Recambio proteico

Mg Ins Arnao Salas

Medicina Humana
2013

EAP Medicina Humana

Recambio proteico: caractersticas
cuantitativas, importancia biolgica.
Proteasas intracelulares y lugares de recambio
Seales qumicas para el recambio:
ubiquitinacin.
Aplicacin clnica: Radicales libres, recambio y
envejecimiento.

Balance
Nitrogenado:
N ingerido
vs N
excretado

Quin
dice la
verdad?

Balance Nitrogenado

sntesis < degradacin

sntesis > degradacin

Recambio de protenas

Recambio proteico
Contar con un sistema de control para cambiar en forma
rpida la concentracin de enzimas reguladoras.
En condiciones de ayuno, poder movilizar protenas y
mantener un aporte constante de AA que permitan la sntesis
de nuevas protenas, la produccin de energa o el uso de los
AA para formar otros compuestos, sin tener que depender de
las fluctuaciones del consumo de alimento.
Destruir protenas producidas con errores o que provoquen
inestabilidad a la clula.
Permitir la reestructuracin o el cambio de funciones
celulares.

Caractersticas cuantitativas del recambio proteico

Protena
dieta
100g/d

Protena
corporal
400g/d

Sntesis de AA
no esenciales
vara

Fondo comn de AA

Protena
corporal
400g/d

Excrecin
100g/d

Glucosa/glu
cgeno

Cuerpos cetnicos,
AG, esteroides
CO2

Sntesis de porfirinas,
creatinina, NT,
purinas, pirimidinas,
otros compuestos N
30g

Semividas y localizaciones intracelulares de la degradacin en el

recambio proteico
Semivida (h)

Ncleo

Citosol

Mitocondria

R.E. y membrana

<2

Productos de
oncogenes

Ornitina DC, Tyr Ac. DHMGCoA

AT,PK-C
aminolevulnico reductasa
sintetasa

2-8

- ------------

Trp
oxigenasa,PKAMPc

- -------------

G-glutamil
transferasa

9-40

ubiquitina

Calmodulina,
glucoquinasa

Acetil CoA
carboxilasa,
ALT

Receptor de
LDL, cit P450

41-200

Histona H1

LDH, aldolasa,
DHFolatoR

Cit oxidasa, PC, Cit b5, cit b5

Cit c
reductasa

>200

Histonas H2A,
H2B, H3, H4

Hb, glucgeno
fosforilasa

- -------------

Receptor de
acetil
colina

Recambio diario de protena tisular

Cantidad

Uso

70 g

Recambio de enzimas digestivas

y clulas intestinales

20 g
8g

Sntesis de protenas
plasmticas
Sntesis de Hemoglobina

20 g

Recambio de leucocitos

75 a 100 g

Recambio de clulas musculares

80 a 100 g

Diversas vas sintticas

Recambio protenico entre rganos

Permite mejorar el
balance de nitrgeno en
el organismo
Hacer uso ms eficiente
de los AA indispensables
el hgado, el msculo, el
intestino y el rin

Recambio diario (%)

Organismo completo

Msculo esqueltico

Hgado

10

Intestino delgado

14

Intestino grueso

Riones

Corazn

Factores de recambio proteico

Ingestin proteico-energtica,
El patrn de aminocidos,
La secrecin hormonal de insulina,
testosterona, cortisol, hormonas tiroideas,
catecolaminas,
El balance cido base,
La presencia de citocinas y
La existencia y grado de respuesta inflamatoria
sistmica.

