ANLISIS DE RESTRICCIN

1970
Base Qumico usado para la alteracin de la base Dimetil sulfato Acido Hidrazina Hidrazina + alcali Qumico usado para remover la base alterada Formato de piperidina Acido Piperidina Piperidina Qumico usado para dividir la cadena Piperidina Piperidina Piperidina Piperidina

G A+G C+T C

Haemophilus influenzae HindII

El Premio Nobel de Medicina de 1978 fue concedido a los microbilogos Werner Arber, Daniel Nathans y Hamilton Smith por el descubrimiento de las endonucleasas de restriccin lo que condujo al desarrollo de la tecnologa de ADN recombinante. El primer uso prctico de su trabajo fue la manipulacin de la bacteria E. coli para producir insulina humana para los diabticos.

Nomenclatura E co R

Ejemplo Escherichia coli RY13 La primera enzima identificada

Corresponde a: Gnero de la bacteria Especie de la bacteria Cepa de la bacteria Orden de identificacin de la enzima en la bacteria

Isoesquizmero

Extremos compatibles

Endonucleasa

Metiltransferasa

S-adenosil-metionina
(ATP+metionina)

SISTEMA DE RESTRICCION MODIFICACION TIPO I ENZIMA TIPO I Enzima bifuncional de 2 subunidades: R y M. Acta simultneamente. ENZIMA TIPO III Enzima bifuncional de 2 subunidades. Endonucleasa y metilasa. Acta exclusivamente 5-7 pb. Corta al azar. 24 - 26 pb. Cohesivos. Mg, ATP y SAM.

SISTEMA DE RESTRICCION MODIFICACION TIPO II ENZIMA TIPO II Endonucleasa. Actan por separado.

Sitio de reconocimiento: 5-7 pb.

Corta al azar. 100-1000 pb. Cohesivos. ATP, Mg y S-adenosilmetionina.

4-6 pb. Cerca del sitio de reconocimiento. Romos o cohesivos. Mg y SAM

Sal I154 Apa I

Sal I778 Sal I

3000 3054

3000

3154

pGEM-Tpsr 4182 pb

pGEM-Tpsr (4182 pb)

624 624 624

Apa I y Sal I

3000, 624, 408 y 154 pb.

Sal I
506, 517 396 408
1 2 3

3154, 624 y 408 pb.

408
4 5

1) 2) 3) 4) 5)

Marcador de 1Kb. Control negativo. Digerido con Apa I y Sal I. Digerido con Apa I y Sal I. Digerido con Sal I.

Problema 1. Qu individuos tienen un alelo normal y qu individuos uno mutado? Justifica tu respuesta

Problema 2. En la fotografa se muestran 3 plsmidos con inserto, podras decirme si son iguales? Justifica tu respuesta

3 kb

0.75 kb

0.5 kb

Glick, B.R., Pasternak, J.J., Molecular Biotechnology: Principles and applications of recombinant DNA, Ed. American Society Microbiology, 1998. Sambrook, J. y Russell, D.W. Molecular Cloning: A laboratory manual. Ed. Cold Sping Harbor Laboratory Press, New York, 2001. http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/default.asp (NewLab) http://www.promega.com/resources/product-guides-and-selectors/restriction-enzymeresource (Promega) http://www.fermentas.com/en/products/all/fastdigest-restriction-enzymes (Fermentas)