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CAPTULO

Tejidos seo y Cartilaginoso


En este Trabajo Prctico de Laboratorio se observarn al microscopio los siguientes preparados:

TRQUEA - H&E
Se observa que los anillos traqueales son estructuras en forma de C, con sus extremos dirigidos a la porcin dorsal del rgano. El tejido cartilaginoso se distingue adems por presentar una marcada basofilia. La observacin cuidadosa muestra que esta caracterstica tintorial es propia de la sustancia fundamental amorfa, ya que las clulas colorean pobremente. Se trata de cartlago hialino. La basofilia disminuye hacia la porcin perifrica de la placa cartilaginosa, siendo gradualmente reemplazada por la eosinofilia caracterstica del pericondrio. Con el objetivo seco fuerte se reconocen condorcitos que presentan una escasa coloracin citoplasmtica, que contrasta con el color azul violeta de la sustancia intercelular. La sustancia fundamental se hace ms intensamente basfila alrededor de las cavidades en las que se encuentran los condorcitos, denominadas condroplastos o lagunas. Algunas clulas cartilaginosas se encuentran aisladas en los condroplastos mientras que otras se encuentran agrupadas circularmente (grupos isgenos coronarios) o longitudinalmente (grupos isgenos axiles). El pericondrio presenta dos porciones: una interna o condrognica y una externa o fibrosa.

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EPIGLOTIS - H&E
Con el objetivo seco dbil se observa que se trata de un tejido cartilaginoso. Observamos que presenta un pericondrio similar al que presenta el cartlago hialino. Con el objetivo seco fuerte observamos que la matriz cartilaginosa contiene numerosas fibras elsticas (birrefringentes) adems de fibras colgenas, la sustancia fundamental es ms clara que la del cartlago hialino. Se trata de cartlago elstico.

CARTLAGO FIBROSO - H&E


Con el objetivo seco dbil se observa que se trata de un tejido cartilaginoso. Con el objetivo seco fuerte observamos que la sustancia fundamental es muy escasa y presenta muchos haces gruesos de colgeno que se localizan entre hileras paralelas de condrocitos. Se trata de cartlago fibroso o fibrocartlago. El pericondrio suele estar ausente.

HUESO COMPACTO - desgaste


Con el objetivo seco nos percatamos que estamos frente a un tejido que no tiene coloracin y para darle contraste debemos cerrar el iris del condensador. Observamos una gran cantidad de conductos de Havers rodeados por laminillas concntricas de tejido seo, en las que hay pequeas cavidades, los denominados osteoplastos, que eran ocupados cuando el tejido estaba vivo por los osteocitos. Estas laminillas concntricas constituyen los sistemas haversianos u osteonas, y entre estas estructuras se ubican grupos aislados de laminillas o sistemas intermedios. Se trata de hueso compacto. Uniendo dos conductos de Havers podemos apreciar los llamados conductos de Volkmann.

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HUESO ESPONJOSO - H&E con descalcificacin


Con el objetivo seco observamos placas seas fuertemente eosinfilas, tachonadas por osteocitos; se trata de espculas o trabculas seas. Rodeando estas estructuras de disposicin tridimensional esponjosa, pero que se presenta en el corte como aisladas, encontramos un conjunto heterogneo de clulas de muy variada forma y tamao, con variable cantidad de tejido adiposo; se trata de la mdula sea hematopoytica. NOTAS
Tener presente que la terminacin cito nos indica que la estructura en cuestin se trata de una clula madura, mientras que la terminacin blasto nos indica que tiene una mayor inmadurez. Tener presente que la terminacin plasto nos indica que la estructura en cuestin se trata del lugar o sitio que ocupa u ocupaba una determinada clula.

PARA PENSAR
Qu criterio utilizara para diferenciar los tres tipos de cartlago? Qu entiende por grupo isgeno? Qu funcin tiene el pericondrio? Por qu cree que el cartlago fibroso suele no presentar pericondrio? Cmo le llegan los nutrientes al osteocito?

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CAPTULO

Sangre y Tejido Hematopoytico


En este Trabajo Prctico de Laboratorio se observarn al microscopio los siguientes preparados:

SANGRE PERIFRICA extendido coloreado con May Grnwald- Giemsa.


