EFICCIA DE SOLUES AQUOSAS DE CLOREXIDINA PARA DESINFECO DE SUPERFCIES

EFFICACY OF CHLOREXIDINE AQUEOUS SOLUTIONS TO DISINFECT SURFACES

Andrea Moreira Jacobucci Bambace rica Joseline de Almeida Barros Silvana Solo Ferreira dos Santos Antonio Olavo Cardoso Jorge
Departamento de Odontologia da Universidade de Taubat

RESUMO
A preveno da infeco cruzada parte fundamental na conduta prtica de um tratamento odontolgico, sendo a desinfeco de superfcies um dos procedimentos para manuteno da biossegurana. Considerando o grande nmero de superfcies operatrias que podem ser contaminadas durante o tratamento odontolgico, torna-se claro que o uso de desinfetantes constitui uma das principais etapas de assepsia efetiva. O objetivo deste trabalho foi verificar a eficcia de solues aquosas de clorexidina na desinfeco de superfcies em concentraes de 0,5%, 1%, 2%, 3% e 4%, comparando a do lcool 70% gel e lquido, bem como verificar sua viabilidade econmica. Cepas de Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans e Klebsiella pneumoniae foram utilizadas para a contaminao de superfcies de couro, frmica e ao inoxidvel e ento realizada a desinfeco utilizando a tcnica spray wipe spray com cada soluo. Aps cada desinfeco foram feitas coletas utilizando placas de superfcie (RODAC) contendo gar BHI, incubadas e as ufc/placa contadas. Solues aquosas de clorexidina a partir de 1%, foram eficazes na desinfeco de todas as superfcies para todos os microrganismos testados, seguidas pela soluo aquosa de clorexidina 0,5%, lcool etlico 70% gel e lquido. PALAVRAS-CHAVE: clorexidina, contaminao, superfcie, desinfeco, biossegurana.

INTRODUO Controle de infeco cruzada e biossegurana so temas de grande importncia para a prtica odontolgica e vm despertando nos ltimos anos maior interesse em virtude, principalmente, do avano da epidemia AIDS (BASTOS, 2001). Infeco cruzada pode ser definida como a transmisso de agentes infecciosos entre pacientes e equipe dentro de um ambiente clnico, podendo ocorrer por contato direto com tecidos, secrees, sangue ou gotculas que contenham agentes infecciosos, ou atravs de bordos cortantes de instrumentais contaminados que no foram corretamente esterilizados (SAMARANAYKE; SCHEUTZ; COTTONE, 1993). A preveno da infeco cruzada parte fundamental na conduta prtica de um tratamento odontolgico, sendo um dos procedimentos fundamentais para manter a biossegurana nos consultrios odontolgicos a realizao da desinfeco de superfcies (FANTINATO et al.,1994). Considerando o grande nmero de superfcies operatrias que podem ser contaminadas por sangue, saliva ou secrees durante o atendimento odontolgico, torna-se claro que o uso de desinfetantes constitui uma das principais etapas de assepsia efetiva. A limpeza e desinfeco das superfcies operatrias fixas e partes expostas do equipo reduz, significativamente, a contaminao cruzada. Para tanto o produto qumico escolhido deve realizar, efetivamente, as funes de descontaminao e desinfeco (BRASIL, 2000). A desinfeco do consultrio deve ser realizada com substncias qumicas desinfetantes de nvel mdio ou intermedirio, que sero empregadas em todos os locais do consultrio onde for possvel encontrar microrganismos carregados pelos aerossis ou pelas mos da equipe odontolgica, sendo elas: cho, armrios,

Rev. biocinc.,Taubat, v.9, n.2, p.73-81, abr-jun 2003.

