UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR Facultad de Ciencias Qumicas DATOS INFORMATIVOS Asignatura: Toxicologa Clinica

PRCTICA DE LABORATORIO DE TOXICOLOGA GENERAL

Practica: Fecha: 13/05/2013 Entrega: Fecha: 30/05/2013

Carrera Semestre: Bioqumica Clnica/ 6to semestre Nombre (s): - Narvez Cristian - Sucuy John Grupo N: 2 DATOS TERICOS

TITULO: DETERMINACIN DE DROGAS ACIDAS 1. OBJETIVO: De determinaren forma cualitativa la presencia de drogas o productos de accin farmacolgica de naturaleza dbilmente cida (analgsicos antiinflamatorios no esteroidales - AINE) en muestras biolgicas (orina) de personas intoxicadas o en tratamiento con AINE. 2. FUNDAMENTO: Se fundamenta en la identificacin directa de las formas libres y sus metabolitos con sales frricas que reaccionan con el grupo OH en un medio cido para dar un complejo coloreado, cuya intensidad de color depende de la sustancia y de la cantidad presente, que puede visualizarse en la placa cromatogrfica y comparada con estndares conocidos. 3. DEFINICIONES: AINE: Analgsico antiinflamatorio no esteroidal Los antiinflamatorios no esteroideos (abreviado AINE) son un grupo variado y qumicamente heterogneo de frmacosprincipalmente antiinflamatorios, analgsicos y antipirticos, por lo que reducen los sntomas de la inflamacin, el dolor y la fiebrerespectivamente.1 Todos ejercen sus efectos por accin de la inhibicin de la enzima ciclooxigenasa.2 Los antiinflamatorios naturales, segregados por el propio organismo, son los derivados de los corticoides, sustancias de origen esteroideo de potente accin antiinflamatoria, pero que cursan con importantes efectos secundarios.3 En oposicin a los corticoides, el trmino "no esteroideo" se aplica a los AINE para recalcar su estructura qumica no esteroidea y la menor cantidad de efectos secundarios. Como analgsicos se caracterizan por no pertenecer a la clase de los narcticos y actuar bloqueando la sntesis deprostaglandinas

4. CONTENIDO DESARROLLO DE LA PRCTICA:

MUESTRA: Orina o Sangre Tomar la muestra de sangre por puncin venosa, colocar en un tubo sin anticoagulante, separar el suero por centrifugacin. Recolectar la muestra de orina, si el frmaco se encuentra en fase de eliminacin

MATERIALES - Embudo de separacin - Centrfuga - Bao Mara - Pipetas serolgicas - Matraces - Probeta fluorescente - Embudo de Filtracin - Papel filtro etlico ( l7: 3 ) - Lmpara UV - Nebulizador - Cmara Cromatogrfica

REACTIVOS - HCl 1 % - Fe Cl3 10 % (Revelador) - Disolvente Eter o Cloroformo - Sulfato de sodio anhidro - Placas de slica gel G con aditivo - Eluente : Cloroformo : Eter

Estndares: solucin al 1 % en metanol de principios activos de Paracetamol y AINE: Acido Acetil Saliclico, Ibuprofeno, Naproxeno,

Fundamento Terico: ANTIINFLAMATORIOS NO ESTEROIDEOS Los antiinflamatorios no esteroideos son un grupo variado y qumicamente heterogneo de frmacosprincipalmente antiinflamatorios, analgsicos y antipirticos, por lo que reducen los sntomas de la inflamacin, el dolor y la fiebrerespectivamente.1 Todos ejercen sus efectos por accin de la inhibicin de la enzima ciclooxigenasa.2 Los antiinflamatorios naturales, segregados por el propio organismo, son los derivados de los corticoides, sustancias de origen esteroideo de potente accin antiinflamatoria, pero que cursan con importantes efectos secundarios.3 En oposicin a los corticoides, el trmino "no esteroideo" se aplica a los AINE para recalcar su estructura qumica no esteroidea y la menor cantidad de efectos secundarios. Como analgsicos se caracterizan por no pertenecer a la clase de los narcticos y actuar bloqueando la sntesis deprostaglandinas.4 Los antiinflamatorios no esteroideos disponibles en el mercado inhiben la actividad tanto de la ciclooxigenasa-1 (COX-1) como a la ciclooxigenasa-2 (COX-2) y, por lo tanto, la sntesis de prostaglandinas y tromboxanos. Se piensa que es la inhibicin de la COX-2 la que en parte conlleva a la accin antiinflamatoria, analgsica y antipirtica de los AINE, sin embargo, aquellos que simultneamente inhiben a la COX-1 tienen la capacidad de causar hemorragias digestivas y lceras, en especial la aspirina.1 Por lo tanto, se enfatizan las ventajas de inhibidores selectivos para la COX-2. El AINE prototipo es la aspirina y le acompaan una gran variedad de cidos orgnicos, incluyendo derivados del cido proplico(como el ibuprofeno y naproxen), derivados del cido actico (como la indometacina) y cidos enlicos (como el piroxicam), todos competidores con el cido araquidnico por el sitio activo de la ciclooxigenasa. El paracetamol se incluye entre los AINE, a pesar de su poca accin antiinflamatoria.

