Normativas y Anlisis Microbiolgico de aguas Nuevos Mtodos Rpidos aprobados

Aura Falla P. Gerente de Producto MPSA

Page 1 Thema (topic)

CONTAMINACIN DEL AGUA

Es el resultado de las actividades antropognicas en las fuentes de agua que se integran en el ciclo hidrolgico. Incorporacin al agua de materias extraas, como microorganismos, productos qumicos, residuos industriales y de otros tipos, o aguas residuales. Estas materias deterioran la calidad del agua y la hacen intil para los usos pretendidos.

Causas de deterioro de la calidad del agua

* Vertidos incontrolados y deficientes de las aguas

residuales * Prcticas agrcolas deficientes * Contaminacin atmosfrica. *Acumulacin de sustancias qumicas en suelos y sedimentos. * Sobreexplotacin de aguas subterrneas, que puede causar intrusin de agua de mar.

Efectos que produce el agua contaminada en el medio ambiente

Contaminacin microbiolgica del agua, con la transmisin hdrica de enfermedades. Prdida de los ecosistemas hdricos naturales. Riesgo de infecciones crnicas en el hombre, asociadas a la contaminacin qumica. Prdida de la capacidad productiva en suelos regados, a causa de procesos de salinizacin. Prdida de la reserva de protenas de los peces. Prdida de suelos por erosin.

TIPOS DE AGUA

1. 2. 3. 4.

AGUAS SUPERFICIALES AGUAS SUBTERRNEAS AGUAS PARA CONSUMO HUMANO AGUAS RESIDUALES 4.1. 4.2. 4.3. 4.4. 4.5. 4.6. Aguas residuales domsticas Aguas residuales municipales Aguas residuales industriales Aguas residuales agropecuarios Aguas residuales minero-metalrgicos Aguas pluviales

AGUAS RESIDUALES DOMSTICAS

Son la combinacin de las excretas eliminadas por la poblacin servida que incluye heces y orina, adems, se incluye desechos de los animales domsticos, residuos de lavandera, residuos de industrias caseras que algunas veces incluyen sustancias recalcitrantes que pueden ser txicas y cancergenas y residuos eliminados de las actividades culinarias.

AGUAS RESIDUALES MUNICIPALES

Son aquellas provenientes tanto de los efluentes domsticos, como de las pequeas industrias y otras actividades ubicadas en las reas urbanas (comercios, oficinas, restaurantes, mercados de abastos, etc.) y que incrementan los contaminantes con algunos componentes que pueden resultar indeseables para los tratamientos convencionales .

AGUAS RESIDUALES INDUSTRIALES

Son aquellos provenientes de las diferentes industrias que existen generalmente fuera de las reas urbanas y que deben tratar sus desages antes de ser vertidos a los alcantarillados, siguiendo las normas sobre vertidos de descargas industriales, relacionadas principalmente con la carga orgnica (CO), los aceites y grasas, temperatura, pH y sustancias recalcitrantes o xenobiticas.

AGUAS RESIDUALES AGROPECUARIAS O AGROINDUSTRIALES

Son escorrentas que provienen de la actividad agrcola y de los mataderos, establos, avcolas, etc., que generan gran cantidad de materia orgnica carboncea, constituidas por el estircol y purines de los animales, combinado con residuos txicos de los pesticidas y fertilizantes usados en la agricultura. Hoy en da, se debe considerar tambin los residuos farmacuticos usados en la crianza y engorde de los animales, como vacunas, hormonas, antibiticos y otros de tipo veterinario.

AGUAS RESIDUALES DE ORIGEN MINERO-METALRGICO

Los efluentes procedentes de las minas se consideran los ms contaminantes y de mayor riesgo para su uso o disposicin, debido a que mayormente lo constituyen metales pesados como el Pb, Hg, Cd, Zn, etc. y metaloides como el Sb y el As. Todos stos residuos son txicos, mutagnicos, carcinognicos y teratgnicos tanto para la biota acutica como para el hombre si es el usuario final,

AGUAS PLUVIALES

Las aguas provenientes de las lluvias que llegan a las alcantarillas, van a diluir la carga orgnica del desage, sin embargo pueden variar las caractersticas del agua como el pH, debido a que muchas de esta aguas de lluvia se convierten en lluvias cidas antes de llegar al suelo y alcantarillas.

