TRABAJO PRCTICO DE LABORATORIO N 2 ESTERILIZACION

La esterilizacin tiene por objeto destruir todos los microorganismos vivos o en estado de latencia. Constituye el fundamento de los mtodos de trabajos microbiolgicos y de la conservacin de alimentos. Estudiaremos los mtodos corrientes aplicables a la esterilizacin de los medios de los medios de cultivos, material de manipulacin y recipientes que van a recibir cultivos puros o medios de cultivos estriles. 1. Fsicos: 1.1Calor 1.1.1. Flameado 1.1.2. Hmedo: continuo (autoclave) discontinuo (tindalizacin) 1.1.3. Seco (horno elctrico) 1.2Filtracin: Filtros de profundidad: asbesto prensado (Seitz); vidrio sintetizado. Filtros de membrana: acetato o nitrato de celulosa (Millipore, Sartorius) Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): pelcula de policarbonato. 1.3Radiaciones: ultravioletas, rayos gama, catdicos. 2. Qumicos: desinfectantes, antispticos. MATERIAL A ESTERILIZAR a) Placas b) Pipetas de distinta capacidad volumtrica c) Gasa, Algodn y Papel para hacer tapones de algodn. A-PREPARACIN DEL MATERIAL ENTREGADO PARA SU POSTERIOR ESTERILIZACIN Todo el material debe estar perfectamente limpio y seco, lavamos con agua, jabn y detergente y luego secamos con agua destilada y escurrimos. Luego secamos en la estufa. Procedimos a envolver con papel tisuue los distintos materiales de laboratorio para someterlos a una esterilizacin en una estufa a T entre 160- 170C durante 2 hs. Una vez esterilizado el material se deja enfriar lentamente dentro del horno y si la operacin ha sido la correcta los papeles de la envoltura y algodones deben quedar ligeramente amarillos pero sin tornarse quebradizo. El material esterilizado ser utilizado en el laboratorio para realizar los cultivos.

Cajas de petri Pipetas

Se envolvieron:
Pipetas(De 10 cc, 5 cc, y 1cc) Placas de petri

Se realizaron:
Tapones para Erlenmeyer Tapones para tubo de ensayo

B-DIBUJAR Y COLOCAR EL NOMBRE DE CADA UNO DE LOS ELEMENTOS DE UN AUTOVLAVE Y DE UN HORNO ELCTRICO O ESTUFA DE ESTERILIZACIN

Autoclave
El ambiente es saturado de vapor de agua. Si la presin de vapor de un recipiente se eleva sobre la atmosfrica, la temperatura ascender, es decir, se aplica calor en forma de vapor saturado a presin.Se eleva la temperatura hasta 121C durante 15 minutos

Vlvula de seguridad y espireta

Tornillos mariposa

Fuente de calor

Uso del autoclave

Agregar agua hasta la rejilla Colocar el material a esterilizar sobre la rejilla Cerrar los tornillos en forma enfrentada. Proceder al encendido Calentar con el escape de vapor abierto, se cierra cuando sale un chorro de vapor continuo. Cuando el manmetro llega a la presin deseada, se regula la llama y se controla el tiempo, cumplido ste se corta la fuente de calor. Para abrir el autoclave, cerrar la entrada de gas y esperar que la presin se haga cero. Retirar el material, guardar en heladera o armario.

Factores influyentes en la esterilizacin Temperatura: las endoesporas bacterianas son las ms resistentes a la muerte por el calor, solo se alcanza la temperatura mortal si el vapor est sometido a presin.

 Humedad: la coagulacin del protoplasma bacteriano (protenas, enzimas) a temperaturas

moderadas, requiere humedad y cuando esta se elimina la temperatura requerida para la coagulacin se eleva rpidamente. Presin: solo se utiliza para mantener la temperatura del vapor por encima de los 100 C. Tiempo: hace falta un cierto tiempo para que el calor penetre y caliente los materiales a la temperatura de esterilizacin. Normalmente se requieren de 11 a 12 minutos a 121 C (calor hmedo) para matar las endoesporas de bacterias termfilas. Aire atrapado: es necesario remplazar por vapor todo el aire. Naturaleza de los materiales: es preferible esterilizar en recipientes pequeos, ya que requieren menos tiempo.

Flameado
Con la llama del mechero, se esterilizan las ansas, piezas, bocas de tubos de ensayo y de erlermeyer.

Horno elctrico
El calor seco es menos efectivo que el hmedo, se requiere mayor temperatura 170- 200C y tiempo para esterilizarse. Se utiliza para todo material de vidrio como: tubos, pipetas, cajas de petri y frascos, a estos se los protege con papel para evitar la contaminacin posterior. Tiene un termostato que interrumpe la fuente clrica una vez alcanzado el lmite de temperatura deseado, y la pone en accin para suministrar calos cuando desciende la temperatura. Tiene un termmetro y un ventilador para homogeneizar la temperatura interna. La esterilizacin se realiza a 160-170 C durante 2 horas. Si la operacin ha sido correcta, los papeles de envoltura y algodones quedan ligeramente Termmetro amarillos.

Doble pared con material aislante