Volume 34 - N.

4 Dezembro de 1976

PROTENAS TOTAIS DO LIQUIDO C E F A L O R R A Q U E A N O OBTIDO POR PUNO D A CISTERNA M A G N A : VALORES NORMAIS

VARIAES LIGADAS AO SEXO

L . M . SINGER VERMES * RUBENS GUIMARES FERRI *

J. AlSEN ***
J. M . MARLET * * * *

As taxas de protenas totais do lquido cefalorraqueano (LCR) normal referidas na literatura, variam segundo os diferentes autores. Estas variaes das taxas consideradas normais podem ser atribudas, entre outros fatores, s diferentes tcnicas laboratoriais que so utilizadas, assim como dificuldade de obteno de amostras de LCR de indivduos sadios. Em estudo prvio comparamos quatro metodologias de quantificao de protenas totais aplicveis a fludos biolgicos diludos o mtodo turbidimtrico aps precipitao das protenas com cido tricloractico - , o colorimtrico preconizado por Heer & Margni , o turbidimtrico aps tratamento do material com soluo de cido sulfossaliclico e sulfato de sdio e o colorimtrico desenvolvido por Lowry e col. e conclumos que, no cmputo geral, o mtodo de Lowry o mais adequado dos procedimentos estudados, em virtude de sua alta sensibilidade e exatido, e por consumir pequeno volume de amostra.
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A possvel presena de taxas de protenas totais mais altas no LCR normal de pessoas do sexo masculino (em relao quelas encontradas nos de sexo feminino) tem sido objeto de controvrsia entre os pesquisadores; enquanto Izikowitz , Dencker , Spina-Frana & A m a r , Dencker & Zethraeus e
9 3 21 4

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Prof. Assistente do D e p a r t a m e n t o de Microbiologia e I m u n o l o g i a do Instituto de Cincias Biomdicas da Univ. de So P a u l o . Prof. Livre-Docente do D e p a r t a m e n t o de Microbiologia e I m u n o l o g i a do Instituto de Cincias Biomdicas da Univ. de So P a u l o . Assistente da Clnica Neurolgica da Faculdade de Medicina da Universidade de So P a u l o . Prof. Livre-Docente do D e p a r t a m e n t o de Medicina Preventiva da Faculdade de Medicina da Univ. de So P a u l o .

Marron observaram que, em mdia, indivduos do sexo masculino apresentam proteinorraquia mais elevada que aqueles do sexo feminino, outros pesquisadores . . > > . > no verificaram diferenas significantes quanto s taxas proticas totais do LCR normal entre os dois sexos.
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Em face dos fatos acima mencionados, e levando em considerao que em nosso meio mais freqente o emprego da puno subocicpital para a colheita do LCR, determinamos pelo mtodo de Lowry os nveis de protenas totais do LCR normal obtido por puno da cisterna magna (LCR-SO). Analisamos tambm se, quanto proteinorraquia total normal, indivduos do sexo masculino e feminino pertencem a uma mesma populao.

MATERIAL

MTODOS

Determinamos a proteinorraquia total do L C R - S O de 98 pacientes a m b u l a t o r i a i s . Todos os pacientes a p r e s e n t a v a m e x a m e neurolgico normal e as amostras de L C R eram normais quanto presso, cor, citologia, contedo em glicose, cloretos e uria; alm disto, em todas as amostras de L C R eram negativas as reaes de Pandy, N o n n e - A p p e l t - S c h u m e T a k a t a - A r a (para pesquisa de globulinas) e sorolgicas para lues e cisticercose. Dos 98 pacientes cujas idades variaram entre 5 meses e 75 anos, 58 eram do sexo masculino e 4 0 do feminino. Os dados de identificao destes pacientes encontram-se nas tabelas 1 e 2 . A p s a colheita o material foi sempre centrifugado para eliminao de possveis clulas e mantido a 4 C (por prazo m x i m o de 72 horas) at o m o m e n t o de efetuarmos as determinaes de protenas t o t a i s . A quantificao das protenas totais foi efetuada e m 0,2 m l de cada amostra, utilizando os reagentes cupro-alcalino e de Folin & Ciocalteu, conforme descrito por L o w r y e col. . A colorimetria foi realizada em espectrofotmetro "Spectronik 20", no comprimento de onda de 6 3 0 n m .
1 J

A anlise estatstica para estudar a diferena na proteinorraquia entre pacientes do sexo masculino e feminino foi feita usando-se a distribuio de freqncia "t" de Student. I g u a l teste foi empregado para testar a hiptese de igualdade das mdias de idades nos dois sexos. Para estas anlises estabelecemos um nvel de rejeio de 5 % .

