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02/05/2011 gliclise;

Gliclise: quebra de glicose com o objetivo de fornecer energia (na forma de ATP) e intermedirios para outras vias metablicas. A gliclise o centro do metabolismo dos carboidratos, pois todos os glicdios so convertidos em glicose. O piruvato o produto final da gliclise. A gliclise envolve uma srie de dez reaes. H a gliclise dividida em gliclise dividida em glicose aerbia / oxidativa, quando o piruvato convertido em CO2 e H2O, e gliclise anaerbia / no oxidativa, quando o piruvato convertido em lactato. Os processos catablicos rendimentos energticos so maiores na gliclise. O piruvato antes de entrar na via aerbica convertido em acetil-coa, e pode ser utilizado no fgado para sintetizar cidos graxos.

Aula: Introduo: A cada processo de gliclise, onde se tem uma sequencia de 10 reaes enzimticas, que vo ser necessrias para converter a glicose em 2 piruvatos. Esse piruvato tambm vai diferir no seu destino. Um destino seria a fermentao alcolica, processo que no acontece em humanos, somente em oliveduras. Em humanos, o piruvato originado da via glicoltica, vai ter dois grandes destinos. Ou vai ter fermentao lctica, ou o piruvato vai ser totalmente oxidado at CO2 e H2O. Ser abordado a seguir a fermentao lctica. Gliclise a quebra de glicose at piruvato. A gliclise a partir da pode ser aerbica/oxidativa ou anaerbica/no oxidativa. Gliclise: glicose piruvato. Praticamente todas as clulas do organismo so capazes de fazer gliclise. A via glicolitica ativada para quebrar glicose e produzir energia na forma de ATP. O grande objetivo da via glicoltica produzir energia, para a manuteno das funes celulares, como por exemplo, a contrao muscular. A via glicoltica vai estar ativa quando a clula precisar de mais energia. O piruvato assume dois caminhos distintos. A gliclise anaerbica/no oxidativa; gliclise aerbica/oxidativa. A gliclise um processo catablico onde h reduo de coenzimas e produz energia. A gliclise aerbica precisa de oxignio para acontecer. O Rendimento energtico da gliclise aerbia muito maior que a da gliclise anaerbia. A via glicoltica s vai ficar ativa, quando a clula precisa de energia, mas vai depender das condies fisiolgicas. Por exemplo: o piruvato antes entrar na via oxidativa, vai ser convertido no composto acetilcoa. Depois segue a via de ciclo de Crebs e cadeia de transporte de eltrons. O acetil-coa pode ser utilizado no fgado para sintetizar cidos graxos, no estado alimentado. No estado alimentado, a glicose entra na via glicoltica e convertida em lipdios. Por esse motivo, que se consome carboidrato e se engorda gordura. Gordura no volta a ser carboidrato.

Gliclise: --15-Via metablica com uma sequencia de enzimas, altamente regulada, que vai ter 10 reaes enzimticas, onde o produto de uma reao o substrato da reao seguinte. Nessa via metablica h trs enzimas regulatrias. a) Hexocinase reao 1; b) PFK-1 reao 3; c) piruvato cinase reao 10.

Essas 10 reaes esto divididas em duas grandes fases. 1) Fase preparatria / de investimento (fase 1 F1); 2) Fase de recompensa / de gerao de ATP / de ganho energtico (fase 2 F2). A converso de glicose at piruvato na via glicoltica, que um processo oxidativo, vai gerar ATP; s que na primeira fase (F1) da gliclise vai haver gasto de ATP; na F1 duas molculas de ATP vo ser consumidas para formar o composto frutose 1,6 bifosfato, que por sua vez o quebrado em duas trioses fosfato, da para frente vai se comear a gerar energia. A converso das 2 trioses fosfato em piruvato vai gerar 2 molculas de NADH e mais 2 ATP. O saldo da via glicoltica 2 ATPs gastos e 4 ATPs formados, gerando um saldo de 2 ATPs produzidos. No final das contas, a gliclise produz 2 ATP e 2 molculas de NADH. O NADH vai depender se o piruvato vai para a via oxidativa ou pela via no oxidativa. Se o piruvato for convertido a lactato, seguindo a via no oxidativa, o NADH no vai render mais energia. Mas se o piruvato seguir a via oxidativa at CO2 e gua, o NADH ainda pode render energia na cadeia de transporte de eltrons. Via glicoltica: forma 2 (ATP + NADH). --20 Fase de preparao: O primeiro ATP consumido para a glicose no sair da clula, pois a primeira enzima da via glicoltica vai ser a hexocinase, que vai consumir ATP, para manter a glicose dentro da clula, convertendo glicose em glicose 6 fosfato. J o segundo ATP utilizado para facilitar a quebra. Ento os dois ATPs investidos vo ser usados para manter a glicose dentro da clula e para produzir o composto frutose 1,6 bifosfato que uma molcula estruturalmente mais fcil de quebrar do que a glicose 6 fosfato. A F1 termina quando se tem a produo de 2 trioses fosfato. Depois na F2 que se tem a fase de produo de ATP. Reao 1 e 3, reaes das enzimas regulatrias, gasta 1ATP cada reao, gastando 2 ATP.

