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Ministrio da Educao Universidade Tecnolgica Federal do Paran Campus de Curitiba Departamento Acadmico de Qumica e Biologia

Prtica no 10 _ Cromatografia em Papel (CP) e Cromatografia em Camada Fina (TLC)

Disciplina: Prticas de Qumica Orgnica Materiais e Reagentes Mesa Professor Mesa Aluno
- 1 Lpis (Aluno e MP) - 1 Rgua (Aluno e MP) - 1 caneta azul, preta, vermelha, verde, roxa, marrom. (Aluno e MP) - 1 Rolo de Fita Adesiva. (MP) - 1 Esptula (MP) - 1 Faca (MP) - Folhas de Papel Sulfite (MP) - 1 Rolo de Papel Alumnio (MP) - Papel filtro (MP) - 1 Funil Simples - 1 Tesoura (Aluno e MP) - 1 Balana Semi-Analtica (MP) - 400 mL de hexano (MP) - 500 mL de Etanol 92% (MP) - 50g de Sulfato de Sdio Anidro(MP) - 10g de Iodo (I2) (MP) - 1 Dessecador (MP) - 4 Chapas de Aquecimento (Capela) - Capilares (MP) - Placas cromatogrficas (MP) - 1 Pina Metlica (MP) 1 Lpis (Aluno e MP) - 1 Rgua (Aluno e MP) - 1 caneta azul, preta, vermelha, verde, roxa, marrom. (Aluno e MP) - 1 Proveta de 25 mL - 1 Proveta de 100 mL - 1 Cuba Cromatogrfica de 500 mL - 2 Bequer de 100 mL 1 placa de petri de 5 cm - 1 placa de petri de 10 cm - 1 Funil Simples - 1 Tesoura (Aluno e MP) - 1 Almofariz com Pistilo Grande - 3 Erlenmeyers de 125 mL - 1 Funil de Separao de 125 mL - 1 Suporte Universal 1 Argola para Funil de Separao - 200 mL de Acetona - 4 Chapas de Aquecimento (Capela) - 4 Barras Magntica (Peixinho) - 1 Basto de Vidro

1 Objetivos Estudar o comportamento de substncias orgnicas em termos da partio cromatogrfica estrutura qumica versus fenmeno adsoro cromatogrfica. Utilizar o Rf na identificao de compostos orgnicos usualmente presentes em diversas formulaes farmacuticas. Verificar as cores que compem as tintas de caneta e os pigmentos que compem os pimentes verdes, amarelos e vermelhos. 2 Introduo Entre os mtodos modernos de anlise, a cromatografia ocupa um lugar de destaque devido a sua facilidade em efetuar a separao, identificao e quantificao das espcies qumicas, por si mesma ou em conjunto com outras tcnicas instrumentais de anlise, como, por exemplo, a espectrofotometria ou a espectrometria de massas. A cromatografia (grego "chrom"=cor e "graphe"=escrever) um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de uma mistura, realizada atravs da distribuio destes componentes entre duas fases, que esto em contacto ntimo. Uma das fases permanece estacionria enquanto que a outra se move atravs dela. A cromatografia em camada delgada (CCD) consiste na separao dos componentes de uma mistura atravs da migrao diferencial

sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfcie plana. O processo de separao est fundamentado, principalmente no fenmeno de adsoro. O grande desenvolvimento desta tcnica consequncia natural das mltiplas vantagens que ela oferece, tais como: fcil compreenso e execuo, separaes em breve espao de tempo, versatilidade, grande reprodutibilidade e baixo custo. Na CCD uma fina camada de adsorvente espalhada sobre uma placa (em geral de vidro, mas outros materiais podem ser usados). Na extremidade desta placa recoberta pelo adsorvente e seca, chamada cromatoplaca, a amostra aplicada repetidas vezes com o auxlio de um capilar, obtendo-se pequenas manchas. Os principais fenmenos que governam a separao cromatogrfica so adsoro e absoro (partio). A adsoro ocorre com fase estacionria (FE) slida, geralmente slicagel (SiO2.xH2O) ou alumina (Al2O3). O grau de adsoro depende da quantidade de gua presente na fase slida (esta ser mais reativa quanto menos gua estiver presente), da estrutura do composto (presena de grupos funcionais polares, capacidade de formar ligaes hidrognio, etc.), da adsoro do solvente ao ocupar os stios ativos da fase slida e da fora atrativa entre o soluto e o solvente (Figura 1).
R N H H Al2O3 O Al O H O O R R C O R R C O HOAl O Al O

