DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS COMO AZUCARES TOTALES POR EL MTODO DE FENOL SULFRICO

I.

OBJETIVO: Determinar la concentracin de azucares totales en la muestra mediante el mtodo fenol sulfrico Conocer los principio bsicos de dicho mtodo

II. 2.1

FUNDAMENTO: Definicin.carbohidratos son polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas

Los

derivados de alcoholes. Se clasifican de acuerdo al numero de carbonos que contiene la cadena (triosas, tetrosas, pentosas, etc...) y de acuerdo al numero de monmeros que posea la molcula (monosacridos, disacridos, polisacridos, etc...). Los carbohidratos, conocidos

generalmente como azcares, son de los compuestos orgnicos ms abundantes en la naturaleza, la mayora de ellos proceden de las plantas y solo unos cuantos son de origen animal. Las propiedades qumicas y fsicas de los carbohidratos varan de acuerdo a su composicin, por lo que se han diseado pruebas especificas para su deteccin y cuantificacin. Los monosacridos, como la glucosa y la fructosa, poseen grupos funcionales hidroxi o ceto, los cuales son reactivos qumicamente. Una de sus propiedades es reducir el cobre de Cu+2 a Cu+1, observndose un cambio caracterstico de color, de azul a naranja o rojo ladrillo. Si se mide el volumen de solucin de un carbohidrato necesaria para precipitar una cantidad medida de solucin de cobre, se puede determinar la concentracin del carbohidrato; lo que permite evidenciar el poder reductor de estos azucares. La sacarosa al igual que los polisacridos no reacciona con los reactivos de cobre, dado que los carbonos anomricos de la glucosa y la fructosa que la componen estn implicados en el enlace glicosdico, restndole reactividad a la molcula, por lo que se consideran azucares no reductores. La determinacin de azucares totales y reductores por el mtodo de Lane- Eynon, se fundamenta en que los compuestos reductores, previamente formado a

partir del carbohidrato en medio alcalino, tiene la propiedad de reducir los iones cpricos a cuproso, los que a su vez reaccionan con los iones que por efecto del calor se transforman en oxido cuproso, formando un precipitado de color rojo ladrillo. El mtodo de Lane- Eynon es un mtodo volumtrico cuya caracterstica fundamental es la determinacin del volumen de solucin problema; requerido para reducir

completamente el volumen conocido de solucin alcalina de cobre.

2.2

Mtodo fenol sulfrico.-

Entre los mtodos para cuantificar los carbohidratos, est el mtodo FENOL SULFRICO. Cuando los azucares son tratados con cidos fuertes, principalmente cido sulfrico concentrado, hay formacin de hidroximetil furfural por deshidratacin que reacciona con una gran variedad de compuestos (FENOL) dando un color anaranjado que puede ser cuantificado colorimetricamente.

En algunas ocasiones debe hacerse una clarificacin previa a fin de retirar sustancias interferentes, resultando en una solucin clara para el anlisis.

2.3

Fenol.-

Antiguamente llamado cido fnico o cido carblico, es un compuesto orgnico aromtico de frmula C6H5OH. Es dbilmente cido y se asemeja a los alcoholes en su estructura.. El fenol en forma pura es un slido cristalino de color blanco-incoloro a temperatura ambiente. Su frmula qumica es C6H5OH, y tiene un punto de fusin de 43C y un punto de ebullicin de 182C. El fenol es un alcohol. Puede sintetizarse mediante la oxidacin parcial del benceno. El fenol es una sustancia manufacturada. El producto comercial es un lquido. Tiene un olor repugnantemente dulce y alquitranado.

Se puede detectar el sabor y el olor del fenol a niveles ms bajos que los asociados con efectos nocivos. El fenol se evapora ms lentamente que el agua y una pequea cantidad puede formar una solucin con agua. El fenol se inflama fcilmente, es corrosivo y sus gases son explosivos en contacto con la llama. El fenol se usa principalmente en la produccin de resinas fenlicas. Tambin se usa en la manufactura de nylon y otras fibras sintticas. El fenol es muy utilizado en la industria qumica, farmacutica y clnica como un potente fungicida, bactericida, antisptico y desinfectante, tambin para producir agroqumicos, policarbonatos, en el proceso de fabricacin de cido acetilsaliclico (aspirina) y en preparaciones mdicas como enjuagadientes y pastillas para el dolor de garganta. De ser ingerido en altas concentraciones, puede causar

envenenamiento, vmitos, decoloracin de la piel e irritacin respiratoria. Fenol (Estructura qumica del fenol)

III.

MATERIALES: Muestras de alimentos,

miel de abeja Balanza analtica Glucosa anhidra p.a. Aguas destilada Solucin de fenol al 5% (bi destilada) cido concentrado espectrofotmetro sulfrico

IV.