Fase de gerao de ATP.

Na segunda fase, se tem dois compostos de 3 carbonos, que vo ser oxidados at piruvato, e vo reduzir o NADH e vo formar 4 ATP. A f2 a fase onde se tem retorno, ganho energtico, oxidao e produo de ATP.

Fase de investimento viso ampliada: F1: A glicose entra na clula, e a via glicoltica acontece toda no citosol. A glicose ou est sendo captada a circulao, ou se estiver no musculo, a glicose pode vir da quebra do glicognio. S que se a glicose vier da quebra do glicognio, a glicose j vai entrar na gliclise na forma de glicose 6 fosfato, porque a glicogenlise libera a glicose na forma de glicose 6 fosfato, e assim no participa da primeira reao da via glicoltica. A primeira reao j aconteceu no processo de glicognese. A primeira enzimada via glicoltica a hexocinase e glicocinase (presente no fgado). A hexocinase uma enzima regulatria da via glicoltica. Enzima responsvel pela converso da glicose em glicose-6-fosfato, gastando 1 ATP. A primeira reao no compromete a glicose com a via glicoltica. No porque a glicose foi fosforilada, que ela vai ser necessariamente degradada pela via glicoltica; ela pode ser sintetizada para formar glicognio, e etc. A reao da Hexocinase uma reao irreversvel, onde o produto no pode ser convertido em substrato pela mesma enzima. Quando a enzima regulatria, ela catalisa uma reao irreversvel. Na primeira reao formada glicose-6-fosfato, que no sai mais da clula. Na reao 2 da via glicoltica tem-se ao da fosfohexose isomerase e converte-se Glicose-6fosfato em frutose-6-fosfato. fosfohexose isomerase catalisa uma reao irreversvel, funcionando de acordo com a concentrao de produto e substrato disponveis. Ou seja, quanto mais a Hexocinase estiver ativa, mais glicose-6-fosfato estar disponvel para ser substrato da reao enzimtica da PFK-1. Reao 3: A frutose-6-fosfato formada, sofre a ao da terceira enzima da via glicoltica, denominada fosfofrutocinase-1 (PFK-1). A PFK-1 vai fosforila a frutose-6-fosfato e produzir um composto denominado frutose-1,6-bifosfato. Nessa reao h gasto de um ATP, sendo o segundo gasto energtico na fase de investimento, e tambm uma reao irreversvel. Tambm uma enzima regulatria da gliclise. A frutose-1,6-bifosfato sofre a ao da quarta enzima da via glicoltica, denominada aldolase. A aldolase quebra a frutose-1,6-bifosfato, que tem 6 carbonos e no simtrica, e converte em duas trioses diferentes, sendo um o gliceroldeido-3-fosfato e outro dihidroxiacetonafosfato. Terminada essa reao, finaliza-se a F1 da gliclise, onde h gasto de 2 molculas de ATP e formao de 2 trioses a partir de uma hexose.

