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EFEITO ANTIMICROBIANO DO EXTRATO DA Matricaria recutita Linn. E Lippia sidoides Cham. SOBRE MICRORGANISMOS DO BIOFILME DENTAL Ana Carolina Lyra de Albuquerque1, Maria do Socorro Vieira Pereira2, Jozinete Vieira Pereira3, Andria Vieira Pereira,4 ,Ednaldo Queiroga de Lima5, Onaldo Guedes Rodrigues6 RESUMO - fato comprovado, que a maior parte das doenas que acometem a cavidade bucal so de origem infecciosa. Vrias categorias de agentes qumicos tm sido utilizadas no controle qumico do biofilme dental, atravs de estratgias que visem a reduo da adeso bacteriana, inibio do crescimento e proliferao dos microrganismos na superfcie do dente. A utilizao das plantas pela medicina popular, seu uso na Odontologia e a divulgao dos xitos conduziram a explorao cientfica, proporcionando um conhecimento qumico-farmacolgico de milhares de plantas. A presente pesquisa objetivou avaliar comparativamente a atividade antimicrobiana in vitro dos extratos da flor da Matricaria recutita Linn. e da folha da Lippia sidoides Cham. em associao sobre microrganismos do biofilme dental, com a Clorexidina 0,12%. Todas as linhagens ensaiadas apresentaram-se sensveis ao extrato estudado, e o mesmo mostrou-se efetivo na inibio de aderncia das bactrias ensaiadas, at a diluio 1: 128 no extrato associado sobre Streptococcus mutans. Diante dos resultados alcanados, pode-se afirmar que os extratos da Matricaria recutita Linn, Lippia sidoides Cham em associao apresentaram potencial atividade antimicrobiana in vitro, sobre as linhagens de Streptococcus mutans, Streptococcus mitis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus e Lactobacillus casei. O extrato da Matricaria recutita Linn e Lippia sidoides Cham associado demonstrou efeito na inibio da sntese do glucano representada pela aderncia ao vidro, sobre os principais microrganismos responsveis pela consolidao do biofilme dental. A pesquisa mostrou a importncia e a necessidade da busca por novas alternativas na teraputica odontolgica para a preveno e controle do biofilme dental. Unitermos: Biofilme dental, Matricaria recutita, Lippia sidoides. ANTIMICROBIAL EFFECT OF THE EXTRACT OF Matricaria recutita Linn. AND Lippia sidoides Cham.ON MICROORGANISMS OF THE DENTAL BIOFILM ABSTRACT- Is proven fact that most of the illnesse sof the buccal cavity is of infectious origin. Some categories of chemical agents have been used in dental the chemical control of biofilm, through strategies that aim at the reduction of the bacterial adhesion, inhibition of the growth and proliferation of the microorganisms in the surface of the tooth. The use of the plants for the popular medicine, its use in the Odontology and the spreading of the successes had lead the scientific exploration, providing to a knowledge chemistry-farmacology of thousand of plants. The present research objectified to evaluate the antimicrobial activity comparativily in vitro of extract of the
Trabalho de dissertao de Mestrado em Diagnstico Bucal o qual foi financiado pela Capes. 1 Aluno(a) do Programa de Ps-Graduao em Odontologia pela UFPB, R. Santa Cavalcante, 169, Cabedelo-PB, CEP 58310-000. Email: lina.lyra@gmail.com. 2 Unidade Acadmica de Cincias Biolgicas, UFPB. Av. Cidade Universitria - Joo Pessoa PB, CEP - 58059900.Email: vieirapereira@uol.com.br. 3 Unidade acadmica de Odontologia,UEPB. Av. das Baranas 351, Campus Universitrio - Bodocong - Campina Grande- PB, CEP- 58101-001. Email:jozinetevieira@hotmail.com. 4 Aluno(a) do Programa de Ps-Graduao em Zootecnia pela UFCG. Av. Universitria, s/n, Bairro Santa Ceclia, CEP: 58708-110., Patos-PB. andreiavet@hotmail.com 5 Unidade Acadmica de Cincias Biolgicas, UFCG, Av. Universitria, s/n, Bairro Santa Ceclia, CEP: 58708-110, Patos-PB. E-mail: onaldo@cstr.ufcg.edu.br. 6 Bolsista do CNPq