RESULTADOS Os resultados das determinaes de protenas totais efetuadas e m 58 amostras de L C R de pacientes do sexo masculino e 4 0 do feminino a c h a m - s e respectivamente nas tabelas 1 e 2; as mdias, desvios-padro e intervalos de confiana (95,5%) calculados para ambos os sexos encontram-se na tabela 3, assim como os dados estatsticos referentes populao m i s t a . Os valores m x i m o e m n i m o de protenas totais encontrados nas pessoas do sexo masculino foram 47,13 e 16,96 m g / I C O ml, respectivamente. O m a i o r teor protico encontrado no L C R de pessoas do sexo feminino foi de 37,68 m g / 1 0 0 m l e o menor foi de 14,43 m g / 1 0 0 m l . N a figura 1 apresentamos dois h i s t o g r a m a s dos resultados obtidos nas determinaes de protenas totais das amostras de L C R , referentes aos sexos masculino e feminino.

anlise

estatstica

mostrou h a v e r

u m a variao de protenas

significante totais.

entre

as

mdias apre-

de proteinorraquia total de pacientes do s e x o masculino e feminino sentando estes ltimos valores inferiores

(t-3,12),

DISCUSSO

O teor protico mdio encontrado no LCR-SO de 98 pessoas (de ambos os sexos) foi de 26,78 mg/100 ml. Este valor mais alto que aqueles encontrados por Hill e col. , Spina-Frana & A m a r , Rieder e Rieder & Wthrich , como se pode observar pelo diagrama apresentado na figura 2. Esta diferena de resultados, em parte pode ser decorrncia do uso de diferentes metodologias (e conseqente variabilidade de exatido), pois tanto Hill e col. quanto Spina-Frana & A m a r estabeleceram os nveis normais da proteinorraquia cisternal, mediante determinaes efetuadas por mtodos turbidimtricos. De fato, em estudo prvio demonstramos que o mtodo turbidimtrico aps precipitao das protenas com cido tricloractico fornece valores 12,33% inferiores aos reais, e a colorimetria de solues proticas aps tratamento com os reagentes cupro-alcalino e de Folin-Ciocalteu oferecem valores que, em mdia, so 5,41% mais elevados que os reais.
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Os nveis mdios de protenas totais do LCR-SO calculados por Rieder e Dieder & Wthrich (que tambm utili2aram o mtodo de Lowry) foram tambm inferiores aos obtidos na presente investigao, embora a diferena entre os resultados referidos por estes autores e os nossos seja pouco acentuada. Esta diferena poderia ser explicada pela hiptese levantada por alguns autores - de que fatores ecolgicos possam atuar sobre os nveis de protenas totais do LCR normal; alm disso devemos ainda considerar que Jung e col. observaram aumento na proteinorraquia total de 18% por dcada e sugeriram que tal elevao de valores poderia estar relacionada a mudanas que a humanidade vem sofrendo, nos seus hbitos e fatores ambientais .
1 9 6 10 1 9 10

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O teor protico mdio encontrado no LCR-SO dos indivduos do sexo masculino foi de 28,76 mg/100 ml e o intervalo de confiana (95,5%) foi de 14,76 a 42,76 mg/100 ml. J os indivduos do sexo feminino apresentaram teores proticos inferiores: 23,91 mg/100 ml em mdia, e um intervalo de confiana de 13,01 a 34,81 mg/100 ml. Apesar de vrios autores . - i4, is, i9 terem observado variaes significantes entre os valores mdios
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da proteinorraquia total de homens e mulheres, a anlise estatstica de nossos resultados mostrou haver, nos indivduos do sexo masculino, valores mdios de protenas totais do LCR significantemente mais elevados que aqueles do sexo feminino. Esta observao concorda com aquelas feitas por Dencker , Dencker & Zethraeus , Izikowitz , Marron e Spina-Frana & A m a r .
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Dado que alguns autores . > > . . verificaram tendncia progressiva para elevao dos valores da proteinorraquia com o avanar da idade, e outros > observaram valores elevados de protenas totais do LCR normal em indivduos com mais de 60 anos de idade, tomamos a precauo de verificar se os diferentes valores encontrados quanto s protenas totais do LCR nos dois sexos, no poderiam ser atribudos a erros de amostragem, no sentido de haver diferenas quanto ao fator idade (entre indivduos do sexo masculino e feminino).
1 3 2 1