Fase de ganho energtico viso ampliada: F2: Tem-se gliceroldeido-3-fosfato e dihidroxiacetonafosfato, e a sexta enzima da gliclise vai utilizar o gliceroldeido-3-fosfato como substrato. A dihidroxiacetonafosfato no substrato da 6 enzima da via glicoltica. Ento a 5 reao da via glicoltica a converso da dihidroxiacetonafosfato em gliceroldeido-3-fosfato, o que resulta no final da 5 reao da via glicoltica em duas molculas de gliceroldeido-3-fosfato, uma resultante da quarta reao enzimtica e outra resultante da quinta reao enzimtica da via glicoltica. A enzima da 6 reao s reconhece a gliceroldeido-3-fosfato. Portanto, conclusivo que, para cada molcula de glicose que se quebra, formado duas molculas de piruvato, dobrando o rendimento da via. A quinta enzima (triose fosfato isomerase) catalisa uma reao reversvel, porm, como o gliceroldeido-3-fosfato, e substrato da 6 reao enzimtica, ele sempre estar em desvantagem de concentrao comparado com o dihidroxiacetonafosfato, favorecendo a ao desta quinta enzima, convertendo dihidroxiacetonafosfato em gliceroldeido-3-fosfato. O gliceroldeido-3-fosfato est sendo constantemente sendo consumido na via, favorecendo a converso de dihidroxiacetonafosfato em gliceroldeido-3-fosfato. Ento, a ao da enzima triose fosfato isomerase (enzima 5) responsvel por formar duas molculas de piruvato no final da via glicoltica. Reao 6: gliceroldeido-3-fosfato substrato da 6 enzima da via glicoltica, e sofre a primeira reao de oxidao da via glicoltica. O gliceroldeido-3-fosfato oxidado em 1,3bifosfoglicerato. A enzima dessa sexta reao a gliceroldeido-3-fosfato desidrogenase. O gliceroldeido-3-fosfato est se oxidando, enquanto o NAD+ est se reduzindo em NADH. H a formao de uma coenzima reduzida de NADH. 6 reao; enzima gliceroldeido-3-fosfato desidrogenase: Reao de oxi-reduo: gliceroldeido-3-fosfato + NAD+ 1,3-bifosfoglicerato + NADH. Na stima reao, o 1,3-bifosfoglicerato vai ser convertido em 3-fosfoglicerato pela ao da enzima fosfoglicerato cinase. Essa reao importante, porque uma reao que consegue produzir ATP independente de fosforilao oxidativa (cadeia de transporte de eltrons) e de ciclo de Krebs. A maior parte do ATP formado vem da oxidao oxidtiva. Como so duas molculas de substrato, na reao 7, se produz 2 ATP. Oitava reao: enzima fosfogliceratomutase converete 3-fosfoglicerato em 2-fosfoglicerato. Ou seja, a enzima da 8 reao s troca a posio do grupamento fosfato. Nona reao: enzima enoase catalisa e converte 2-fosfoglicerato em fosfoenol piruvato (PEP). Decima reao: enzima piruvato cinase catalisa e converte PEP em piruvato. A piruvato cinase uma enzima regulatria da via glicoltica, que catalisa uma reao irreversvel. Resulta em 2 molculas de piruvato. Essa reao tambm consegue gerar ATP (2 ATP, uma para cada molcula). Reao 10 gera 2 ATP.

Rendimento final da gliclise, em molculas: Formao de 2 ATP, 2 NADH, 2 piruvato. = 2 (ATP + NADH + piruvato).

O piruvato um composto que ainda altamente energtico, por ter sido pouco oxidado, ento ainda se pode tirar muita energia. Ento se o piruvato seguir uma via oxidativa, ele poder formar mais ATP. Se o piruvato seguir a via no oxidativa formando lactato, no haver mais formao de ATP. A via glicoltica est presente no citosol, em situaes em que se necessita de energia, ou no fgado no estado alimentado. -1--A partir da a gliclise pode seguir dois caminhos, a gliclise oxidativa e a gliclise no oxidativa. Gliclise anaerbica: Piruvato lactato: enzima lactato desidrogenase. H a converso de piruvato em lactato pela ao da enzima lactato desidrogenase em uma reao de oxi-reduo. Nessa reao h uma reduo de piruvato para lactato e uma oxidao de NADH para NAD+, sem formao de energia. Esse NAD+ vai ser necessria para manter a via glicoltica ativa, pois o NAD+ vai ser reutilizado na sexta reao da via glicoltica, que uma reao de oxi-reduo. O NAD+ que foi reoxidado pela lactato desidrogenase, vai ser reaproveitado na 6 reao onde esse mesmo composto vai ser reduzido, para a continuao das reaes da via. Se no houvesse essa reposio, s haveria consumo de NAD+ e chegaria um momento em que acabaria o estoque de NAD+, impedindo assim, que a sexta reao da via se efetivasse. O NAD+ oxidado e utilizado na reao 6 da via. Quanto mais a via estiver ativa, mais piruvato vai ser formado, mais lactato tambm formado, e mais NAD+ vai sendo oxidado para seu reaproveitamento na via glicoltica. Piruvato lactato. Olhar pdf 12 gliclise pg. 8/13. So dois NAD+ que so reoxidados.