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flower of the Matricaria recutita Linn. and of the leaf of the Lippia sidoides Cham. in association on microorganisms of dental biofilm and Chorhexidine 0,12%. All tested strain were sensitive to the extracts studied, showing effective in the regarding adherence of the tested strains at the dilution of 1:128 in the associated extract upon Streptococcus mutans. Ahead of the reached results, we can affirm that the extract of the Matricaria recutita Linn and Lippia sidoides Cham had presented potential antimicrobial in vitro, on the ancestries of Streptococcus mutans, Streptococcus mitis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus and Lactobacillus casei, the Lippia sidoides Cham. The extract of the Matricaria recutita Linn, Lippia sidoides Cham had demonstrated effect in the inhibition of the synthesis of the glucan represented for the tack to the glass, on the main responsible microorganisms for the consolidation of dental biofilm. The research showed to the importance and the necessity of the search for new alternatives in the odontologic therapeutical for the prevention and control of dental biofilm. Uniterms: Dental biofilm, Matricaria recutita, Lippia sidoides. INTRODUO O biofilme dental tem sido definido como um depsito no calcificado, constitudo de microrganismos, clulas epiteliais descamadas, detritos alimentares e macromolculas sintetizadas por bactrias proliferantes, que se aderem pelcula adquirida ou diretamente sobre a superfcie do dente. por um processo ordenado e dinmico de fixao e proliferao e aderncia de bactrias sobre as superfcies dentrias que se d sua formao (Lindhe, 2005). fato comprovado que a maior parte das doenas que acometem a cavidade bucal so de origem infecciosa. Dependendo de fatores tais como a dieta e a remoo mecnica regular do biofilme dental, o tipo de microbiota predominante na cavidade bucal pode variar. Quando a remoo mecnica do biofilme deficiente e a utilizao da sacarose freqente, ocorre uma seleo para certos organismos patognicos e o biofilme se torna virulento, podendo resultar tanto em leses de tecido duro, quanto de tecido mole. Todavia, devese lembrar das dificuldades em se conseguir que os pacientes mantenham um adequado controle mecnico. Por conseguinte, substncias antimicrobianas poderiam tentar compensar a desmotivao para uma boa higienizao dos dentes (Torres, 2000). Vrias categorias de agentes qumicos tm sido utilizadas no controle qumico de biofilme dental, atravs de estratgias que visem a reduo da adeso bacteriana, inibio do crescimento e proliferao dos microrganismos na superfcie do dente, inibio da formao da matriz intercelular do biofilme, modificao da atividade bioqumica e da ecologia do biofilme para uma microbiota menos patognica (Igncio; Peres; Cury, 1999; Rsing , Maltz, Oppermann, 2005). A clorexidina um dos mais efetivos agentes antimicrobianos, devido a sua forte absoro pelas superfcies bucais, sendo liberada gradativamente dos stios de ao, podendo reduzir o crescimento e metabolismo do biofilme dental, assim como o potencial de aderrncia dos microorganismos (Vinholis et al.,1996; Zanatta, Rsing, 2007). Embora seja um excelente antimicrobiano, devido a seus efeitos colaterais, no recomendado seu uso prolongado. Da a necessidade de serem desenvolvidas substncias to efetivas quanto, mas sem os seus efeitos colaterais. Dentre os efeitos adversos pode-se citar a colorao dos dentes, descamao reversvel da mucosa, alteraes do paladar e aumento dos depsitos calcificados supragengivais (Torres et al., 2000). Agentes fitoterpicos podem contribuir como agentes antimicrobianos, devido s vantagens: efeito sinrgico, devido aos vrios fitoconstituintes que atuam melhor em associao; associao de mecanismos por compostos atuando em molculas alvos diferentes, proporcionando aes diversificadas em todo o organismo; menos riscos de efeitos colaterais, devido s baixas concentraes em que os princpios ativos se apresentam nas plantas, sem considerar correlaes dose-tempo; menores custos de pesquisa, quando se compara ao desenvolvimento de um novo frmaco (Yunes; Pedrosa; Cechinel, 2001).

