1.

INTRODUCCIN

El cultivo del palto (Persea americana MILL.), es una de las especies frutales que presenta el mayor ndice de plantacin en los ltimos aos, alcanzndose una superficie cercana a las 23.000 hectreas. Dichas hectreas, se encuentran plantadas principalmente con el cultivar Hass, y se distribuyen entre la III y VI regiones del pas (CASTRO, 2002). Este crecimiento expansivo de la superficie en Chile, se debe por una parte a su relativa facilidad de manejo comparada con otras especies frutales de exportacin y tambin, a los atractivos niveles de rentabilidad que presenta. Otro factor importante que ha gatillado este aumento de la superficie plantada ha sido sin duda la plantacin en ladera, la cual no siempre otorga las mejores caractersticas de suelo para el desarrollo de esta especie. El palto por tener un origen subtropical es muy sensible a condiciones climticas adversas como sequas y temperaturas extremas, tambin a condiciones edficas como texturas arcillosas y salinidad, por nombrar algunas. Es por esta razn que actualmente existe una constante bsqueda de nuevos patrones que presenten caractersticas deseables para superar estas limitantes (SCHAFFER y WHILEY, 2002). Para nuestras condiciones edafoclimticas se requieren portainjertos con adaptacin a mltiples factores adversos del suelo como lo son texturas finas, temperaturas poco adecuadas durante la floracin y la salinidad de las aguas de riego, entre otras. Bajo este contexto, la resistencia a la salinidad es un factor relevante para la industria chilena, pues existen varias zonas en desarrollo y algunas que podran desarrollarse, como la zona norte del pas,

que presentan esta limitante. Junto con lo anterior, debido al mal manejo de la fertilizacin y riego se est provocando paulatinamente la salinizacin del agua y de los suelos. Bajo la premisa de superar problemas de salinidad, la Facultad de Agronoma de la Pontificia Universidad Catlica de Valparaso y en el marco del proyecto FONDEF DO1I1054: Programa de introduccin, seleccin y propagacin de portainjertos y variedades de paltos en Chile, ha internado al pas cultivares de la raza antillana utilizados como portainjertos, los cuales sern evaluados en vivero y bajo condiciones de campo. Lo que permitira ampliar la oferta de stos y as obtener plantas que sean capaces de adaptarse a condiciones edafoclimticas adversas, mejorando homogeneidad y productividad de los huertos. Adems al realizar un estudio gentico a patrones de la raza mexicana, guatemalteca y antillana, permitira contar con un patrn gentico para compararlos con ecotipos de paltos colectados en Chile y as determinar a que raza pertenecen y las caractersticas que poseen.

Hiptesis de trabajo Existe diferencia en la tasa de crecimiento entre los portainjertos de la raza antillana y los testigos mxicola y nabal, y en el porcentaje de prendimiento del cv Hass sobre los portainjertos antillanos y sobre los testigos mxicola y nabal.

Dados estos antecedentes preliminares y en una primera instancia (a nivel de vivero), los objetivos de la investigacin son: Objetivo general Determinar el comportamiento en vivero y el patrn gentico de portainjertos de reciente introduccin en Chile.

Objetivos especficos Determinar el porcentaje de germinacin y la tasa de crecimiento de los diferentes cultivares de la raza antillana, utilizados como portainjertos. Determinar el porcentaje de prendimiento del palto (Persea americana MILL.) cv Hass, sobre los diferentes cultivares de la raza antillana, utilizados como portainjertos. Caracterizar el patrn gentico que presentan 13 portainjertos de semilla de la raza antillana.

2. REVISIN BIBLIOGRFICA

2.1.

Taxonoma y botnica

Comercialmente el palto (Persea americana) es clasificado en cuatro subespecies o variedades botnicas: Americana, Guatemalensis, Drimifolia y Costaricencis. Estas cuatro variedades son razas ecolgicas, que se desarrollaron en distintas reas y que por dcadas han sido conocidas como las razas hortcolas antillana, guatemalteca, mexicana, y recientemente- se ha clasificado la raza silvestre Costaricencis. Las tres primeras razas difieren en cuanto al tipo de suelo y de las caractersticas que ste tenga, es as como los rboles provenientes de la raza guatemalteca y ms aun los de la raza mexicana, son altamente sensibles a la salinidad. Adems, los paltos mexicanos y en mayor medida los de la raza guatemalteca son muy sensibles a la clorosis frrica. Esto se debe a que en las zonas donde se originaron estas razas, las condiciones de suelo y clima son tales que tienen frecuentes lluvias y habitan en suelos de muy buen drenaje. Al contrario los rboles provenientes de la raza Antillana, son mucho ms tolerantes a ambas condiciones adversas (GARDIAZABAL, 1998). SCHAFFER y WHILEY (2002), sealan que los portainjertos y plantas de los cultivares de la raza mexicana son considerados los ms sensibles a la condicin salina, los portainjertos y plantas de la raza guatemalteca son intermedios y los de la raza antillana los ms tolerantes a la condicin salina. Los mayores atributos buscados en los portainjertos de palto son: resistencia a P. cinnamomi, tolerancia a salinidad, adaptabilidad a suelos calcreos,

rboles pequeos y una alta cosecha sostenible en el tiempo (WHILEY, 1992). En el cuadro 1 se resumen las caractersticas principales que tienen las tres razas de paltos utilizadas como portainjertos. CUADRO 1. Caractersticas de tres variedades botnicas (razas) de palto en su uso como portainjertos. Adaptacin a Suelos pesados y baja aireacin Salinidad Carbonatos Muy sensible Resistencia media Phytophthora cinnamomi Bajas temperaturas Productividad No depende de la raza portainjertos productivos pueden ser seleccionados en cada raza
Fuente: BEN-YAACOV, 2002.

Mexicana Buena

Guatemalteca Regular Resistencia media Muy sensible Sensible Sensible

Antillanos Mala Resistente Resistente Sensible Muy sensible

Sensible Resistente

2.1.1 Caractersticas de las races. Referente a las races en trminos generales de acuerdo con LAHAV y WHILEY (2002) la ubicacin, dimetro, ngulo de insercin de stas y nmero de races laterales que se ubican a lo largo de la raz principal, es lo

que determina la capacidad explorativa del sistema radicular en el suelo. Consecuentemente esto podra afectar la eficiencia de absorcin de los nutrientes minerales y del agua para la planta. Los mismos autores al estudiar las diferentes razas determinaron que la arquitectura y el crecimiento de plntulas de la raza antillana tuvieron un sistema radicular ms largo que plntulas mexicanas y guatemaltecas, con un mayor nmero de races laterales, ya sean primarias, secundarias o terciarias. Adems, se encontr una correlacin directa entre el tamao del sistema radicular de las plntulas provenientes de semillas y el crecimiento de la planta, es as como las semillas de antillanos produjeron rboles ms grandes. En estudios sobre la absorcin de K por las races, se encontr diferencias entre sectores de la raz, y entre raz primaria y laterales de rboles de raza mexicana y guatemalteca. La absorcin del K ocurra en todo el segmento de la raz, pero declinaba hacia el pice radicular. Esto fue de alta ocurrencia en las races no suberizadas (blancas); sin embargo como la masa de las races suberizadas (caf) es mayor que la masa de las no suberizadas, ello sugiere que el K que se encuentra en el rbol debiera ser absorbido por las races suberizadas. Las races de los rboles de raza mexicana son un 13% ms efectivas en absorber K desde el suelo, comparadas con las races de rboles de la raza antillana, mientras que las races laterales de segundo orden fueron ms eficientes que las de primer orden y que las races primarias (LAHAV y WHILEY, 2002).

2.2. Principios fisiolgicos de la resistencia a sales. LEVITT (1980) seala que existen dos formas mediante las cuales se produce un estrs salino: aumento del potencial osmtico, como resultado de la concentracin de solutos, y un efecto txico debido a la alta concentracin de iones. En consecuencia, existe un estrs salino, en el cual el potencial hdrico tiene valores de 0.05 a 0.1 MPa y un estrs inico provocado por un in especfico en un medio con baja concentracin de sales. La edad de la planta puede afectar la tolerancia a las sales, as como la evaluacin de la resistencia. En las especies frutales, las plantas se hacen ms sensibles conforme avanzan en edad. Los iones sodio y cloro se acumulan ms rpidamente en las hojas, observndose que las quemaduras de las hojas se desarrollan ms temprano durante la estacin de crecimiento y con una mayor severidad en plantas ms viejas. La causa de esta susceptibilidad con la edad estara dada por la acumulacin de sales en las races y en el tronco (QUAMME y STUSHNOFF, 1988). Los mecanismos de tolerancia que se han descrito, son los siguientes (LEVITT, 1980): a. Suculencia, cuyo efecto es la dilucin intracelular de sales. b. Glndulas excretoras de sal, que reducen la concentracin de stas en la planta. c. Aumento del potencial hdrico a valores de 2 a 4 MPa, lo que equivale a una concentracin de iones de 400 a 700 mM. d. Alta absorcin de iones, con una alta concentracin de stos para mantener el turgor. e. Sntesis y acumulacin de solutos orgnicos (como carbohidratos, aminocidos y cidos orgnicos), para mantener el turgor.

Los principales sntomas de estrs salino en frutales son: una reduccin del tamao del fruto y su calidad, quemaduras en las hojas desde las puntas hacia los mrgenes y hasta necrosis en estados avanzados de acumulacin (QUAMME y STUSHNOFF, 1988). Segn estos mismos autores, los mecanismos de resistencia al dao por sales no estn aun definidos, pero en la glicfitas que incluyen a la mayora de los frutales, se ha advertido que resisten a la salinidad mediante la regulacin del movimiento de las sales a la parte area, la absorcin de los iones va la membrana y el tonoplasto. Las halfitas (donde solo hay pocas especies frutcolas) absorben sales, pero las eliminan mediante la excrecin o compartimentacin.

2.3. Dao por salinidad El palto es una de las especies ms sensible a la salinidad (BENAVIDES, 1996; AYERS y WESCOT, 1987; BINGHAM, FENN y OERTLI, 1968). Su sistema de adaptacin a la salinidad consiste bsicamente en el mecanismo de absorcin de sales, lo cual en un principio facilitara el ajuste osmtico de la planta, pero dado que los mecanismos de compartimentalizacin (formacin de vacuolas) en estas especies estn mal desarrollados, se originan problemas de toxicidad por iones y desequilibrios nutricionales (LACHI y EPSTEIN, 1984). La salinidad es un factor muy importante de considerar, ya que se ha demostrado que suelos con una conductividad elctrica mayor a los 2 mmhos/cm podran provocar dentro de un 10% de prdida en la cosecha. (AYERS y WESTCOT, 1987).

