ENZIMAS EN LA PRODUCCIN DE BIODIESEL

Jairo Alberto Rojas*, Jhoan Sebastian Ceballos* & Yeisson Gutirrez Lpez** *Estudiantes Ingeniera de Alimentos, ** estudiante de Biologa Universidad de Caldas, Mayo de 2010

INTRODUCCIN La problemtica actual del consumo de energas no renovables derivadas combustibles fsiles (petrleo,

industriales

en

procesos es

de

transesterificacin) alrededor del mundo,

prioridad

sin embargo

dichos procesos deberan seguir una serie de parmetros secuenciales e interrelacionados s se quiere

carbono y gas natural), tiene efectos tanto econmicos como ambientales ya que por una parte el

globalizar su produccin, estos son: bsqueda de fuentes de

abastecimiento o suministro de las fuentes de extraccin de dichos

abastecimiento suficientes, procesos eficientes y eficaces en cuanto a rendimiento, efectos bajos o

recursos se ve en dficit en relacin a la necesidad de consumo de nuestra poca que se incrementa cada da, adems las consecuencias del uso exagerado de estas fuentes de

preferiblemente nulos al ambiente, y costos integrales de produccin bajos o por lo menos competitivos con los utilizados para la extraccin de

energa desde hace ms de un siglo ya se estn notando en el ambiente (contaminacin de efluentes,

combustibles fsiles. Esta revisin tendr como objetivo referenciar los procesos existentes donde se utilicen enzimas para su produccin observar su viabilidad y

destruccin de la capa de ozono); por ello la investigacin y puesta en marcha de procesos de produccin de fuentes renovables alternativas

segn

literatura, adems de explorar hacia donde se dirige la produccin de fuentes renovables de energa de

(produccin biolgica a travs de sntesis de residuos orgnicos e

acuerdo a proyectos de innovacin presentes.

son ms compatibles con la variacin en la calidad del material de sustrato y adems son reusables

MARCO TERICO El biodiesel, definido tcnicamente como compuesto de mono-

pueden mejorar la separacin del producto y adems se puede obtener glicerol de alta calidad

alquilsteres de cidos grasos de cadena larga, puede ser producido a partir de lpidos, grasa animal, sebo, aceites residuales y aceites vegetales (palma, castor, colza y Jatropha curcas) convirtiendo estos cidos

Algunos inconvenientes de utilizar enzimas: baja tasa de reaccin elevado costo perdida de actividad despus de un tiempo de reaccin Las enzimas de utilizadas biodiesel para son la las

grasos y triglicridos en steres de alquilo; es llamado biocombustible de segunda generacin ya que utilizan residuos de otros procesos como materia prima (Gonzales et al. 2008). Los catalizadores utilizados para esta transesterificacin, son cidos, bases y enzimas libres o inmovilizadas. Las enzimas tienen una perspectiva

produccin

Lipasas (glycerol ester hidrolasas EC 3.1.1.3), las cuales pueden ser

producidas intra- y extracelularmente; no deben ser estreo-especificas

para que la reaccin se pueda llevar a cabo con todos los tri, di y monoglicridos. Las lipasas ms

interesante para la produccin a escala industrial por las siguientes razones: pueden llevar a cabo la

comnmente utilizadas son las de bacterias y hongos, las mejores enzimas conversin pueden del alcanzar mientras una la

reaccin en un solo paso utilizando menos energa en el proceso y no forman jabones

90%

temperatura este en un rango de 30 a 50C; y el tiempo de reaccin puede variar de 8 horas para Pseudomonas

cepacia

inmovilizada

acuosos y en ausencia de solventes orgnicos e interface los sitios activos de las lipasas presentan una

transesterificando aceite de Jatropha sp. A 90 horas para la misma enzima transesterificando aceite de soya. Entonces no solo el origen de la enzima influir de en el tiempo y

conformacin cerrada y con baja actividad (salvador et al. 2009).