Figura 1. Algumas formas de visualizar as interaes entre a alumina e os componentes orgnicos de uma amostra. Estruturas similares podem ser escritas para a slicagel. A partio ocorre com FE lquidas (que so imobilizadas sobre suportes slidos). Os componentes da mistura adsorvem-se com as partculas de slido devido interao de diversas foras intermoleculares. O composto ter uma maior ou menor adsoro, dependendo das foras de interao, que variam na seguinte ordem: formao de sais > coordenao > ligaes de hidrognio > dipolo-dipolo > Van der Waals. O processo de absoro (interfacial) governado pela partio e ocorre devido a diferena de solubilidade dos componentes na FE lquida. Dependendo da natureza das duas fases envolvidas (estacionria e mvel) tm-se diversos tipos de cromatografia: - slido-lquido (CC, TLC); - lquido-lquido (HPLC, CP); - gs-lquido (CG). Na cromatografia em papel (CP), a fase estacionria o papel colocado em um frasco. A fase mvel o eluente que sobe pelo papel carregando as substncias que compem as misturas (no experimento, as substncias que compem as tintas das canetas). As diferentes substncias sobem com velocidades diferentes, porque interagem de forma diferente com o eluente e com o papel. As substncias que tm mais afinidade pelo eluente sobem mais rpidamente, enquanto as que tm grande afinidade pelo papel so arrastadas mais lentamente pelo eluente. Dessa forma, ocorre a separao, sendo possvel visualizar os diferentes componentes de cada tinta. A cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio lquido-lquido, estando um deles fixado a um suporte slido. Este mtodo, embora menos eficiente que a cromatografia em camada delgada (CCD), muito til para a separao de compostos polares. Na Cromatografia em Camada Fina (TLC) uma pequena quantidade de uma amostra orgnica colocada em um ponto da placa, sendo adsorvida pela fase slida (Figura 2a). A placa cromatogrfica colocada em uma cmara fechada contendo um eluente que percorre a fase fixa em movimento ascendente por ao capilar, carregando consigo a amostra orgnica (Figura 2b). A visualizao dos componentes da mistura pode ser feita a olho nu (se os componentes forem coloridos) atravs de luz ultravioleta, por se tornarem fluorescentes quando excitados por essas radiaes (cuidado!) e por vapores de iodo, em recipiente fechado (Figura 2c).

Figura 2. (a) Aplicao da amostra na cromatoplaca (b) Eluio de uma placa cromatogrfica; (c) Revelao de uma placa cromatogrfica em cuba de iodo

Este procedimento especialmente til no caso de compostos que so sensveis ao calor ou no so volteis, ou seja, no caso de compostos que no so apropriados determinao de ponto de ebulio ou cromatografia em fase gasosa. A distncia percorrida por cada composto em uma amostra, dividido pela distncia percorrida pelo solvente conhecido como o Rf (fator de reteno). Comparaes do valor de Rf da amostra com o de um padro um mtodo qualitativo usado na identificao de um composto. Para o clculo de valor de Rf mede-se a distncia que a substncia deslocou a partir do ponto de aplicao (ds), considerando-se para efeito de medida o centro de gravidade da mancha, e divide-se pela distncia percorrida pela frente do solvente a partir do ponto original da amostra (dm). A Figura 3 ilustra o clculo do Rf para os componente de uma amostra.

Distncia percorrida pela mancha desde a origem (ds) Rf = ----------------------------------------------------------------------------------Distncia percorrida pelo solvente desde a origem (dm)

Figura 3. Determinao de Rf no cromatograma em camada fina.3 Quando as condies de medida so completamente especificadas, o valor do Rf constante para uma dada substncia, e corresponde a uma propriedade fsica daquele composto. O valor de Rf pode, ento, ser usado para identificar um composto desconhecido, mas como muitas substncias podem ter o mesmo valor de Rf, assim com podem ter o mesmo ponto de fuso, mtodos adicionais devem ser utilizados para identificao inequvoca do composto. Existem vrias tcnicas cromatogrficas que vo das mais simples como cromatografia de coluna e camada fina at as mais sofisticadas e computadorizadas, como a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). De modo geral, entre os mtodos modernos de anlises, as tcnicas cromatogrficas, ocupam um lugar de destaque na qumica e bioqumica, na pesquisa e na

indstria, devido a sua facilidade em efetuar a separao, identificao e quantificao das espcies qumicas presentes em uma amostra, mesmo em misturas muito complexas. Aplicaes da CCD em Qumica Orgnica - Estabelecer a identidade dos compostos; - Determinar o nmero de componentes de uma mistura; - Determinar o solvente apropriado para a separao por cromatografia em coluna; - Monitorar uma separao realizada por cromatografia em coluna; - Verificar a eficincia de uma separao; - Monitorar o andamento de uma reao.

