I.

INTRODUO As protenas so as molculas orgnicas mais abundantes e importantes nas clulas e perfazem 50% ou mais de seu peso seco. So encontradas em todas as partes de todas as clulas, uma vez que so fundamentais sob todos os aspectos da estrutura e funo celulares. Existem muitas espcies diferentes de protenas, cada uma especializada para uma funo biolgica diversa. Alm disso, a maior parte da informao gentica expressa pelas protenas. Pertencem classe dos peptdeos, pois so formadas por aminocidos ligados entre si por ligaes peptdicas. Uma ligao peptdica a unio do grupo amino (-NH 2 ) de um aminocido com o grupo carboxila (-COOH) de outro aminocido, atravs da formao de uma amida. So os constituintes bsicos da vida: tanto que seu nome deriva da palavra grega "proteios", que significa "em primeiro lugar". Nos animais, as protenas correspondem a cerca de 80% do peso dos msculos desidratados, cerca de 70% da pele e 90% do sangue seco. Mesmo nos vegetais as protenas esto presentes. A importncia das protenas, entretanto, est relacionada com suas funes no organismo, e no com sua quantidade. Todas as enzimas conhecidas, por exemplo, so protenas; muitas vezes, as enzimas existem em pores muito pequenas. Mesmo assim, estas substncias catalisam todas as reaes metablicas e capacitam aos organismos a construo de outras molculas - protenas, cidos nuclicos, carboidratos e lipdios - que so necessrias para a vida. Todas contm carbono, hidrognio, nitrognio e oxignio, e quase todas contm enxofre. Algumas protenas contm elementos adicionais, particularmente fsforo, ferro, zinco e cobre. Seu peso molecular extremamente elevado. Todas as protenas, independentemente de sua funo ou espcie de origem, so construdas a partir de um conjunto bsico de vinte aminocidos, arranjados em vrias seqncias especficas. Estruturas as protenas podem ter 4 tipos de estrutura dependendo do tipo de aminocidos que possui, do tamanho da cadeia e da configurao espacial da cadeia polipeptdica. Estrutura primria - a sequncia de aminocidos ao longo da cadeia polipeptdica, especfica para cada protena. Estrutura secundria - Descreve a formao de estruturas regulares pela \cadeia polipeptdica. Pode ser -hlice ou folha . . Estrutura terciria - a forma tridimensional como a protena se "enrola". Descreve o dobramento final da cadeia polipeptdica por interao de regies com estrutura regular. Estrutura quaternria - Descreve a associao de duas ou mais cadeias polipeptdicas de estrutura terciria.

II.

OBJETIVO

Caracterizao da presena de protenas em material biolgico; Demonstrar as reaes de colorao para protenas; Verificar experimentalmente a precipitao de protenas com e sem desnaturao; Relacionar as observaes prticas com a teoria de propriedades gerais, estrutura e isolamento de protenas;

III.

MATERIAIS Ninhidrina Protena a 10% NaOH 2,5 mol/L Sulfato de cobre a 1 % gua destilada cido tricloroactico Acetato de chumbo lcool etilco Clara de ovo in natura Sulfato de amnio Nacl 1mol/L

IV. 1.

MTODOS Reao da Ninhidrina

Tubo 1: 2mL de ninhidrina + 5 gotas de protena a 10%. Aqueceu-se em banhomaria a 100C por 5 minutos. 2. Reao do Buireto:

Tubo 2: 1mL de protena a 10% + 5 gotas de NaOH 2,5mol/L e 3 gotas de sulfato de cobre a 1%. Tubo 3: 1mL de gua destilada + 5 gotas de NaOH 2,5mol/L e 3 gotas de sulfato de cobre a 1%.

Reaes de Precipitao: 1. Ao do Calor: Tubo 4: 2mL de protena a 10%, aqueceu-se em banho-maria a 100C por 3 minutos.

2. Reagentes Alcalides: Tubo 5: 1mL de protena a 10% + 1mL de cido tricloroactico a 10%. 3. Sais de Metais Pesados: Tubo 6: 1mL de protena a 10% + 1mL de acetato de chumbo a 5%. 4. Solventes Orgnicos: Tubo 7: 1mL de protena a 10% + 3mL de lcool etlico. 5. Adio de Sais: Tubo 8: 3mL de clara de ovo in natura + gua destilada. Agitou-se com basto at a formao de precipitado esbranquiado. Dissolveu-se com auxlio de um basto, adicionou-se NaCl 1mol/L gota a gota at o precipitado redissolver. Tubo 9: 2mL da soluo do tubo 8 + 4mL de soluo saturada de sulfato de amnio. Observou-se. Adicionou-se 6mL de gua destilada e observou-se o efeito.

V.

RESULTADOS

1. Reao da Ninhidrina: Tubo 1: A reao antes do banho Maria era incolor, aps o banho Maria ela tornouse azul. Isso acontece porque a ninhidrina um poderoso agente oxidante que reage com aminocidos com pH em 4 e 8. 2. Reao do Biureto: Tubo 2: A reao ficou de cor violeta. A reao do biureto devido a reaes peptdicas. As protenas ou polipeptdios, quando tratados por uma soluo de sulfato de cobre, em um meio alcalino do uma colorao violeta caracterstica. Tubo 3: No teve alterao pelo fato de no haver ligaes entre os aminocidos e o biureto. Reaes de Precipitao: 1. Ao do Calor: Tubo 4: A reao fica branca. A agitao trmica afeta as interaes que estabilizam a estrutura tridimensional das protenas. 2. Reagentes Alcalides: Tubo 5: Na reao h a formao de precipitado. Houve a desnaturao da protena, pois valores extremos de pH afetam a estrutura dos peptdeos causando uma mudana na sua conformao. 3. Sais de Metais Pesados: Tubo 6: Na reao h a formao de precipitado. Combinam com protenas com carga negativa formando complexos insolveis. As molculas proticas desnaturadas precipitam porque o chumbo insolvel em gua. 4. Solventes Orgnicos: Tubo 7: Na reao h a formao de precipitado branco com o restante incolor. O resultado obtido foi a transformao da protena na forma insolvel, isso aconteceu devido aos radicais hidrofbicos da cadeia R . 5. Adio de Sais: Tubo 9: Ocorrendo a formao de precipitado. A concentrao reduzida de sal aumenta a solubilidade das protenas, porque diminui a interao protenaprotena. A concentrao aumentada de sal diminui a solubilidade das protenas, porque remove a gua de solvatao, aumentando a interao protena-protena.

VI.

CONCLUSO

As reaes de colorao e precipitao de protenas permitem a caracterizao dessas pela anlise de suas propriedades qumicas e fsicas, como ligaes peptdicas, solubilidade e estrutura molecular. Vrias reaes especficas so empregadas para detectar cada tipo de protena, de forma qualitativa e, posteriormente, quantitativa. As reaes de colorao no alteram a estrutura da protena, ao contrrio das reaes de precipitao que podem alterar vrios tipos de estruturas proteicas.

VII.

REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS

Lehninger, A. Lester. Fundamentos de Bioqumica. 4 ed. So Paulo: Sarvier, 2006 http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/precipitacao_prote inas.htm