El ejercicio tiene un efecto positivo sobre el crecimiento

muscular. El ejercicio de resistencia mejora el balance
proteico

Ejercicio y sntesis proteica

Importancia del recambio proteico

Control de calidad: protenas mutantes >
protenas de tipo salvaje
Regulacin de etapas metablicas
Adaptacin celular: esporulacin
Mecanismos fisiolgicos: control del ciclo
celular
Procesos patolgicos: Alzheimer

Seales qumicas para el recambio

Ubiquitinacin
Residuos N terminales
Residuos oxidados: Fe+2 , OH. : (Pro, Lys, Arg)
Secuencias PEST
Ciclinas y cajas de destruccin: RAALGNISN (Arg, Ala, Ala,
Leu, Gly, Asn, Ile, Ser, Asn) se encuentra entre los residuos
13 y 66 de la secuencia proteica
Pentapptido KFERQ (Lys, Phe, Glu, Arg, Gln)
Algunas seales de degradacin pueden estar enmascaradas
u ocultas en el ncleo hidrofbico, o por insercin de grupos
fosfatos.

Dependencia de la vida media de protenas citoslicas de levadura en

funcin de la naturaleza de su residuo N-terminal

Residuos muy estabilizadores

T1/2 >20h
Ala, Cys, Gly, Met, Pro, Ser, Thr, Val
Residuos desestabilizadores por s mismo
T1/2 entre 2 y 30 min
Arg, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Trp, Tyr
Residuos desestabilizadores tras su modificacin qumica
T1/2 entre 3 y 30 min
Asn, Asp, Gln, Glu

Secuencias PEST
Protenas con regiones abundantes de pro (P),
glu (E) ser (S) y Thr (T).
12 a 60 residuos
Forma parte de un esquema de
reconocimiento.
Glicosilacin de protenas
PEST con GlcNAc tiene
un efecto opuesto

Proteasas intracelulares
Clase

Ejemplos

Serin proteasas

Catepsina A, G y R
Uroquinasa
Proteasa neutra de 700 Kda, MPC, (20S)
Proteosoma (treonin proteasa) (26S)

Cisten proteasas

Catepsinas B, B2, C, H, I, J, K,
L,M,N,O,P,S,T y X.
Calpanas I y II
Caspasas

Aspartato proteasas Catepsina D y E

Metaloproteasas

Gelatinasas A y B
Catepsina III
Colagenasas
Insulinasa

Estructura
de las
calpanas
Son cisteinil proteasas
activadas por Ca++
I: 50-70 mM
II: 1-5 mM

Calpanas

Estn relacionadas con el

procesamiento de proteinas del
citoesqueleto, la diferenciancin
celular y la apoptosis.
Proteinas de vida media corta, que
llevan la secuencia PEST son buenos
sustratos de las calpainas.
Estn relacionada con la degradacin
de diferentes quinasas como la
piruvato quinasa o la fosforilasa B
quinasa.
Juega un papel preponderante en
estados catablicos como son la
inanicin o la diabetes. En el msculo
tiene un rol especfico en la
degradacin de la protena -actina.

Ubiquitina
Protena de 76 AA.
Termoestable
Presente en eucariotas
Ubicua
K6, K11,K27, K29, K33,
K48, y K63.
Gly C-terminal de la
ubiquitina + NH2 de Lys
de protena

Componentes del sistema

ubiquitina

Mecanismo de accin de la ubiquitina

1.- Activacin de
ubiquitina : E1 un
homopolmero de 105
Kda.
2..- Conjugacin de la
ubiquitina: E2. Protena
transportadora de la
ubiquitina
3.- E3: ubiquitina ligasa
(225 Kda). Es especfica.
4.- E4: factor de
ensamblaje de la
poliubiquitina.

ubiquitinzacin

Desubiquitinacin
Proceso reversible
Enzimas:
Ubiquitina C terminal hidrolasas (UCH):
pptidos
Proteasas de procesamiento especfico de la
ubiquitina (UBP): protenas de alto peso
molecular
Isopeptidasas (complejo 19 S)

Componentes del proteosoma 26S

Unin poliUb

Rpt (trifosfatasa RP) y Rpn (RP no ATPasa).