IMPORTANCIA DE LA CALIDAD DEL AGUA

Contribuye con la salud de las poblaciones Mejora la calidad de vida de las personas Estabilidad de los ecosistemas acuticos y productividad. Mantiene la biodiversidad Funcionalidad de los ciclos biogeoqumicos

MARCO LEGAL NORMATIVIDAD Y CARACTERIZACIN

1. 2. 3. 4. 5.

Ley General de Recursos Hdricos Reglamento de Calidad de Agua Potable: MINAM Guas de Calidad de la OMS-2004-2008 Estndares de Calidad Ambiental (ECAs) 2008 Guias de calidad de Aguas Residuales-OMS

LEY DE RECURSOS HDRICOS

Ley 29338 del 30 de marzo de 2009 Art. 14: Crea la ANA Para ejercer jurisdiccin administrativa exclusiva en materia de aguas, desarrollando acciones de administracin, fiscalizacin, control y vigilancia, para asegurar la preservacin y conservacin de las fuentes naturales de agua, de los bienes naturales asociados a estas y de la infraestructura hidrulica, ejerciendo para tal efecto, la facultad sancionadora y coactiva.

LEY DE RECURSOS HDRICOS

Artculo 35.- Clases de usos de agua y orden de prioridad La Ley reconoce las siguientes clases de uso de agua: 1. Uso primario. 2. Uso poblacional. 3. Uso productivo.

Artculo 43.- Tipos de uso productivo del agua

Son tipos de uso productivo los siguientes: 1. Agrario: pecuario y agrcola; 2. Acucola y pesquero; 3. Energtico; 4. Industrial; 5. Medicinal; 6. Minero; 7. Recreativo; 8. Turstico; y 9. de transporte.

Artculo 76.- Vigilancia y fiscalizacin del agua

La Autoridad Nacional en coordinacin con el Consejo de Cuenca (CHRC), en el lugar y el estado fsico en que se encuentre el agua, sea en sus cauces naturales o artificiales, controla, supervisa, fiscaliza el cumplimiento de las normas de calidad ambiental del agua sobre la base de los Estndares de Calidad Ambiental del Agua (ECA-Agua) y las disposiciones y programas para su implementacin establecidos por autoridad del ambiente.

Artculo 76.- Vigilancia y fiscalizacin del agua

Tambin establece medidas para prevenir, controlar y remediar la contaminacin del agua y los bienes asociados a esta. As mismo, implementa actividades de vigilancia y monitoreo, sobre todo en las cuencas donde existan actividades que pongan en riesgo la calidad o cantidad del recurso.

Artculo 79.- Vertimiento de agua residual

La Autoridad Nacional autoriza el vertimiento del agua residual tratada a un cuerpo natural de agua continental o marina, previa opinin tcnica favorable de las Autoridades Ambiental y de Salud sobre el cumplimiento de los Estndares de Calidad Ambiental del Agua (ECA-Agua) y Lmites Mximos Permisibles (LMP). Queda prohibido el vertimiento directo o indirecto de agua residual sin dicha autorizacin.

Artculo 80.- Autorizacin de vertimiento

1. Someter los residuos a los necesarios tratamientos previos. 2. Comprobar que las condiciones del receptor permitan los procesos naturales de purificacin.

Artculo 83.- Prohibicin de vertimiento de algunas sustancias

Est prohibido verter sustancias contaminantes y residuos de cualquier tipo en el agua y en los bienes asociados a sta, que representen riesgos significativos segn los criterios de toxicidad, persistencia o bioacumulacin. La Autoridad Ambiental respectiva, en coordinacin con la Autoridad Nacional, establece los criterios y la relacin de sustancias prohibidas.

REGLAMENTO DE LA CALIDAD DEL AGUA PARA CONSUMO HUMANO

DIGESA Con arreglo a la Ley N 26842 - Ley General de Salud, el presente Reglamento 031-DIGESA 2010 tiene como objeto normar los siguientes aspectos: 1. La gestin de la calidad del agua; 2. La vigilancia sanitaria del agua; 3. El control y supervisin de la calidad del agua;

REGLAMENTO DE LA CALIDAD DEL AGUA PARA CONSUMO HUMANO

4. La fiscalizacin, las autorizaciones, registros y aprobaciones sanitarias respecto a los sistemas de abastecimiento de agua para consumo humano; 5. Los requisitos fsicos, qumicos, microbiolgicos y parasitolgicos del agua para consumo humano; y, 6. La difusin y acceso a la informacin sobre la calidad del agua para consumo humano.

