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DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE UN AMINOCIDO Diana Lalaleo; Egda Mara Fernanda Garcs; Ing.

Mara Teresa Pacheco Universidad Tcnica de Ambato, Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos Av. Los Shyris .Campus Huachi Laboratorio de Qumica de los Alimentos II Av. Colombia y Chile Campus Ingahurco. diani-4444@hotmail.com RESUMEN Los puntos isoelctricos proporcionan informacin til para razonar sobre el comportamiento de los aminocidos y protenas en solucin. As, la presencia de grupos ionizables en stas molculas tiene importantes consecuencias sobre la solubilidad. Se realizo titulaciones de un aminocido polar con carga y un aminocido no polar, con NaOH para haciendo mediciones de pH en cada mL adicionado de cido para encontrar los pKa del aminocido; graficamos los resultados y determinamos su punto isoelctrico de los aminocidos fenilalanina e isoleucina. El pI de los -aminocidos monoamino-dicarboxlicos se encuentra a un pH intermedio entre los valores de pKa de los grupos carboxlicos y en el caso de los -aminocidos diamino-monocarbox-licos entre los valores de pKa de los grupos amino los cuales fueron de la isoleucina . Palabras clave: aminocidos, isoleucina, fenilalanina, punto isoelctric,o amino, carboxilo 1. INTRODUCCION El comportamiento cido-base de los aminocidos reviste una gran importancia biolgica, ya que influye a su vez en las propiedades de las protenas de las que forman parte. Adems, las tcnicas para separar y analizar los aminocidos componentes de una protena se basan en gran medida en su comportamiento cido-base. DOMINGUEZ, X. CANTU, L. R, HINOJOSA, D., ROJAS GARCIDUEAS CANO, J., (1989). Por lo cual el objetivo de este estudio es determinar el punto isoelctrico de los aminocidos isoleucina y fenilalanina a partir de pka de grupos carboxlicos y amino mediante la curva de titulacin.

Los aminocidos son compuestos orgnicos que poseen un grupo carboxilo y un grupo amino. Pueden ser , , , aminocidos. En la naturaleza existen distintos tipos de aminocidos que desempean diferentes funciones, sin embargo, los aminocidos que forman parte de las protenas son todos ellos -aminocidos. los aminocidos existen en disolucin, y cristalizan a partir de las disoluciones, en forma de iones dipolares A pH neutro el grupo carboxilo cede un protn y queda cargado negativamente y el grupo amino capta un protn y queda cargado positivamente. As, los aminocidos pueden comportarse como cidos o como bases segn el pH del medio; se dice que son sustancias anfteras. Existe un valor de pH llamado punto isoelctrico (pI) para el cual el aminocido est compensado elctricamente (carga neta = 0). pI = (pKa + pKa)/2 ROWN, T., LEMAY, H. E., BURSTEN B., E. (1993). Las curvas de titulacin de los aminocidos son ms complejas que las de los pares conjugados cidobase corrientes. Esto se debe a que cada aminocido posee dos grupos funcionales capaces de aceptar o ceder protones (amino y carboxilo), cada uno de los cuales tiene su propio pK y comportamiento cido-base caracterstico. Por otra parte, algunos aminocidos presentan cadenas laterales (R) con grupos funcionales que son potenciales dadores o aceptores de protones, y que por lo tanto tambin influyen de manera determinante en sus propiedades cido-base. BURTON, D. J. ROUTH, J.L. (1990).

2.

METODOLOGIA Y MATERIALES

En un dos matrazes aforados, se preparo 25 ml de una solucin 0.1 M de dos aminocidos tales como isoleusina y fenilalanina, acidulando hasta pH cercano a 1, con el HCl 1 M. Se Enraso una bureta de 50 ml con el NaOH1 M y se procedi a titular la solucin de los aminocidos con el NaOH1. se tomo nota del pH que adquiere la solucin del aminocido despus de cada 0,5 ml de ttulo aadido se continu la titulacin hasta llegar a pH 12.