Para la observacin de los elementos formes de la sangre se requiere utilizar el objetivo de inmersin en aceite (100x) para logar una magnificacin de 1000 aumentos. Para ello se proveer del aceite adecuado y se proceder de la siguiente forma:
a. Bajar totalmente la platina. b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40. d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso. i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin. j. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

Con este objetivo observaremos: ERITROCITOS: se presentan como elementos en forma de disco, de coloracin acidfila (anaranjados), con ausencia de ncleo y zona central ms clara. Mi-

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den aproximadamente 7-8 micras. Es el elemento ms abundante de un frotis sanguneo. Tambin reciben el nombre de glbulos rojos o hemates. NEUTRFILOS: es la clula ms abundante de la serie blanca, mide entre 10 y 12 micras, presenta un ncleo multilobulado (2-5 lbulos unidos por un fino puente cromtinico) en los que la cromatina es de aspecto grueso. El citoplasma presenta grnulos azul plidos. EOSINFILOS: su dimetro es de 9-10 micras, el ncleo es bilobulado y un fino nexo cromatnico los une dando el aspecto de un anteojos, El citoplasma est ocupado totalmente por granulaciones grandes anaranjadas. BASFILOS: son los elementos formes menos abundantes, y por lo tanto difciles de encontrar en un frotis. Miden de 10 a 11 micras, el ncleo es lobulado (2 a 3 lbulos unidos por puentes gruesos) y presenta gran cantidad de grnulos basfilos (azul-violeta) que cubren gran parte del ncleo, dificultando su observacin. LINFOCITOS: Son los elementos ms abundantes de la serie agranuloctica. Los linfocitos pequeos miden de 8-9 micras (similar al tamao de un eritrocito). Su ncleo es esfrico, de cromatina densa y puede presentar una pequea muesca. El ncleo ocupa la mayor parte de la clula y est rodeado de escaso citoplasma color celeste. Los linfocitos medianos y grandes pueden tener proporcionalmente mayor citoplasma. MONOCITOS: Son clulas grandes (15-20 micras), de ncleo exntrico arrionado, con la cromatina laxa en fina red (parece apolillado). El citoplasma es abundante y tiene una coloracin plida (gris).

PLAQUETAS: son los elementos ms pequeos del frotis (1-3 micras), de color azul-violeta, y se presentan aislados o formando conglomerados plaquetarios.

HUESO ESPONJOSO CON MDULA SEA H&E.


Con el objetivo seco dbil observamos espinillas seas rodeadas de la mdula sea, formada por cuatro elementos fundamentales: clulas adiposas, megacariocitos (clulas grandes de 30 a 60 micras, ncleo multilobulado con grumos gruesos de cromatina y citoplasma acidfilo), vasos/nervios y las diferentes progenies celulares sanguneas que forman un magma basfilo (debido a la gran cantidad de ncleos entremezclados). Con objetivo seco fuerte se pueden distinguir mejor las caractersticas ya citadas. No es objetivo de esta actividad distinguir las diferentes progenies.

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NOTAS
Para diferenciar los elementos formes de la sangre perifrica diferenciar primeramente elementos anucleados de nucleados, y diferenciar estos ltimos teniendo en cuenta si el ncleo est o no segmentado, la relacin de tamao entre el ncleo y el citoplasma, la cromatina nuclear y la presencia y coloracin de las granulaciones. Tener presente que la terminacin plasto nos indica que la estructura en cuestin se trata del lugar o sitio que ocupa u ocupaba una determinada clula.

PARA PENSAR
Por qu te parece que algunos autores no consideran a los hemates clulas? Cmo se originan las plaquetas o trombocitos? Se trata de clulas, corpsculos o fragmentos celulares? En un frotis de sangre perifrica qu elemento forme es el ms abundante? qu clula es la ms abundante? qu clula es la menos abundante?

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CAPTULO

Tejido Muscular
En este Trabajo Prctico de Laboratorio se observarn al microscopio los siguientes preparados:

INTESTINO GRUESO- H&E


A los efectos de estudiar el msculo liso podra utilizarse cualquier rgano del tubo digestivo, excepto el tercio superior del esfago. En primer lugar ubicar la luz del rgano. Se puede observar entonces en su pared la primera capa (la mucosa), donde se observa el epitelio cilndrico con clulas caliciformes y las glndulas tubulares (de Lieberkhn). Debajo de ella se observa una capa de tejido conectivo (la submucosa) y luego la capa muscular. En esta se observan dos zonas, una interna y otra externa. Con el objetivo seco fuerte en la capa ms interna se observa un tejido de estructura fibrilar, muy eosinfilo, cuyas clulas pueden estar separadas por delgadas estras de tejido conectivo, ms claras. Los ncleos de estas fibras son alargados, nicos, de extremos redondeados en el sentido de la fibra. Esta descripcin permite deducir que el corte toma a la fibra o clula muscular segn su eje mayor, por lo que esta capa interna est dispuesta en forma circular y perpendicular al eje mayor del tubo. En la porcin ms externa de la capa muscular se observan iguales caractersticas citoplasmticas pero los ncleos de las clulas musculares en vez de alargados son circulares, con iguales caractersticas cromatnicas, y se encuentran situados en la parte central de la clula. Estas caractersticas indican que el corte ha tomado a la fibra en forma perpendicular a su eje mayor y que esta capa entonces tiene entonces una disposicin longitudinal, es decir paralela al eje mayor del tubo.

MSCULO ESTRIADO ESQUELTICO - H&E


Segn la estructura muscular que se observe las fibras o clulas musculares adoptarn distintos sentidos y se encuentran ms o menos aisladas.

