CENTRO FEDERAL DE EDUCAO TECNOLGICA DE MINAS GERAIS DEPARTAMENTO DE QUMICA COORDENAO DE ENSINO TCNICO

DISCIPLINA- Qumica Orgnica Aplicada III Turma: Mdulo 3- 2013 / Primeiro semestre

Alunos: Alana Santos Benz Alef Cleto Almeida

Data da prtica: 12/12/12

Desenvolvimento de sistema cromatogrfico via cromatografia em papel para separar clorofila de carotenoides em manjerico

Belo Horizonte/ 1 semestre

INTRODUO A seleo do solvente de fundamental importncia numa cromatografia, podendo ser feita atravs de tabelas apropriadas ou experimentalmente. A escolha experimental pode ser feita atravs de testes em tubos de ensaio, com solventes mais comuns ou a mistura deles. Os compostos polares ou inicos dissolvem-se em geral, na gua e nas substncias igualmente polares, como alcois, por exemplo. J os solventes dos compostos apolares so, tambm, apolares. Os compostos que formam ligao de hidrognio so solveis, em geral, na gua, exceo daqueles cuja parte alqulica da molcula relativamente grande (superior a seis tomos de carbono). De certa forma, todas as substncias orgnicas que no possuem hidrognio capaz de associar-se s molculas de gua ou de alcois, dissolvem-se em ter etlico, benzeno, benzina, ter de petrleo, e outros solventes apolares. Os solventes que apresentam hidroxilas associadas (metanol, etanol, cido actico) so miscveis em gua, elas apresentam carter solubilizante intermedirio entre a gua e o ter etlico ou o benzeno. Estes solventes devem ser preferidos para dissoluo de compostos que apresentam, igualmente, associao de molculas. O clorofrmio e o tetracloreto de carbono so bons dissolventes para os compostos cujas molculas no se associam. A acetona, em alguns casos, possui poder dissolvente superior ao do etanol.1 Os pigmentos verdes dos organismos fotossintticos so conhecidos coletivamente como clorofilas, os quais encontram-se nas clulas vegetais fotossintetizantes em organelas chamadas cloroplastos. A clorofila o principal pigmento absorvedor de luz da fotossntese, a qual consiste num processo metablico fundamental a todos os organismos vivos. Os cloroplastos das plantas superiores sempre contm dois tipos de clorofila: clorofila a e clorofila b. Quimicamente a molcula de clorofila uma porfirina. Porfirina qualquer pigmento tetrapirrlico macrocclico, na qual os anis de pirrol formam um circuito conjugado fechado. A clorofila b difere da clorofila a pela presena de um resduo aldedo ao invs de um grupo metila na posio 7, conforme mostrado na figura 1.2

Figura 1 Molcula de clorofila

Fonte: adaptado de Hyvarinen & Hynninen, 1999.

Os carotenoides compreendem uma famlia de compostos naturais, dos quais mais de 600 variantes estruturais so reportadas e caracterizadas, a partir de bactrias, algas, fungos e plantas superiores. Os carotenoides mais comumente encontrado nos alimentos vegetais so o b-caroteno, licopeno, vrias xantofilas e a bixina. As frmulas qumicas de parte dos carotenoides mencionados esto representados na figura 2.

Figura 2 Estrutura qumica de alguns carotenides Como regra geral, os carotenoides so lipossolveis. No plasma de mamferos so transportados em associao s lipoprotenas. Excepcionalmente adquirem alguma hidrossolubilidade como resultado de processos oxidativos ou derivatizaes naturais. O objetivo desta prtica o desenvolvimento de uma parte mvel capaz de separar clorofila de carotenoides por meio de cromatografia em papel.

MATERIAIS Cuba cromatogrfica (ou pote de vidro de tamanho mdio) Papel de filtro qualitativo Capilar aplicador de amostra Rgua Lpis Proveta 50 mL Graal Pistilo 5 tubos de ensaio Estante para tubos de ensaio

REAGENTES Acetona PA, marca Vetec lcool etlico PA, marca Vetec Cloreto de metileno (diclorometano) PA ACS, marca Vetec Acetato de etila PA ACS, marca Prquimios Hexano PA ACS, marca Dinmica Reagentes Analticos Amostra de manjerico em acetona PA (extrato)

METODOLOGIA E RESULTADOS - Preparou-se as cromatoplacas cortando-se o papel de filtro em tiras de aproximadamente 3 cm de largura, marcando-se com lpis o ponto de partida (1,5 cm) e a linha de chegada (1,0 cm); - Aplicou-se a amostra no papel com o auxlio de um aplicador;

- Transferiu-se aproximadamente 5 mL das fases mveis escolhidas para cada tubo de ensaio, verificando-se que: no ocorreu eluio da amostra em hexano como fase mvel; arraste da amostra ocorreu com fase mvel de diclorometano, de diclorometano/acetona e tambm com etanol, porm no houve separao de componentes; ocorreu eluio e boa separao de componentes com fase mvel de hexano/diclorometano.

DISCUSSO E CONCLUSO A principal caracterstica para a escolha do eluente a sua polaridade, dado que a eluio um processo de separao devido s diferentes interaes entre a amostra, a fase estacionria e a fase mvel. Para a realizao da prtica baseou-se na srie eluotrpica disponvel no laboratrio. Por tratarse de compostos orgnicos de parte alqulica grande (mais que 6 carbonos em sua estrutura) escolheuse partir dos eluentes apolares e realizar os testes posteriores com compostos mais polares, capazes de interagir mais fortemente com a amostra e separ-la dos compostos mais adsorvidos fase estacionria. No houve eluio com hexano (Rf = 0), logo, a afinidade dos compostos com este no forte o suficiente para promover uma separao. Seguindo-se a srie eluotrpica, utilizou-se o diclorometano. O cromatograma evidenciou que a interao entre os compostos e a fase mvel era mais forte (Rf = 0,38), entretanto no houve separao dos mesmos. Testou-se ainda como fases mveis a mistura 1:1 de diclorometano/acetona e etanol. O arraste dos compostos foi identificado no cromatograma, porm a eluio no teria ocorrido pois no houve ainda a separao dos compostos. Testou-se ento como fase mvel a mistura 1:1 de hexano/diclorometano, conseguindo-se uma eluio e boa separao de carotenoides (Rf = 0,74) e clorofila (Rf = 0,22). A diferente polaridade dos dois compostos determinante nesta separao, visto que a clorofila possui maior afinidade com a fase estacionria (gua adsorvida pela celulose na superfcie do papel) e os carotenoides pela fase mvel (a mistura de diclorometano/hexano 1:1) pois apresentam menos grupamentos polares, mas ainda assim no so compostos apolares, pois, se fossem, a separao teria sido eficaz utilizando-se apenas hexano como eluente. A melhor fase mvel para tal separao portanto uma mistura entre hexano e diclorometano, podendo-se realizar outros testes com misturas de diferentes proporo para a obteno de uma separao ainda mais eficaz.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1

MACHADO, A. M. R; SANTOS, M. S. dos. Qumica Orgnica Aplicada I. Curso Integrado 3

Srie/Curso Modular Mdulo III. Belo Horizonte: Grfica do CEFET-MG, 2007.

2

MALHEIROS, G. C. Estudo da alterao da cor e degradao da clorofila durante armazenagem de

erva-mate tipo chimarro. 2007. 103p. Dissertao (Mestrado em Cincia e Tecnologia dos Alimentos) Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Santa Maria.
3

FONTANA et al. Carotenides: cores atraentes e ao biolgica. Revista Biotecnologia: Cincia &

Desenvolvimento. Ano 2, n. 13, abr./mar. 2000.