Ciclo do cido Ctrico

Estgio final do metabolismo dos carboidratos, lipdeos e aminocidos Ciclo Oxidativo - requer O2

Tambm conhecido como ciclo de Krebs Homenagem a Hans Krebs quem primeiro o descreveu

O Respirmetro de Warburg
Dcada de 20 Coloca o substrato

Tecido Meio de cultura

Fluido com cor

Papel de filtro com KOH

Detecta CO2 Produzido Detecta o O Consumido

Qual o destino do Piruvato na presena de O2 ?

A: Piruvato (C3) + 3O2 3CO2 + 3 H2O B: Piruvato (C3) + cidos dicarboxlicos (C4) + 7O2
Msculo de peito de pombo

3CO2 + 3 H2O

Moles CO2 produzidos

3 2 1 0

Szent Gyrg (1930) testa os cidos C4

Malato Oxalacetato Succinato Fumrato

A 0 5 10 15
Tempo (min)

20

No eram consumidos na reao Efeito cataltico na respirao dos tecidos

Sir Hans-Krebs (1935)

Testa cidos dicarboxlicos de 5 carbonos - Alfa cetoglutarato

Moles CO2 produzidos

3 2 1 0
0 6 12 18

Piruvato

24 30

No eram consumidos na reao Efeito cataltico na respirao dos tecidos

Sir Hans-Krebs (1937)

Testa cidos tricarboxlicos de 6 carbonos

Moles CO2 produzidos

3 2 1 0
0 6 12 18

Piruvato

Citrato Aconitato Isocitrato

24 30

No eram consumidos na reao Efeito cataltico na respirao dos tecidos

Krebs NOBEL (1943)

Coenzima a importante para reaes de tranferncia de carbonos

E1 Piruvato Desidrogenase E2 - Dihidrolipoil Transacetilase E3 Dihidrolipoil Dehidrogenase

Ciclo do cido Ctrico - Tiamina Pirofosfato (TPP) E1 (piruvato desidrogenase) - Flavina Adenina Dinucleotdeo (FAD) E2 (diidrolipoil transacetilase) - Coenzima A (CoA) E3 (diidrolipoil desidrogenase) - Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo (NAD) - Lipoato

Quatro vitaminas hidrossolveis diferentes so necessrias na nutrio humana e componentes vitais neste sistema: 1) Tiamina na TPP; 2) Riboflavina no FAD; 3) Niacina no NAD e 4) cido pantotnico na CoA

Ciclo do cido Ctrico

Descarboxilao Oxidativa do Piruvato

Um processo que envolve 9 passos. Convertendo acetato (acetilCoA) em CO2

MITOCNDRIA
Estruturas alongadas (mitos) na maioria das clulas ou arredondadas (chondrion, pequenos grnulos) em intestino e fgado. Esto relacionadas demanda energtica da clula -300.000 em ovcitos -Clulas renais, em torno de 300 -Clulas vegetais, em geral, nmero menor

MITOCNDRIA
Mtodos de estudo

Microscopia -Corante verde janus: substncia redox; oxidado pela citocromo c oxidase na mitocondria -Microscopia eletrnica Purificao por centrifugao diferencial

MITOCNDRIA
Ultra-estrutura Constitudas de duas membranas, estrutural e funcionalmente diferentes, que definem dois compartimentos: o espao intermembranar e a matriz mitocondrial.
Maior fluidez; alm disso, apresenta uma protena chamada porina, que forma canais

Protenas com funes bem definidas e que conferem maior seletividade entrada de substncias

Aspecto mais particulado

As Mitocndrias podem se concentrar em determinadas regies da clula onde a necessidade energtica maior

Associao entre a mitocndria e gotculas de lipdio

Origem da Mitocndria
A teoria simbitica mais aceita

Como surgiu a hiptese da origem simbitica?