GUIAS DE LA OMS
El propsito primario de las GUAS DE CALIDAD DE AGUA POTABLE es la proteccin de la salud publica AGUA DE BEBIDA SEGURA: Aquella que no representa ningn riesgo significativo a la salud por su consumo durante toda la vida. Las guas no se usan para proteccin de vida acutica o de uso industrial.

CONSIDERACIONES GENERALES
Los requerimientos bsicos y esenciales para asegurar el agua de bebida segura son: un marco terico que asegure la calidad, compromiso de las autoridades de salud para establecer lneas de base de salud, adecuado sistema de manejo de agua y sistema de vigilancia independiente.

PRINCIPALES ASPECTOS EN LAS GUAS

ASPECTOS MICROBIOLGICOS ASPECTOS DE DESINFECCIN ASPECTOS QUMICOS ASPECTOS RADIOLGICOS ASPECTOS DE ACEPTABILIDAD

LMP DE PARMETROS MICROBIOLGICOS Y PARASITOLGICOS vs. VALORES GUA DE LA OMS

PARMETROS Coliformes totales (UFC/100 mL) Coliformes termotolerantes o fecales (UFC/100 mL) E. coli (UFC/100 mL) Bacterias Heterotrficas (UFC/mL) Huevos y larvas de Helmintos, quistes y ooquistes de protozoarios patgenos (N Org/L) Organismos de vida, como algas, protozoarios, coppodos, rotferos, nemtodos en todos sus estadios evolutivos (Norg/L) Virus (UFP/L) MINSA-2010 0 0 0 500 0 OMS-2004 Ausencia Ausencia -

ESTNDARES DE CALIDAD AMBIENTAL2008 - ECAs

DS 002-2008-MINAM CATEGORA 1: Poblacional y recreacional Aguas superficiales destinadas a la produccin de agua potable Sub categora A1: Aguas que pueden ser potabilizadas con simple desinfeccin Subacategora A2: Aguas que pueden ser potabilizadas con tratamiento convencional Subcategora A3: Aguas que pueden ser potabilizadas con tratamiento avanzado

ESTNDARES NACIONALES DE CALIDAD AMBIENTAL PARA AGUA CATEGORA I: POBLACIONAL Y RECREACIONAL

Aguas superficiales destinadas a la produccin de agua potable A1 A2 Aguas que pueden ser potabilizadas con tratamiento convencional VALOR A3 Aguas que pueden ser potabilizadas con tratamiento avanzado VALOR

PARMETRO

UNIDAD

Aguas que pueden ser potabilizadas con desinfeccin VALOR

MICROBIOLGICO Coliformes termotolerantes (44,5C) Coliformes totales (35-37C) Enterococos fecales Escherichia coli Formas parasitarias Giardia duodenalis Salmonella Vibrio cholerae
NMP: Nmero ms probable

NMP/100 mL NMP/100 mL NMP/100 mL NMP/100 mL Organismos/L Organismos/L Presencia/100 mL Presencia/100 mL

0 50 0 0 0 Ausencia Ausencia Ausencia

2 000 3 000 0 0 0 Ausencia Ausencia Ausencia

20 000 50 000 Ausencia Ausencia Ausencia

ESTNDARES DE CALIDAD AMBIENTAL-2008- ECAs Aguas superficiales destinadas para recreacin:

Subcategora B1: contacto directo Subcategora B2: contacto indirecto CATEGORA 2: AGUAS MARINO COSTERAS Subcategora 1: Extraccin y cultivo de moluscos bivalvos. Subcategora 2: Extraccin y cultivo de otras especies hidrobiolgicas. Subcategora 3: otras actividades.

ESTNDARES DE CALIDAD AMBIENTAL-2008 - ECAs

CATEGORA 3: RIEGO DE VEGETALES Y BEBIDA DE ANIMALES CATEGORA 4: CONSERVACIN DEL AMBIENTE ACUTICO -Lagunas y lagos -Ros -Ecosistemas marino-costeros

DIRECTRICES RECOMENDADAS PARA EL RE USO DE AGUAS EN AGRICULTURA.