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A camomila, um membro da famlia da margarida, Asteraceae, possui proeminentes flores brancas com cnico centro dourado. Seu nome deriva de duas palavras gregas: chamos (crescimento) e melos (ma), que se referem ao pobre hbito de crescimento (crescem somente de 8 a 16 polegadas de altura) e a seu aroma de ma. Ela foi uma importante droga no antigo Egito, Grcia e Roma. Ela conhecida por apresentar uma variedade de flavonides ativos bem como seu leo voltil que rico em terpenides, como o alfa-bisabolol e camazuleno. Esses constituintes propiciam a atividade antiinflamatria, antiespasmdica e antibacteriana da camomila (Craig, 2001; Weber et al.,2007; Mulinacci et al.,2000). A Lippia sidoides Cham. uma planta do nordeste do Brasil. Seu leo essencial contm principalmente timol e carvocrol, que confere a esta planta forte ao anti-sptica contra fungos e bactrias ( Radnz et al., 2001; Costa et al., 2002; Leal et al., 2003). Devido s caractersticas de efeito antimicrobiano e anti-inflamatrio da Matricaria recutita e Lippia sidoides objetivou-se avaliar comparativamente a atividade antimicrobiana in vitro do extrato da associao sobre os microrganismos: Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus e Lactobacillus casei, principais agentes responsveis pela formao do biofilme dental supragengival e, conseqentemente da crie dentria. METODOLOGIA Delineamento experimental A avaliao da atividade antimicrobiana da Matricaria recutita Linn. e da Lippia sidoides Cham. foi realizada em duas fases experimentais. Avaliao quantitativa atravs da diluio em gar, sendo determinado a Concentrao Inibitria Mnima (CIM), alm da determinao da Concentrao Inibitria Mnima de Aderncia (CIMA). Material botnico e obteno dos extratos A escolha, quanto planta e a parte que seria utilizada no estudo, seguiu a orientao do modo de uso pela populao (Quadro 1). A obteno dos extratos, foi realizada no Laboratrio de Tecnologia Farmacutica do Departamento de Farmcia da Universidade Federal de Pernambuco. Para a extrao foi empregado o mtodo de lixiviao em fluxo contnuo temperatura ambiente. A extrao ocorreu atravs da soluo extratora (a 80% v/v) renovado constantemente por um perodo de 24 horas. Quadro 1 - Relao das plantas utilizadas, nome cientfico, nome popular, parte utilizada e concentrao da soluo de trabalho. PARTE DA NOME PLANTA CONCENTRAO DA NOME POPULAR CIENTFICO SOLUO DE UTILIZADA TRABALHO Matricaria recutita Linn. Camomila Flores 0,84g.ml-1 Lippia sidoides Cham. Alecrim-pimenta Folhas 0,86g.ml-1 Associao M/L 1,71g.ml-1 Linhagens bacterianas Foram utilizadas no presente trabalho linhagens bacterianas padronizadas de Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus e Lactobacillus casei,