porcentaje

conversin,

sino REACCIN DE TRANSESTERIFICACIN. Al utilizarse como materia prima

tambin la temperatura, actividad acuosa, si la enzima es inmovilizada o no, tiempo de vida de la enzima (Fjerbaek 2009). Las lipasas son enzimas que

triglicridos

(girasol,

colza,

soja,

presentan un mecanismo de reaccin llamado activacin interfacial, que difiere del clsico Michaelis-Menten. La activacin interfacial es explicada por la estructura tridimensional en el sitio de la enzima. El sitio activo de la lipasa se caracteriza por la triada compuesta de serina, histidina y cido glutmico, tambin con

aceites de fritura usado, sebo de vaca, otras fuentes de origen animal y vegetal como a partir de algas, bacterias y hongos, as como a partir de microalgas), el proceso consta de tres reacciones reversibles pasando como producto de la primera reaccin diglicridos hasta monoglicridos

como reactante en la tercera reaccin y produciendo en definitiva glicerol (glicerina) y esteres grasos.

complejos acil-enizma. En medios

R Triglicrid os Alc ohol Alcohol Bi odiesel Glicerina 3 ROH R

Triglicridos 3 ROH

Biodiesel

Glicerina

La configuracin del reactor para enzimas libres y suspendidas para aplicacin industrial necesita incluir la retencin de las enzimas de la corriente de producto. Para enzimas libres se utiliza ultrafiltracin que o las

integren

en

el

proceso en

enzimas la

catalizadoras transesterificacin.

Respectivamente a los procesos de reaccin extractiva, Oliveira et al. Han estudiado la integracin alcohlica de la

centrifugacin,

mientras

enzimas inmovilizadas brindan ms opciones. (Fjerbaek 2009) Para la separacin de los productos de reaccin se hace necesario el empleo de tcnicas de separacin fsicas como destilacin al vaco (para recuperar el alcohol a priori de la separacin decantacin biodiesel de de (para la productos) separar glicerina). y el La

fermentacin

extractiva

con la esterificacin enzimtica del etanol a nivel emprico. El cido oleico es empleado como agente extractor del etanol y como sustrato para la reaccin de esterificacin catalizada Rhizomucor por la lipasa libre de o

miehei

inmovilizada. La viabilidad y eficacia del proceso fue probada en una fermentacin con altas

produccin enzimtica de biodiesel puede ser: Proceso continuo Proceso en batch

concentraciones de glucosa (hasta 400 kg/m3). All, la adicin de la lipasa al sistema de fermentacin extractiva dio como resultado un consumo cuasi entero de la glucosa y una fase acuosa con reducidas

ANTECEDENTES (REVISION BIBLIOGRFICA)

concentraciones de etanol debido a su esterificacin con el cido oleico. Otro estudio (Shukla y kumar. 2004;

Para especificidad en la revisin se tratarn documentos relacionados a la produccin de biodiesel donde se

Giorno

et

al.

2007)

verifica

la

factibilidad del uso de reactores de membrana con lipasas al servicio de

la transesterificacin fundamentada en el uso de este mtodo para la hidrlisis de cidos grasos, ya que mediante la membrana se soporta el catalizador enzimtico y se convierte en barrera de las dos fases (aceiteagua) permitiendo de los la separacin y

que

inactiva

irreversiblemente

la

lipasa, y llega a una variacin en la proporcin de enzimas y metanol, arrojando resultados

significativamente altos de biodiesel (alrededor del 90%). (Shiamada et al. 2002) Naranjo J.C. (2008) valor varios soportes para la inmovilizacin de la enzima, una era una tela de carbn y la otra era carbn granulado, para luego verificar la produccin de a

selectiva

componentes

mejorando el rendimiento en cuanto a conversin condiciones de sustratos de an en o

inhibicin

termodinmicamente desfavorables. Watanabe et al. (2001) evala la actividad de la lipasa de Candida

biodiesel con ambos soportes

condiciones de temperatura de 35 C por veinticuatro horas en cajas de Petri con agitacin y confirm la reaccin de la transesterificacin

antrctica en un periodo de tiempo sometindola a proporciones variadas de metanol en una columna cerrada, y concluy que la actividad

mediante un anlisis de infrarrojo, con esto logr demostrar cualitativamente la obtencin de biodiesel. Martnez C. et al. (2008) en su estudio evalu la utilizacin de

enzimtica de esta lipasa permaneci constante durante cien das. Una estudio continu la evaluando del Candida

mediante

lipasa

microorganismo

diferentes materias primas para la produccin (biodiesel, de biogs, biocombustibles bioetanol), los