Clase

Condiciones de Aprovechamiento

Grupo expuesto

Nemtodos Coliformes intestinales Termotolerantes No Huevos/L NMP/100 mL

Tratamiento de aguas residuales necesario para lograr la calidad microbiolgica exigida

Riego de cultivos que se consumen crudos, campos deportivos parques Riego de cultivos de cereales y forraje Riego de cultivos cuando no se exponen los trabajadores ni el pblico

Trabajador es consumido res pblico Trabajador es

Menos de 1

1.000

Serie de estanques de estabilizacin para lograr la calidad deseada.

Menos de 1

No hay norma

Tr: 8 -10 das

Ninguno

No aplica

No aplica

Lagunas con tratamiento primario

CONTAMINANTES BIOLGICOS

Bacterias: Indicadores de contaminacin fecal, bacterias patgenas, cianobacterias Parsitos: quistes de protozoarios, larvas de helmintos, huevos de helmintos Virus: Coxakie virus, hepatitis A, Enterovirus, polio, etc. Vectores: larvas de Anopheles; larvas de Aedes aegypti,

MICROBIOLOGA DEL AGUA

BACTERIAS INDICADORES E NDICES : COLIFORMES ENTEROCOCOS FECALES CLOSTRIDIUM PERFRINGENS COLIFAGOS BACTERIAS HETEROTRFICAS MICROORGANISMOS PATGENOS PATGENOS OPORTUNISTAS

QUIMIOHETERTROFOS Incluyen diversos grupos:

Las enterobacterias: E. coli, coliformes totales y termotolerantes salmonellas, shigellas. Incluyen vibrionaceas: V. cholerae, V. parahaemolitycus, V. fisheri. Pseudomanadaceas: P. aeruginosa. Aeromonadaceas: A. hidrophyla. Bacteriodetes el otro gran grupo de los G- que incluyen: Cytophaga y Flavobacterium.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

Incluyen dos grupos: Bacillus, Clostridium (esporulados) Streptococcus, Enterococcus. Otras bacterias importantes Cianobacterias: Microcystis, Anabaena, Pseudoanabaena, Scenedesmus.

ASPECTOS MICROBIOLGICOS

1. 2.

3.

El riesgo de presencia de microbios asociados al consumo de agua potable es la contaminacin con excretas humanas y animales Las enfermedades infecciosas causadas por bacterias, virus y parsitos patgenos (protozoarios y helmintos) son los riesgos ms comunes asociados al consumo de agua potable El problema de salud pblica est determinado por: severidad de la enfermedad asociada a patgenos, su infectividad y la poblacin expuesta

ASPECTOS MICROBIOLGICOS

4. El agua potable segura no slo est relacionada a contaminacin fecal, algunos microorganismos crecen en el sistema de distribucin vg. Legionella pneumophyla, Dracunculus medinensis y cianobacterias; amebas de vida libre: Naegleria fowleri, Achantamoeba sp. etc. Otras bacterias: Pseudomonas aeruginosa, Flavobacterium, Mycobacterium, Aeromonas, Serratia, etc.

PERSISTENCIA Y CRECIMIENTO EN AGUAS

Los patgenos tpicos son capaces de persistir en agua potable, pero la mayora no crece ni prolifera; algunos pueden acumularse en sedimentos y son movilizados cuando incrementa el flujo de agua. La persistencia se afecta por factores tales como: la temperatura y la radiacin UV. Los virus y formas parasitarias (quistes ooquistes, huevos) no se multiplican en el agua, sin embargo el carbono orgnico biodegradable y bajo cloro residual, permiten el crecimiento de Legionella, V. Cholerae, N. Fowleri, Acanthamoeba, y organismos molestos en fuentes de agua

V. cholerae

N. flowneri

Acanthamoeba

ASPECTOS DE SALUD PBLICA

En casos epidmicos o no, la exposicin a algunos patgenos es ms severa que en otros, vg., son infecciones severas: Hepatitis A, clera, tifoidea, shigelosis y ltimamente las infecciones producidas por E. coli H7:O157, son las mas severas. Las menos severas son: diarreas producidas por Norvirus y Cryptosporidium Repetidas exposiciones a patgenos se asocia a una baja probabilidad de la enfermedad, debido a la adquisicin de inmunidad, vg. la inmunidad a hepatitis A es muy prolongada, mientras que la producida por Campylobacter es de algunos meses No todos los individuos desarrollan los sntomas de la enfermedad, muchos solo son portadores, sin embargo al igual que los sintomticos contribuyen a la dispersin de la enfermedad.