Aula 04/05/2011;

3 enzimas regulatrias da via glicoltica: a) Hexocinase; b) PFK-1; c) Piruvato cinase.

No fgado, as enzimas regulatrias possuem uma modulao diferente em comparao com os outros tecidos.

Hexocinase: uma enzima que catalisa a primeira reao da via glicoltica, e catalisa a fosforilao da glicose em glicose-6-fosfato. Essa enzima possui diferentes isoemzimas nas suas diferentes isoformas. Isoenzimas so enzimas que possuem a mesma atividade, catalisam a mesma reao, mas possuem algumas caractersticas distintas, como por exemplo na sua regulao, ou no valor de km, na velocidade mxima. A Hexocinase tem quatro isoformas diferentes. Cada isoforma vai ser expressa em um tecido diferente. A diviso se estabelecer, diferenciando a Hexocinase 1, 2, 3 da Hexocinase 4, tambm denominada glicocinase, que presente somente no tecido heptico. Glicocinase a isoforma da Hexocinase presente no fgado. A diferena das hexocinases para a glicocinase est no valor do km. A Hexocinase tem um valor de km, quando comparado com o valor do km da glicocinase, bem mais baixo. A glicocinase tem um km mais alto. Isso indica que a concentrao de substrato para se chegar na metade da velocidade mxima da atividade da Hexocinase muito baixa. Para se chegar no km da glicocinase, necessria uma maior concentrao do substrato glicose. Importncia desse fato: a Hexocinase tem uma afinidade maior pela glicose. Funo do fgado quando se trata de metabolismo de glicose. O fgado responsvel por armazenar glicose, e manter a glicemia. Desse modo, a glicocinase, funciona apenas quando a concentrao intracelular de glicose no fgado est elevada. O fgado tem que ser capaz de responder as variaes de glicose no sangue. O fgado funciona como um sensor de glicose, pois deve sentir quando a glicose aumenta, captar essa glicose, fosforilar, e dar um destino para ela, como por exemplo, a sntese de glicognio, ou degradao pela via glicoltica para a converso em cidos graxos; e quando essa glicose baixa dos valores normais, o fgado tem que parar que captar essa glicose, para manter a glicemia sangunea. J o musculo, necessita de glicose quando ... A glicocinase tem que ser mais ativa, quando se tem mais glicose, pois sua atividade tem que ser parelha com a atividade do GLUT. A glicose tem que ser fosforilada para ficar dentro da clula, no adianta o GLUT transportar elevado nveis de glicose para dentro da clula, se essa glicose no for fosforilada, porque caso no haja fosforilao da glicose, a mesma retorna ao meio extracelular. Se o fgado possu uma Hexocinase com o km alto; num valor de glicemia normal, glicemia de jejum, glicemia padro; a atividade da Hexocinase vai estar ativa, porm em nvel muito inferior ao mximo de sua atividade. A Hexocinase vai estar em uma atividade baixa para seu valor mximo. Como a glicocinase no tem uma afinidade grande com a glicose, ela atua em uma velocidade baixa a sua velocidade mxima. No momento em nos alimentamos, a glicemia sobe; como a glicocinase estava atuando em velocidade muito abaixo de sua capacidade mxima, ela, glicocinase tem como aumentar muito a sua velocidade. Somente pelo fato de se aumentar a glicemia, em momento posterior, a glicemia se torna abaixo dos valores normais, porque o aumento da concentrao de substrato faz aumentar abruptamente a atividade da glicocinase. A glicose-6-fosfato vai sendo convertida em glicognio, o que faz a glicemia diminuir para valores normais. Quando a glicemia est em valores normais, a glicocinase volta

