CENTRO UNIVERSITRIO DO MARANHO COORDENAO DE MEDICINA LMF 3 perodo

CITOGENTICA CLNICA
Prof. Msc. Andrya Mrcya de Holanda Araujo Viana

PRINCPIOS DA CITOGENTICA

NOMENCLATURA CROMOSSMICA
Antes de 1971 Grupos Tamanho decrescente Posio do centrmero Aps Conferncia em Paris 1971 Grupos Tamanho decrescente Posio do centrmero Padro de bandas: cromossomo + regies e bandas

NOMENCLATURA CROMOSSMICA
A: 1-3 (1 e 3 metacntricos grandes, 2Intermedirio)
B: 4-5 (submetacntricos grandes) C: 6-12+X (submetacntricos mdios)

D: 13-15(acrocntricos mdios com satlite)

E: 16-18 ( 16- metacntricos intermedirios, 17 e 18- submetacntricos pequenos) F: 19-20 (metacntricos pequenos) G: 21-22+Y (21 e 22- acrocntricos pequenos com satlite, Y- no tem satlite)

NOMENCLATURA CROMOSSMICA
Padro de bandas - Caspersson, 1970: Bandas Q - Seabright, 1971: Bandas G - Bandas C: heterocromatina constitutiva centrmero, NaOH ou Ba(OH)2 - Bandas R: desnaturao com altas temperaturas + sal (soluo de Earle a 87C e pH=6,8) - Banda NOR: c. tricloroactico quente e c. Clordrico + impregnao com prata amoniacal - Bandas T: soluo de Earle pH=4,5 - 5,5 (telmeros) - Alta Resoluo

NOMENCLATURA CROMOSSMICA
- FISH (fluorescence in situ hybridization) - Sondas: cadeias simples de DNA marcadas com nucleotdeos modificados quimicamente (biotina avidina) - Hibridizao - Metafsicos - Interfsicos (resultado em 24 a 48 hs, no necessita cultura). - Diagnstico pr-natal (clula interfsica)

Sondas telomricas

FISH Tipos de Sondas

- Centromricas: DNA repetitivo
- Loco nico: delees e duplicaes - Cromossomo inteiro: pintura, coquetel de sondas, translocaes e material adicional

- Espectro multicolorido: conj. Sondas de pintura, caritipo multicolorido, pequenos rearranjos constitucionais ou adquiridos (cncer)

Anlise de Espermatozides
Cromossomo 18 = Amarelo Cromossomo Y = Verde

Cromossomo X = Vermelho 23,Y

Y

18

X
X 18 18

Y
X

X
18 23,X 24,XX 24,XY

Lquido Amnitico
X = Verde Y = Vermelho 18 = Azul 21 = Vermelho 13 = Verde

X = verde 18 = Azul

Y 18

X 18 X X 18 X 18 18 18

21 21 21

13 13

18

Isocromossomo dicntrico: Vermelho = Sonda centrmero X Centrmeros funcionais = Verde (dois pontos) = Sonda Centrmero normal

Prader-Willi

Verde = Centrmero
Vermelho = sonda controle 15q distal Vermelho = sonda para o gene de PraderWilli 15q proximal

Translocao Balanceada (11;16) -Pintura Cromossmica 11 = Amarelo

46,X,r(X)

46,X,r(X)

Painting normal

Painting Cncer

Painting cromossomo Ph LMC

CGH-ARRAY
- Array-CGH uma tcnica de citogentica molecular que permite verificar se h perdas ou ganhos de segmentos cromossmicos submicroscpicos no genoma de um indivduo.
- O caritipo por bandeamento G oferece informao semelhante, mas com limite de resoluo bem menor s detecta alteraes maiores do que 4-10 Mb.

- O exame de array-CGH detecta alteraes cromossmicas de 10 a 100 vezes menores do que visvel ao microscpio ptico, dependendo da plataforma utilizada.

UTILIZAO
- O exame de array-CGH resulta em diagnstico com a identificao de perdas ou ganhos cromossmicos em aproximadamente 20% dos casos de deficincia mental e/ou anomalias congnitas. Este exame no tem finalidade teraputica

MATERIAL NECESSRIO
- 5 ml de sangue perifrico coletado em tubo contendo EDTA (tampa roxa) ou no mnimo 1 ug de DNA de boa qualidade, tanto do paciente quanto dos pais
- outros 5 ml de sangue perifrico coletados em tubo contendo heparina ou suspenso fixada de preparao de metfases do trio (para eventual confirmao por FISH).

METODOLOGIA
- Baseado na hibridizao de DNA de tumor (marcado de cor verde, geralmente FITC) e DNA normal (marcado de cor vermelha, geralmente Rodamina)
- O DNA do tumor e o DNA normal so marcados diferencialmente, e hibridizados com milhes de sondas. - As sondas so derivadas de genes conhecidos e de regies no codificantes do genoma - O nvel de intensidade de fluorescncia do tumor em relao ao DNA de referncia comparada e o resultado avaliado

Caritipo

Conceito: Estudo dos cromossomos, de sua estrutura e sua herana aplicado gentica mdica Indetifica mais de 100 sndromes Presente em 1% dos nativivos e 2% das gestaes de mulheres com mais de 35 anos 50% dos abortos espontneos de 1 trimestre

No-disjuno

Meiose I: Gametas com material gentico extra maternos e paternos

Meiose II: Gameta com cromossomo extra com material gentico de apenas um genitor

ALTERAES ESTRUTURAIS
- BALANCEADAS
- TRANSLOCAES BALANCEADAS RECIPROCAS ROBERTSONIANA

- INVERSES

INVERSO

ALTERAES ESTRUTURAIS
- NO BALANCEADAS DELEO DUPLUCAO ISOCROMOSSOMO INSERO

DELEO

DUPLICAO

ISOCROMOSSOMO

MOSAICISMO