Clasificacin qumica

Con el advenimiento de los inhibidores de la ciclooxigenasa (Coxib) o inhibidores selectivos de la COX2, la tendencia actual en las clasificaciones es a agruparlos segn su capacidad en una determinada concentracin y utilizando mtodos in vitro de inhibir el 50% de la COX-2 en comparacin con la concentracin necesaria para inhibir el 50% de la COX-1. Las variaciones que se han visto en los datos reportados en los ltimos aos se relacionan con los diversos mtodos experimentales de investigacin utilizados para hallar resultados que ubiquen a un AINE en valores que indiquen su selectividad COX.12 De ah que resumiendo todos los datos obtenidos se ha intentado agrupar a los AINE antiinflamatorios no esteroideos segn:

1. Equipotencia inhibidora de COX-2 versus COX-1 2. El porcentaje de inhibicin de COX-1 cuando se inhibe el 80% de la COX-2, que correspondera 3. La concentracin necesaria de un AINE para lograr efectos teraputicos relevantes Los AINE, entonces, se pueden agrupar de acuerdo con su mecanismo de accin en inhibidores no selectivos de la ciclooxigenasa e inhibidores selectivos de la ciclooxigenasa-2.13 De otras clasificaciones posibles para los AINE, quizs la ms utilizada sea la que se basa en su estructura molecular. En funcin a la estructura qumica bsica sobre la que se desarrolla cada frmaco, estos pueden ser:

Clasificacin de los AINE5 Salicilatos cido acetilsaliclico Clonixinato de lisina Benorilato Diflunisal Derivados indolacticos Acemetacina Glucametacina Indometacina Proglumetacina Oxametacina Derivados ariloacticos Aceclofenaco Diclofenaco Etodolaco Fentiazaco Ketorolaco Oxicanes: Droxicam Meloxicam Piroxicam Tenoxicam cidos enlicos

Pirazolonas: Fenilbutazona Mofebutazona Oxifenbutazona Clofezona

Aspirina

Sulindac

Etodolaco

Piroxicam

Fenilbutazona

Derivados Arilpropinicos

Fenematos

Otros

Suprofeno Ibuprofeno Ibuproxam

Indoprofeno Naproxeno Oxaprozina

cido meclofenmico cido mefenmico

Varios Nabumetona Glucosamina

Para-aminofenol: Paracetamol (Acetaminofen)

(S)-Ibuprofeno

Naproxeno

cido mefenmico

Nimesulida

Valdecoxib

Diagrama de Flujo del Procedimiento:

Diagrama de Flujo del Procedimiento

Pruebas cualitativas directa

Extraccin

Identificacin cromatogrfica

Con Cloruro frrico

Colocar en un tubo de ensayo 1 cm3 de orina, aadir 3 gotas de cloruro frrico al 10 %. Cambia a color violeta (salicilatos) o rosado de intenso a tenue para el resto de AINE

A la muestra de orina acidificar con l cm3 de HCl 1%, extractar en un embudo de separacin con 20 cm3 de ter etlico o Cloroformo

Al extracto etreo evaporar a sequedad y redisolver en unas gotas de metanol, aplicar en una placa cromatogrfica con la ayuda de un capilar, en la misma placa aplicar las soluciones de los estndares de AINE,

Separar la capa etrea, filtrar por NaSO4 anhidro y descartar la capa acuosa.

colocar en la cmara cromatogrfica que contiene el eluente y desarrollar el corrimiento con un frente de 10 cm.

Secar la placa, observar bajo la luz UV, revelar con el reactivo de FeCl3, con lo que aparecen manchas de color violeta a rosado.

Calcular los Rfs y comparar las muestras con los estndares.