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Formao de Biofilmes Microbianos

Prof Dra Luciana Maria Ramires Esper Universidade Federal Fluminense

V Simpsio Brasileiro de Microbiologia Aplicada

28/09/2011

SUMRIO
INTRODUO CARACTERSTICA E ARQUITETURA DOS BIOFILMES FORMAO DE BIOFILME COMUNICAO INTERCELULAR (QUORUM SENSING) BIOFILME NA INDUSTRIA DE ALIMENTOS SANITIZANTES AVALIAO DE BIOFILME CONTROLE E PREVENO DE BIOFILMES CONSIDERAES FINAIS

Introduo Por muito tempo foi considerado que as bactrias viviam de forma isolada.

No entanto, observou-se que ocorre associao, e nas ltimas dcadas tambm uma comunicao entre as bactrias.

Esse tipo de comportamento comunitrio permite a formao de uma estrutura multicelular complexa denominada BIOFILME
(FUQUA et al., 1996).

A definio exata do que seja biofilme ainda no consensual nos meios acadmicos e h vrias definies descritas na literatura

Definio :

Biofilmes microrganismos,

uma comunidade complexa e estruturada de envoltos por uma matriz extracelular de

polissacardeos, aderidos entre si a uma superfcie ou interface


(Costernon et al., 1995).

Biofilmes no setor da sade

Biofilmes formados sobre ou dentro de aparatos mdicos constituem uma sria ameaa sade pblica.

Implante

Fonte: Xavier,2005

Introduo

Importncia dos biofilmes


Tem grande importncia em inmeras atividades humanas

Estaes de tratamento de guas ou de efluentes

Numerosos bioprocessos tambm utilizam biofilmes:


* biorreatores para a produo de fermentados * produo de vinagre * cido ctrico *vinhos

Introduo

A ocorrncia de biofilmes ganha cada vez mais destaque nas discusses focadas em qualidade e segurana de alimentos.

Estas estruturas, uma vez constitudas, agem como ponto de contaminao constante, liberando clulas de microrganismos patognicos e deteriorantes, podendo comprometer, assim, a qualidade microbiolgica de matrias-primas, insumos e alimentos processados.

O crescimento no desejado de biofilmes, tem um impacto negativo em vrias atividades

Trocadores de calor: aumento da resistncia do fluxo e da taxa de transferncia de calor. Membranas de filtrao: reduz o fluxo atravs da membrana, entupimento. Biocorroso de materiais, como o ao inoxidvel.

Contaminao dos alimentos por microrganismos deteriorantes e patgenos

Caractersticas e arquitetura dos biofilmes As clulas aderidas so designadas por ssseis, enquanto aquelas livres e dispersas so denominadas por planctnicas. Um biofilme corresponde a uma comunidade de clulas ssseis aderidas a um substrato, embebidas em uma matriz de polmeros extracelulares, na qual existem diferenciados fentipos, metabolismo, fisiologia e transcrio gentica.
Clulas planctnicas

ssseis

Superfcie

So complexas comunidades mono ou multiespcies (indstria de alimentos), ancoradas a uma superfcie, sendo estas embebidas em uma matriz constituda, basicamente por exopolissacardeo (EPS).

Exopolissacardeos

Vital importncia no processo de ancoragem dos microrganismos

A matriz de polmeros extracelulares (EPS) de natureza polissacardea ou proteica, expe-se exteriormente membrana externa das clulas Gram negativas e ao peptdeoglicano das Gram positivas, sintetizado pr polimerases, constituindo-se em uma estrutura complexa bem hidratada

Um dos grandes responsveis por conferir proteo aos sanitizantes so os EPS, que agem como barreira fsica impedindo que sanitizantes cheguem a seus stios de ao como, por exemplo, a membrana de gram-negativos. Em alguns casos o EPS capaz de sequestrar ctions, metais e toxinas, conferindo tambm proteo contra radiaes UV, alteraes de pH, choques osmticos e dessecao.

SANITIZANTES
ANTIBITICOS

As clulas em biofilme so de 500 at 1000 vezes mais resistentes quando comparadas s clulas planctnicas.

So percebidas muitas alteraes fenotpicas, principalmente nos aparatos de motilidade, no tamanho da clula e no metabolismo, decorrentes da restrio de nutrientes e de oxignio em algumas fases, da variao na taxa de reproduo e em toda a regulao gnica.

Biofilmes so as nicas estruturas microbianas que permitem a coexistncia de organismos aerbios e anaerbios estritos a distncias de poucas centenas de micrmetros um do outro.

So compostos por microcanais internos, teis na distribuio de nutrientes e gua, no escoamento de metablitos, alguns potencialmente patognicos ao homem, nas enzimas alginatoliases e as proteases, necessrias ao destacamento de clulas do biofilme e na distribuio de molculas sinalizadoras de quorum sensing (Hall-Stoodley et al, 2004)

Como etapas importantes para sua formao so descritas as bioadeses iniciais, passando os microrganismos de seu estilo de vida planctnico ao sssil, a formao de microcolnias, a maturao do biofilme e o destacamento de clulas, retornando ao seu estilo de vida planctnico.

Etapas que uma nova espcie bacteriana realiza, durante sua incorporao em um biofilme (Adaptado de Watnick & Kolter, J. Bacteriol., 182:26752679, 2000)

Estudo microscpico da formao de um biofilme por V. cholerae (Adaptado de Watnick & Kolter, J. Bacteriol., 182:26752679, 2000)

(Xavier, 2002)

COMUNICAO INTERCELULAR

Uma vez que o biofilme constitudo de agregados de clulas e a formao de sua estrutura tridimendisional um processo dinmico que envolve uma srie de eventos moleculares coordenados, ele representa um ambiente propcio para a comunicao clula-clula, ou quorum sensing (QS)

Sistema de comunicao dependente de densidade populacional em bactrias.