VERIFICACIN DE SEGURIDAD MICROBIOLGICAY CALIDAD CON RESPECTO A PATGENOS

1. 2. 3.

Los patgenos se hallan en forma discreta y no en solucin Se encuentran siempre adheridos a los slidos suspendidos del agua La probabilidad de infeccin por patgenos depende de la invasibidad y virulencia del patgeno y de la inmunidad del individuo Si se establece la infeccin, el patgeno se multiplica en el hospedero En contraste con los agentes qumicos, la dosis-respuesta del patgeno no es acumulativa.

4. 5.

ORGANISMOS INDICADORES E NDICES

Los coliformes termotolerantes y E. coli son los indicadores de verificacin de la calidad del agua potable El indicador de eleccin es E. coli Los coliformes termotolerantes pueden ser usados como alternativa Los coliformes totales no son aceptados como indicadores de la calidad sanitaria del agua. El agua de consumo humano no debe contener organismos indicadores

ORGANISMOS INDICADORES E NDICES

Los patgenos mas resistentes a condiciones ambientales o tecnologas de tratamiento pueden estar presentes en agua potable en ausencia de E. coli Se recomienda estudios de alternativas de indicadores para esos organismos: vg. Enterococos, Clostridium perfringens y colifagos

Enterococos

Clostridium perfringens

Fago T4

CRITERIOS PARA UN INDICADOR

1. 2. 3. Estar universalmente presente en gran nmero en heces humanas y de animales No multiplicarse en aguas naturales Persistir en el agua en forma similar a los patgenos fecales.

CRITERIOS PARA UN INDICADOR

4. Estar en mayor nmero que los patgenos fecales

5. 6. Responder a los procesos de tratamiento en forma similar a los patgenos fecales. Ser detectados rpidamente y con mtodos de bajo costo

COLIFORMES TOTALES

Incluye bacilos Gram (-) aerobios y anaerobios facultativos, fermentan la lactosa con produccin de gas, cido o aldehdo en 24 h a 35-37oC. Adems producen la enzima -galactosidasa. Pertenecen a los gneros: Escherichia, Citrobacter, Klebsiella,y Enterobacter y los ambientales: Serratia y Hafnia

Citrobact er

Klebsiella

Serratia

Enterobacterias

Enterobacterias Coliformes Escherichia coli

Page 47

Thema (topic)

COLIFORMES TOTALES y FECALES

BACTERIAS COLIFORMES FECALES

ESCHERICHIA

ENTEROBACTER

KLEBSIELLA

CITROBACTER

Page 48

Thema (topic)

Chromocult & Fluorocult

Sustratos Cromognicos y Sustratos Fluorognicos
Una nueva herramienta en el Anlisis Microbiolgico.

Page 49

Thema (topic)

Cromognicos & Fluorognicos

Todos los mtodos tradicionales requieren varios das ( 35 de incubacin ) para obtener el resultado final. No es posible la diferenciacin entre E.coli y Coliformes

Page 50

Thema (topic)

Ventajas de Reacciones Enzimticas

Gas + Acid a partir de Lactosa 95 % de los Coliformes Gas + Acid a partir de Lactosa a 44 C SOLO el 90 % de E.coli Tryptofanasa 99 % de las E.coli son Indol positiva -D-Galactosidasa Detecta el 95 % of Coliformes -D-Glucuronidasa Detecta el 94-97 % de E.coli Tryptophanasa
Page 51 Thema (topic)

99 % of E.coli son Indol positivas

Mtodos Cromognicos & Fluorognicos

Tcnica NMP

Tcnica MF

Tcnica P-A

Los mtodos microbiolgicos basados en los principios del sustrato definido y sustratos fluorognicos estn ya aprobados por diversos organismos oficiales (Standard Methods, USEPA. ISO, entre otros) y se aplican en las tres principales metodologas usadas

VENTAJAS : > rapidez + > especificidad + > sensibilidad

Page 52 Thema (topic)

Principio

Reaccin general de los Sustratos indolil

Page 53

Thema (topic)

Escherichia coli
4-Methylumbelliferyl--D-glucuronide

Glucuronidase = ENZYME

(MUG) Colorless
Glucuronide = Carbohydrate
Methylumbelliferon

) m n 0 (36 -light UV

Fluorescence

Page 54

Thema (topic)

Composicin de los Medios de Cultivo: (Agares)