antarctica con un sistema modelo de metanolisis y aceites residuales por lotes de dos etapas la dificultad para lograr la reutilizacin de las enzimas en la reaccin de transesterificacin e hizo referencia a que el metanol es insoluble en el compuesto o agente

sustratos empleados a nivel industrial y los factores determinantes en la eleccin de un cultivo energtico, subrayando el uso de biomasa

lignocelulsica en relacin con la

caa de azcar y el maz, y otros cultivos como los Miscanthus (pasto elefante), Jatropha (pion) y Poplar (pasto perenne C4), Swithgrass establece la

extremas y adems pueden acelerar las velocidades la de hidrlisis y

enzimtica,

fermentacin

recuperacin del producto. Kumari A, et al. (2009). Llev a cabo la transesterificacin de aceite de Jatropha con el uso de la lipasa inmovilizada aerogenes solvente con debido de Enterobacter t-butanol a los como efectos

(Panicum

virgatum),

importancia en el uso de biomasa residual para la preservacin del ambiente empero su composicin formada por complejos lignina-

celulosa se convierte en una limitante al ser difcil de degradar; sin embargo mediante unos pretratamientos

adversos causados por el metanol y glicerol, el primero causa la inhibicin de las lipasas inmovilizadas y con ello disminuye la velocidad de la reaccin de transesterificacin, y el glicerol al ser hidroflico es absorbido por la superficie de la lipasa conllevando a un desequilibrio en la estabilidad del sistema; reaccin las de condiciones de la

qumicos y trmicos puede obtenerse celulosa accesible para la accin hidroltica de enzimas por la

decristalizacin, depolimerizacin de la celulosa y solubilizacin de la lignina y hemicelulosa; para la

degradacin de esta biomasa se involucran una serie (que los de

microorganismos enzimas) Aspergillus, como

producen gneros Penecillos,

transesterificacin

fueron: temperatura de 30C bajo agitacin, una mezcla de reaccin aceite- metanol en relacin molar 1:2, t-butanol a 0.2 en volumen y 20 U de lipasa inmovilizada de Enterobacter

Hisopas,

Phanerochaete (hongos),

chrrysosporium reesei,

Trichoderma

Streptomyces, Pseudomonas, thermocellum (bacterias); se y

Cellulomonas, Clostridium Ruminicoccus en estas

aerogenes a 200 rpm; se analizaron los efectos de concentracin de

centra

enzima, adicin de agua, cantidad de solvente (t-butanol), velocidad de

bacterias debido a su capacidad de producir enzimas bajo condiciones

agitacin, temperatura de reaccin, y relacin molar del sustrato. Dicho

anlisis conllevo a establecer que el mayor rendimiento (94%) se logr bajo las siguientes condiciones:

por el mtodo de BET. La cantidad de protena contenida en un gramo de enzima inmovilizada se hallo por el mtodo kjeldhal, de biuret y mtodo que de la

relacin molar de aceite- metanol de 1:4, 50 U de lipasa inmovilizada por gramo de aceite, t-butanol a una relacin de volumen de 0.8/1 a una temperatura de 55 durante un tiempo de reaccin de 48 horas y se concluy que no hubo prdida

encontrndose

eficiencia de inmovilizacin fue de un 30%. La actividad enzimtica

promedio (mmol de acido oleico esterificado/ g de protena *h) fue obtenida para esterificacin de acido oleico con butanol tanto para la lipasa libre como para la inmovilizada para esta ultima la actividad fue de 0.8 veces la de la lipasa libre. Este sistema biocataltico fue probado en

significante en la actividad cataltica de la lipasa despus de repetir el proceso por siete ciclos. Dussan M, K. (2008) trata acerca de la inmovilizacin de la lipasa cndida sobre recubiertas partculas va magnticas activacin Las con

cualitativamente

transesterificacin de aceite de palma con etanol presentando como positiva la presencia de esteres para u tiempo de 72 horas. Finalmente se realizo un anlisis terico de un proceso

glucaraldehido.