El dao por salinidad ha sido asociado con altas concentraciones de Na+, y Cl- en hojas de palto. El modo de accin y los sntomas de toxicidad difieren entre el Na+ y el Cl-. Uno de los principales iones que causa problemas es el cloruro, y se ha visto que dependiendo de la raza del palto existe distinta sensibilidad. La raza mexicana tolera hasta 140 ppm (4 meq/l) de cloruro en el extracto de saturacin del suelo (ALARCON, 1999); sin embargo AYERS y WESTCOT (1987) plantean como lmite 177 ppm (5 meq/l) y GALAN (1990) seala como lmite un valor de 213 ppm (6 meq/l). La raza guatemalteca tolera, segn AYERS y WESTCOT (1987), concentraciones cercanas a las 213 ppm (6 meq/l) de cloruro y de acuerdo a lo planteado por GALAN (1990), concentraciones de 370 ppm (10.5 meq/l) de cloruros en la pasta saturada del suelo. Con respecto a la tolerancia de la raza antillana, AYERS y WESTCOT (1987) sealan una concentracin de 283 ppm (8 meq/l) de cloruros en el extracto de saturacin del suelo como nivel de tolerancia. Se ha demostrado que las plantas de palto expuestas a medios salinizados, exhiben una rpida absorcin de cloruro, el cual se acumula en las races, tallos y hojas; sin embargo, se ha visto que al aumentar las concentraciones de cloruros en el sustrato, las concentraciones a nivel de races se mantienen prcticamente constantes, a diferencia de lo que sucede en tallos y por sobre todo en hojas maduras (ms que en tejidos nuevos) las que incrementan su contenido en funcin de la concentracin de cloruro del sustrato y del tiempo (BENAVIDES, 1996, DOWNTON, 1978 y ALLISON, BROWN y HAYWARD, 1954). Se ha demostrado que bastan dos a tres meses con altas concentraciones de cloruros, para que las concentraciones foliares de cloruros alcancen una concentracin suficiente, para inducir sntomas visuales definidos como necrosis tanto en el pice como en el borde de las

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hoja (BENAVIDES, 1996). KADMAN (1963) agrega que existe una alta correlacin entre contenido de cloruro en las hojas y el dao foliar (quemadura); adems, a travs de anlisis foliares demuestra que el contenido de cloruro en las hojas es significativamente mayor en el otoo de cada ao, razn por la cual la aparicin e intensidad de daos foliares es mayor en la poca otoal, cuando la planta se encuentra en menor actividad. La cintica de acumulacin foliar del cloruro presenta un ritmo caracterstico. Al respecto, BINGHAM, FENN y OERTLI (1968), observan que la tasa de acumulacin en las hojas, inicialmente rpida, aumenta con incrementos decrecientes hasta que la concentracin foliar alcanza un valor caracterstico (plateau), que es proporcional a la concentracin de cloruro en el sustrato, si eventualmente aumenta la concentracin de cloruro en el sustrato, se inicia un nuevo periodo de acumulacin con un valor de plateau mayor que el anterior. Al respecto, WALKER y DOUGLAS (1983) relacionan de forma ms o menos lineal la acumulacin de cloruro en las hojas con la concentracin externa de sal. MENDOZA (2000), seala como nivel foliar crtico de cloruro para el palto un 0.25% con respecto al peso seco de la hoja. Estudios realizados por AYERS, ALDRICH y COONY (1951) muestran que los sntomas de quemaduras en hojas de paltos se presentan cuando la concentracin de cloruros es de 0.5 a 0.9% del peso seco, al respecto CALABRESSE (1992) indica que el resecamiento apical comienza a manifestarse con concentraciones de 0.4% de cloruro referidas al total de materia seca. El palto es considerado como un cultivo sensible al sodio, tolerando concentraciones bajo los 3.5 meq/l en el suelo y valores de porcentaje de sodio intercambiable (P.S.I.) menores a 15 (AYERS y WESCOT, 1987).

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El sodio a diferencia del in cloruro, no se mueve rpidamente desde las races hacia las hojas, sino que es acumulado en las races donde alcanza valores crticos antes de entrar al cultivar injertado (CALABRESSE, 1992 y KADMAN, 1963). Dada esta situacin, ALLISON, BROWN y HAYWARD (1954) consideran que el exceso de sodio en el suelo puede no reflejarse en el contenido de sodio de los tejidos foliares. Utilizando plantas de palto de razas mexicanas, guatemaltecas y antillana sometidas a riego con agua salina (330 ppm de Na+), KADMAN, (1963) observ un gradiente decreciente de concentraciones de Na+ desde las races, brotes y hojas, existiendo una relacin del contenido de Na+ en races/hojas de 3-4:1 para la mayora de los cultivares estudiados, a excepcin de Northrop, raza mexicana, en que la relacin races/hojas es 1:2, con lo que sugiere la existencia de algn tipo de barrera a nivel de races, la que es alterada cuando las races estn daadas permitiendo el movimiento de sodio desde las races a los brotes, como sucede en plantas de raza mexicana (Northrop). La entrada de sodio a un cultivar de palto injertado sobre patrn de raza mexicana o mexicana x guatemalteca est asociada con el incremento en la suculencia (incremento peso fresco/peso seco) de los tejidos de los brotes y hojas; segn DAWNTON (1978), posiblemente, sta es una respuesta adaptativa que permite la dilucin de los iones acumulados. Las lesiones causadas por exceso de sodio pueden ser enmascaradas por los daos simultneos debidos al cloruro, sin embargo, AYERS, ALDRICH y COONY (1951) en un estudio realizado con soluciones nutritivas observaron quemaduras de las hojas atribuidas al sodio cuando stas contenan 0.5% de

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sodio por peso seco, valor que coincide con lo planteado por CALABRESSE (1992). MASS (1984) define al palto como un cultivo sensible al boro, considerando valores dentro del rango 0.50.75 ppm como concentraciones mximas en el extracto de saturacin, para no tener prdidas de rendimientos o reduccin en el crecimiento. 2.3.1. Efectos fisiolgicos y productivos de la toxicidad por sales en paltos. En condiciones de estrs por cloruros, la primera consecuencia de los daos foliares es la prdida de capacidad fotosinttica, por necrosamiento y cada prematura de hojas maduras, junto con una disminucin del calibre de la fruta. Si los daos son severos, se puede ver una reduccin de la capacidad de produccin de fruta (BENAVIDES, 1996). MOYA et al (2000) sealan que esta prdida de capacidad fotosinttica est dada por una menor fotosntesis neta y un menor contenido de clorofila. Ensayos efectuados por BAR, APELBAUM y GOREN (1998) en ctricos, utilizando un inhibidor de la actividad de etileno, Tiosulfato de plata (STS), muestran que el STS evita la abscisin de hojas inducidas por los cloruros, no afectando, sin embargo, en la necrosis de las hojas, de esta manera sugieren que el etileno es el responsable de la abscisin de hojas y los sntomas de quemadura de hojas son atribuidos en parte a los cloruros y/o a la acumulacin de putrescina. COOPER (1951) en un estudio realizado con plantas de palto en vivero, indica que los primeros sntomas detectados en plntulas sometidas a un exceso de sal, es una necrosis tpica en las hojas con una distribucin

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simtrica, que puede proceder despus de una ligera clorosis intervenal (SAAVEDRA y ALCALDE, 1987), la cual es atribuida principalmente a los cloruros. Al analizar hojas de rboles de palto en condiciones de campo, AYERS, ALDRICH y COONY (1951) atribuyen la necrosis tambin a un efecto del Na+ y al igual que SAAVEDRA y ALCALDE, (1987); BINGHAM, FENN y OERTLI, (1968); BINGHAM y FENN (1966), caracterizan la necrosis causada por Cl- como una necrosis que se inicia en el pice avanza hacia los mrgenes y cubre paulatinamente la zona intervenal. Estos ltimos autores agregan que cuando el dao se agudiza, se observan manchas necrticas entre las nervaduras que no presentan un patrn simtrico y en situaciones en que la concentracin salina en el sustrato es muy alta, las hojas jvenes manifiestan clorosis antes que se observe necrosis. SAAVEDRA y ALCALDE, (1987) estudiaron la influencia de la salinidad y sintomatologa foliar en rboles de palto cv Hass, sobre patrn de la raza mexicana aplicando distintas concentraciones de MgSO4, NaSO4, MgCl2 y NaCl2, encontrando daos evidentes en hojas solo por cloruros. Estos mismos autores sealan que la presencia de hojas nuevas e incremento en la longitud del tallo, se relaciona con la abscisin de hojas adultas necrosadas por efecto de una expulsin masiva de sales, situacin tambin observada por BAR, APELBAUM y GOREN, (1997) en un ensayo con dos portainjertos de palto, uno tolerante a la salinidad y otro sensible a la salinidad, en donde la abscisin foliar del portainjerto tolerante es acompaado con una alta velocidad de crecimiento de un nuevo crecimiento vegetativo. SAAVEDRA y ALCALDE, (1987) agregan, adems, que la abscisin ocurre mas rpido en aquellas plantas que recibieron MgCl2, debido a que el Mg2+ y Cl- pueden inducir la produccin de etileno, que acelera el proceso de abscisin y consideran la disminucin del ngulo que forman las hojas con relacin al tallo, como una forma de adaptacin

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morfolgica ante un estrs salino, permitindole a la planta reducir notablemente su metabolismo, debido a la baja cantidad de tejido foliar que recibe radiacin. BAR, APELBAUM y GOREN, (1997) concluyen que los sntomas causados por altos contenidos de cloruros en rboles de ctricos (Cleopatra y Troyer), estn asociados con altos niveles de putrescina y bajos de espermina en las hojas. Cuando la diferencia entre los niveles de las poliaminas crece, los efectos detrimentales del cloruro aumentan, atribuyndole a la putrescina un posible rol en la aparicin de sntomas txicos en las plantas sometidas a riego con aguas de alto contenido de cloruros; por otro lado, tambin se atribuye un rol de proteccin de la espermina. BAR, APELBAUM y GOREN (1998) agregan que el incremento de cloruros en la solucin del suelo, incrementa el contenido de c. l.- aminocyclopropano- l carboxlico (ACC), incrementndose la velocidad de sntesis de etileno, el dao en hojas y disminuyendo el crecimiento, adems, BAR, APELBAUM y GOREN, (1997) sugieren una posible estimulacin de la sntesis de etileno por cloruros provocada por bloqueo de la sntesis de espermina y por la acumulacin de putrescina en las hojas de plantas estresadas. En un experimento realizado en palto cv Hass utilizando cuatro niveles de salinidad en el agua de riego, se comprob que a medida que aumenta la salinidad, el incremento en el rea transversal del tronco disminuye (MICKELBART y ARPAIA, 1995; OSTER y ARPAIA, 1992). Igual situacin fue observada por DOWNTON (1978) en el dimetro de brotes de paltos cv Fuerte injertados sobre patrn de raza mexicana tratados con niveles crecientes de NaCl. El crecimiento vegetativo decrece cuando se incrementa el contenido de cloruro en las hojas y tallo; sin embargo, no existe esta

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correlacin entre el contenido de sodio del tallo y el crecimiento (OSTER et al. 1985). La floracin del palto se ve afectada por la concentracin de sales en la solucin del suelo como tambin por el portainjerto, es as como DOWNTON (1978) seala que la floracin del cultivar Fuerte injertado sobre el patrn de raza mexicana se incrementa con la salinidad hasta valores de 10 mM de NaCl; sin embargo, se ve fuertemente inhibida con concentraciones de 20 mM. Agrega adems, que existe una progresiva estimulacin de la floracin del cultivar Fuerte sobre patrn Zutano a medida que se incrementa la concentracin de NaCl al igual que Fuerte sobre patrn guatemalteco, sin embargo, el nmero de flores que se obtienen en esta combinacin cultivar/patrn es similar a niveles de 10 mM de NaCl y 20mm de NaCl aumentando con niveles mayores de salinidad. Estudios experimentales realizados por BINGHAM, FENN y OERTLI (1968) con relacin a la produccin de Hass bajo condiciones de altas concentraciones de cloruros del sustrato, anlisis foliar y nivel de sntomas foliar se muestran en el Cuadro 2.