3.

DATOS OBTENIDOS

Tabla 1; titulacin de la solucin de fenilalanina ( NaOH aadidos y pH alcanzado)

Grafica 1: Curva de titulacin de Fenilalanina

ml NaOH Inicial 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6

Ph fenilalanina) 6,10 1,41 1,63 1,88 2,12 2,42 2,85 7,09 8,71 9,13 9,49 9,92 10,81 12,24

(a.a. 14 12 10 pH 8 6 4 2 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 ml de NaOH

COOH

pKa 2
9,13

P.I pKa 1
1,88

NH3
5,50

Elaborado por: Diana Lalaleo Fuente: Laboratorio de Qumica de los Alimentos II Elaborado por: Diana Lalaleo Fuente: Laboratorio de Qumica de los Alimentos Tabla 2; titulacin de la solucin de Isoleucina ( NaOH aadidos y pH alcanzado)

Grafica 2: Curva de titulacin de Fenilalanina

ml NaOH Inicial 0 1 2 2,5 3 4 4,5 5 5,5 6 7

Ph (a.a. Isoleucina) 6,40 1,99 2,59 8,27 9,48 9,74 10,54 11,64 12,35 12,60 12,77 13,01

14 12 10 pH 8 6 4 2 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 ml de NaOH


Elaborado por: Diana Lalaleo Fuente: Laboratorio de Qumica de los Alimentos II 2,59

COOH

pKa2
9,54

PI

6,06

NH3

pKa 1

Elaborado por: Diana Lalaleo Fuente: Laboratorio de Qumica de los Alimentos II

4.

RESULTADOS Y DISCUSIN

La curva de titulacin realizada a partir de los aminocidos isoleucina y fenilalanina se determino el punto isoelctrico de cada uno mediante los datos que se muestran en la tabla N 1 y tabla N2 respectivamente previo a la titulacin fue necesario acidular el ph para obtener la curva que se observa en las graficas 1 y 2 en la neutralizacin de dichos aminocidos se identifican el pKa1 y el pKa2 que es la fuerza que tienen las molculas de disociarse en el caso de pKa1 es respecto al primer protn se elimina de una molcula neutra en el caso de la fenilalanina se observa como a partir de 1.88 de ph se incrementa significativamente al igual que en el aminocido isoleucina donde es mas evidente en la curva representado en la grafica 2 y la solubilidad es muy baja . Y pKa2 que se refiere al segundo protn se quita de un negativamente cargada de iones, tal como se observa en la grafica del aminocido fenilalanina donde el pKa2 marca la inflexin superior donde la acides del grupo carboxilo ya es constante y la solubilidad aumenta. Mediante el promedio se puede determinar el Punto Isoelectrico , asi la grafica 1 presenta que el de la fenilalanina corresponde a 5,50 y 6,05 para la isoleucina los mismo que son muy similares a los bibliogrficos (5,48 y 6,02) respectivamente, este dato puede variar dependiendo a la concentracin de las soluciones de acido-base que se utilicen y a los reactivos porque presentan diferente fuerza para e el movimiento de las molculas. El PI representa el pH en el cual el nmero de cargas positivas se iguala al nmero de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de la isoleucina y fenilalanina. En el punto isoelctrico la carga neta de los aminoacidos es cero (0). En los aminoci-dos los grupos ionizables corresponden a grupos carboxilos, amino. La determinacin del PI es importante porque el orden de los aminocidos en la molcula de protena determina la relacin mutua de las cadenas laterales y por consiguiente determina cmo la protena interacciona consigo misma y el medio. De acuerdo con las ramificaciones que presentan los aminocidos que conforman las protenas as ser su comportamiento anfotrico y la tendencia a formar enlaces de hidrgeno que son una caracterstica trascendental en las protenas. 5. CONCLUSIONES