Motilidade

Esporulao

Fatores de virulncia Biofilmes


bactria Molcula sinalizadora
Protena receptora

Produo de antibiticos
Promotor DNA

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BIOFILMES EM INDSTRIAS E UNIDADES PROCESSADORAS DE ALIMENTOS.


Alguns micro-organismos patognicos presentes em alimentos podem facilmente formar ou fazer parte da comunidade de microrganismos presentes em um biofilme. E. coli Salmonella sp Staphylococcus aureus Listeria monocytogenes Bacillus cereus Yersinia enterocolitica Microrganismos Deteriorantes Pseudomonas fragi, Micrococcus sp, Pseudomonas fluorescens, Enterococcus faecium

Nas indstrias de alimentos devido diversidade da produo, das matrias primas e dos produtos, pode ocorrer a formao de biofilmes com composio heterognea e com comportamentos os mais variados.

Em biofilme composto por multi-espcies, fato mais comum na natureza, os produtos metablicos de um microrganismo podem servir para o crescimento da outra espcie e a adeso de uma espcie pode prover substncias ligantes que permitem a adeso de outras. Todavia, a competio por nutrientes e o acmulo de produtos txicos gerados podem limitar a diversidade microbiana em um biofilme.

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Shi e Zhu, 2009

BIOFILMES EM INDSTRIAS E UNIDADES PROCESSADORAS DE ALIMENTOS.


possvel ocorrer adeso bacteriana e formao de biofilme em praticamente todas as superfcies envolvidas no processamento de alimentos desde as rugosas, que apresentam fissuras e fendas at as consideradas mais lisas.

Formao em qualquer tipo de superfcie: ao-inoxidvel, borracha, nylon, alumnio, teflon, etc.

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Fonte: Andrade, 2009

Fonte: Andrade, 2009

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Ao inoxidvel AISI 304

Fonte: Carelli, 2005

A adeso bacteriana depende das propriedades fsico-qumicas do material do substrato e da superfcie da clula.

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Sanitizantes
Um biofilme microbiano presente numa superfcie com resduos oriundos do alimento impede um efetiva penetrao do sanitizante para eliminar microrganismos. O sanitizante reage inicialmente com: resduos de protenas, gordura, carboidratos e minerais. Ao final, pouca atividade do sanitizante resta para agir sobre os microrganismos no biofilme. Sabe-se que, quando o biofilme tratado corretamente com detergente antes do uso dos sanitizantes, os microrganismos geralmente so eliminados. No entanto, procedimentos de higienizao incorretos no removem nem inativam ao microrganismos aderidos

EFICINCIA DO SANITIZANTE

Depende dos microrganismos envolvidos, das condies da aderncia e desenvolvimento e caractersticas do biofilme.

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AVALIAO DE BIOFILME NA INDUSTRIA DE ALIMENTOS

Atualmente, vrios mtodos so usados na deteco e monitoramento da carga microbiana de superfcies envolvidas na produo de alimentos.

As tcnicas de microscopia eletrnica apresentam alto poder de resoluo e comprimento de onda muito curto (0,5 A) de feixe de eltrons, permitindo observar as amostras em aumentos maiores quando comparado com a microscopia ptica comum

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Fonte: Esper, 2010

Preveno

Controle/ Preveno
O melhor caminho para controlar os biofilmes baseia-se na preveno de seu desenvolvimento

A estratgia nmero um de controle a prtica de adequados procedimentos de higiene industrial, com finalidade de remover resduos e clulas de micro-organismos de superfcies, impedindo o inicio de todo o processo.

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Preveno

Desenho correto das superfcies dos equipamentos em contato com os alimentos.

O tipo do material usado nos equipamentos deve ser de fcil limpeza e resistncia a corroso.

difcil erradicar um biofilme utilizando um nico tipo de tratamento ou um nico desinfetante ou detergente.

Os equipamentos devem ser desmontveis facilmente para a limpeza ou que possam ser limpos sem ter que desmonta-los

Preveno

Boas Prticas e Sistema APPCC

A implantao de sistemas de qualidade como:

Boas Prticas de Fabricao (BPF) Sistema de Anlises de Perigos e Pontos Crticos de Controle (APPCC) So ferramentas eficazes para garantir a produo de alimentos seguros, simplificando as aes de segurana dos alimentos, indicando operaes crticas e chaves do processo e oferecendo formas eficientes para control-las e monitor-las. Possibilitando, portanto, tambm prevenir a formao de biofilmes.

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Referncias
ANDRADE, N. J.; PINTO, C. L. O.; LIMA, J. C. Adeso e formao de biofilmes microbianos. In: ANDRADE, N. J. Higiene na Indstria de Alimentos - Avaliao e controle da adeso e formao de biofilmes bacterianos. So Paulo (SP): Varela. 410p, 2008.

COSTERTON, J.W.; LEWANDOWSKI, Z.; CALDWELL, D.E.; KORBER, D.R.; LAPPIN-SOCOTT, H.M. Microbial Biofilms. Ann. Rev. Microbiol, v. 49.p.711-745, 1995.

SHI,X.;ZHU. X. Biofilm formation and food safety in food industries. Trends in Food Science and Technology. doi:10.1016/j.tifs.2009.01.054,2009

WATNICK, P.; KOLTER, R. Minireview Biofilm, city of microbes. Journal of Bacteriology, v.182, p. 2675-2679, 2000.

XAVIER,J.B., PICIOREANU,C., ALMEIDA,J.S., VAN LOOSDRECHT, M.C.M. Monitorizao e modelao da estrutura de biofilme. Boletim de Biotecnologia, 2005.

Muito Obrigada!!!

lesper@id.uff.br

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