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CUADRO 2. Toxicidad por cloruros y produccin en cv. Hass. Concentracin Sustratos (meq/l) 0 5 10 15 20 Concentracin foliar % Cl 0.01 0.20 0.48 0.80 1.51 Ninguno Ninguno Ligero Definido Severo Dao foliar Produccin paltas Kg/rbol 30 13 16 14 7

Fuente: BINGHAM, FENN y OERTL., 1968

El primer rgano que se afecta por el exceso de sales es la raz, alterndose la absorcin de nutrientes y el crecimiento radicular, la reduccin en el crecimiento de las races bajo condiciones de salinidad ha sido descrito por KALAJI y PIETKIEWICZ (1993), lo que se contrapone con lo observado por MUOZ y CHAPARRO (1997) en plantas de vid, donde el crecimiento radicular no se ve afectado, lo que indicara una respuesta de tolerancia que podra estar relacionada con una capacidad de incluir iones que seran traspasados a la parte area en forma controlada. El estudio de la ultraestructura de clulas centrales de cofias en plantas de vid bajo condiciones de riego con aguas salinas, muestra una disminucin en tamao de stas y aumento en el nmero de vacuolas en comparacin con plantas bajo condiciones normales, adems de un mayor nmero de mitocondrias (MUOZ y CHAPARRO, 1997).

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Segn BERSTEIN, LOFFE y ZILBERSTAINE (2001), la salinidad sdica y salina, inhiben el crecimiento y reducen la produccin de muchas especies. Se establece comnmente la hiptesis que la inhibicin del crecimiento de las plantas bajo condiciones de estrs salino est asociado con alteraciones relacionadas al agua (efecto osmtico), efectos inicos especficos (deficiencia o exceso) o disponibilidad de energa (carbohidratos). El mecanismo de inhibicin del crecimiento bajo condiciones de estrs salino es poco entendido. Investigaciones en los mecanismos fundamentales de la inhibicin del crecimiento y tolerancia muchas veces se basan en lneas o estudios comparativos, cultivares o variaciones genticas, demostrando niveles diferenciales de sensibilidad o resistencia a condiciones subptimas. La evaluacin y categorizacin del nivel de tolerancia de los procesos de crecimiento al estrs de diferente material vegetal usado para investigacin es una fase crucial para el establecimiento de cada mecanismo de estudio comparativo.

El palto es muy sensible al NaCl en el medio de crecimiento de la raz; incluso bajos niveles de sal inhiben el crecimiento del rbol y disminuyen la productividad. Si bien las especies como un todo demuestran altos niveles de sensibilidad al estrs, existe un amplio rango de sensibilidad entre las razas, variedades y portainjertos comerciales de palto. De todas, la raza antillana es ms resistente a salinidad que las razas mexicana y guatemalteca con un amplio rango de sensibilidad al estrs salino tambin encontrado entre los portainjertos antillanos.

La sensibilidad del palto al estrs salino ha sido cuantificada usualmente como un efecto de estrs en la produccin agrcola, cada de hojas debido a

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cloro y acumulacin de sodio. Portainjertos resistentes, basados en este criterio, demuestran bajos niveles de dao de hojas bajo condiciones salinas, pero el efecto negativo en productividad permanece. Esto sugiere la implicancia de otros factores de la planta aparte del dao en hojas en la disminucin de la productividad. 2.3.2. Mecanismo de tolerancia a la salinidad en paltos. CALIANDRO, CANTATORE y MUSACCHI (2000) dividen a las plantas superiores en dos grupos en relacin al mecanismo de adaptacin a la salinidad, plantas que impiden el ingreso de los iones presentes en la solucin del suelo, al interior de sus tejidos o sitios mas activos (yemas y hojas en expansin) definidas como excluyentes de iones y plantas que acumulan los iones en su interior de la misma planta o en rganos especiales llamadas incluyentes de iones Las plantas para enfrentar la salinidad presentan principalmente dos mecanismos, el primero de ellos es la produccin de solutos compatibles de manera de disminuir internamente su potencial osmtico (osmorregulacin), ya sea con sales minerales inorgnicas absorbidas desde la solucin del suelo, compuestos orgnicos solubles producidos por la propia planta, pudiendo ser azcares, alcoholes, compuestos de azufre ternario, compuestos de amonio cuaternario como la prolina y la glicina (FLAGELLA et al., 1999), lo que fue comprobado por BAULS Y PRIMO-MILLO (1992) en ctricos, donde encontraron una alta correlacin entre el potencial osmtico y la concentracin de prolina en las hojas como consecuencia de concentraciones crecientes de NaCl en la solucin del suelo.

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Una importante caracterstica del ajuste osmtico de las halfitas es el de acumular las sales dentro de las hojas en vacuolas, manteniendo de esta manera una baja concentracin salina en el citoplasma, de manera de no interferir con la actividad de las enzimas y en el metabolismo, mientras que el ajuste osmtico dentro del citoplasma lo efectan por medio de la produccin de solutos compatibles con la actividad enzimtica (LACHI y EPSTEIN, 1984). Muchas glicfitas responden a las bajas concentraciones salinas,

disminuyendo la velocidad del transporte sodio y/o cloruro desde las races a los brotes, generalmente gran parte de estas glicfitas no poseen un buen ajuste osmtico va sntesis de solutos orgnicos, sufriendo una disminucin del turgor celular. Las glicfitas sensibles a la salinidad, tienen un control inadecuado a la absorcin de iones cuando estn sometidas en un medio salino, generndose una alta concentracin al interior de la clula, debido a que este tipo de plantas no tiene desarrollado un mecanismo de compartimentalizacin; el incremento del contenido de iones en el citoplasma podra provocar daos a nivel de enzimas y organelos, como tambin a nivel de membrana celular (LACHI y EPSTEIN, 1984). El segundo mecanismo es la regulacin del transporte inico, a nivel de los canales transportadores de Cl- y Na+, y el transporte activo (es decir, con gasto de energa) de Na+ desde el citoplasma al medio externo en contra el gradiente electroqumico (FLAGELLA et al., 1999). La tolerancia del palto a los altos niveles de Na en el suelo ha sido atribuida a la existencia de una barrera en las races, la efectividad de sta determina la susceptibilidad de un cultivar al Na. La forma ms comn de la tolerancia al Cl-, es reducir la absorcin del Cl- por parte de las races. Parece ser que

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este es el mecanismo de tolerancia para muchos cultivares de la raza guatemalteca. En todo caso algunos cultivares como el mexicano GI 7, pueden resistir altas concentraciones de Cl- en las hojas sin mostrar sntomas de toxicidad (SCHAFFER y WHILEY (2002). SAAVEDRA y ALCALDE (1987) comentan que los mecanismos usados por las plantas de palto, expulsin masiva de sales a travs de la abscisin foliar, pueden deberse a que no cuenten con la informacin gentica para resolver inmediatamente problemas de estrs salino. Ambos autores observaron a nivel de microscopio que plantas sujetas a tratamientos salinos no presentaban ningn grado de adaptacin anatmica foliar, sino que mostraban efectos letales sobre algunas clulas, especficamente clulas del parnquima en empalizada. 2.3.3. Valoracin de la tolerancia a la salinidad en trminos productivos. MAAS y HOFFMAN (1977), a partir de datos reales, han encontrado que entre la salinidad del suelo y la produccin de los cultivos existe una relacin lineal, la cual puede ser expresada de la siguiente forma (PIZARRO, 1996 y FLAGELLA et al., 1999): P = 100 b(CEe a) 100 Donde: P = produccin del cultivo en % respecto al mximo. CEe = salinidad del suelo expresada como conductividad elctrica del extracto de saturacin y medida en mmhos/cm.

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a = valor de Ce que representa el nivel mximo de salinidad tolerado sin producirse prdidas en la produccin. b = valor que representa la reduccin en la produccin por el incremento unitario en la salinidad. Segn MAAS y HOFFMAN (1977), los valores correspondientes al palto son:

Valores de CEe (mmhos/cm para una P(%) de: a 1.3 b 100 90 1.8 75 2.5 50 3.7 0 6.0 20.8 1.3

2.4. Requerimientos de la calidad del agua El concepto de calidad de agua de riego se refiere a las caractersticas de las aguas que pueden afectar su adaptabilidad a un uso especfico. La calidad del agua se define por una o ms caractersticas fsicas, qumicas o biolgicas. En la evaluacin de la calidad del agua para riego se toman en cuenta solo las dos primeras. (CARRASCO, 1991). La calidad del agua de riego puede variar significativamente segn la concentracin y composicin de las sales disueltas. Las sales se encuentran en cantidades relativamente pequeas, pero significativas y tienen su origen en la disolucin o meteorizacin de las rocas y suelos, adems de la disolucin lenta de la caliza, del yeso y de otros minerales. Las sales son transportadas por las aguas de riego y depositadas en el suelo, en donde se

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acumulan a medida que el agua se evapora o es consumida por los cultivos (AYERS y WESCOT, 1987). Los iones predominantes son una mezcla de sodio, calcio y magnesio con cloruros. Sulfatos, bicarbonatos y ocasionalmente pequeas cantidades de carbonato. Tanto los cloruros como los sulfatos contribuyen a la salinizacin del suelo, sin embargo, los carbonatos y bicarbonatos ayudan a la aparicin de sodio intercambiable (CARRASCO, 1991). Segn SCHAFFER y WHILEY (2002), la salinidad es generalmente asociada a cultivos de paltos que se ubican en climas semiridos por ejemplo California, Chile, Israel y el sudeste de Australia, donde la insuficiente cada y la pobre calidad del agua pueden elevar la concentracin de sal en el suelo. En los climas subtropicales hmedos, donde la substancial lluvia de verano reduce la concentracin de sal en el suelo, como ocurre en el este de Australia y en Sudfrica, stas no son un problema. SCHAFFER y WHILEY (2002), aseguran que en Israel, al igual que en algunas zonas de Chile, el problema ms importante es la salinidad en el agua de riego y en el suelo, as como la presencia de carbonatos de calcio. En las condiciones climticas de ese pas, prosperan bastante bien los portainjertos de raza antillana, puesto que la resistencia a sales es mayor en stos, intermedia en los cultivares guatemaltecos y mnima en los mexicanos. En todo caso, esto es significativamente variable entre cada una de las tres razas. Las aguas de riego son consideradas el principal factor de acarreo de sales lo que junto con un drenaje restringido contribuyen a la salinizacin de los suelos, que puede llevar consigo la presencia de una capa fretica poco

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profunda que, como consecuencia de la ascensin por capilaridad de las sales a los horizontes superiores, provocara salinizacin definida como secundaria por los autores CALIANDRO, CANTATORE y MUSACCHI, (2000). Generalmente el agua que se utiliza para suplir las necesidades hdricas del cultivo contiene sales en solucin, que cada vez que se efecta un riego se incorporan al suelo en cantidades variables de acuerdo a la cantidad de sales disueltas como al volumen de agua aplicado, significando un aumento paulatino de sales que se acumulan en el suelo, ya que el agua aportada se evapora o es utilizada por las plantas, mientras que las sales persisten (RAZETO, 1999; CARRASCO, 1991; ALLISON, BROWN y HAYWARD, 1954). MARTINEZ (1987) y MENDOZA (2000) a travs de un clculo terico muestran el aporte de sales producto de la utilizacin de aguas de alto contenido salino del ro Copiap y de un pozo de la IV Regin, asumiendo un aporte de agua de 10000 m3/ha/ao y una C. E de 2.0 mmhos/cm para el primer caso, y de 1.7 mmhos/cm para el segundo, las toneladas de sal incorporadas al perfil del suelo anualmente son de aproximadamente 12.5 ton y 6.9 ton, respectivamente; otros estudios realizados por FIEROTTI, DAZZI y TUSSA (1999) muestran relaciones semejantes a las descritas anteriormente. VOGEL (1985), en un estudio realizado sobre la composicin qumica de las aguas de riego chilenas, identifica grandes fluctuaciones en los contenidos de sales entre una cuenca hidrogrfica y otra, destacndose la gran variabilidad del magnesio, cloruros y sulfatos que existe dependiendo de las condiciones locales de clima y composicin mineral, especficamente en aquellos en que existe un alto contenido de minerales sulfatados (yeso). HEREDIA (1999) seala que los problemas de salinidad en frutales irn en aumento, debido a la utilizacin de aguas residuales procedentes de ncleos

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urbanos con altos contenidos de sodio y boro, por el uso de detergentes domsticos; SAAVEDRA y ALCALDE (1987) agregan como una de las causas de la salinidad, el uso indiscriminado de fertilizantes con cloro y estircol con alto contenido salino. 2.4.1. Conceptos de calidad del agua de riego Distintos autores CARRASCO (1991), AYERS y WESTCOT (1987), VERMEIREN y JOBLING (1986) han determinado cuatro problemas producidos por la calidad del agua en suelos y cultivos. - Salinidad La salinidad del agua se evala por su conductividad elctrica expresada en mmhos/cm. Existe un problema de salinidad cuando las sales se acumulan en la zona radicular a una concentracin tal que ocasiona prdidas en la produccin. Estas sales provienen la mayor parte de las veces del agua de riego. Segn VOGEL (1985), el contenido de sales solubles tiene una relacin directa con la latitud en que se encuentran los diversos cursos de agua, es as como en Chile el contenido salino tiende a disminuir de norte a sur, debido a un aumento de la pluviometra anual y mayor acumulacin de nieve en la cordillera. En el Cuadro 3, se muestran los rangos de clasificacin de las aguas de riego con respecto a la salinidad.