a ter uma atividade baixa, para deixar a glicose sangunea disponvel para os outros tecidos. Quando a glicemia estiver muito baixa, o fgado, neste estado, aciona os mecanismos de glicogenlise. Ento a glicocinase vai regular a glicose por ter um km alto. No musculo, a Hexocinase possui um km muito baixo, o que permite que a Hexocinase muscular funcione em alta atividade mesmo com baixa concentrao do substrato glicose. O musculo tem outro tipo de regulao para a captao de glicose, j que a funo do msculo no remover e captar glicose do sangue. A Hexocinase muscular, vai trabalhar, praticamente todo o tempo, na sua atividade mxima, no seu plat, pois no importa a variao de glicemia. Ento a glicocinase muscular sofre outro tipo de regulao. Com o km baixo da Hexocinase muscular, no permite que essa enzima responda a variao de concentrao de seu substrato, respondendo assim, a outro tipo de regulao. O fgado funciona como um sensor de glicose, pois quando a glicemia est alta, ele tem que captar essa glicose. No momento de glicemia normal, ele no pode estocar glicose na mesma quantidade, pois se no iria baixar muito a glicemia, o obrigando devolver rapidamente essa glicose para o sangue. Hexocinase e glicocinase possuem a mesma atividade, catalisam a mesma reao, s que a funo e as caractersticas so diferentes. So protenas diferentes, porem muito semelhantes. O fgado, diferentemente dos outros tecidos, tem que fornecer glicose ao invs de gast-la. --20--As hexocinases 1, 2, 3, possuem uma inibio alostrica por glicose-6-fosfato, que produto da reao de sua atividade. A glicocinase no possui essa regulao. Essa regulao da glicose6-fosfato vai ser importante em alguns tipos de exerccio, porque o msculo possui glicognio intramuscular. Quando se faz exerccio, se tem estimulo de degradao de glicognio muscular, associado tambm ao estimulo de captao de glicose sangunea, diminuindo assim a glicemia, gerando o estimulo para a ativao da glicogenlise heptica pelo fgado. Uma das formas para se evitar que seja diminuda a glicose sangunea, e tambm para que o musculo consiga utilizar seu prprio glicognio, pelo processo de inibio da Hexocinase pela glicose6-fosfato. Quando o musculo comea a degradar o seu prprio glicognio, comea a aumentar a concentrao de glicose-6-fosfato dentro da clula muscular, inibindo a Hexocinase, inibindo por sua vez, a captao de glicose sangunea. Assim, utilizada pelo musculo, a glicose intracelular, evitando a utilizao e a captao da glicose que vem do meio extracelular, poupando a glicose da glicemia, e usa o glicognio do msculo, que foi armazenado para sua posterior utilizao. No momento em que o glicognio comea a diminuir, a inibio da Hexocinase pela glicose-6-fosfato tambm diminui, e assim continua captando glicose sangunea. Ento a funo dessa inibio alostrica negativa poupar um pouco a glicose sangunea, para a utilizao do prprio glicognio muscular. --26--A glicocinase tambm possui uma modulao. A glicocinase possui um mecanismo de regulao onde ela removida do citoplasma, quando no se precisa dessa protena. As vias que vo utilizar a glicose-6-fosfato, como a glicognese como a gliclise, vo acontecer no citosol. Se houvesse remoo da enzima regulatria

glicocinase do citosol, como essa protena no estivesse na clula, diminuindo a concentrao de glicose-6-fosfato do citosol. Ento uma protena regulatria, sequestra a glicocinase quando ela no necessria, e transporta-a para dentro do ncleo. A protena regulatria se associa com a glicocinase, e depois leva a glicocinase para dentro do ncleo. Dentro do ncleo, a glicocinase fica acoplada com a protena regulatria. A protena regulatria s ativada por frutose-6-fosfato, fazendo o processo de transporte para dentro do ncleo da glicocinase. Se houver um acmulo de frutose-6-fosfato (substrato da PFK-1), esse acmulo inibi a glicocinase, o que favorece a inibio da via glicoltica. O aumento de glicose faz a glicocinase voltar para o citoplasma para que a enzima tenha sua atividade normal. O aumento de glicemia, aumenta a captao de glicose pelo fgado, e essa glicose vai ativar a dissociao da glicocinase da protena regulatria e a volta da enzima para o citoplasma. Ento o aumento da glicose sangunea aumenta a atividade da glicocinase, porque a glicose favorece a presena da glicocinase no citosol, como tambm aumenta a atividade da glicocinase, porque o km da enzima baixo. O aumento da glicemia ativa a glicocinase por dois mecanismos. Glicose: glicocinase no citosol; frutose-6-fosfato: glicocinase no ncleo.