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obtidas mediante solicitao na Fundao Tropical de Pesquisas e Tecnologia "Andr Tozello" (Campinas/SP) e Instituto Adolfo Lutz/SP respectivamente, remetidas em Agar Sangue Inclinado ("slants"), e posteriormente reativadas no Laboratrio de Gentica de Microrganismos Departamento de Biologia Molecular/CCEN/UFPB. Determinao da atividade antimicrobiana do extrato hidroalcolico da Matricaria recutita Linn. e Lippia sidoides Cham. em associao A atividade antimicrobiana em placas foi determinada pelo mtodo de diluio em meio slido, segundo Bauer et al. (1969) e as recomendaes do National Commite for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2003) para a determinao da Concentrao Inibitria Mnima (CIM) dos extratos hidroalcolicos de Matricaria recutita Linn. e a Lippia sidoides Cham. em associao, sobre as linhagens bacterianas. As linhagens foram cultivadas em caldo nutritivo BHI (Brain Heart Infusion- DIFCO), incubadas a 37C por 18-20 horas em microaerofilia. Placas de Agar Mueller Hinton (DIFCO) foram preparadas e aps 24 horas para controle de esterelidade, foram inundadas com soluo salina inoculada com microrganismos do overnight em uma concentrao de 10-1 e a seguir, foram confeccionados no meio de cultura, dez orifcios que receberam numeraes de 1 a 10, os quais correspondiam ao nmero da diluio da substncia teste (1:1 at 1:1024), de aproximadamente 6 mm de dimetro. Nos orifcios foram colocados um volume de 50 l da soluo do extrato nas diluies. As placas foram incubadas em estufa bacteriolgica a 37C por um perodo de 24 horas. Cada ensaio foi realizado em duplicata frente a cada linhagem selecionada. O mesmo procedimento foi utilizado para o controle positivo, com o gluconato de clorexidina (Periogard ). Foi considerada como CIM (Concentrao Inibitria Mnima) a menor concentrao do extrato capaz de inibir completamente o crescimento bacteriano, ou seja, presena do halo acima de 12 mm. A partir dos resultados a CIM tambm pde-se calcular o ndice de Concentraes inibitrias Fracionrias para a associao dos extratos ( AZEVEDO-XIMENES, 1993). FIC = CIM(A) em presena de B/ CIM(A) + CIM(B) em presena de A/CIM(B) A interpretao dos resultados est em funo dos seguintes critrios: FIC 0,5 Sinergismo 0,5< FIC -Adio 1 < FIC 2- Indiferena FIC > 2- Antagonismo Determinao da concentrao inibitria mnima de aderncia do extrato hidroalcolico da Matricaria recutita Linn. e Lippia sidoides Cham. em associao. A Concentrao Inibitria Mnima de Aderncia (CIMA) das bactrias Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis e Lactobacillus casei (principais responsveis pela aderncia) ao vidro foi determinada na presena de sacarose a 5%, usando-se concentraes crescentes e dobradas da soluo diluda do extrato em associao, variando de 1:1 a 1:1024. A partir do crescimento overnight as linhagens foram subcultivadas a 37C em caldo Meller-Hinton (DIFCO), obtendo-se um inculo de 106 UFC/ml. Foram distribudos 1,8ml da cultura em tubos de hemlise em seguida adicionados 0,2 ml da soluo correspondente a escala do extrato. A incubao foi feita a 37 C por 24 horas em microaerofilia, com tubos inclinados a 30. A leitura foi realizada atravs da observao visual da aderncia da bactria s paredes do tubo aps agitao do mesmo. A CIMA foi definida como a menor concentrao do agente em meio com sacarose que impediu a aderncia ao tubo de vidro. Anlise estatstica Os dados foram coletados, organizados e apresentados em forma de tabelas com os seus respectivos percentuais, utilizando-se o teste t de Student, para a comparao dos valores das mdias dos halos de inibio dos extratos avaliados.

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RESULTADOS Da concentrao inibitria mnima do extrato vegetal em associao Os resultados da atividade antimicrobiana da associao dos extratos de Lippia sidoides e Matricaria recutita esto na Tabela 1. Tabela 1- Dimetros dos Halos de inibio do Extrato da associao Lippia sidoides/ Matricaria recutita. e Clorexidina 0,12% frente aos microrganismos do biofilme dental. *SP-Soluo pura DIMETRO DOS HALOS ( mm) MICRORGANISMOS CONCENTRAO DA SOLUO (1,71g/mL) Associao Lippia + Matricaria Clorexidina 0,12% SP S. mutans S. mitis S. sanguinis S. sobrinus L. casei 13 17 15 16 16 1:2 0 0 11 0 0 1:4 0 0 0 0 0 1:8 0 0 0 0 0 1:16 0 0 0 0 0 SP 21 20 21 19 21 1:2 18 19 19 18 19 1:4 14 15 14 15 15 1:8 12 13 13 12 13 1:16 0 0 0 0 0

Figura 1-Representao fotogrfica da CIM dos extratos da Lippia sidoides e Matricaria recutita em associao frente ao Streptococcus mutans. Na tabela 2, observa-se a comparao das mdias das amostras do extrato com a mdia da amostra de Clorexidina (controle) atravs do teste t de Student, observando que apenas o valor calculado de t para a Lippia sidoides foi maior que o valor crtico do teste, podendo-se concluir que as mdias dos halos da mesma so inferiores aos da Clorexidina 0,12%.

Extrato Comparado Associao M+L

Valores de t calculado 6,353>t0,05;8

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Tabela 2- Utilizao do teste t de Student para comparao dos valores das mdias dos halos de inibio dos extratos analisados e a Clorexidina O nvel de significncia escolhido foi 0,05; o valor crtico do teste Foi t0,05;8 =2,306. Na tabela 3, observa-se as Concentraes Inibitrias Mnimas do extrato