1) A dupla-hlice de DNA circular 2) Ribossomos tm um coeficiente de sedimentao em torno de 55S (mais prximo do de bactrias) 3) Sntese de protenas na mitocndria inibida por cloranfenicol (antibitico) 4) O aminocido iniciador da traduo no a metionina, mas sim a formilmetionina, como em procariotos 5) A membrana interna possui um alto contedo do lipdio cardiolipina, assim como a membrana plasmtica de bactrias

Biognese das Mitocndrias

Ocorre a partir da diviso e crescimento de mitocndrias pr-existentes

Biognese das Mitocndrias

Embora as mitocndrias contenham DNA, este no contm todas as informaes para que a organela possa sobreviver independentemente do resto da clula. Apenas 13 protenas so codificadas pelo DNA mitocondrial Para que a mitocndria possa realizar todos os processos de replicao, transcrio e traduo, necessrio que protenas ribossomais, aminocidos, etc... sejam importados do citosol. Algumas doenas degenerativas j foram associadas a mutaes no DNA mitocondrial (que apresenta uma taxa de mutao maior do que o DNA nuclear por no ter a maquinaria de reparo) Atualmente o DNAmt tem sido utilizado para se traar os ancestrais da espcie humana

Outros destinos do piruvato produzido pela gliclise

MITOCNDRIA

CITOSOL

Transduo de energia
Uma das caractersticas mais impressionantes das mitocndrias sua capacidade de aproveitar a energia presente em ligaes qumicas covalentes, entre tomos de carbono (C-C) e transform-la em energia eltrica, para novamente armazen-la em ligaes qumicas na formao da molcula de ATP.

NADH+H

NAD+

Piruvato
CoA-SH

CO2

Ciclo do cido Ctrico 2C 4C 6C

1 Acetil-CoA (consumido) 1 oxaloacetato (regenerado) 2 CO2 (produzido)

4C

4C

6C

4C 4C

5C

Enzimas do Ciclo do cido Ctrico

Ciclo do cido Ctrico

1. Formao do Citrato Regenerao da CoA

[ ]s Grupamento metil ligado ao grupo carbonila do oxaloacetato.

2. Formao do Isocitrato

INTERMEDIRIO

Isocitrato mais facilmente oxidado que o citrato e constantemente consumido na etapa seguinte do ciclo.

Ciclo do cido Ctrico

3. Oxidao do Isocitrato Produo de NADH

4. Oxidao do -Cetoglutarato Produo de NADH

Consumo de CoA

CoA atua como carreadora do grupo succnil. Reao semelhante catalisada pelo complexo Piruvato desidrogenase

Ciclo do cido Ctrico

5. Succinil-CoA a Succinato Regenerao de CoA

Energia liberada na quebra da ligao tioster utilizada para a sntese de uma molcula de GTP (ATP) GTP+ ADP GDP + ATP

6. Oxidao a Fumarato

Succinato desidrogenase a nica enzima do Ciclo de Krebs associada membrana mitocondrial interna

Ciclo do cido Ctrico

7. Fumarato a Malato

8. Malato a Oxaloacetato

[ ]s

G = + 29,7 kj/mol

Ciclo do cido Ctrico

Papel do CK no est confinado oxidao do acetato

Papel central no metabolismo intermedirio: produtos de 4C e 5C servem como combustveis para outras vias.

Pontos de entrada de intermedirios formados em outras vias de degradao

a via que representa maior vantagem seletiva. Alguns seres anaerbicos usaram algumas das reaes dessa via em processos biossintticos e alguns microorganismos ainda as utilizam.

Ciclo do cido Ctrico Anfiblico

Reaes anaplerticas

Regulao do Ciclo do cido Ctrico

Regulao na formao de Acetil-CoA

Regulao na entrada de Acetil-CoA

Regulao no ciclo

Regulao do Ciclo do cido Ctrico

Piruvato desidrogenase: alm da regulao alostrica sofre regulao por fosforilao

TPP

S S

lipoato

E1 E2
ATP

FAD

E3

Quinase

Fosforilase ATP

TPP
PO4

S S

lipoato

E1 E2

FAD

E3

INATIVA