paredes, equipamento (refletor, cuspideira, cadeira, suctores, equipo, mangueiras, caixa de comando e canetas), mocho, etc. (GUANDALINI; MELO; SANTOS, 2000). Na desinfeco destas superfcies podem ser utilizados o lcool 70%, compostos sintticos do iodo, compostos fenlicos ou hipoclorito de sdio, de acordo com o material das mesmas. Tem sido preconizada a tcnica spray wipe spray, que consiste na pr-limpeza e desinfeco pela aplicao do desinfetante na superfcie com auxlio de um burrifador e a seguir, limpeza da rea com toalha de papel e realizao de nova aplicao do desinfetante. Tradicionalmente, o lcool etlico tem sido utilizado na desinfeco das superfcies (JORGE, 1998). Apesar de no ser aprovado pelo Centro de Controle de Doenas e Preveno (CDC) para esta finalidade, Silva e Jorge (2002) observaram reduo estatisticamente significativa de microrganismos quando da utilizao de lcool 70%, embora no tenha sido o melhor desinfetante testado. Devido proibio da comercializao do lcool na forma lquida, outras substncias passaram a ser utilizadas para desinfeco de superfcies, principalmente o lcool gel, produto que substituiu comercialmente o lcool convencional. A clorexidina uma substncia qumica que foi introduzida h muitos anos como anti-sptico de largo espectro contra bactrias Gram-positivas e negativas (DAVIES et al., 1954). uma biguandina com propriedades catinicas. Quimicamente classificada como Digluconato de Clorexidina, uma molcula estvel, que quando ingerida excretada pelas vias normais, sendo que a pequena porcentagem retida no organismo no txica. Quando em baixas concentraes, provoca lixiviao de substncias de pequeno peso molecular, como o potssio e o fsforo, exercendo efeito bacteriosttico e bactericida em altas concentraes (SILVA, 2002). Age nas bactrias rompendo a integridade de suas membranas citoplasmticas resultando na perda de constituintes celulares vitais como o cido nucleico e potssio (JORGE, 1997). Desta maneira, embora a clorexidina mate formas vegetativas de bactrias, no demonstra efetividade contra esporos, exceto em temperaturas elevadas (SIQUEIRA et al., 1998). Em odontologia, a soluo alcolica de clorexidina surgiu como desinfetante de campo cirrgico e de canais radiculares (CAWSON; CURSON, 1959). Atualmente, suas aplicaes aumentaram, sendo eficaz na higienizao de prteses (SESMA et al., 1999), degermao das mos (SILVA et al., 2000; MAGRO FILHO et al., 2000), reduo do nmero de S. mutans na cavidade bucal e, conseqentemente, na reduo do risco de crie e doena periodontal (DENARDI, 1994; RIBEIRO; BUSSADORI, 2000), podendo ser utilizada na forma de gel, dentifrcio, colutrio, irrigaes, chicletes e at mesmo spray (DENARDI, 1994). Existe grande interesse na odontologia em encontrar uma substncia qumica para desinfeco nos consultrios odontolgicos que tenha atividade antimicrobiana de amplo espectro, estabilidade no armazenamento, ausncia de toxicidade, substantividade, seja facilmente encontrado e tenha baixo custo, entre outras caractersticas. O presente estudo tem como objetivo verificar a eficcia de solues aquosas de clorexidina, na desinfeco de superfcies, em diferentes concentraes (0,5%, 1%, 2%, 3% e 4%) comparando a do lcool 70% gel e lquido, bem como verificar sua viabilidade econmica. MATERIAL E MTODO Cepas padro de Streptococcus mutans (CCT 1910), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 2753), Candida albicans (F 72) e Klebsiella pneumoniae (ATCC 18833) foram semeadas em meios especficos para obteno de cultura de 24 horas. gar Mitis Salivarius Bacitracina Sacarose (MSBS) para S. mutans, gar Infuso Crebro-Corao (BHI) para S. aureus, gar MacConkey (MC) para a P. aeruginosa e K. pneumoniae e gar Sabouraud para C. albicans. Todas as cepas foram incubadas em estufa bacteriolgica a 37o C por 24 horas, exceto para a cepa de S. mutans, que foi incubada em estufa com tenso de 5% de CO2. Aps incubao, cada cepa foi suspensa em 10mL de soluo salina 0,9% esterilizada, at atingir a escala nmero um de McFarland (3x108cls/mL) e homogeneizadas por 30 segundos em agitador de tubos Vortex. Foram utilizadas para o experimento sete superfcies de couro (5cm2), sete de frmica (5cm2) e sete bandejas clnicas de ao inoxidvel. As superfcies foram contaminadas, em ambiente assptico, com 0,1 mL de cada suspenso e espalhadas com auxlio de alas de Drigalsky.