em associao. Tabela 3- Concentrao Inibitria Mnima (CIM) do extrato da Matricaria recutita Linn.e Lippia sidoides Cham. em associao. CONCENTRAO INIBITRIA MNIMA Concentrao do Extrato/Substncia Associao M/L Clorexidina Microrganismo S. mutans SP 1:8 S.mitis SP 1:8 S.sanguinis 1:2 1:8 S. sobrinus SP 1:8 L. casei SP 1:8 De acordo com a CIM de cada extrato pde-se avaliar os resultados da associao dos dos mesmos atravs do ndice de Concentraes Inibitrias Fracionrias (FIC). Aps o clculo, observou-se que houve antagonismo para as cepas de S. mutans, S. mitis, S. sobrinus e L. casei, porm, para o S. sanguinis houve indiferena na interpretao (Quadro 2). Quadro 2 Interpretao dos resultados da associao dos extratos segundo os resultados do ndice de Concentraes Inibitrias Fracionrias ndice de Concentraes Inibitrias Fracionris MICRORGANISMO FIC INTERPRETAO S. mutans 9,98 Antagonismo S. mitis 6,00 Antagonismo S. sanguinis 2,00 Indiferena S. sobrinus 6,00 Antagonismo L. casei 6,00 Antagonismo Da concentrao inibitria mnima de aderncia (CIMA) do extrato vegetal em associao Os resultados referentes a Concentrao Inibitria Mnima de Aderncia (CIMA) do extrato da Lippia sidoides Cham. e da Matricaria recutita Linn. em associao e do gluconato de clorexidina 0,12% sobre S. mutans, S. sanguinis e L. casei encontram-se na Tabela 4. Tabela 4- Dados comparativos da CIMA do extrato da Lippia sidoides Cham.e Matricaria recutita Linn. em associao e do Gluconato de clorexidina 0,12% sobre Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis e Lactobacillus casei. Linhagens S.mutans Associao 1:128 Clorexidina 1:16

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S.sanguinis L.casei

1:4 1:8

1:16 1:16

De acordo com os resultados da tabela acima, pode-se observar que o extrato apresenta atividade antiaderente. A atividade representada pela ausncia de aderncia da bactria parede do tubo de vidro, demonstrando a capacidade do extrato de inibir a sntese do glucano pela glicosiltransferase. Deve-se observar que o potencial de inibio aderncia foi maior na associao Matricaria recutita com a Lippia sidoides sobre o Streptococcus mutans. DISCUSSO Nesse estudo verificou-se a ao do extrato da Matricaria recutita Linn. e Lippia sidoides Cham. em associao, sobre microrganismos aerbios predominantes no bofilme supragengival: Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus,, Streptococcus mitis, Streptococcus mutans e Lactobacillus casei. Os resultados demonstraram a potencial atividade dos extratos sobre todas as linhagens ensaiadas. Em 2006, Oliveira observou que o leo essencial de Lippia sidoides tinha efeito sinrgico combinado com a ampicilina, cefalotina e cloranfenicol, destacando-se esse efeito sobre a cefalotina frente a Staphylococcus aureus. Com relao aos ensaios da atividade antimicrobiana realizados com o gluconato de Clorexidina, todas as linhagens ensaiadas foram sensveis, observando-se maiores halos de inibio no S. mutans (21mm), S. sanguinis (21mm) e L. casei (21mm). De acordo com o teste t de Student observou-se que as mdias dos halos para o extrato da associao estavam aqum das mdias dos halos da Clorexidina. A utilizao de associao de antimicrobianos continua a ser avaliada pela capacidade de suprimir o aparecimento de mutantes resistentes, e produzir um efeito sinrgico in vitro. A associao de antibiticos com muito cotribui na teraputica clnica, principalmente no combate a infeces por microrganismos intracelulares. Desde os tempos mais remotos, o homem busca nas plantas o alvio de suas dores e cura das doenas. O conhecimento e a utilizao de algumas plantas isoladas ou em associao pela populao vem sendo atentamente observado, no entanto a associao pode resultar em sinergismo, antagonismo, adio ou indiferena. De acordo com a CIM de cada extrato pde-se avaliar os resultados da associao dos mesmos atravs do ndice de Concentraes Inibitrias Fracionrias (FIC). Aps o clculo e interpretao dos resultados, observou-se que ocorreu antagonismo para as cepas de S. mutans, S. mitis, S. sobrinus e L. casei, porm, para o S. sanguinis houve indiferena. Os dados obtidos neste estudo demonstraram a eficcia do extrato associado. Poucos estudos relatam a influncia dos agentes antimicrobianos nos estgios iniciais da formao do biofilme, especialmente com relao aderncia Este estudo objetivou inibir a formao de glucanos insolveis a partir da sacarose pelos extratos da Matricaria recutita Linn e Lippia sidoides Cham em associao, atravs da inibio da aderncia ao vidro. Para a associao Lippia/ Matricaria d-se nfase ao resultado para S. mutans que inibiu aderncia at 1:128. Estes resultados so bastante promissores uma vez que esses microrganismos so os maiores responsveis pela formao da crie dental. Em 2003, Landucci avaliou os efeitos de diferentes solues de caf (Coffea arbica) sobre a aderncia de cepas de Streptococcus mutans superfcie de vidro, tendo como resultado que a soluo de Coffea arbica a 16% foi mais efetiva na inibio da aderncia de Streptococcus mutans. A atividade antimicrobiana e a capacidade de inibio da sntese de glucano in vitro do extrato da casca do fruto da rom (Punica granatum Linn.) sobre linhagens bacterianas de Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus e