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2 3

Como verificamos que a mdia das idades dos indivduos do sexo masculino (31,7 anos) no diferia significantemente (t = 0,39) daquela encontrada nas pessoas de sexo feminino (28,7 anos), pudemos concluir que no havia tal tipo de interferncia em nossos resultados. A diferena relativa entre a concentrao protica mdia do LCR de indivduos do sexo masculino e do feminino foi de aproximadamente 20%. Esta diferena menor que aquelas encontradas por Dencker , Dencker & Zethraeus e Izikowitz (que foram de 25,27 e 27%, respectivamente) e maior que aquela encontrada por Spina-Frana & A m a r (12%).
3 4 9 21

CONCLUSES

Indivduos do sexo masculino apresentam, em mdia, taxas de protenas totais do LCR-SO superiores quelas encontradas em indivduos do sexo feminino. As taxas normais de protenas totais do LCR-SO de pessoas do sexo masculino e feminino encontram-se entre 14,76 e 42,76 mg/100 ml e 13,01 a 34,81 mg/100 ml, respectivamente, quando efetuamos a quantificao de protenas totais pelo mtodo de Lowry.

RESUMO

Aplicando o mtodo de Lowry, determinamos as protenas totais do LCR considerado normal de 98 pessoas: 58 do sexo masculino e 40 do feminino. Todas as amostras de LCR foram obtidas por puno da cisterna magna (LCR-SO). Mediante tratamento estatstico dos valores obtidos, estabelecemos as taxas normais de proteinorraquia cisternal para a populao mista: limite superior de 40,36 mg/100 ml, valor mdio de 26,78 mg/100 e limite inferior de 13,20 mg/100 ml. Estes valores so superiores queles referidos na literatura. Foi verificado que a proteinorraquia total , em mdia, significantemente maior nos indivduos do sexo masculino, que nos de feminino. Consequentemente estabelecemos em separado os nveis normais de protenas totais do LCR-SO para pessoas do sexo masculino e feminino. As taxas mdias de protenas totais do LCR-SO de pessoas do sexo masculino e feminino so de 28,76 e 23,91 mg/100 ml, respectivamente; os limites normais vo de 16,96 a 47,13 mg/100 ml para o sexo masculino e de 14,76 a 42,76 mg/100 ml para o sexo feminino.

SUMMARY

Total

protein

content

of normal

cisternal

cerebrospinal

fluid:

Variations

related

to sex

The total protein content of CSF collected from the cisterna magna (cisternal fluid) of 98 patients (58 males and 40 females) with no neurological diseases was determined by the colorimetric method devised by Lowry and co-workers. This method has been previously chosen based mainly on it's sensitivity, accuracy and low fluid consumption. The CSF samples were normal with regard to pressure, color, citology and it's content in glucose, chloride and urea. Complement fixation tests for syphilis and cisticercosis, as well as the globulin tests (Pandy, Nonne Appelt and Takata-Ara) were negative.

The average value and the normal range of cisternal fluid total protein was calculated for the mixed population (males and females). The mean protein value was 26.78 mg/100 ml, the lower and upper limits were respec tively 13.20 and 40.36 mg/100 ml. These data are higher than those stated in some publications, and factors that could interfere in the different results mentioned in the literature are briefly discussed. Since the statistical analysis of the results showed that the mean total protein concentration in males (28.76 mg/100 ml) was higher than in females (23.91 mg/100 ml), normal limits for each sex were established: 16.96 to 47.13 mg/100 ml for males and 14.76 to 42.76 mg/100 ml for females.

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