Trinta minutos aps a contaminao foi coletado o grupo controle (sem desinfeco) com placas de superfcie (RODAC) contendo gar BHI, deixadas em contato com a superfcie por 30 segundos. Logo aps, cada superfcie foi submetida ao processo de desinfeco pela tcnica spray wipe spray para cada soluo, e cada superfcie recebeu a aplicao do desinfetante com auxlio de um borrifador, em seguida esfregou-se com gaze esterilizada e foi novamente aplicado o desinfetante que permaneceu na superfcie por 10 minutos. Foram utilizadas para desinfeco das superfcies solues aquosas de clorexidina (0,5%, 1%, 2%, 3% e 4%), lcool 70% gel e lquido. Aps o perodo de desinfeco, foram feitas coletas com placas de superfcie (RODAC) deixadas em contato por 30 segundos em cada superfcie para cada microrganismo. As placas, controle e ps-desinfeco, foram incubadas a 370C por 24 horas em estufa bacteriolgica, exceto para as contaminadas com S. mutans que foram incubadas em estufa com tenso de 5% de CO2. Aps incubao, as unidades formadoras de colnias (ufc) foram contadas e feitos esfregaos corados pelo mtodo de Gram para confirmao da morfologia da cepa utilizada. A cada experimento as superfcies foram submetidas a descontaminao com hipoclorito de sdio (2,0 a 2,5%) por 30 minutos, lavadas com gua, sabo e auxlio de uma escova, embaladas e esterilizadas em autoclave 1210C por 15 minutos para a reutilizao. Para a verificao da viabilidade econmica das solues testadas foram feitas cotaes de preo para cinco litros de cada soluo em trs farmcias de manipulao. RESULTADOS Todas as solues desinfetantes testadas demonstraram eficcia na desinfeco de superfcies em couro, frmica e ao inoxidvel, considerando-se a ausncia ou pequeno crescimento de ufc/placa quando comparado ao grupo controle (Quadros 1, 2, 3, 4 e 5). Quadro 1- Resultados obtidos no experimento: controle e aps desinfeco para a cepa de Klebsiella penumoniae
Soluo desinfetante Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% n de ufc/placa controle 16 20 40 10 50 30 50 108 23 58 15 46 21 10 24 11 34 19 20 45 70 n de ufc/placa aps desinfeco 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Microrganismo

Superfcie

Couro

Klebsiella pneumoniae

Ao inoxidvel

Frmica

Quadro 2- Resultados obtidos no experimento: controle e aps desinfeco para a cepa de Pseudomonas aeruginosa
Soluo desinfetante Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% n de ufc/placa controle *Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis Incontveis n de ufc/placa aps desinfeco 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Microrganismo

Superfcie

Couro

Pseudomonas aeruginosa

Ao inoxidvel

Frmica

Quadro 3- Resultados obtidos no experimento: controle e aps desinfeco para a cepa de Streptococcus mutans
n de ufc/placa aps desinfeco 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Microrganismo

Superfcie

Soluo desinfetante Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70%

n de ufc/placa controle 105 99 incontveis 489 incontveis incontveis incontveis 390 incontveis 430 450 incontveis incontveis 420 incontveis 172 258 incontveis 222 incontveis incontveis

Couro

Streptococcus mutans

Ao inoxidvel

Frmica

Quadro 4- Resultados obtidos no experimento: controle e aps desinfeco para a cepa de Staphylococcus aureus
n de ufc/placa aps desinfeco 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 08

Microrganismo

Superfcie

Soluo desinfetante Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70%

n de ufc/placa controle incontveis incontveis 320 incontveis 370 incontveis incontveis 202 incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis incontveis

Couro

Staphylococcus aureus

Ao inoxidvel

Frmica

Quadro 5- Resultados obtidos no experimento: controle e aps desinfeco para a cepa de Candida albicans
n de ufc/placa aps desinfeco 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 01 0 0 0 0 0 0

Microrganismo

Superfcie

Soluo desinfetante Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70% Clorexidina 0,5% Clorexidina 1% Clorexidina 2% Clorexidina 3% Clorexidina 4% lcool 70% gel lcool 70%

n de ufc/placa controle incontveis 39 43 79 49 137 incontveis 53 208 270 380 44 38 326 183 203 37 151 37 84 85