--33--PFK-1: segunda enzima regulatria da via glicoltica. Possui regulao simples. regulada por modulao alostrica. O ATP e citrato so moduladores alostricos negativos, e assim, inibem a enzima PFK-1. Alta concentrao de ATP ou de citrato, inibem a atividade da PFK-1, inibindo toda a via glicoltica. AMP, ADP e frutose2,6-bifosfato so ativadores alostricos da enzima. Quanto maior sua concentrao no meio, maior a atividade da PFK-1 e de toda a via glicoltica. O ATP reflete o estado energtico da clula. A funo da via glicoltica sintetizar ATP. Se h muito ATP na clula, comparado com AMP e ADP, sinal que a clula no precisa mais sintetizar ATP porque ela no est gastando o ATP, no necessitando degradar mais glicose. O ATP sinaliza para a PFK-1 que no h necessidade de sintetizar mais ATP. Porm, a clula continua gastando ATP, e a concentrao de ATP decresce, ficando menor que a concentrao de AMP e ADP. AMP e ADP ativam mais a atividade da PFK-1, aumentando a atividade da via glicoltica, para sintetizar mais ATP. A modulao positiva da PFK-1 por frutose-2,6-bifosfato vai acontecer no fgado. PFK-1: | | | | |

Moduladores alostricos ... Negativos: ATP; | Positivos: |

| AMP, ADP;

Citrato.

| Frutose-26-bifosfato |

--40--Piruvato cinase: Piruvato cinase inibida por ATP alostericamente Pelo menos trs isoenzimas de piruvato cinase so encontradas em vertebrados, diferindo na sua distribuio de tecidos e sua resposta ao moduladores. Altas concentraes de ATP, acetil-CoA e cidos graxos de cadeia longa (sinais de fonte de energia abundante) alostericamente inibir todas as isoenzimas de piruvato cinase (Fig. 15-19). A isoenzima heptica (forma L), mas no o isoenzima muscular (forma M), est sujeita regulamentao posterior por fosforilao. Quando a glicose no sangue provoca a liberao de glucagon, o AMPc-dependente da protena cinase fosforila a isoenzima L de piruvato quinase, inativando-a. Isso diminui o uso de glicose como combustvel no fgado, poup-lo para a exportao para o crebro e outros rgos. No msculo, o efeito do aumento da [cAMP] completamente diferente. Em resposta epinefrina, o AMPc ativa a quebra de glicognio e gliclise e fornece o combustvel necessrio para a resposta de luta ou fuga. Piruvato cinase: | | | | |

Moduladores alostricos ... Negativos: ATP; | | Positivos: |

Acetil-coa.

| Frutose-16-bifosfato | |

cidos graxos de cadeia longa; | Alanina. | |

A piruvato cinase tem uma modulao diferente no fgado. A piruvato cinase converte PEP em piruvato. A piruvato cinase sofre modulao alostrica. A modulao alostrica positiva feita pelo composto frutose-1,6-bifosfato (produto da PFK-1 e intermedirio da via glicoltica), e a modulao alostrica negativa feita pela acetil-coa, ATP, cidos graxos de cadeia longa e alanina, que inibem a enzima. Se houver disponibilidade energtica de ATP, e cidos graxos de cadeia longa que podem ser degradados no lugar da glicose (poupa a glicose), no necessrio que a via glicoltica fique ativa. No fgado, a modulao tambm ocorre em um processo diferente, j que no tecido heptico, a gliclise deve estar ativa em momentos diferentes comparado com outros tecidos. A piruvato cinase pode ser fosforilada. Quando h o estado de jejum, com o organismo em hipoglicemia, prevalece a liberao de glucagon. O glucagon sinaliza para a protena cinase PKA a fosforilar a piruvato cinase. A piruvato cinase, com o grupamento fosfato se torna

inativa, ou menos ativa, inativando assim, a via glicoltica. Mas quando o organismo estiver no estado alimentado, em hiperglicemia, vai haver baixa de glucagon, associado a maior concentrao de insulina, resultando na sinalizao para ao da fosfatase PP desfosforilar a piruvato cinase, e assim, com a piruvato cinase sem o grupamento fosfato, volta a sua forma mais ativa, ativando por consequncia a via glicoltica. Explicao: no estado alimentado vai haver glicognese e gliclise. O fgado sintetiza glicognio para reserva de glicose. Mas o glicognio libera glicose de uma maneira rpida e tem um limite para o armazenamento de glicognio, pois a capacidade do fgado limitada. O excesso de glicose que no foi convertido em glicognio para estoque, segue a via glicoltica para aps seguir a via lipdica. Estoca-se assim gordura ao invs de glicose. A ativao da via glicoltica ativada para se converter carboidrato em lipdios. Tem-se glicose, que segue a via glicoltica que termina na produo de piruvato. A via lipdica depois estimulada para converter o piruvato em acetil-coa, que por sua vez sintetizado em cidos graxos. No fgado, no estado alimentado, a glicose em excesso estocada em cidos graxos. Logo, uma parte da glicose ingerida vai para a glicognese, e o excesso de glicose que no foi convertida em glicognio, vai ser estocada em cidos graxos. A converso de cidos graxos para glicose no existe, pois no h enzima que faa. No estado de jejum, o fgado no consome glicose. No jejum, h a glicogenlise pelo fgado, mas o consumo de glicose pela via glicoltica para, para que a disponibilidade dessa glicose esteja mais presente nos outros tecidos, j que estes no possuem a capacidade de utilizar cidos graxos como fonte energtica como o fgado. A modulao por fosforilao se sobrepe a modulao alostrica. Se a enzima estiver fosforilada, ela vai estar inativa.