Chromocult Inhibidor Indicador
Tergitol 7

VRB

Endo

Mac Conkey EMB

Sales biliares Eosina Azul de Cristal violeta Metileno Rojo Neutro Lactosa Peptonas Eosina Azul de Metileno Lactosa Sacarosa Peptonas

Sales Biliares Cristal Violeta Fucsina Fucsina Lactosa Peptonas Sodio sulfito

Cromogenicos Rojo Neutro Salmon-Gal - XGlucuronide Lactosa Extracto Levadura

Sustrato Factores Piruvato Crecimiento Triptona Otros

Page 55

Thema (topic)

Composicin de los Medios de Cultivo: (Caldos)

LMX Inhibidor Indicador
Lauril Sulfato Fluorognicos / Cromognicos

Lauril Sulfato Brila

Lauril Sulfato Bilis de Buey Verde Brillante

EC
Sales biliares Gas de Lactosa Lactosa Peptonas

Gas de Lactosa Gas de Lactosa Lactosa Triptosa Lactosa Peptona

MUG / X-GAL Sustrato Factores Crecimiento Peptonas

Otros
Page 56

Iso Propil Tio Galactopiranosido

Thema (topic)

COLIFORMES y E.coli MICROBIOLOGA DE AGUAS

CALDO LAURYLSULFATO CALDO BRILA CALDO EC

Page 57

Thema (topic)

Medios fluorognicos: Fluorocult

Caldo Fluorocult LMX - Tcnica NMP Mtodologia NMP en tubo nico

Page 58

Thema (topic)

Fluorocult Caldo LMX Coliformes modificado por MANAFI and OSSMER . Composicin tpica (g/L)
Triptosa 5.0 Sorbitol 1.0 Potasio dihidrogeno fosfato 2.0 Di-potasio hidrogeno fosfato 2.7 Lauril sulfato Sodio 0.1 Triptofano 1.0 X-GAL 0.08 MUG 0.05 IPTG 0.1
pH: 6.8 0.2 at 25 C.

La interaccin de triptosa, sorbitol y bufer fosfatos garantiza el rpido crecimiento de las colonias, aun de los coliformes subletalmente injuriados. El Lauril sulfato inhibe el crecimiento de bacterias Grampositivas y algunas Gramnegativas y no afecta el crecimiento de bacterias coliformes. La combinacin de 2 sustratos cromognicos los cuales diferencian y detectan los coliformes totales y E.coli. El IPTG aumenta la actividad de la enzima B-D-galactosidasa.

Page 59

Thema (topic)

Comparacin de las frmulas del nuevo Mtodo NMP Fluorocult LMX vs el medios tradicional Caldo LST

Page 60

Thema (topic)

Fluorocult Caldo LMX Coliformes modificado por MANAFI and OSSMER .

NMP Tubos multiples con 10 ml Fluorocult caldo LMX a simple concentracin 1, 0.1, 0.01 ml muestra / 35 C
Pesar 17 gr/L de Fluorocult Caldo LMX a simple concentracin. Alto Gram + : 30 mg Novobiocina en 1 Litro de medio antes de autoclavar)

1 Da

PH medio para ver Fluorescencia: 9-10.

Sin Cambio color Cambio de Color Negativ o Incoloras: Otras Gram Page 61 Thema (topic)

Positivo Verdes: Coliformes T

Prueba de indol con Kovacs

Fluorescencia: E.Coli

Fluorocult Caldo LMX Coliformes modificado por MANAFI and OSSMER .

Cepas Escherichia coli ATCC 25922 Citrobacter freundii ATCC 8090 Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 Enterobacter cloacae ATCC 13047 Citrobacter freundii ATCC 6750 Cambio Color B-DGal MUG Indol