3 PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 3.1. Cromatografia em Papel. 3.1.1. Preparar uma cuba cromatogrfica colocando uma tira de papel de filtro (sulfite) de 10x15 cm e tampar com uma placa de petri. 3.1.2. A partir de um papel sulfite, cortar, uma tira de 5 cm de largura e 21 cm de comprimento. 3.1.3. Com um lpis, traar em uma das extremidade do papel, uma linha de 1,5 cm acima da extremidade inferior. 3.1.4. Fazer, nessa linha, quatro marcas a lpis, com distncia de 1 cm de cada uma, e nas extremidades deixar 0,5 cm de distncia de cada margem. 3.1.5. Escrever o nmero 1 sob a primeira marca, o 2 sob a segunda,e assim por diante, at o nmero 4. 3.1.6. Nas marcas com os nmeros 1, 2, 3 e 4 aplicar a tinta das canetas preta, roxa, rosa, verde, verde ou azul, de tal forma que o circula tenha um dimetros de 0,5 cm. 3.1.7. Uma mancha no deve invadir a outra, e entre cada uma deve ficar um espao de pelo menos 0,5 cm. 3.1.8. Cortar a extremidade superior do papel em um comprimento tal que sua extremidade inferior fique a aproximadamente 0,5 cm do fundo da cuba cromatogrfica (vidro de Nescaf). 3.1.9. Dobre a parte que sobra do papel e recorte de tal forma a deixar 1 cm de papel sobrando. 3.1.10. Colocar um pedao de fita adesiva na parte superior dobrada do papel sulfite e prender o papel na boca da cuba cromatogrfica. 3.1.11. Para obter o eluente, misturar 7 mL de etanol 92 e 7 mL de gua. 3.1.12. Colocar o eluente na cuba cromatogrfica at atingir 1 cm de altura. 3.1.13. Colocar a tira de papel preparada na cuba cromatogrfica tomando o cuidado para que a camada de eluente fique prxima, mas no molhe inicialmente as manchas de tinta. Se isso ocorrer, retire um pouco do eluente do frasco, at que o nvel no frasco no alcance as manchas. 3.1.14. Prender o papel no topo da cuba cromatogrfica com a ajuda da fita adesiva. 3.1.15. Tampar o frasco de vidro com a placa de petri. 3.1.16. Esperar at que o eluente suba at o topo do papel. 3.1.17. Retirar a tira de papel do frasco de vidro, esperar secar e verificar o que ocorreu com as cores. Anotar as observaes e calcular o Rf de cada macha. Anexar o cromatograma no relatrio. 3.1.18. O professor ir fazer uma anlise cromatogrfica utilizando um papel filtro aberto e uma tampa contendo o eluente. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 3.2. Cromatografia em Camada Fina (TLC)

3.2a) Preparao do extrato Cortar em pedaos pequenos os pimentes verdes, amarelos e vermelhos (Figura 4a). Pesar cerca de 30 g dos pedaos de cada pimento em bqueres diferentes. Adicionar 10 mL de acetona e 50 mL de hexano (Figura 4b). Transferir cada mistura, separadamente, para um almofariz com pistilo e macerar at obter uma pasta homognea. 3.2a5) Deixar em repouso por 1 hora (Figura 4c). 3.2a6) Filtrar para um funil de separao utilizando um funil comum, com papel de filtro pregueado, adicionar a soluo lentamente para que o hexano seja filtrado primeiro. 3.2a7) Separar a fase aquosa. 3.2a8) Adicionar, 15 mL de gua. Girar lentamente o funil, pois a agitao brusca pode causar a formao de emulso. 3.2a9) Separar e descartar a fase aquosa. Repetir esta operao de lavagem, por mais uma vez. 3.2a10) Descartar a fase aquosa e transferir a fase orgnica (extrato) para um erlenmeyer de 125 mL (Figura 4d). 3.2a11) Adicionar 2g de sulfato de sdio anidro a fase orgnica e deixar em repouso por 15 minutos. 3.2a12) Filtrar em um bquer de 50 mL e concentrar os extratos at o volume de 1 mL, com aquecimento em banho-maria a 70 C e sob agitao. 3.2a1) 3.2a2) 3.2a3) 3.2a4)

Figura 4. Etapas da preparao dos extratos de pimento.5 3.2b) Aplicao da amostra na placa
3.2b1.