Livro: Pg. 576: Isoenzimas Hexocinase de msculo e no fgado so afetados diferentemente pelo seu produto, Glucose 6-Fosfato. Hexocinase, que catalisa a entrada de glicose livre para a via glicoltica, uma enzima reguladora. Existem quatro isoenzimas (designados de I a IV), codificados por quatro genes diferentes. Isoenzimas so diferentes protenas que catalisam a mesma reao (Quadro 15-2). A isoenzima hexocinase predominante dos micitos (hexocinase II) possui uma elevada afinidade para a glicose, que semi-saturada em cerca de 0,1 mM. Como a glicose entrar micitos do sangue (onde a concentrao de glicose de 4 a 5 mm) produz uma alta concentrao de glicose intracelular suficiente para saturar hexocinase II, a enzima age normalmente na ou perto de sua taxa mxima. A hexocinases muscular I e II so alostericamente inibida por seu produto, glicose-6-fosfato, por isso sempre que a concentrao celular de sobe glicose-6-fosfato acima de seu nvel normal, estas isoenzimas esto temporariamente e inibido, levando a taxa de formao de glicose-6-fosfato em equilbrio com a taxa de utilizao e restabelecer o estado estacionrio. As isoenzimas diferentes hexocinase de fgado e no msculo reflete as diferentes funes desses rgos no metabolismo dos carboidratos: glicose consomida no musculo, utilizanda para a produo de energia, enquanto mantm a homeostase da glicose do fgado sangue atravs da remoo ou o fornecimento de glicose, dependendo da concentrao de glicose em vigor. A isoenzimas da

hexocinase predominante do fgado hexocinase IV (glicocinase), que difere em trs aspectos importantes do hexocinases I a III do msculo. Primeiro, a concentrao de glicose no qual hexocinase IV semi-saturada (cerca de 10 mm) maior que a concentrao usual de glicose no sangue. Porque um transportador de glicose eficiente em hepatcitos (GLUT2; ver Fig. 1131) rapidamente equilibra as concentraes de glicose no citosol e no sangue, o quilmetro elevado de hexocinase IV permite a sua regulao direta com o nvel de glicose no sangue. Quando a concentrao de glicose no sangue elevada, como aps uma refeio rica em carboidratos, o excesso de glicose transportada para os hepatcitos, onde hexocinase IV converte em glicose-6-fosfato. Porque hexocinase IV no est saturado em 10 mM de glicose, a sua atividade continua a aumentar medida que a concentrao de glicose sobe para 10 mm ou mais. Em segundo lugar, hexocinase IV est sujeita inibio da ligao reversvel de uma protena reguladora especfica para o fgado (Fig. 15-17). A ligao muito mais apertado, na presena do efetor alostrico frutose 6-fosfato. Glicose concorre com frutose 6-fosfato para a dissociao de ligao e as causas da protena reguladora da hexocinase IV, aliviando a inibio. Imediatamente aps uma refeio rica em carboidratos, quando a glicemia elevada, a glicose entra no hepatcito via GLUT2 e ativa a hexocinase IV por este mecanismo. Durante o jejum, quando a glicemia cai abaixo de 5 mM, frutose 6-fosfato provoca a inibio da hexoquinase IV pela protena reguladora, para que o fgado no compete com outros rgos para a glicose escassos. O mecanismo de inibio da protena reguladora interessante: a protena ncoras hexoquinase IV dentro do ncleo, onde separada da de outras enzimas da gliclise no citosol (Fig. 15-17). Quando a concentrao de glicose na clula aumenta, ele se equilibra com a glicose no ncleo de transportes atravs dos poros nucleares. A glicose faz com que a dissociao da protena reguladora, e hexoquinase IV entra no citosol e comea para fosforilar a glicose. Em terceiro lugar, hexoquinase IV no inibida pela glicose 6 - fosfato, e pode assim continuar a operar quando o acmulo de glicose-6-fosfato inibe completamente hexoquinases I-III.