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Lactobacillus casei foi avaliado. Para as CIMAs o extrato da Punica granatum mostrou resultados melhores que a clorexidina, exceto para o S. mutans com achados semelhantes na diluio de 1:256. ( Pereira et al., 2006). A atividade antimicrobiana do extrato da casca do caule de Anacardium occidentale L., foi avaliada. Nesse estudo, o extrato do caule do A. occidentale foi efetivo na inibio da aderncia das trs cepas testadas, representada pela ausncia de aderncia ao vidro na presena de sacarose; particularmente, a maior eficcia do extrato foi observada sobre o S. sanguinis, o qual considerado o agente mais importante na fase inicial de deposio do biofilme bacteriano ( Melo et al., 2006). Estudou-se o efeito dos extratos da aroeira-do-serto (Myracrodruon urundeuva All.), goiabeira (Psidium guajava Linn.) e malva (Malva sylvestris) sobre linhagens de Streptococcus mutans, Streptococcus mitis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus e Lactobacillus casei com o qual observou-se que os extratos demonstraram excelente efeito na inibio da sntese do glucano representada pela aderncia ao vidro (CIMA), com resultados semelhantes aos encontrados com Clorexidina (Alves, 2005). CONCLUSES De acordo com a metodologia utilizada e a partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que: Os extratos da Matricaria recutita Linn e Lippia sidoides Cham associados apresentaram potencial atividade antimicrobiana in vitro, sobre as linhagens de Streptococcus mutans, Streptococcus mitis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus e Lactobacillus casei; A associao dos extratos da Matricaria recutita Linn. e Lippia sidoides Cham. demonstrou efeitos de antagonismo e indiferena, relacionada ao tamanho do halo de inibio, tendo a atividade antimicrobiana permanecido; Os extratos da Matricaria recutita Linn. e Lippia sidoides Cham. em associao demostraram efeito na inibio da sntese do glucano representada pela aderncia ao vidro, sobre os principais microrganismos responsveis pela consolidao do biofilme dental; A Clorexidina apresentou atividade antimicrobiana sobre todas as linhagens bacterianas. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS Alves, P. M. (2005). Atividade antimicrobiana e antiaderente in vitro dos extratos da Myracrodruon urundueva All., Malva sylvestris e Psidium guajava Linn. sobre microrganismos do biofilme dental e cepas da gnero cndida. Joo Pessoa. 102f. Dissertao (Mestrado) Universidade Federal da Paraba Azevedo-Ximenes, E. C. P. (1993).Contribution a Letude de Lactivite in vitro de divers antibiotiques sur ds Mycobacteries atypiques isoles de sujets vhi-positifs.Montpellier. 184f. Tese (Doutorado) Universite de Montpellier. Bauer, A. W. et al. (1969). Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Amer J Clin Pathol,Chicago, v.45, p. 493-496. Costa, S. M. O. et al. (2002). Constituintes qumicos de Lippia sidoides (Cham.) Verbenaceae. Rev. Bras. Farmacogn.,Paraba, v. 12, supl., p. 66-67. Craig, W. J. (2001). Chamomile. For common complaints. Vibrant Life, Mar/Apr. Ignacio, R. F., Peres, P. E. C., Cury, J. (1999). A. Efeito de um dentifrcio fluoretado contendo bicarbonato de sdio na contagem de estreptococos do grupo mutans, acidogenicidade e composio da placa dental. Revista de Odontol USP, So Paulo v.13, n.1, p.43-49.

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