Couro

Candida albicans

Ao inoxidvel

Frmica

Para as cepas de K. pneumoniae, P. aeruginosa e S. mutans, a desinfeco com todas as solues resultaram em 100% de reduo no nmero de ufc/placa nas superfcies em couro, ao inoxidvel e frmica (Quadros 1, 2 e 3). Apesar da reduo significativa do nmero de ufc/placa, a cepa de S. aureus foi o microrganismo mais resistente desinfeco. Na superfcie em couro, onde foi utilizado o lcool 70% gel, cresceram duas ufc/placa. Na superfcie em frmica e ao inoxidvel onde foi utilizado o lcool 70% lquido, cresceram respectivamente oito e duas ufc/placa, aps a desinfeco (Quadro 4). Para a cepa de C. albicans, houve reduo de 99,45% das ufc/placa quando da utilizao de soluo aquosa de clorexidina a 0,5%, somente para a superfcie em frmica, sendo que a mesma soluo resultou em 100% de reduo no nmero de ufc/placa para as superfcies em couro e ao inoxidvel. As demais solues testadas reduziram em 100% o nmero de ufc/placa em todas as superfcies contaminadas com C. albicans (Quadro 5). A anlise estatstica destes resultados pelo mtodo de ANOVA no permitiu afirmar que os parmetros tenham influncia ou significncia, pois h um nmero muito elevado de dados nulos (iguais a zero), porm pela observao dos resultados obtidos, pode-se verificar que solues aquosas de clorexidina a 0,5%, lcool 70% gel e lquido tiveram desempenho inferior ao das solues aquosas de clorexidina a partir de 1,0%. Os valores obtidos aps cotao dos preos em farmcias de manipulao esto listados no Quadro 6.

Quadro 6- Cotao de preos das solues aquosas de clorexidina e lcool em farmcias de manipulao.
SOLUO

MANIPULRIO

FARMA FORMULA 34,20 44,16 64,00 84,00 103,90 * *

VIVNCIA

MDIA DOS PREOS 38,70 55,80 91,60 119,68 156,10 38,20 26,50

Clorexidina 0,5% 5L Clorexidina 1,0% 5L Clorexidina 2,0% 5L Clorexidina 3,0% 5L Clorexidina 4,0% 5L lcool 70% gel 5Kg lcool 70% - 5L

50,80 70,24 112,80 155,04 179,40 35,20 23,00

31,10 53,00 98,00 120,00 185,00 41,20 30,00

A soluo aquosa de clorexidina 1% apresentou preo mdio de R$ 55,80, custo mais elevado que o lcool 70% gel (R$ 38,20) e lcool 70% lquido (R$ 26,50). Apesar da soluo aquosa de clorexidina 0,5% ter preo menor que a soluo a 1%, no obteve o melhor resultado na desinfeco das superfcies testadas. As solues de clorexidina a partir de 2%, apesar de terem demonstrado eficcia na desinfeco, apresentaram preos muito elevados. DISCUSSO A escolha das espcies de microrganismos utilizados no presente trabalho teve como base o trabalho realizado por Silva e Jorge (2002), no qual foi verificado que os microrganismos mais freqntemente isolados das superfcies de equipamentos odontolgicos, aps atendimento clnico, foram estreptococos bucais, estafilococos cogulase negativa, leveduras do gnero Candida, e enterobactrias. Pseudomonas aeruginosa foi inserida neste trabalho por ser resistente a vrios desinfetantes (MIMICA et al., 1994). Samaranayake, Scheutz e Cottone (1993) reporta que a soluo alcolica de clorexidina amplamente utilizada como desinfetante de superfcie fora dos Estados Unidos. Segundo Feist e Micheli (1989), solues alcolicas de clorexidina em baixas concentraes so eficientes na reduo da microbiota da cavidade bucal. Vignarajah (1991) recomenda a utilizao de solues alcolicas de clorexidina a 0,5% ou 1% como desinfetantes de imerso. Solues alcolicas de clorexidina em altas concentraes (4%) so utilizadas como agentes anti-spticos na degermao das mos, nos estudos de Silva et al. (2000) e Magro Filho et al. (2000). Feist e Michele (1989) objetivando analisar a ao da clorexidina sobre alguns microrganismos, observou que a concentrao do agente antimicrobiano fator decisivo para sua ao sobre os microrganismos. Nenhum dado na literatura foi encontrado quanto eficcia de solues aquosas de clorexidina em qualquer concentrao. Silva e Jorge (2002) verificaram que soluo alcolica de clorexidina a 5% foi o desinfetante que proporcionou maior reduo microbiana em superfcies. Os resultados do presente trabalho demonstraram que a soluo aquosa de clorexidina 1% foi, entre as solues de clorexidina testadas, a menor concentrao a apresentar eficcia na desinfeco de superfcies em couro, frmica e ao inoxidvel. Giuliana et al. (1999) demonstraram que Candida albicans era mais resistente ao da clorexidina que outras espcies do gnero Candida. Os resultados do presente trabalho demonstraram resistncia de Candida albicans somente para a superfcie em frmica quando utilizada soluo aquosa de clorexidina 0,5% para desinfeco.