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Con los objetivos secos observamos que estas fibras son gruesas y poseen una estructura interna fibrilar, y si la fibra se dispone longitudinalmente, bajando el condensador, o cerrando el iris o moviendo el tornillo micromtrico (diafragmando), una delicada estriacin transversal. Los ncleos de estas clulas son alargados, de cromatina densa y homognea, y estn dispuestos perifricamente y hay varios por fibra. Si la fibra es cortada transversalmente los ncleos se observan perifricos y las estriaciones no se observan, sin embargo las miofibrillas que las componen aparecen bien como puntos o agrupadas en reas o paquetes de aspecto poligonal llamados campos de Cohnheim.

MSCULO ESTRIADO ESQUELTICO - Hematoxilina cida fosfotngstica de Mallory, o PTAH Esta coloracin permite observar las estriaciones transversales en una fibra muscular estriada dispuesta longitudinalmente sin necesidad de diafragmar, ya que con esta tcnica se colorean de azul. Con esta coloracin el colgeno y la elastina del tejido conectivo adquieren un aspecto amarronadoviolceo.

CORAZN - H&E
El miocardio es la capa ms gruesa del corazn y est formado por msculo estriado cardiaco. Con los objetivos secos observamos que presenta caractersticas tintoriales eosinfilas y se trata de un tejido fibrilar. Son ms delgadas que las esquelticas y dan la impresin, cosa que se verifica con mayores aumentos, que estn unidas unas a otras en sus extremos a partir de unas estructuras llamadas discos intercalares (principalmente formadas por uniones estrechas y uniones en hendidura o gap), perdiendo as su individualidad. Cuando la fibra se dispone longitudinalmente, podemos observar diafragmando las estriaciones transversales. Los ncleos son ovalados, de cromatina laxa, nicos y centrales.

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NOTAS
Para hacer el diagnstico diferencial entre los diferentes tipos de msculo se recomienda usar los criterios esquematizados en el siguiente cuadro:

Para hacer el diagnstico diferencial entre tejido conectivo y msculo liso con la tcnica de hematoxilina-eosina debe tenerse en cuenta que ste ltimo presenta un mayor orden, una diferente afinidad tintorial, pero sobre todo las variaciones son notables a nivel de los ncleos. La fibra muscular lisa tiene un ncleo de mucha mayor longitud y espesor y de extremos ms romos que el de los fibroblastos. El uso de tinciones como la PTAH permiti con el uso de microscopios pticos di-

lucidar la estructura del sarcmero, tal como se indica en el siguiente esquema:

PARA PENSAR
Cmo se clasifica el tejido muscular y por qu? Qu es un sarcmero? Qu son los discos intercalares?

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CAPTULO

Tejido Nervioso
En este Trabajo Prctico de Laboratorio se observarn al microscopio los siguientes preparados:

BLOQUE DE SISTEMA NERVIOSO CENTRAL DE RATN - H&E , corte parasagital.


Con el objetivo seco dbil observamos que se trata de un conjunto de rganos ricamente celular. Con objetivos secos fuertes es posible identificar distintos tipos de clulas o los ncleos de las mismas. Algunos de esos ncleos son grandes, tienen la cromatina laxa y presentan un nuclolo ms o menos prominente, estando rodeados por un citoplasma ligeramente basfilo; se trata de los somas o cuerpos de neuronas. Se observan as mismo ncleos medianos, claros, ovoides, de cromatina laxa; corresponden a las clulas de la gla llamadas astrocitos. Tambin podemos encontrar ncleos redondeados algo ms pequeos y oscuros que los de los astrocitos; estos ncleos son los de las clulas de la gla llamadas oligodendrocitos. En escaso nmero (5% o menos) podemos encontrar ncleos alargados muy pequeos y con la cromatina muy densa, son los de las clulas de la gla llamadas microglia.

MDULA ESPINAL - Tcnica de Nissl y/o Impregnacin argntica. Corte transversal. Se puede distinguir claramente la sustancia blanca (fibras nerviosas mielnicas ascendentes y descendentes; y clulas de la gla) de la sustancia gris (cuerpos neuronales y sus prolongaciones, fibras amielnicas en su mayora y clulas de la gla).

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Mediante objetivo seco dbil se comprueba la disposicin de la sustancia gris central en forma de H o de semilunas enfrentadas en su convexidad.. Con objetivo seco fuerte se observa que la sustancia blanca est constituida por una serie de tubos cortados transversalmente y de distintos dimetros, claros o vacos, rematados por un punto levemente coloreado; constituyen las fibras mielnicas que corren paralelas al eje del rgano. En la sustancia gris se observan mayor densidad de neuronas en las astas anteriores o motoras, esto reforzado por el hecho de que las neuronas motoras son de mayor tamao. PARA PENSAR
Qu es una fibra nerviosa? Diferencie el significado del trmino fibra segn se trate de tejido conectivo, muscular y nervioso. Qu se entiende por neuritas y por neuropilo?

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