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CUADRO 3. Clasificacin de las aguas de riego segn su nivel de salinidad. Clasificacin de las aguas Conductividad Elctrica (mmhos/cm) Aguas satisfactorias para el riego Aguas con riesgo medio para el riego Aguas con alto riesgo para el riego
Fuente: VOGEL, 1985.

Menor a 0.75 mmhos/cm.

0.75 3 mmhos/cm.

Sobre 3 mmhos/cm.

- Permeabilidad La permeabilidad del suelo se reduce cuando el agua lleva constituyentes qumicos. Segn VERMEIREN y JOBLING (1986), esta dificultad se asocia con aguas que tengan un contenido en sales muy bajo y un alto contenido de sodio con respecto al calcio y al magnesio. Es as como se ha clasificado como aguas sin problemas de permeabilidad cuando el anlisis arroja una C.E. mayor a 0.5 mmhos/cm y un S.A.R. menor a seis; aguas con dificultad cuando tienen un rango de C.E. entre 0.20.5 mmhos/cm y un S.A.R entre seis a nueve y dentro de las aguas con alto riesgo estn aquellas con una C.E. menor a 2 mmhos/cm y un S.A.R. mayor a 9. - Toxicidad. Los problemas de toxicidad surgen, cuando ciertos iones del agua son absorbidos por las plantas y acumulados en sus tejidos en concentraciones lo suficientemente altas para provocar daos y disminuir los rendimientos (AYERS y WESTCOT, 1987). Los principales iones son el cloro, sodio y boro,

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y estos deben encontrarse bajo los 0.5 ppm, 4 meq/l y 3 S.A.R., respectivamente para no ocasionar problemas. En lo referido a la calidad del agua de riego, GARDIAZABAL (1998) afirma que el palto es una de las especies ms sensibles al exceso de sales presentes en el agua de riego y se ha demostrado que con una conductividad elctrica de 1.8 mmhos/cm, se produce una disminucin en la produccin, de un 10%. A continuacin se dan valores referenciales de los distintos elementos que pueden ser peligrosos en el agua de riego: Conductividad Elctrica : Cloruros Boro : : < a 0.75 mmhos/cm. < a 2.8 meq/litro o 100ppm. < a 0.2 meq/litro

2.5 Efecto del portainjerto en la cantidad de nutrientes en las hojas La cantidad de nutrientes en las hojas vara dependiendo del portainjerto utilizado, LAHAV y WHILEY, (2002) reportaron los efectos del portainjerto para algunos nutrientes. Por ejemplo, rboles cultivar Fuerte injertados sobre portainjertos mxicolas, tuvieron altos niveles de N en las hojas comparados con aquellos injertados sobre portainjertos guatemaltecos, mientras que los injertados sobre antillanos tuvieron bajos niveles de N y Ca y presentaron altos niveles de K, Mg y Fe en las hojas. En forma paralela los rboles injertados sobre portainjertos antillanos tuvieron altos niveles de Zn y Mn en las hojas, comparados con aquellos injertados sobre portainjertos mexicanos.

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En la zona semirida de Israel y California los portainjertos antillanos fueron los mejor evaluados en su resistencia a la salinidad frente a mxicolas y guatemaltecos. Esto se expres en una baja concentracin de Cly

Na+ en

las hojas. Una comparacin de los niveles relativos de minerales en las hojas de cultivares injertados en portainjertos de las 3 razas se presenta en el Cuadro 4 (LAHAV y WHILEY, 2002). CUADRO 4: Efecto relativo de los portainjertos en el nivel de nutrientes en las hojas de la variedad comercial (H, alto; M, medio; L, bajo). Nutrientes N P K Ca Mg Na ClMn Fe B Mexicano H M H L L H H L M L Antillano L H M L H L L H H Guatemalteco L L L H H L L L H

Fuente: LAHAV y WHILEY,2002.

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2.6. Variedades de portainjertos antillanos internadas al pas Segn BEN-YAACOV (2002), las variedades de portainjertos internadas al pas, pertenecen a los siguientes grupos, cuyas caractersticas principales son las siguientes: Nachlat: corresponden a antillanos puros, que presentan una alta

resistencia a condiciones de sal y cal presentes en el agua y en el suelo, requieren de suelos de tipo franco-arenoso. Adems este grupo de portainjertos confiere algo de enanismo a la variedad comercial injertada en l. Waldin: Antillano de parentales desconocidos, fue desarrollado en Florida,

posee caractersticas similares a Nachlat y soporta suelos francos. Degania: Antillano (predominante), con una buena produccin bajo

condiciones salinas, es un rbol vigoroso y resiste suelos ms pesados. Ashdot: Antillano (predominante), presenta una buena produccin bajo

condiciones salinas, es un rbol vigoroso y resiste condiciones de suelo pesado y es sensible a la cal. Ziffrin: Sus caractersticas son similares a las de la serie Ashdot. Nachal OZ: Caractersticas, similares a la serie Degania.

BEN`YAACOV, A. Ph. D. Profesor Emerito. Volcani Center. Israel. Comunicacin personal.

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2.7. Propagacin por semillas BENDER y WHILEY, (2002) aseveran que debido al bajo costo, crecimiento vigoroso de las plntulas y la facilidad de propagacin, la mayora de los pases aun usan semillas para producir portainjertos que sern injertados con la variedad comercial deseada, a pesar de su variabilidad gentica. Las semillas pueden ser cosechadas directamente del rbol cuando estn maduras, evitando el contacto con el suelo. Sin embargo, si se recogen frutos cados o stos son de origen dudoso, la coleccin de semillas debe ser tratada con agua caliente a 50 C por 30 minutos para eliminar cualquier infeccin con P. cinnamomi. El control de la temperatura debe ser preciso puesto que la semilla puede perder viabilidad a los 52 C. Despus del tratamiento con agua caliente, las semillas deben ser puestas en agua fra y limpia para enfriarlas, luego sembrarlas en sustrato esterilizado. Se debe estar seguro que la planta madre no esta infectada con Sunblotch, ya que esta enfermedad tipo virus es altamente transmisible por las semillas. 2.7.1. Germinacin y crecimiento Las semillas de palto frecuentemente germinan lenta e irregularmente, lo cual puede ser debido a cualquiera de los tratamientos de poscosecha. Algunos estudios en germinacin de las semillas de palto, los cuales han examinado los efectos de remover la cubierta de las semillas y/o cortando secciones de los cotiledones (terminada la escarificacin). De estos estudios ha sido reportado consistentemente que la remocin de la cubierta caf de las semillas, incrementa la velocidad y el porcentaje de germinacin, particularmente para semillas que han sido almacenadas en fro (BENDER y WHILEY, 2002).

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Para el ptimo crecimiento de las plntulas la temperatura del invernadero debe mantenerse cercana a los 27 C con alta humedad, aunque algunos trabajadores de viveros creen que las frescas temperaturas nocturnas (13 C) producen plantas fuertes (BENDER y WHILEY, 2002). En el mundo cerca de un 90% de los patrones de paltos son producidos por semillas (va sexual), en Chile se usa principalmente semilla de la variedad mxicola, lo cual no garantiza plena uniformidad en el huerto, no otorga resistencia a dos problemas importantes; Phytophthora cinnamomi ni a quemaduras de las hojas, causadas por altos niveles de cloruros y sodio presentes en el agua de riego de algunas zonas, ni asegura que la semilla utilizada sea realmente de la variedad mxicola (CASTRO, 2002).

2.8.

Anlisis gentico

La tcnica de marcadores polimrficos de ADN de amplificacin aleatoria (Randomly Amplified Polimorphic DNA, RAPD), realizada por WILLAMS et al., (1990), se basa en el polimorfismo genmico intraespecifico del DNA. En sta se utilizan oligonucleotidos sintticos como partidores, los cuales se unen a regiones complementarias sobre el genoma en estudio, permitiendo amplificar fragmentos de DNA en forma completamente aleatoria, mediante la reaccin de la polimerasa en cadena (PCR). Los fragmentos de DNA obtenidos, normalmente denominados productos PCR son fcilmente visibles sobre geles de agarosa. Cada partidor utilizado produce un patrn de banda de DNA que cambia dependiendo de la variedad del palto, evidenciando de esta forma la existencia de polimorfismo entre los genomas (individuos) a comparar.

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Los polimorfismos generados por RAPD resultan de cambios en la regin o secuencias del genoma donde se unir el partidor (p.e. mutaciones puntuales), o cambios que alteran el tamao o previenen la amplificacin exitosa del ADN en estudio (p.e inserciones, delecciones, inversiones) (WAUGH y POWELL, 1992). La cantidad de fragmentos de ADN depender de que en el genoma de la variedad analizada se encuentren secuencias complementarias al partidor y en la orientacin opuesta dentro de una distancia que sea posible de amplificar por PCR (200-2500 pb). Dado su gran potencial y simpleza, este mtodo ha sido ampliamente aplicado paradiferenciar individuos en numerosas especies vegetales. En la literatura es posible encontrar diversas referencias con respecto al uso de la tcnica de RAPD-PCR para la determinacin de patrones genticos y su uso en la ciencia forense, la identificacin clnica patolgica o la certificacin de variedades vegetales. Los marcadores moleculares generados por la tcnica RAPD-PCR; han sido usados con gran xito en el rea agronmica para la identificacin de diferentes variedades de cultivos, tales como Tomate (MORI et al., 1993), Brcoli y Coliflor (HU y QUIRS, 1991), Cocoa (WILDE et al., 1992), Apio (YANG y QUIRS, 1993), Arroz (FUKUOKA et al., 1992), y tambin (GOGORCENA y PARFITT, 1994). en algunos frutales como Manzano (KOLLER et al., 1993) y Damasco

2.9.

Caractersticas qumicas de las aguas de riego, en las zonas con problemas de salinidad.

El pH de estas aguas es moderadamente alcalino y vara entre 8.04 y 8.22. El contenido salino es muy variable entre los diferentes ros y flucta entre

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0.47ds/m para el agua del ro Manflas y 1.20 ds/m para las aguas del ro Jorquera. El ro Copiap presenta una conductividad elctrica intermedia de 1.07 ds/m, que corresponde por definicin a agua salina. La relacin de absorcin de sodio ms alta corresponde a las aguas del ro Jorquera, seguidas por las aguas del ro Copiap, lo que se explica por el alto contenido relativo de sodio en relacin a su contenido de calcio y magnesio (BERNAL, CSPED, y OSORIO, 2001).