Foi observado durante o experimento que as solues aquosas de clorexidina 3% e 4% deixavam a superfcie em couro esbranquiada aps a segunda aplicao do desinfetante, pela tcnica spray wipe spray, que desaparecia aps frico com gaze umidecida em gua. Apesar do lcool etlico 70% no ser aceito como desinfetante efetivo pela American Dental Association (ADA) e pelo Centro de Controle de Doenas e Preveno (CDC) (FERREIRA, 1995), esta substncia amplamente utilizada pela classe odontolgica principalmente por seu baixo custo, facilidade de aquisio, baixa toxicidade, estabilidade no armazenamento, ser incolor e evaporar sem deixar resduos no equipamento. A literatura demonstra que apesar de no ser o desinfetante mais eficaz, resultou em reduo significativa de microrganismos aps seu uso para desinfeco (SILVA; JORGE, 2002). No presente trabalho, o lcool 70% lquido, seguido pelo lcool 70% gel foram os desinfetantes que apresentaram menor reduo na quantidade de ufc/placa somente para a cepa de S. aureus. Foi possvel observar durante o experimento que o lcool 70% gel deixou resduos em todas as superfcies, principalmente na superfcie em couro (aspecto melado) que perdurou enquanto a superfcie no foi lavada com gua, sabo e escova. Vignarajah (1991) props-se a avaliar alguns fatores que poderiam influenciar na escolha da soluo desinfetante. Um desses fatores foi o preo das solues desinfetantes usadas na prtica odontolgica. Desta forma, convm discutirmos tambm o custo e a eficcia das substancias utilizadas no presente estudo. O lcool 70% lquido apresentou o menor preo seguido pelo lcool 70% gel, porm no foram os desinfetantes mais efetivos entre os analisados, no entanto, a soluo aquosa de clorexidina a 1% foi eficaz e teve o menor custo entre as solues aquosas de clorexidina mais efetivas. O custo mais elevado para a soluo aquosa de clorexidina 1%, em relao ao lcool 70% gel e lquido, justifica-se pela sua baixa comercializao. CONCLUSO

Solues aquosas de clorexidina a partir da concentrao de 1% demonstraram maior eficcia na desinfeco

de superfcies quando comparadas com soluo aquosa de clorexidina 0,5%, lcool 70% gel e lquido; Dentre as substncias testadas, a soluo aquosa de clorexidina 1% foi a substncia qumica que apresentou a melhor relao entre custo e eficcia para desinfeco de superfcies, sendo efetiva para todas as superfcies e todos os microrganismos testados. ABSTRACT The cross infection prevention is a fundamental part from an odontologic treatment and one of the fundamental procedures to keep the biosecurity is the surface disinfecting. The high number of operatory surfaces that could be contaminated during the odontological treatment certainly makes the use of disinfectant one of the main phases of the effective asepsis. The objective of this study was to verify the efficiency of aqueous solutions of chlorhexidine 0,5%, 1%, 2%, 3% and 4% comparing to 70% gel and liquid alcohol, as well as to verify economical aspects of their use. Strains of S. mutans, S. aureus, P. aeruginosa, C. albicans and K. pneumoniae, were utilized to contaminate the surfaces of leather, formic laminate and stainless steel, then the solutions were used to disinfect the surfaces using the spray wipe spray technique. After the disinfecting period, it was collected using surface plates (RODAC) containing BHI agar, incubated and the ufc/plate counted. Aqueous solution of chlorhexidine from 1% was effective in disinfecting the entire set of surfaces and microorganism, followed by the aqueous solution of chlorhexidine 0,5%, 70% gel alcohol and 70% liquid alcohol. KEY WORDS: chlorexidine, contamination, surfaces, disinfection, biosecurity. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS BASTOS, G. K. Controle da infeco em odontologia. Disponvel em: <http;//www.web@webschool.com.br> Acesso em : 17 jan 2001

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