AN. R. ACAD. NAC. FARM ; VOL. 71 (1), 45-82, 2005

Mecanismo de degradacin de
protenas poliubiquitinizadas
1) Reconocimiento y unin del sustrato poliubiquitinado por el
receptor en el complejo 19S;
2) Despliegue mecnico de la protena sustrato, dependiente de
ATP;
3) Introduccin de la protena desplegada en el ncleo 20S
despus de haberse desprendido la cadena de poliubiquitina
por accin de isopeptidasas;
4) Rotura de la protena en fragmentos de 8 a 9 residuos, y
5) Salida de los pptidos por el extremo 19S opuesto.

Mecanismo va ubiquitina-proteosoma

La transformacin hacia
el desarrollo tumoral se
bloquea, habitualmente,
por la p53, una de las
protenas supresoras de
tumores del organismo.
El HPV recurre a una
estratagema para evitar
el sistema defensivo
celular, fabrica una
protena (E6) que se
enlaza simultneamente
a la p53 y a una enzima
E3 (E6-AP)
La fatdica unin insta la
ubiquitinacin de la p53,
que as queda marcada
para su destino fatal en el
proteosoma

Protelisis dependiente del proteosoma pero

independiente de ubiquitina

A) Degradacin de protenas oxidadas por el

proteosoma 20S
Calmodulina y aconitasa oxidadas
B) Ornitina decarboxilasa

Degradacin proteica lisosomal

Variedad de proteasas : catepsinas.
Protenas de 20 a 40 Kda
Catepsina D : aspartil proteinasa
Catepsinas B, H y L : cistein proteinasas
Catepsina H: actividad endo y
aminopeptidasa.
Reconocen secuencia KFERQ o relacionada.
Activadas por ayuno prolongado.

Catepsinas

Mecanismo de accin de las catepsinas

Que es la sumoilacin, que alguien me lo

expliqueeeeeeeee!
La sumoilacin es una modificacin posttraduccional, reversible, que tiene como
objetivo unir covalentemente una o mas
protenas SUMO (small ubiquitin-like
modifier) a un aminocido lisina de una
protena blanco.
Sentrina proteasas remueven SUMO.
Respuesta celular a la hipoxia y
sumoilacin: si HIF SUMO mayor
estabilidad y no es degradado por
ubiquitina-proteosoma

Envejecimiento, RL y
estrs oxidativo

1956, Denham Harman propone que

el envejecimiento normal es el
resultado del dao a los tejidos
producido por el estrs oxidativo

Balanza del envejecimiento

Aula virtual de la Universidad de Cantabria, 2011

RL producto del
metabolismo

Perxidos

Disminucin
de la sntesis
de protenas

Disminucin de la
sntesis de las
protenas de la
membrana interna

Dao al DNA
mitocondrial

Malondialdehidos

Molecular of Biology of Aging

Sntesis
disminuda de
ATP

Alteracin de la
replicacin
mitocondrial

Desbalance de
la homeostasis
fisiolgica

Disminuye la
resistencia al
estrs
ambiental

ENVEJECIMIENTO

Modelo de envejecimiento basado

en los RL

Argumentos a favor de esta teora

A) Se ha podido comprobar cmo el aumento de la expresin de genes

que codifican para enzimas que neutralizan RLO prolongan la vida media
en invertebrados.

B) La longevidad de diferentes especies de mamferos guarda una relacin

inversa con la tasa metablica y por consiguiente con la produccin de
RLO en sus mitocondrias.

C) La evidencia de que la restriccin calrica retrasa el envejecimiento

pudiera estar relacionada con la hiptesis del papel de RLO en el
envejecimiento, ya que los animales sometidos a tal prctica tienen un
menor nivel de RLO en sus clulas y tejidos (Sohal, 1996).