+ + +
+

Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028

+ -

+ + + + -

+ -

+ -

Literature
HAHN, G., a. WITTROCK, E.: Comparison of chromogenic and fluorogenic substances for differentiation of Coliforms and Escherichia coli in soft cheeses. - Acta Microbiologic Hungarica 38 (3-4); 265-271 (1991). MANAFI, M., a. KNEIFEL, W.: Ein kombiniertes Chromogen-Fluorogen-Medium zurm simultanen Nachweis der Coliformengruppe und von E. coli in Wasser. - Zbl. Hygiene und Umweltmedizin 189; 225-234 (1989). MANAFI, M.: Schnellnachweis von Bakterien mittels fluorogener und chromogener Substrate. - Forum Stdte-Hygiene 41; 181-184 (1990). MANAFI, M.: Diagnostik von Mikroorganismen mittels fluorogener und chromogener Substrate. - Ernhrung/Nutrition 15, Nr. 10 (1991) MANAFI, M., a. KNEIFEL, W.: Fluorogenic and chromogenic substrates. - A promising tool in Microbiology. - Acta Microbiologica Hungarica 38 (3-4); 293-304 (1991). MANAFI, M., KNEIFEL, F., a. BASCON, S.: Fluorogenic and chromogenic substrates used in bacterial diagnosis. - Microbiol. Rev. 55; 335-348 (1991).
Page 62 OSSMER, Thema (topic) of Total Coliforms and E. coli-Fluorocult LMX-Broth. - 15th international Symposium/FOOD MICRO 1993. R.: Simultaneous Detection The Interntional Committee on Food Microbiology and Hygiene, Bingen/Rhine (1993).

Fluorocult Caldo LMX Coliformes modificado por MANAFI and OSSMER .

Selectivo Rpido
Item Descripcin 1.110620.0500 Fluorocult Caldo LMX Coliformes 1.09293.0100 B491207 1.13203.0001 Reactivo de Kovacs Novobiocina Lampara UV 365 nm Envase 500 Gr 100 ml 1 gr, 10 gr 1 UN

Reaccin sustrato Enzima muy especfica Deteccin simultanea de Coliformes y E.coli en 24 horas. Simple deteccin por cambio de color diferencia los Coliformes y E.Coli Requiere solo un medio. Reduccin de tiempo y material No usa tubos Durham.

Fcil lectura

Econmic o

Page 63

APROBADO POR LA USEPA

Thema (topic)

Readycult Coliforms 100 vs. Colilert

Coliform and E.coli : Test rpido para Aguas

Ventaja : Confirmacin de E.coli (fluorescencia) : Prueba de Indol In situ

Page 64 Thema (topic)

Determinacin Cualitativa de Coliformes totates y Escherichia coli

Inoculacin
(100 ml de muestra y el contenido de un sachet de Readycult)

Incubacin
(37 C / 18-24 horas)

Interpretacin
Coliformes positivo (frasco 3 cambio de color) Negativo (frasco 2 sin cambio de color) Control (frasco 1)
Page 65 Thema (topic)

Interpretacin
E. coli positivo (frasco2 cambio de color) E. coli confirmatorio (frasco 3 reactivo de kovacs positivo Control (frasco 1, positivo para coliformes previo)

Readycult

Deteccin simultnea de Coliformes totales y E.coli en aguas Test rpido para indicadores de higiene Sistema listo para el uso Visualizacin por color y radiacin UV No requiere de implementacin adicional Incubacin 18 - 24 horas Combina tcnicas cromognicas y fluorognicas : Chromocult y Fluorocult
Thema (topic)

Page 66

Chromocult & Fluorocult

Agar Chromocult COLIFORMES

Page 67

Thema (topic)

Mtodo Filtracin por membrana ...

Agar Cromocult Coliformes

Validado

Page 68

Thema (topic)

Agar Chromocult Coliformes.

Composicin tpica (g/Vial) Peptonas Sodio cloruro Sodio dihidrogeno fosfato Di-sodio hidrogeno fosfato Sodio piruvato Triptofano agar-agar Sorbitol Tergitol 7 3.0 5.0 2.2 2.7 1.0 1.0 10.0 1.0 0.15

La interaccin de peptonas, piruvato, sorbitol y bufer fosfato garantiza el rpido crecimientode las colonias subletalmente injuriadas de coliformes. El Tergitol 7 inhibe el crecimiento de bacterias Gram-positivas y algunas Gram-negativas y no afecta el crecimiento de bacterias coliformes. La combinacin de de 2 sustratos cromognicos los cuales diferencian y detectan los coliformes totales y E.coli.

Cromogenica mezcla
pH: 6.8 0.2 at 25 C.

0.4.

Page 69

Thema (topic)

Procedimiento Chromocult Coliformes Recuento en placa .