El Cuadro N 4 muestra las caractersticas qumicas de las aguas superficiales del ro Copiap.

Cuadro 4: Caractersticas qumicas de las aguas utilizadas en riego en el valle de Copiap.

pH CE ds/m RAS Mg mmol(+)/l Na mmol(-)/l Cl mmol(-)/l B mg/l

Ro Copiap Ro Jonquera Ro Pulido

8.12

1.07

1.87

2.37

3.20

1.47

0.85

8.04

1.20

2.50

2.31

4.31

2.10

1.30

8.10

0.58

0.67

1.25

1.00

0.49

0.27

Ro Manflas

8.22

0.47

0.75

0.83

1.00

0.50

0.16

Fuente: BERNAL, CSPED y OSORIO, 2001.

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En cuanto a las caractersticas del ro Huasco GONZLEZ (1986), afirma que las aguas del canal Tatara presentan las caractersticas que se presentan en el cuadro 5:

Cuadro N 5: Caractersticas qumicas de las aguas del ro Huasco, medidas en el canal Tatara.
pH CE mhos/cm RAS Mg Meq/l Na Meq/l Cl Meq/l

7.95

4.5

4.6

10.33

18.40

921

Fuente: GONZLEZ (1986)

En el cuadro 6 se muestran los rangos de los parmetros qumicos del agua de riego registrados el ao 1996 en el canal Algarrobo ubicado en Ovalle.

Cuadro 6: Anlisis qumico de agua del canal Algarrobo en la zona de Ovalle.

Conductividad Elctrica pH Cationes Solubles Calcio (Ca2+) Magnesio (Mg2+) Sodio (Na+) Potasio (K+) Aniones Solubles 3.10 mmhos/cm 8.0 meq/l 6.3 7.8 39.4 0.17 meq/l

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Carbonato (CO32-) Bicarbonato (HCO3-) Cloruro (Cl-) Sulfato (SO42-) Boro

0.0 3.8 18.3 1.8 0.33 ppm.

Fuente: Departamento de Ing. y Suelos, Fac. de Ciencias Forestales y Agrcolas; Universidad de Chile.

Otra de las zonas que presentan problemas serios de salinidad en las aguas de riego es la zona regada por el ro Mapocho, principalmente la zona de Mallarauco donde se desarrolla una interesante parte de la industria paltera de Chile. En el cuadro 7 se muestran los rangos de los parmetros qumicos del agua de riego registrados los ltimos cuatro aos meses de octubre a enero. en Mallarauco durante los

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Cuadro 7: Anlisis qumico de agua de canal de la zona de Mallarauco. Parmetro Conductividad Elctrica Calcio soluble Sodio soluble Magnesio soluble Potasio soluble Cloruro soluble Sulfato soluble Bicarbonato soluble Carbonato soluble pH Contenido 1.28 1.61 6.74 8.68 3.85 6.16 1.82 3.57 0.12 0.41 4.24 6.85 1.94 6.68 3.84 4.16 No detectable 6.89 8.01 Expresin mmhos/cm meq/L meq/L meq/L meq/L meq/L meq/L meq/L meq/L meq/L

Fuente: Laboquim Terra; Agrolab; Pontificia Universidad Catlica de Chile, Laboratorio de Suelos.

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3. MATERIALES Y MTODO

3.1 Localizacin geogrfica del ensayo: El presente estudio se realiz en el Laboratorio de Propagacin, Profesor Gregorio Rosenberg, perteneciente a la Facultad de Agronoma de la Pontificia Universidad Catlica de Valparaso, la que se encuentra ubicada en el valle del Aconcagua, Provincia de Quillota (32 50 LS y 71 13 LW), V Regin. El valle posee un clima templado clido, con lluvias invernales que dan un promedio de 400 mm anuales. Las fechas probables de ocurrencia de heladas, varan entre el 16 de mayo y el 13 de agosto. El promedio de horas fro es de 546 horas, con temperaturas inferiores a 7C. La temperatura media en el periodo estival, flucta entre 18 y 23C (NOVOA, et al. 1989).

3.2 Material vegetal: Para llevar a cabo esta investigacin se internaron desde Israel semillas de 13 portainjertos del grupo Degania, Ashdot, Nachal, Nachlat, Ziffrin, y Waldin correspondientes a la raza antillana, las cuales arribaron al pas el 8 de enero del 2003. Las semillas fueron sembradas el 11 de enero de 2003.

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3.3 Ensayo 1: Evaluacin del porcentaje de germinacin y la tasa de crecimiento de los diferentes cultivares de la raza Antillana utilizados como portainjertos: Para determinar el porcentaje de germinacin y la tasa de crecimiento de los diferentes cultivares de la raza antillana utilizados como portainjertos, se procedi a realizar el preacondicionamiento de las semillas y su posterior siembra en contenedor. Dicho proceso consisti en eliminar primero la testa y luego ser sumergidas por 5 minutos en una solucin de 1.8 gr/L de Benlate ms Captan, a continuacin fueron sembradas en contenedores de 7 litros. El sustrato utilizado corresponde a la marca comercial AGROMIX PLUS que posee una conductividad elctrica entre 0.6-1.0 mmhos/cm aproximadamente, pH 6.3, fertilizacin bsica (N, P, K, Ca y Mg) y fungicida, compuesto por corteza de pino, perlita y turba en la relacin de 1/3 de cada componente. Se consider una semilla como germinada cuando la plmula emergi sobre el sustrato. Adems se establecieron tres estados iniciales de la plntula, dependiendo del estado de desarrollo que presentaba. Estado 1: plmula emergida, estado 2: presencia de rudimentos foliares, estado 3: primera hoja verdadera expandida. En este caso se midi todos los das con una regla (en centmetros) la altura de las plntulas, durante los meses de enero y febrero. Se grafic para ver la diferencia en la tasa de crecimiento entre las distintos cultivares estudiados. Las mediciones se realizaron cada 15 das, registrndose la altura total de la planta y el dimetro del tronco a 20 centmetros de altura.

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3.4 Ensayo 2: Determinacin del porcentaje de prendimiento del palto (Persea americana MILL.) cv Hass, sobre los diferentes cultivares de la raza antillana, utilizados como portainjertos: Para determinar el dimetro del tronco (a los 20 cm de altura desde el cuello de la planta), se utiliz un pie de metro digital marca MITUTOYO y la altura total de las plantas (cm) se obtuvo utilizando una regla, las mediciones se realizaron cada 15 das. La injertacin se realiz el 7 de agosto cuando las plantas alcanzaron un dimetro de 0.6 cm de dimetro a 20 centmetros de altura. El injerto utilizado correspondi al empalme de costado con una pa terminal de la variedad comercial Hass.

3.5 Ensayo 3: Caracterizacin del patrn gentico que presentan 13 portainjertos de semilla de la raza antillana: El ensayo 3 se realiz en el Laboratorio de Bioqumica del Instituto de Bioqumica de la Pontificia Universidad Catlica de Valparaso. Para extraer el DNA, primero se macer el material vegetal,

aproximadamente 1 gramo de tejido de hojas lavadas previamente con agua ultra pura estril, se depositaron en el interior de un mortero, se agrego 1mL de tampn 2x CTAB, 1% de PVP y 1:1000 de 2-mercaptoetanol. Se macer por unos 2 minutos, este procedimiento se llev a cabo en hielo.

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El macerado anteriormente descrito contiene grandes complejos de la forma de nucleoprotenas, estos complejos deben ser totalmente disociados. Para lograr sto, se incuba por espacio de media hora a 65C. En estas condiciones se optimiza la accin del detergente (CTAB), la cual combinada con la fuerza inica (NaCl) del tampn de extraccin disocia completamente el ADN de las protenas nucleares. Durante la incubacin la mezcla se agit por inversin cada 5 minutos aproximadamente. La extraccin del DNA se realiz con cloroformo/isoamilalcohol. La separacin del ADN genmico del resto de los componentes celulares se hace mediante una extraccin con solvente orgnico. Para sto se agrega un volumen de cloroformo/isoamilalcohol (24/1) equivalente al volumen de la preparacin que contiene el ADN y se procedi a mezclar cuidadosamente por inversin hasta lograr una emulsin de aspecto lechoso. Este procedimiento se ejecut a temperatura ambiente (no menos de 20C) para evitar que precipite el detergente CTAB. En estas condiciones los lpidos presentes en la preparacin pasan a la fase orgnica en tanto que las protenas se desestabilizan en la fase acuosa y precipitan. La separacin final se logr por centrifugacin de la emulsin a 10000 rpm, a temperatura ambiente durante 10 minutos. Despus de la centrifugacin, la emulsin queda separada en dos fases claramente diferenciables entre s. Una fase superior acuosa que contiene el DNA y una fase inferior u orgnica que contiene los componentes hidrofbicos de las clulas, especialmente lpidos y pptidos hidrofbicos, y una interfase de color blanquecino que contiene la mayora de las protenas precipitadas. La remocin de la fase acuosa se realiz con una punta recortada para minimizar la fragmentacin del ADN al momento de pipetear el sobrenadante.

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Para recuperar el DNA se realiz mediante la precipitacin con alcohol isoproplico, se agregan 2/3 del volumen de alcohol isoproplico y se mezcla por inversin. A temperatura ambiente (mayor a 20 C) se incub aproximadamente durante una hora. Los cidos nucleicos finalmente se recuperaron por centrifugacin a no ms de 7000 rpm. La preparacin de cidos nucleicos descrita en el punto anterior corresponde a una mezcla de ADN y ARN. No es conveniente utilizar directamente estas preparaciones en la implementacin de la tcnica de los marcadores RAPD, dado que eventualmente alguna secuencia presente en la fraccin ribonucleotdica podra ser complementaria al o los partidores investigados. Si este fuera el caso los fragmentos originados en el ARN variaran su intensidad en funcin del tiempo y tipo de almacenaje de las preparaciones, haciendo los patrones de bandeo irreproducibles. Esto se debe fundamentalmente a la inestabilidad del ARN en solucin. Debido a esto es esencial eliminar el ARN desde las preparaciones. Para la eliminacin del ARN se recurri a la enzima ARNasa A, esta enzima degrada el ARN en forma bastante eficiente. Adems, tiene la ventaja que es activa en tampn TE, lo que evita manipular excesivamente el ADN. La enzima se utiliz en una proporcin de 1l por cada 100l de preparacin, las condiciones de reaccin fueron de 37C durante una hora. Terminada la reaccin de degradacin de ARN no se hizo necesaria eliminar la enzima del seno de la solucin. Las muestras fueron conservadas a -20C. Para la cuantificacin y calidad del ADN genmico extrado se tom una muestra de 100L de la solucin madre de ADN genmico y se llev a 500L. Esta solucin se deposit en una cubeta de cuarzo de 500L y se

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midi la absorbancia en el espectrofotmetro a las longitudes de onda () de 230, 260 y 280nm. El blanco utilizado fue agua destilada ultrapura. A partir de la =260nm se obtuvo la cantidad de ADN genmico de la solucin, mediante la siguiente ecuacin:

[ADNg ]SM
donde

= Aobtenida Fd 50 g mL

ec.1

[ADNg ]SM

es la concentracin de ADN genmico en la solucin

madre, Aobtenida es la absorbancia de la muestra a =260nm y Fd es el factor de dilucin de la solucin, siendo la ecuacin:

Fd =

volumen final solucin alcuota solucin madre

ec.2

Para determinar el grado de contaminacin del ADN genmico extrado, ya sea por ARN y protenas, se establecen las siguientes relaciones A 260 A 280 y A 260 A 230 . Para saber si el ADN no est contaminado por el ARN, la relacin de A 260 A 280 debe estar entre 1,8 y 2,0, si no significa que est contaminado con ARN. Para averiguar si no hay contaminacin por protenas la relacin A 260 A 230 debe ser mayor que 2,3, si este valor es menor significa que est contaminado con protenas. La calidad del ADN genmico se refiere al estado de ste, si est fragmentado o no. Esto se determin al realizar una electroforesis en gel de agarosa al 1,0% en solucin amortiguadora Tris-Borato-EDTA (TBE) 1 corriendo a 100V constantes utilizando la fuente de poder. Las muestras en este gel estaban constituidas por: solucin madre de ADN genmico,

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solucin amortiguadora TBE 1 y solucin amortiguadora para cargar geles 10; en el primer bolsillo del gel se puso una muestra control de tamao molecular de 1Kb de ADN en una concentracin de 1g/L, solucin amortiguadora TBE 1 y solucin amortiguadora para cargar geles 10. La amplificacin del ADN genmico mediante marcadores polimrficos de ADN de amplificacin aleatoria (Randomly Amplified Polymorphic DNA, RAPD), se basa en la utilizacin de marcadores o partidores que son oligonucletidos sintticos (de alrededor de 10 pares de bases de largo) siendo su secuencia establecida en forma completamente al azar. Son capaces de detectar la variabilidad genmica intra-especfica (polimorfismo gentico) entre individuos al generar perfiles de bandeo con cada uno de los partidores disponibles. La reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction, PCR) fue realizada en un volumen total de 50L, en tubos para PCR Axygen PCR02D-C de 200L. La mezcla de reaccin es de 47L del MIX (5L de solucin amortiguadora de amplificacin 10x, 8L de la mezcla de desoxinucletidos 1,25mM cada uno, 0,5L de Taq ADN polimerasa 5U/L y 33,5L de agua destilada ultrapura autoclavada), 2L del partidor 10pmoles/L y 1L de ADN genmico 54ng/L. Para cada partidor se realiz un control negativo (Cn) que contena todos los reactivos anteriormente descritos, excepto el ADN genmico que se remplaza por 1L de agua destilada ultrapura autoclavada. Este procedimiento se llevo a cabo en bao de hielo (aproximadamente 4C). Cuando estuvieron todos los reactivos en los tubos, estos se centrifugaron a 4500 rpm por 1minuto. Luego se cubrieron con aceite mineral estril y los tubos se colocaron en el termociclador con el siguiente programa: se inicio con una denaturacin completa del ADN de 4 minutos a 94C, prosiguiendo

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con 45 ciclos de 1 minuto a 94C, 1 minuto a 36C y 2 minutos a 72C, y finalizando con una sntesis de cuatro minutos a 72C. Luego, estos productos se conservaron a 4C hasta su utilizacin. Los productos de PCR del estudio de todos los partidores se resolvieron (corrieron) en geles de agarosa al 1,3% (disuelta en la solucin amortiguadora TBE 1). En los bolsillos del gel se colocaron las muestras que consisten en 9L del producto de PCR y 1L de la solucin amortiguadora para cargar geles 10, intercaladamente en el gel se puso una muestra control de tamao molecular de 1Kb de ADN en una concentracin de 1g/L (0,6L de tamao molecular de 1Kb de ADN de 1g/L, 8,4L de solucin amortiguadora TBE 1 y 1L de la solucin amortiguadora para cargar geles 10). Se corri el gel a 75V constante utilizando la fuente de poder, utilizando la solucin amortiguadora TBE 1. Luego, el gel fue teido por 20 minutos con una solucin de bromuro de etidio de 0,75g/ml y lavado por 10 minutos con agua destilada. Los fragmentos amplificados de ADN se visualizaron directamente bajo luz ultravioleta (UV), mediante una cmara de video y un programa computacional del equipo BIO RAD Gel Doc 1000 con el cual se obtuvo una imagen digitalizada del gel. Esta imagen luego se analizo por el programa computacional Gel-Pro AnalyzerTM versin 3.0 que analiza las bandas obtenidas, dando sus pesos moleculares.

3.6. Diseo Experimental:

El ensayo 1 se diseo en base a un modelo Completamente al Azar.

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Para el caso de la germinacin de las semillas de los portainjertos estudiados, se realiz un anlisis descriptivo de los correspondientes porcentajes. Para el anlisis estadstico de las variables altura de la planta e incremento del dimetro del tronco, se utiliz una Andeva, con 10 repeticiones, donde la unidad experimental correspondi a una planta. Para la determinacin de efectos significativos se utiliz el test de Tukey con un error del 5%. En el ensayo 2 para evaluar el porcentaje de prendimiento del cultivar Hass sobre los portainjertos estudiados, se realiz un anlisis descriptivo de los correspondientes porcentajes. El nmero de plantas injertadas por variedad, vari dependiendo de cuantas de ellas presentaran el dimetro mnimo requerido para la injertacin (Anexo 5).

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4. PRESENTACIN Y DISCUSIN DE RESULTADOS

4.1 Ensayo 1: Evaluacin del porcentaje de germinacin y la tasa de crecimiento inicial de los diferentes cultivares de palto utilizados como portainjertos:

4.1.1 Porcentaje de germinacin. Al comparar los porcentajes finales de germinacin de las diferentes variedades evaluadas, como lo muestra la Figura 1. Se puede observar que todas ellas sobrepasan el 90% de germinacin. Al realizar una comparacin entre las razas, se tiene que dentro de la raza Antillana, las nicas en alcanzar el 100% fueron Nachal OZ 7 y Waldin, mientras que en la raza Mexicana, la variedad Mxicola logro el 100%, y en la raza Guatemalteca, Nabal, alcanz el 100%. El Cuadro 8 muestra las fechas en que las variedades estudiadas alcanzan el 50 y 90% de germinacin y el nmero total de semillas sembradas. Se puede observar que al 30 de enero las primeras variedades en alcanzar el 50% de germinacin corresponden a las siguientes variedades: Degania 118, Nachal oz, Nachal oz 6, Nachal oz 7, Nachal oz 8, Nachlat 2, Nachlat 3 y Ashdot 27, todas ellas pertenecientes a la raza Antillana. Mientras que Mexcola y Nabal no presentan semillas germinadas. Al analizar el porcentaje de germinacin en la fecha 03 de marzo, todas las variedades de la raza Antillana sobrepasaron el 90% de germinacin, pero solo Nachal oz 7 y Waldin llegaron al 100%. Sin embargo, Mexcola y Nabal alcanzaron el 100% en un periodo menor a un mes.

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100,0

% de germinacin

98,0 96,0 94,0 92,0 90,0 DG 117 DG 118 DG 62 NAOZ 6 NAOZ 7 NAOZ 8 NAT 2 NAT 3 ZE 99 AS 17 AS 27 WA NAOZ MX NA

Variedad

Figura 1: Porcentaje de germinacin de las diferentes variedades de palto. Quillota 2003.

DG 117: Degania 117 DG 118: Degania 118 DG 62: Degania 62 AS 17: Ashdot 17 AS 27: Ashdot 27 NAT 2: Nachlat 2 NAT 3: Nachlat 3 NAOZ: Nachal Oz NAOZ 6: Nachal- Oz 6 NAOZ 7: Nachal Oz 7 NAOZ 8: Nachal Oz 8 ZE 99: Ziffrin 99 WA: Waldin NA: Nabal MX: Mxicola.

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Cuadro 8: Fechas en que las variedades alcanzan ms del 50% de semillas germinadas, porcentaje final de germinacin, y el nmero total de semillas sembradas. Quillota 2003.
Variedad Dg 117 Dg 118 Dg 62 Na oz Na oz 6 Na oz 7 Na oz 8 Nat 2 Nat 3 As 17 As 27 Ze 99 Wa Mx Na 30 de Enero % germinacin 13.6 69.4 36.7 64.1 77.6 79.6 61.2 51.0 59.2 46.9 79.6 36.0 28.6 0.0 0.0 05 de Febrero % germinacin 53.0 89.8 69.4 92.3 93.9 93.9 89.8 65.3 69.4 79.6 89.8 90 51.4 0.0 7.7 03 de Marzo % germinacin 94.7 93.9 91.8 92.3 95.9 100 95.9 91.8 95.9 98.0 93.9 92.0 100 100 100 N total de semillas sembradas 132 49 49 39 49 49 49 49 49 49 49 50 35 20 13

4.1.2 Primeros estados fenolgicos de las plntulas de los cultivares utilizados como portainjertos. El Cuadro 9 muestra el nmero de das transcurridos (promedio) desde la siembra hasta germinacin, estados fenolgicos posteriores y la altura que presentan las plntulas de los cultivares utilizados como portainjertos, se puede establecer que existe diferencia significativa en el nmero de das que transcurren desde la siembra hasta que las primeras semillas comienzan a

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germinar. Al analizar las variedades de la raza Antillana vemos, las que menos tiempo demoraron fueron las variedades Nachal oz 7 y Degania 118, demorando solo 17.69 y 17.89 das respectivamente, pero estadsticamente son iguales a todas las otras variedades antillanas exceptuando a Degania 117, Degania 62 y Waldin que demoraron en promedio 23.82 y 27.97 das. Las variedades Mxicola y Nabal demoraron 47 y 50 das respectivamente, y se puede ver claramente que todas las variedades de la raza Antillana son ms precoces que estas representantes de las otras dos razas de palto. LEAL, KREZDORN y MARTE, (1976) afirman que las semillas de palto germinan lenta e irregularmente y algunos estudios han demostrado que el remover la testa de las semillas puede aumentar considerablemente la velocidad y el porcentaje de germinacin, sobre todo en semillas que han sido almacenadas en fro (BERGH, 1988). Las temperaturas utilizadas en el almacenaje de semillas de palto van desde los 4.5 a los 8.9C (BERGH, 1988). Segn ALEXANDER (1977), en el ambiente de invernadero las semillas germinan dentro de un mes cuando la temperatura se mantiene dentro de un rango que va desde los 23-25C. Las semillas de las variedades antillanas, al ser importadas desde Israel, es probable que fueran almacenadas en fro para evitar la deshidratacin, por lo tanto, la precocidad observada en la germinacin seria concordante con lo afirmado por BERGH (1988). En cambio las variedades Mxicola y Nabal fueron cosechas y sembradas inmediatamente. Para establecer si existen diferencias en la tasa inicial de crecimiento de los diferentes cultivares estudiados, se determinaron tres estados fenolgicos

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posteriores a la germinacin; se determin que una semilla estaba germinada cuando emerga la plmula, luego el estado siguiente corresponde al de rudimentos foliares, donde el eje principal presentaba rudimentos de hojas, puesto que no corresponden a una hoja propiamente tal. Luego se estableci el estado de 1 hoja verdadera expuesta. La Figura 2 muestra los diferentes estados evaluados: emergencia de la plmula, rudimentos foliares y 1 hoja verdadera expandida. Al analizar la altura que presentaron la plntulas en el 3 estado fenolgico, correspondiente a la 1 hoja verdadera expuesta, se puede observar que en la raza Antillana la variedad que present una mayor altura fue Nachal oz 7, alcanzando los 3.14 cm y estadsticamente es igual a Nachal oz 6 y Ashdot 27 que alcanzaron una altura de 2.90 y 2.68 cm respectivamente. Se puede observar adems que las variedades Ziffrin 99 y Degania 117 presentaron la menor altura llegando solo a los 2.26 y 2.15 cm cada una, y que a su vez son estadsticamente iguales a Degania 118, Degania 62, Nachal oz, Nachal oz 8, Nachlat 2, Nachlat 3, Ashdot 17. Ashdot 27 y Waldin. La variedad Nabal (2.70 cm) es estadsticamente igual a las variedades antillanas que presentaron la mayor altura, a pesar de que demor ms tiempo en germinar, una vez alcanzado el estado de 1 hoja verdadera expandida present un rpido crecimiento, lo que permiti que rpidamente alcanzara en tamao a aquellas variedades que presentaron una germinacin ms temprana. A su vez, tambin es estadsticamente semejante a Mxicola que alcanz una altura de 2.28 cm y que tambin present una tarda germinacin y un rpido crecimiento luego de alcanzar el 3 estado post germinacin. Se puede observar, por lo tanto, que a pesar de que estas dos variedades presentan una germinacin ms tarda, el vigor alcanzado al final del 3

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estado fenolgico les permite tener un buen vigor inicial, lo que les permite obtener al final del periodo de evaluacin un adecuado crecimiento vegetativo.