ANEXOS

CALCULOS Punto Isolectrico

Fenilalnina

Isoleucina

CUESTIONARIO

1.1 Reportar una tabla de valores bibliogrficos de


PI de aminocidos. AMINOCIDO Glicina Alanina Valina Leucina Isoleucina Fenialanina Tirosina Triptfano Serina Treonina Cistena Metionina cido Asprtico cido Glutmico Histidina Lisina Arginina Asparginina Glutamina Prolina TABLA 3: Valores de pI de los -aminocidos. PUNTO ISOELTRICO 5,97 6,07 5,97 5,98 6,02 5,48 5,66 5,89 5,68 5,87 5,07 5,74 2,77 3,22 7,59 9,74 10,76 5,41 5,65 6,48 los grupos ionizables de

Los aminocidos tienen en su forma interna, un estado llamada zwitterin. Esto ocurre porque un electron del oxigeno del grupo carboxilo es atrado por el grupo amino NH2 (ya que a al nitrogeno le sobraban dos electrones de valencia) que est en posicin alfa y quedando este como grupo amonaco NH3+ por lo que se determino que el punto isolectrico a partir del pKa del grupo amino y carboxilo presente en los aminocido en el caso de la Isoleusina es 6,06 y de la fenilalanina es 5,50, estado donde present menor solubilidad, la importancia de la determinacin de PI es que permite conocer el tipo de protena y la estabilidad , debido a la polaridad de sus grupos funcionales.

Fuente: http://www.qb.fcen.uba.ar/quimicabiologica/Tabla %20pKa.html 3.2 Cmo se llama el estado en el cual un aminocido presenta carga neutra? Punto isoelctrico (pI): pH en que la carga neta del aminocido es nula; en este punto elminocido se encuentra en forma de ion dipolar, as como en pequeas cantidades equimolaresde aniones y cationes y una pequea fraccin de aminocido no ionizado.El pI de los aminocidos neutros se localiza a pH 6-8. pH<pl. carga + pH>pl. carga pH =pl carga neutra

BIBLIOGRAFIA ROWN, T., LEMAY, H. E., BURSTEN B., E. (1993). Qumica La ciencia central quinta edicin, PrenticeHall Hispanoamrica S.A. Mxico. BURTON, D. J. ROUTH, J.L. (1990). Qumica Orgnica y Bioqumica. Primera edicin Sistemas Editoriales Tcnicos S.A. de C.U. Mxico D.F. DOMINGUEZ, X. CANTU, L. R, HINOJOSA, D., ROJAS GARCIDUEAS CANO, J., (1989). Ciencias Naturales, Tercer Grado de Enseanza Secundaria Noriega Editores Limusa, Mxico D.F. GUYTON, A. (1967) Fisiologa Humana, segunda edicin , Editorial Interamericana S.A. Mxico D.F.

3.3 En qu estado se halla un aminocido cuando el medio es cido y porqu? Cationico por que al estar en un ambiente acido tiende a cargarse posititivamente.

3.4 Consultar qu aminocidos se hallan presentes en los siguientes alimentos: carne, leche, huevos, soya, frjol, lenteja, trigo, cebada, quinua, amaranto, chocho. (elaborar y reportar una tabla).

Ile
Carne Leche Huevos Soya Frejol Lenteja Trigo Cebada Quinua Amaranto Chocho

Leu
x x x x x x x x x x x

Met
x x x x x x x x x x x

phe
x x x x x x x x x x x

Thr
x x x x x x x x x x x

Trp
x x x x x x x x x x

Val
x x x x x x x x x x

His
x x x X X X X x X x X

x x x x x x x x x x x

Valina (Val) Leucina (Leu) Treonina (Thr) Triptfano (Trp) Histidina (His) Fenilalanina (Phe) Isoleucina (Ile) Metionina (Met) En conclusin estos alimentos poseen todos los aminocidos esenciales. (casi todos los aminocidos esenciales el amaranto)