0.1 ml Muestra 18 - 24 h / 35-37 C
Pesar 28.5 gr/L de A Cromocult coliformes. No autoclave Alto Gram + : Solucin de cefsulodin(5 mg Cefsulodin en 1 ml de agua desmin.) a 1 Litro de medio

1 Da

Prueba de indol con Kovacs

Positivo Cambio de Color Rojas: Coliformes

Page 70 Thema (topic)

Positivo

Negativ Incoloras: o Otras Gram -

Violetas: E.Coli

Procedimiento Chromocult Coliformes Filtracin por membrana

1. Filtre 100 ml de agua cruda o potable en filtro membrana esteril 0.45 Micras. 2. Coloque filtro en caja de petr con Agar Cromocult. 3. Incube 18-24 h a 35-37 C
Alto Gram + : Solucin de cefsulodin(10 mg Cefsulodin en 1 ml de agua desmin.) a 1 Litro de medio

3. Interprete los resultados

Coliformes totales
Positivo: Colonias de color Rojo. Negativo: Colonias color amarillo o azul turqueza.

Escherichia Coli
Positivo: Colonias violetas y forman gota roja con Kovacs (indol positivo). Negativo: sin Cambio.

Page 71

Thema (topic)

Agar Chromocult Coliformes.

Metdos de sustrato definido
Cepas Escherichia coli ATCC 11775 Citrobacter freundii ATCC 8090 Escherichia coli DSM 502 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Enterococcus faecalis ATCC 19433 Crecim.
Bueno y muy bueno Bueno y muy bueno Bueno y muy bueno Suficiente y muy bueno Ninguno

Color Colonia
Azul a violeta obscuro Salmn a Rojo Azul a violeta Incoloro

Salm -Gal

Xgluc

Indol

+ + + -

+ -

+ + -

Literature
LE MINOR, L. a. HAMIDA, F. BEN: Advantages de la recherche de la -galactosidase sur celle de la fermentation du lactose en milieu complexe dans le diagnostic bactriologique, en particulier des Enterobacteriaceae. - Ann. Inst. Pasteur (Paris), 102; 267-277 (1962). MANAFI, M. a. KNEIFEL, W.: A combined chromogenic-fluorogenic medium for the simultaneous detection of total coliforms and E. coli in water. - Zentralabl. Hyg. 189; 225-234 (1989). OSSMER, R., SCHMIDT, W. a. MENDE, U.: Chromocult Coliform Agar - Influence of Membrane Filter Quality on Performance. - XVII Congresso de la Sociedad, Granada (1999). New Zealand Dairy Industry: Microbiological Methods Manual, Section 48: Product Test Methods - Enteric Indicator Organisms. - NZTM 2; 48.5.1-48.5.10 (1998).
Page 72 Thema (topic)

Medios Cromognico para Coliformes

Metdos de sustrato definido.
Reaccin sustrato Enzima muy especfica Deteccin simultanea de Coliformes y E.coli en 24 horas. Simple deteccin por cambio de color diferencia los Coliformes y E.Coli Requiere solo un medio. Reduccin de tiempo y material.

Selectivo Rpido

Fcil lectura
Item 1.10426.0500 1.09293.0100 B491207 C 8145
Page 73

Descripcin Agar Chromocult Coliformes Reactivo de Kovacs Novobiocina Cefsulodin/SIGMA

Thema (topic)

Envase 500 Gr 100 ml 1 gr, 10 gr 100 mgr

Econmico

Test para Aguas : COLIFORMES y E.coli

mENDO Agar LES / mFC Agar acc.to EPA

CCA

Page 74

Thema (topic)

ENUMERACIN de E.COLI y COLIFORMES USANDO EL METODO MF Y CHROMOCULT COLIFORM AGAR

COLIFORMES
Page 75 Thema (topic)

CULTIVO MIXTO

E.COLI

Chromocult Coliformes : Influencia del tipo de membrana usada

1 A + 2 A: Gelman GN 6 ---- 1B +2B: Whatman

1A

1B

2A

2B

Page 76

1C

Thema (topic)

1D

2C .

2C

MF TOTAL COLIFORM TEST ACC.TO US-EPA M-ENDO + M-FC AGAR IN COMPARISON TO CHROMOCULT COLIFORM AGAR **
No. of positive samples Water Samples CCA Agar M-ENDO Agar M-FC Agar

Total Coliforms E.coli

141 135

85 67

**Results of EPA Approval -- Performance Study , August 2000 , USA

Page 77 Thema (topic)

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIN !!! Si estuviera interesado en alguno de estos productos, favor contactar a: aura.falla@merckgroup.com Celular y RPC : 996410096

Page 78

Thema (topic)