Utilizando um capilar, aplicar duas pores da soluo de pigmentos sobre uma placa de slica (2,5 x 7,5 cm) a 1,0 cm de uma das extremidades. 3.2b2. Evitar a difuso da mancha de forma que seu dimetro no deva ultrapassar a 2 mm durante a aplicao da amostra. 3.2b3. Deixar o solvente evaporar. 3.2c) Desenvolvimento do cromatograma
3.2c1. 3.2c2. 3.2c3. 3.2c4.

3.2c5.

Preparar uma cuba colocando uma tira de papel de filtro de 4x5 cm, hexano com 5% de acetona. Tampe com uma placa de petri. Esperar o tempo suficiente para que ocorra a completa saturao. Colocar cuidadosamente a placa na cuba, evitando que o ponto de aplicao da amostra mergulhe no solvente. Quando o solvente atingir cerca de 0,5 cm do topo da placa, remover a placa e marcar a frente do solvente (linha de chegada da fase mvel). Deixar secar ao ar por 5 minutos e observar o nmero de

manchas coloridas. Caso seja necessrio insira a placa na cuba contendo um pouco de iodo slido e coberto com uma placa de petri. Espera-se o surgimento de manchas na placa. 3.2c6. Copiar a placa com as substncias separadas (cromatograma), obedecendo fielmente a distncia entre o ponto de aplicao e a frente do solvente, bem como a distncia percorrida por cada substncia, iniciando pelo ponto de aplicao at o centro de maior concentrao da mancha. 3.2c7. Anotar as observaes e calcular o Rf de cada macha. Identificar as manchas atravs de dados da literatura. 3.2c8. Fazer uma anlise cromatogrfica utilizando papel filtro ou sulfite. 4 Questes 4.1. Qual o estado fsico da fase mvel e da fase estacionria na cromatografia em camada delgada (CCD)? 4.2. Com que finalidade a soluo de pigmentos lavada com gua? 4.3. Por que o sulfato de sdio anidro adicionado soluo de pigmentos? 4.4. Que se entende por fator de reteno (Rf)? 4.5. Dois componentes A e B, foram separados por CCD. Quando a frente do solvente atingiu, 6,5 cm, acima do ponto de aplicao da amostra, a mancha de A, estava a 5 cm, a de B a 3,6 cm. Calcular o Rf de A e de B. Desenhar esta placa, obedecendo o mais fielmente possvel as distncias fornecidas. O que se pode concluir sobre a resoluo das manchas, nesta separao? 4.6. Descreva detalhadamente o que voc observou medida que o eluente subia pelo papel e ao final do experimento. 4.7. Com base nas informaes fornecidas na teoria e nas observaes do experimento, quais so os componentes das tintas mais atrados pelo eluente? E quais os mais atrados pelo papel? Explique 4.8. Por que a cromatografia utilizando hexano com 5% de acetona mais rpida que a cromatografia utilizando etanol - gua 1:1? 5 Bibliografia 1. ROBERTS, R. M.; GILBERT, J. C.; RODEWALD, L. B. WINGROVE, A. S., Modern experimental organic chemistry, 4th ed, Phyladelphia Saunders College Publishing,1985. 2. DEGANI, A. L. G., CASS, Q. B.; VIEIRA, P. C. Qumica Nova na Escola, 1998. 7, 21. 3. PALOSCHI, R.; ZENI, M.; RIVEROS, R. Experimentos Cromatogrficos. Qumica Nova na Escola, n. 7, p. 35-41, 1998. 4. COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; PIERINA, S. B. Introduo a mtodos cromatogrficos. 4 ed., Campinas: Editora da Unicamp, 1995. 5. RIBEIRO, N. M.; NUNES, C. R. Anlise de Pigmentos de Pimentes por Cromatografia em Papel. Qumica Nova na Escola, n.29, 34-37, 2008. 6. NBIA, D. S.; Instrumentao para o Ensino de Qumica, Srie: Experincias Demonstrativas Cromatografia. UNIOESTE, Curso de Qumica.