PROCEDIMIENTO:

PREPARACIN DE LA CURVA PADRN A partir del padrn de glucosa, cuya concentracin es: 0.01% (0.1g/1000ml) (glucosa) se prepara la curva padrn conforme los datos indicados abajo. -

En forma semejante se hace las lecturas de las absorbancias de la muestra problema, para ello se toman alcuotas de 0.1:0.2ml de filtrado y se completa a volumen para 1.0ml con agua destilada. Seguidamente se hacen las lecturas a 490nm

CUADRO N 1 Esquema Para Determinar La Curva Patron Nmero Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 blanco Padrn glucosa 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 ----[ ] (mg.) H2O (ml) 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 ----1 H2SO4 (ml) 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 Fenol (5%) (ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Abs (540nm)

-----

*despus de agregar el fenol, debe adicionarse el H2SO4 *esperar 30 minutos y realizar las lecturas de absorbancia

PREPARACIN DE LA MUESTRA Pesar 1 ml de muestra Disolver en 100ml H2O Llevar a bao mara 5 minutos Filtrar y completar a 100ml Se descarta el residuo, y se guarda el filtrado (lquido).

Se hacen las diluciones correspondientes,1/100ml; 25/100ml y por ltimo una alcuota de 0.2ml

Pesar 5,0 gr de muestra

Disolver 100 ml H2O

Bao Mara 5 min.

Filtracin

Completar a 100 ml

Filtrado (lquido)

Residuo (descartar)

1/100 ml de Filtrado

12.5/50 ml

Fenol sulfrico (1 ml)

V.

RESULTADOS Y CALCULOS

Se prepara las muestras de gaseosa (0.9 ml y 1 ml), luego se procedi a depositar la glucosa en los 10 tubos de ensayo, todos con volmenes diferentes, (especificados en la tabla), adems de un tubo sin glucosa, para ser utilizado como patrn para el Espectrofotmetro.

Se agreg agua destilada a todos los tubos, luego 1mL de Fenol al 5%, los cuales se agitaron.

Luego 5 ml de cido Sulfrico concentrado. Terminado este proceso, con su debida precaucin, se agitaron bien los tubos y se esper por 30 minutos. Pasado esto, se procedi a medir la Absorbancia en el Espectrofotmetro a 490 nm utilizando el tubo sin glucosa como blanco para calibrar la mquina. Construir la curva padrn y leer la absorbancia de cada tubo:

Numero de tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 blanco

Padrn de glucosa 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 ---

H2O (ml) 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,4 0,1

Fenol (5%)(ml) 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0

H2S04 (ml) 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0

Concentr. (ug/ml) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 ---

Absor. (490 nm) 0.148 0,250 0.117 0.358 0.495 0,600 0.695 0,810 0.800 0.830 1,0

1,0

Clculos Hallando las concentraciones: 0.1g X X=10g 1000ml 0.1ml

1. 0.1g X X=20g

1000ml 0.2ml

2. 0.1g X X=30g

1000ml 0.3ml

3. 0.1g

1000ml

X X=40g

0.4ml

4. 0.1g X X=50g

1000ml 0.5ml

5. 0.1g X X=60g

1000ml 0.6ml

6. 0.1g X X=70g

1000ml 0.7ml

7. 0.1g X X=80g

100ml 0.8ml

8. 0.1g X X=90g

1000ml 0.9ml

Por regresin lineal obtenemos: a = - 0.0350 b = 0.00905 r = 99% Entonces:

POR REGRESION LINEAL: a = -0.0054 b = 0.0093 r = 0.958 Desarrollando la ecuacin tomando la absorbancia de la muestra como Y

Despejando x

Llevando los valores a la muestra inicial tenemos:

Transformando ug a mg 42516.1ug= 42.5161mg

Transformando mg a g 4251.61 mg= 4.25161g

VI.

DISCUSIN:

El monosacrido contenido en la muestra reaccion con el cido sulfrico el cual causa la deshidratacin del monosacrido Luego de esta reaccin se pudo realizar la medicin de Absorbancia a 490 nm.

Algunas sustancias tales como cationes de metales pesados a veces interfieren en los resultados El reactivo fenol sulfrico, es txico por lo que se recomienda tener cuidado

VII. -

CONCLUSIN:

Los carbohidratos son los compuestos orgnicos ms abundantes de la biosfera y a su vez los ms diversos. Normalmente se los encuentra en las partes

estructurales de los vegetales y tambin en los tejidos animales, como glucosa o glucgeno. Estos sirven como fuente de energa para todas las actividades celulares vitales. La deshidratacin del monosacrido, es debida a la reaccin con el cido sulfrico, formndose un furfural, al agregar el fenol, forma un compuesto coloreado, que se mide en el espectrofotmetro Los tubos de menor absorbancia son los primeros debido a que a medida que la concentracin de glucosa aumenta hasta 1,0 ml tambien aumenta la absorbancia.

VIII.

BIBLIOGRAFA: Pearson, D; Tcnicas de laboratorio para Anlisi de los Alimentos, Ed. Acribia, Traducido por: Romero, C y Miranda, J.L.; Zaragoza-Espaa, 1986, pp.331 Pginas de Internet.www.monografias.com/trabajos15/carbohidratos/carbohidratos.shtml www.zonadiet.com/nutricion/hidratos.htm www.rincondelvago.com/analisis-de-hidratos-de-carbono.html http://practicasintegrales.files.wordpress.com/2007/09/practica-10carbohidratos.pdf