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a)

b)

c) Figura 2: Estados fenolgicos que presentan las plntulas de Palto: emergencia de la plmula (a), rudimentos foliares (b)y 1 hoja verdadera expandida (c). Quillota, 2003.

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Cuadro 9: Nmero promedio de das transcurridos desde la siembra hasta germinacin, estados fenolgicos posteriores y altura que presentan las plntulas de los cultivares de Palto, utilizados como portainjertos. Quillota, 2003.
Variedad N de das a germinacin Dg 117 Dg 118 Dg 62 Na oz Na oz 6 Na oz 7 Na oz 8 Nat 2 Nat 3 As 17 As 27 Ze 99 Wa Mx Na 27.56 17.85 a 23.82 b 19.94 a b 18.43 a b 17.69 a 18.96 a b 22.31 a b c 22.34 a b c 21.40 a b 18.68 a b 23.46 a b c 27.97 50.00 47.55 cd e e c N de das a primordios Foliares 29.75 19.74 a 26.84 20.74 a b 20.12 a 20.89 a b 24.20 a b c d 24.83 a b c d 23.35 a b c d 20.32 a 26.37 29.71 51.54 49.50 bc de f f cd 22.25 a b c de Altura de la planta en P. Foliares 1.16 1.23 b b 32.35 23.59 a b 29.62 c e 26.89 a b c d e 24.91 a b c d 24.49 a b c 24.23 a b c 28.02 a b c d e 29.81 23.55 a 29.48 32.31 53.38 51.20 b e ef g g c ef 25.77 a b c d ef 1.37 a b 1.29 a b 1.35 a b 1.29 1.16 1.23 1.26 1.23 1.14 1.09 b b b b b b b 1.34 a b N de das a 1 hoja verdadera Altura de las plantas en 1 H V 2.15 2.48 2.51 2.46 3.14 a 2.59 2.40 2.56 2.48 2.26 2.34 2.28 bc bc bc bc c bc bc c bc bc bc

2.90 a b

1.43 a b

2.68 a b c

1.53 a b

2.70 a b c

Letras distintas en una misma columna indican diferencia significativa, segn test de Tukey con = 0.05.

4.1.3 Dimetro y altura final de las plantas. El cuadro 10 muestra el dimetro y la altura promedio que presentaron las plantas a los 180 das desde la siembra de las semillas. Dentro de la raza Antillana la variedad que alcanz un mayor dimetro fue Degania 117, alcanzando los 0.9 cm. La variedad que present el menor dimetro fue Nachlat 2 que lleg solo a los 0.6 cm y que estadsticamente es semejante a Nachal oz, Nachal oz 6, Nachlat 3 y Ziffrin 99.La variedad Nabal present un dimetro de 0.8 cm y no presenta una diferencia significativa con las

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variedades de la raza Antillana que alcanzaron el mayor dimetro, en cambio la variedad Mxicola alcanz un dimetro de 0.7 cm y presenta una diferencia significativa con las variedades antillanas de mayor dimetro. Cuadro 10: Altura de las plantas (cm) y Dimetro del tronco (cm) de las plantas de Palto a los 20 cm de altura, a los 180 das desde la siembra y N de das que demoran en alcanzar los 0.6 cm de dimetro a los 20 cm de altura. Quillota, 2003.
Variedad Dg 117 Dg 118 Dg 62 Na oz Na oz 6 Na oz 7 Na oz 8 Nat 2 Nat 3 As 17 As 27 Ze 99 Wa Mx Na Dimetro promedio (cm) 0.9 a 0.8 a b c d 0.8 a b c d e 0.7 0.8 bcde bcde 53.9 55.4 42.2 46.0 52.6 34.3 41.8 57.7 a b c d 61.4 a b c 49.1 a b c d 58.2 a b c d de 53.8 bcde 64.5 a b Altura promedio (cm) 65.4 a b bcde bcde ef def bcde f ef N de das en alcanzar los 0.6 cm 68 111 125 125 111 111 111 153 125 96 111 96 82 139 111

0.8 a b c d e 0.8 a b c d 0.6 0.7 0.8 a b 0.8 a b c d e 0.7 0.7 bcde 0.8 a b c 0.8 a b c d e cde

59.0 a b c d

Letras distintas en una misma columna indican diferencia significativa, segn test de Tukey con = 0.05.

Referido a la altura final de las plantas, dentro de las variedades antillanas las que presentaron un mayor crecimiento fueron Degania 117, Nachal oz 7, Nachal oz 8, Ashdot 17, Ashdot 27, Ziffrin 99 y Waldin, que presentaron una altura que vara desde los 49.1 cm hasta los 65.4 cm, pero que

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estadsticamente son iguales. La variedad que present la menor altura fue Nachlat 2 alcanzando solo los 34.3 cm, y que es igual estadsticamente a Nachlat 3, Nachal oz y Nachal oz 6. Cabe destacar que las variedades Nachlat 2 y 3 presentaran la capacidad de transferir un cierto grado de enanismo a la variedad comercial injertada en ella, por lo tanto, este bajo crecimiento sera debido a dicha caracterstica. La variedad Nabal presenta una altura de 64.5 cm y es estadsticamente semejante a las variedades antillanas que alcanzaron el mayor crecimiento. La variedad Mxicola alcanz una altura de 53.8 cm y es estadsticamente diferente e inferior a las variedades antillanas que presentaron el mayor crecimiento. Segn WHITSELL et al., 1989, cuando las plantas tienen una altura entre los 30-75 cm, generalmente dos a cuatro meses despus de la siembra, ellas estn listas para ser injertadas con la variedad comercial. Por lo tanto, todas las variedades cumplen con el requisito mnimo referido a la altura. Al analizar el nmero de das que demoraron en alcanzar el dimetro mnimo para realizar la injertacin (0.6 cm). La variedad Antillana que en menos tiempo lo logr fue Degania 117, demorando solo 68 das. En cambio Nachlat 2 fue la que ms tiempo tard, alcanzndolo a los 153 das. La variedad Mxicola tambin tard ms en alcanzar dicho dimetro, logrndolo a los 139 das, doblando el tiempo que demor la variedad Degania 117. Referido a la variedad Nabal, sta alcanz el dimetro mnimo a los 111 das, lo mismo que necesitaron las variedades Nachal oz 6, Nachal oz 7, Nachal oz 8, Ashdot 27 y Degania 118, que pertenecen a la raza Antillana.

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Segn WHITSELL et al., 1986, el momento ideal para realizar la injertacin es cuando las plantas han alcanzado un dimetro mnimo de 0.5-0.6 cm; por lo tanto, todas las variedades evaluadas cumplen con dicho requisito. Las variedades de la raza Antillana no presentan un comportamiento en vivero inferior en lo referido a su desarrollo vegetativo, respecto a Mxicola y Nabal, que son las variedades ms usadas como portainjertos de palto en Chile. Sin embargo, presentan una mayor precocidad en la germinacin y un adecuado crecimiento, lo que les permite alcanzar los requerimientos mnimos para realizar la injertacin sin problemas en lo que dura el periodo normal que se destina en vivero para que los portainjertos se desarrollen vegetativamente (180 das). En los Anexos 1, 2, 3 y 4, se presentan los datos de dimetro y altura de las plantas, hasta los 180 das desde la siembra.

4.2 Ensayo 2: Determinacin del porcentaje de prendimiento del palto (Persea americana Mill.) cv Hass, sobre los diferentes cultivares de la raza antillana, utilizados como portainjertos: Para el ensayo nmero 2, no se realiz un anlisis estadstico inferencial, puesto que no existan rplicas por tratamiento (variedad) para la variable de respuesta porcentaje de prendimiento, ya que solo existe un porcentaje por variedad. Al analizar, el porcentaje de prendimiento del cultivar Hass, sobre los diferentes portainjertos, como lo muestra la Figura 3, se puede observar que ninguna variedad alcanz el 100% de prendimiento. Dentro de las variedades

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antillanas la que logr el ms alto porcentaje fue Nachlat 3 con 91.7%, de un total de 24 plantas injertadas, mientras que la que obtuvo un menor porcentaje fue Degania 118, llegando solo a un 43.6% de un total de 39 plantas injertadas. En cambio la variedad Mxicola obtuvo un 91.7% de prendimiento al igual que Nachlat 3 y Nabal alcanz un 70% de prendimiento. Esto puede deberse, a que la fecha en que se realiz la injertacin no era la adecuada, ya que se injerto el da 7 de Agosto, por lo tanto las bajas temperaturas que an se registraban pudieron haber influenciado en este bajo prendimiento. Adems, las pas terminales del cultivar Hass que se injertaron en su mayora se encontraban inducidas a flor, por lo tanto, no eran de una calidad ptima. La razn por la cual se realiz la injertacin en esa fecha se debe principalmente a la necesidad de obtener lo ms pronto posible, plantas terminadas con el fin de continuar las evaluaciones del comportamiento del cultivar Hass sobre estos portainjertos. En el Anexo 5, se encuentran los datos del nmero de plantas injertadas y el nmero de plantas prendidas.

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100,0 90,0 80,0 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0
11 7 11 D 8 G 6 AS 2 17 AS 27 N AT 2 N AT N 3 AO N Z AO Z N 6 AO Z N AO 7 Z 8 ZE 99 W A G G N A M X

% de Prendimiento

Variedades

Figura 3 Porcentaje de prendimiento del cultivar Hass, sobre los diferentes cultivares de Palto utilizados como portainjertos. Quillota, 2003.

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4.3 Ensayo 3: Caracterizacin del patrn gentico que presentan 13 portainjertos de semilla de la raza antillana: Se evalu un total de 20 partidores RAPD, de los cuales 2 lograron amplificar bandas de ADN distintivas y de buena calidad de los cultivares analizados, puesto que son capaces de generar bandas de diferente peso molecular en todos los portainjertos estudiados. En el Anexo 6, se presentan las variedades analizadas y sus respectivas claves. El partidor 1 cuya secuencia corresponde a 5-GCC-CCT-CGT-C- 3, es capaz de establecer claramente un patrn de bandas de diferente peso molecular para los cultivares Nabal, Mxicola y Nachlat 2 (carril 7, 12 y 13 respectivamente), que corresponden a miembros de las tres razas de palto analizadas. En la Figura 4 se muestra el patrn de bandeo de los ADN genmicos obtenidos al realizar una electroforesis en gel de agarosa al 1.3 %, utilizando el partidor 1, en el Anexo 7 se muestra la descripcin de la imagen. Al analizar el gel obtenido a travs del programa computacional GelPro analyzer versin 3.0, se pudo establecer el nmero de bandas por cultivar y el nmero de pares de bases de cada una de ellas (Anexo 8). Para el Cultivar Nabal se pudo determinar un nmero de 13 bandas, para el cultivar Mxicola un total de 12 bandas y para Nachlat 2 un total de 10 bandas. Pero con este partidor no es posible establecer patrones de bandeo para todos los cultivares de la raza Antillana estudiados, en el caso de la variedad Ziffrin 99 solo genera una banda de 270 pares de bases. Para la serie Degania es posible diferenciar a Degania 118, ya que genera un patrn de 4 bandas, pero no es capaz de diferenciar a Degania 117 de Degania 62, ya que genera para ambas variedades 3 bandas de 2693, 816 y 731 pares

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12216 pb --6108 pb --4072 pb --3054 pb ---

2036 pb --1636 pb ---

1018 pb ---

506 pb --396 pb --344 pb --298 pb --220 pb --201 pb ---

Figura 4 Gel de agarosa al 1,3% mostrando el patrn de bandeo de los ADNg con el partidor 1. Imagen digitalizada obtenida en el equipo BIORAD gel Doc 1000. Carril: 2: Ziffrin 99; 3: Degania 118; 4: Degania 62; 5: Degania 118; 7: Nabal, 8: Waldin; 9: Ashdot 17; 10: Ashdot 27; 12: Mxicola; 13: Nachlat 2; 14: Nachlat 3; 15: Nachal oz.