Acciones de los RL en las macromolculas

Martha Snchez Rodrguez, 1997

Bioqumica y envejecimiento
Modificacin de
protenas

Modificacin y
mutacin del DNA

Otros

Enlaces covalentes Oxidacin

Lipofuscina

Oxidacin

Depurinacin

E inactivas

Desaminacin

Sustituciones

D-aspartato

Inserciones y
deleciones

Grupos C=O en
protenas

Inversiones y
transposiciones

Glucoxidacin
Lipoxidacin

Sistemas celulares de
eliminacin de organoides y
biomolculas

Disfuncin mitocondrial y envejecimiento

Acumulacin de dao oxidativo. El deterioro secundario al
envejecimiento se observa ms claramente en clulas postmitticas, las cuales, al ser daadas, no pueden ser
reemplazadas por clulas nuevas, como es el caso de la
neurona.
Disminucin de la produccin de ATP mitocondrial
Reduccin de la masa mitocondrial en cerebro e hgado.
Reduccin de la capacidad de fosforilacin de ATP sintasa.
Disminucin de la velocidad de transferencia de e- a travs de
la c.t.e.

Se ha reportado alteraciones de los complejos de la cadena respiratoria

( complejo I ,II y IV) en relacin con el envejecimiento.
Al declinar la funcin mitocondrial (citocromo oxidasa) se generara en exceso
el anin superxido y perxido de hidrgeno.

Actividad de las enzimas mitocondriales de cerebro que son usadas como marcadores de
envejecimiento en relacin a la supervivencia de los ratones machos (A) y hembras (B)

Complejo I:
decreci 17 a 33%
Complejo IV:
decreci 24 a 36%

Am J Physiol Cell Physiol 292: C670C686, 2007.

Proceso de envejecimiento y la transduccin de

energa mitocondrial
Disfuncin mitocondrial

Fosforilacin oxidativa

Actividad de complejos I y IV y Mit NOS

Incremento de tamao y fragilidad de la

membrana mitocondrial
Am J Physiol Cell Physiol 292: C670-C686, 2007

Restriccin Calrica
La restriccin calrica se refiere a una dieta en
que las caloras estn limitadas a un 30 40%
de la dieta sin restriccin.
La restriccin calrica extiende el tiempo de
vida en las levaduras, drosophila, gusanos,
roedores y probablemente primates.
La restriccin calrica se asocia a una mayor
sobrevida

Restriccin Calrica
Hiptesis: hace ms lento el metabolismo y la
produccin de ROS.
Sin embargo esta relacin puede superarse mediante
factores genticos, dentro de una especie o entre
especies.
Se puede extender la vida de la drosophila
produciendo mutaciones sin restriccion calrica.
Los murcilagos tienen una velocidad metablica
similar a la del ratn pero viven 10 veces ms.

Efecto de la RC en la longevidad de los ratones

Aging and calorie restriction modulate yeast redox state, oxidized protein
removal, and the ubiquitin-proteosome system
Fernanda Marques da Cunha, Marilene Demasi, Alicia J. Kowaltowski
Free Radical Biology & Medicine 51 (2011) 664-670
2% glucosa

0,5% glucosa
Parmetros estudiados:
Glutation total, GSSG y GSH
Consumo de O2
Produccin de H2O2
Actividad del proteosoma
Protenas carboniladas y protenas
poliubiquitinizadas

S.
cerevis
iae

C
16 h

RC
16 h

C
28
d

RC
28 d

Aging and calorie restriction module yeast redox state, oxidized protein
removal, and the ubiquitin-proteosome system

Young

AGING

Old

Acumulacin de protenas oxidadas

Disminucin de la ubiquitinacin
Ambiente ms oxidativo
Menor actividad del proteosoma
Desmejoramiento de la ubiquitinacin

Young

AGING +
RC

Old

No acumulacin de protenas oxidadas

Se preserva el recambio proteico

Ambiente menos oxidativo

Alta actividad del proteosoma
Se mantiene la ubiquitinacin

Incremento de la viabilidad

Concluyendo..
1.- Hbito alimentario saludable y
equilibrado: pescado, frutas y
verduras.
2.- Evitar sedentarismo (fsico y
mental)
A) Ejercicio fsico moderado y/o
deportes
B) Ejercicio mental: lectura,
estudiar, etc
3.-Chequeos mdicos preventivos

"El secreto de como prolongar la vida

est en el arte de aprender como no acortarla".