partculas

magnticas fueron sintetizadas por el mtodo de co-precipitacion de iones de Fe+3 y Fe+2 en una solucin de hidrxido partculas de sodio. Adems las

enzimtico extraccin reaccin en el que se encontr la zona en la que debe ir el biocatalizador, esto con el fin de que el proceso sea ms eficiente. Esta ubicacin optima del biocatalizador puede ser logrado con la aplicacin de una campo de

magnticas

fueron

recubiertas con ATPS-TEOS para lograr tener en la superficie grupos NH2 que . Mediante anlisis de

espectrometra infrarroja se demostr efectivamente fueron las partculas recubiertas,

magnticas

magntico (11.600gauss).

externo

adems de ocurrir un cambio en su rea superficial la cual fue obtenida

El trabajo de Martnez C. et al (2009), valora el uso de residuos de aceites de fritura como materia prima para la reaccin de transesterificacin y la enzima catalizadora fue la lipasa B de Candida antarctica (Calb) y se analiz los parmetros para utilizo optimizar una de el

no hay aumento en la produccin de steres de metilo debido a una sobresaturacin de la enzima que interfiere en la separacin de

productos y steres metlicos por la solubilidad aumentada del glicerol.

funcionamiento proceso. Se

mezcla CONCLUSIONES A pesar de todas las ventajas mencionadas en procesos que emplean enzimticos, operacin el del catalizadores tiempo sistema de es

homognea de aceites de fritura de restaurantes locales filtrados para remover la materia en suspensin, se determin la composicin de cidos grasos por cromatografa de gases y propiedades fisicoqumicas de

inters, se realiz el ensayo bajo condiciones inferiores en la relacin molar estequiomtrica normal (por debajo de 1:3 aceite-alcohol). Se realizaron varios ensayos, el primero para determinar el tiempo de reaccin ptimo cuyo resultado arrojo un

mayor que en otros procesos de catalizadores qumicos lo que provoca que este sea ms costoso y limitando su uso a nivel industrial, sin embargo al realizar un balance entre

tiempo de tres horas como el pico de rendimiento de steres metlicos, es decir, este tiempo es el necesario para la inactivacin enzimtica; en el segundo ensayo se aade 0.2g de enzima fresca y se incrementa el tiempo de operacin durante cuatro horas para observar los cambios s los hay, los resultados arrojaron que

beneficios y desventajas el resultado sera favorable por los rendimientos considerables de este mtodo. Los procesos en donde se emplean catalizadores

enzimticos eliminan varias de las etapas de produccin como el

convencionales

precalentamiento de la materia prima, la remocin del lavado en la catlisis, adems emisiones

en todas las reas del proceso de produccin de dichas

fuentes. La estandarizacin de las

disminuye

industriales y baja el consumo energtico. Con las nuevas tendencias hacia el uso de residuos

condiciones tanto intrnsecas del proceso (pH, como actividad la

acuosa),

concentracin de catalizador, relacin alcohol / aceite

vegetales (aceites de fritura residuales) lignocelulsicas una posible y se fuentes advierte a la

(molar), tiempo y temperatura de reaccin, que son del

solucin

parmetros

extrnsecos

problemtica actual por el uso de alimentos para la

proceso se hace primordial ya que tienen un durante efecto la

produccin de biocombustibles ya que se asegura un

significativo

reaccin de transesterificacin y por lo tanto en la produccin y cuantificacin de steres grasos o biodiesel que es el compuesto de inters. Las enzimas son catalizadores mucho ms especficos que los catalizadores qumicos, y por lo tanto, promueven mayor purificacin del producto. La produccin de

suministro casi inagotable. Si bien se estn realizando infinidad de estudios para la consecucin energticas de fuentes y

renovables

limpias (biocombustibles), es necesario conjeturar y

estandarizar los mtodos de obtencin que aseguren un alto rendimiento para llevarlos a gran escala s se quiere avanzar a la siguiente etapa de desarrollo, ya que por ahora ningn estudio es aceptado por la mayora de involucrados

biocombustibles, en este caso el bioetanol se hace factible por su amplia gama de

catalizadores enzimticos que reporta la literatura y cuyos

ensayos eficacia y

determinaron viabilidad

su con

generacin y Biodiesel: Una mirada a la contribucin de la Universidad de los Andes.

diversa materias primas que contienen cidos grasos.

Revista de Ingeniera. no.28, p.70-82. Kumari

A.,

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ANEXO Tabla extrada de Fjerbaek (2009) que muestra la produccin de Biodiesel con lipasas de diferentes microorganismos, con diferentes materias primas