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de bases. Tampoco es un buen diferenciador para las variedades Ashdot 17 y Ashdot 27, puesto que el patrn de bandeo generado para cada una es muy similar en el nmero de pares de bases. Para la serie Nachlat se puede establecer una mayor diferencia con este partidor que con el nmero 2 ya que genera un nmero igual de bandas, pero con una mayor diferencia en el nmero de pares de bases que las componen. Respecto al partidor numero 2 cuya secuencia es 5- CCG-CCT-CAT-T-3 la Figura 5 muestra el patrn de bandeo de los ADN genmicos obtenidos al realizar una electroforesis en gel de agarosa al 1.3 %, utilizando el partidor 2, el anlisis de la imagen se encuentra en el Anexo 9. En el caso del partidor 2 (Anexo 10), para las variedades antillanas es capaz de diferenciar Ziffrin 99 generando 4 bandas completamente diferentes del resto de las variedades. Para la serie Degania se puede diferenciar a Degania 117 de Degania 62, lo que no era posible con el partidor 1, pero no es capaz de establecer una diferencia entre Degania 118 de Degania 62, como lo logro el partidor 1. En el caso de la serie Ashdot se pueden diferenciar claramente, ya que para Ashdot 17 genera un nmero de 11 bandas y para Ashdot 27 un nmero de 12 bandas con diferente nmero de pares de bases para cada una de ellas, teniendo en comn solo una banda de 344 pares de bases, pero no es capaz de diferenciar a Waldin de Ashdot 17, como ocurre con el partidor 1. Para la serie Nachlat, no es un buen diferenciador ya que genera un patrn de bandeo casi idntico en ambas variedades, tal vez las pequeas diferencias en el nmero de pares de bases solo sea por un error en la preparacin de las muestras. Sin embargo, es un muy buen partidor para la

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serie Nachal oz, ya que para cada variedad establece un patrn de bandeo completamente diferente. En el caso de los representantes de cada raza del palto estudiadas (Mxicola, Nabal y Nachlat 2), se puede diferenciar claramente Nabal de las otras dos variedades, pero Mxicola y Nachlat 2 no presentan diferencias marcadas en el patrn de bandeo, ya que genera igual nmero de bandas y de similar nmero de pares de bases para ambas variedades. Cabe destacar, que actualmente la tcnica RAPD-PCR se ha perfeccionado en el campo de la identificacin de cultivares, mediante la incorporacin de otros partidores como son las secuencias microsatlite, por lo tanto, es posible determinar el polimorfismo gentico, que existe entre las diferentes razas y cultivares de palto y as poder establecer un patrn de bandeo que permita identificar a las diferentes variedades comerciales y tambin identificar ecotipos encontrados en Chile, de los cuales no est claro si son hbridos o pertenecen a una raza en particular. Por otra parte esto es importante, ya que al determinar la pertenencia a una raza especfica, un cultivar de raza desconocida podra presentar las mismas caractersticas que presentan sus parentales, como por ejemplo, la resistencia a sales de la raza antillana.

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.
12216 pb --6108 pb --4072 pb --3054 pb --2036 pb --1636 pb ---

1018 pb ---

506 pb --396 pb --344 pb --298 pb --220 pb --201 pb ---

Figura 5 Gel de agarosa al 1,3% mostrando el patrn de bandeo de los ADNg con el partidor 2. Imagen digitalizada obtenida en el equipo BIORAD gel Doc 1000. carril: 3: Ziffrin 99; 4 Degania 118; 5: Degania 62; 7: Degania 117; 8: Nabal; 9: Waldin; 10: Ashdot 17; 12: Ashdot 27; 13: Mxicola; 14: Nachlat 2; 15: Nachlat 3; 17: Nachal oz;

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5. CONCLUSIONES

El porcentaje de germinacin de todas las variedades evaluadas fue superior al 90%. Logrando el 100% de germinacin las variedades Nachal OZ y Waldin pertenecientes a la raza Antillana, Nabal perteneciente a la raza Guatemalteca y Mexcola perteneciente a la raza Mexicana. Las variedades ms precoces en germinar corresponden a aquellas de la raza Antillana, sin embargo Mxicola y Nabal presentaron un rpido crecimiento luego de alcanzar el estado de 1 hoja verdadera expandida, lo que les permiti obtener un tamao estadsticamente semejante a las variedades Antillanas que germinaron primero y que tuvieron un periodo de tiempo mayor de crecimiento vegetativo. Todas las variedades evaluadas cumplen con los requisitos mnimos de dimetro y la altura requeridos para realizar la injertacin. Dentro de la raza Antillana la de mayor desarrollo vegetativo corresponde a Degania 117, mientras que las de menor desarrollo fueron las de la serie Nachlat, que confiere cierto grado de enanismo a la variedad comercial injertada en ella. Es posible caracterizar genticamente cultivares de Persea americana Mill mediante la tcnica RAPD-PCR. Con el partidor molecular cuya secuencia nucleotdica corresponde a 5-GCC-CCT-CGT-C-3, es posible diferenciar molecularmente los cultivares Mxicola, Nabal y Nachlat 2 representantes de las tres razas de palto; y a travs del partidor molecular cuya secuencia nucleotdica corresponde a 5-CCG-CCT-CAT-T-3, se puede diferenciar entre los cultivares de la raza Antillana que no se diferenciaban con el primer partidor.

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El porcentaje de prendimiento en todas las variedades evaluadas fue inferior a 100%.Dentro de las variedades antillanas la que logr el ms alto porcentaje fue Nachlat 3 con 91.7%, mientras que la que obtuvo un menor porcentaje fue Degania 118, llegando solo a un 43.6% de un total de 39 plantas injertadas. En cambio la variedad Mxicola obtuvo un 91.7% de prendimiento y Nabal alcanz un 70% de prendimiento.

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6. RESUMEN

El cultivo del palto (Persea americana Mill.), es una de las especies frutales que presenta el mayor ndice de plantacin en los ltimos aos, alcanzndose una superficie cercana a las 23.000 hectreas. Debido a su origen subtropical es muy sensible a condiciones climticas adversas de sequas y temperaturas extremas y tambin a condiciones edficas como texturas arcillosas y salinidad. La resistencia a la salinidad es un factor relevante para la industria chilena, pues existen varias zonas en desarrollo y algunas que podran desarrollarse, como la zona norte del pas, que presentan sta limitante. Junto con lo anterior, debido al mal manejo de la fertilizacin y riego se est provocando paulatinamente la salinizacin del agua y de los suelos en zonas que no presentaban este problema. El presente ensayo se realiz en el laboratorio de Propagacin de la Facultad de Agronoma de la Pontificia Universidad Catlica de Valparaso, entre enero del 2003 y enero del 2004. Se internaron al pas 13 cultivares de palto pertenecientes a la raza Antillana y utilizados como portainjertos, los cuales fueron evaluados junto a Mexcola y Nabal; los portainjertos ms utilizados en Chile. Se evalu su comportamiento en vivero (desarrollo vegetativo), porcentaje de prendimiento del cultivar Hass injertado sobre ellos y se estableci un patrn gentico a travs de la tcnica RAPD-PCR. El porcentaje de germinacin de todas las variedades evaluadas fue superior al 90%. Las variedades ms precoces en germinar corresponden a aquellas de la raza Antillana, sin embargo Mxicola y Nabal presentaron una mayor tasa de crecimiento inicial. Todas las variedades evaluadas cumplen con los requisitos mnimos de dimetro y la altura requeridos para realizar la injertacin. Dentro de la raza Antillana la de mayor desarrollo vegetativo corresponde a Degania 117, mientras que las de menor desarrollo fueron las de la serie Nachlat, que conferiran un cierto grado de enanismo a la variedad comercial injertada en ella. Es posible caracterizar genticamente cultivares de palto mediante la tcnica RAPD-PCR. Con el partidor molecular 5-GCC-CCT-CGT-C-3, es posible diferenciar molecularmente los cultivares Mxicola, Nabal y Nachlat 2 representantes de las tres razas de palto; y a travs del partidor molecular 5-CCG-CCT-CAT-T-3, se pueden diferenciar los cultivares de la raza Antillana que no se diferenciaban con el primer partidor. El porcentaje de prendimiento del cultivar Hass vari entre 43.6 y 91.7%: El mayor porcentaje lo presentaron Nachlat 3 y Mexicola, mientras que el menor porcentaje lo presento Degania 118. Nabal present un 70% de prendimiento.

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7. ABSTRACT The culture of avocado (Persea americana Mill.) has been one the most planted species in recent years, it has reached a surface area surrounding 23.000 hectares. The avocado is very sensible to severe climatic conditions like severe drought, extreme temperatures and soil conditions like inappropriate texture, alkaline or salinity problems and others, due to the fact that it is originated from a subtropical region. Considering this, salinity resistance is a relevant fact for the Chilean industry because there are some production areas and some that are becoming production areas, like northern Chile, that have this restriction. As well as this, there has been a mismanagement of fertilization techniques and irrigation that have salinized the aquifers and the soil. The present experiment was realized at the Gregorio Rosemberg Propagation Laboratory at the Agronomy Faculty of the Pontificia Universidad Catlica de Valparaso from January, 2003 until January 2004. Thirteen cultivars belonging to the West Indian races used as rootstocks were introduced, they were evaluated together with cv Mxicola and Nabal, the most used rootstocks in Chile. Their performance (vegetative growth) and bud- take percentage of cultivar Hass once grafted on the different rootstocks were studied under green house conditions and a genetic pattern was established by the RAPD PCR method The seed germination percentage of all the evaluated varieties was higher than 90%. The most precocious were those belonging to the West Indian Races, although Mexicola and Naval had higher initial growth rate. All the evaluated varieties counted with the minimum diameter and height prerequisites to be grafted. Within the West Indian Race the one with highest vegetative development was Degania 117, while the ones with the least vegetative development belonged to the Nachlat serie, which grants dwarfness characteristic to the commercial variety grafted on it. It is possible to genetically characterize Persea americana Mill cultivars by the RAPD-PCR technique. With the molecular carrier which has a 5-GCC-CCTCGT-C-3 nucleotide sequence, it is possible to molecularly differentiate a Mxicola cultivar from Nabal and Nachlat 2 cultivar, which are representatives of the thee avocado races; and by using a molecular carrier which has a 5CCG-CCT-CAT-T-3 nucleotide sequence it is possible to differentiate the rest or the West Indian cultivars which were not possible to differentiate with the first carrier. The Bud-take percentage of Hass cultivar varied from 43.6% to 91.7%.The highest percentage belonged to Nachlat 3 and Mexicola, while the lowest percentage belonged to Degania 118. Nabal obtained 70% of Bud-take.

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