Livro, pg. 578.

Regulao alostrica da PFK-1:

ATP no apenas um substrato para a PFK-1, mas tambm um produto final da via glicoltica. Quando os sinais de alta celular [ATP] que o ATP produzido mais rpido do que est sendo consumido, o ATP inibe a PFK-1 atravs da ligao a um stio alostrico e diminuindo a afinidade da enzima para a frutose 6-fosfato (Fig. 15-18). ADP e AMP, que aumento da concentrao, o consumo da produo de ATP ultrapassa, ato alostericamente para aliviar a inibio pelo ATP. Estes efeitos combinam para produzir a maior atividade da enzima quando ADP ou AMP acumula e menor atividade quando o ATP se acumula.

Gliconeogenese: -110 S ocorre no fgado. Aula 09/05/2011 Gliconeognese: Gliconeognese:

Gliconeognese vai ser via ativa no fgado quando a glicemia estiver baixa, no estado prolongado de jejum. Na glicemia baixa tambm h a gliclise para a quebra do glicognio. A Gliconeognese precisa de energia, pois ela gasta energia para acontecer. A glicemia vai ser importante, principalmente, nas situaes de jejum mais prolongado. O sinal de ativao da Gliconeognese vai ser o mesmo sinal de ativao da glicogenlise, como o estado de jejum, para que se aumente a glicemia. Porm, a Gliconeognese uma via que demora para ser ativada e demora para ser desativada. Gliconeognese uma via de ativao e desativao lenta. Ento, em situao de jejum curto, a glicogenlise primeiramente ativada, e a gliclise deste modo, a via predominante da liberao de glicose no sangue. A glicose liberada a partir da glicogenlise, e no a partir da Gliconeognese, no requerendo assim, no estagio inicial, de energia. No jejum mais prolongado, a Gliconeognese comea a ser ativado, e s nesse estgio de glicemia, que h gasto de energia. Com a Gliconeognese ativa e com jejum prolongado, o fgado usa outros compostos como fonte energtica, como por exemplo, os cidos graxos. Da utilizao dos cidos graxos, o fgado vai produzir ATP, para manter a Gliconeognese ativa, para se produzir glicose, para que ela seja liberada, e assim, manter a glicose para os tecidos que necessitam de energia para obter energia. A Gliconeognese um processo muito dispendioso de energia. O fgado consegue suprir essa energia gasta na Gliconeognese pela oxidao de cidos graxos. O ATP formado na oxidao de cidos graxos, mantm a Gliconeognese ativa nesse momento. O fgado gasta energia para produzir glicose, para que os outros tecidos possam utilizar essa glicose. Gliconeognese no jejum mais prolongado! Gasta ATP para acontecer. Mantm a glicemia. Gasta 6 ATP e forma oxida NADH para NAD+. Gliconeognese, parte 2:

Na Gliconeognese h uma substituio das enzimas da gliclise que so irreversveis. As trs enzimas regulatrias e irreversveis da gliclise so substitudas por quatro enzimas da Gliconeognese. Quando a Gliconeognese estiver ativa, a gliclise vai estar inativa. As enzimas que so da Gliconeognese vo estar mais ativas que as enzimas da gliclise, direcionando mais essa via, direcionando o fluxo energtico. A glicose-6-fosfatase substitui a Hexocinase, retirando o fosfato da glicose, liberando a mesma para a circulao sangunea, afim de regular a glicemia. O fgado s vai utilizar a Gliconeognese para exportar glicose, e no para us-la. A PFK-1 substituda pela frutose-1,6-bisfosfatase-1. Catalisa a reao inversa

da PFK-1. A piruvato cinase substituda pela piruvato carboxilase e pela PEP carboxicinase, que fazem a reao inversa da piruvato cinase. A primeira enzima converte piruvato em oxalocetato, e a segunda enzima converte oxalocetato em PEP. A enzimas exclusivas da via glicoltica e as enzimas exclusivas da Gliconeognese, vo ser reguladas de maneira oposta, pois so duas vias que no podem acontecer simultaneamente, evitando um ciclo ftil com desperdcio de energia.

Gliconeognese, parte 3: Pdf 11 Gliconeognese pg.4: Considerasse dois piruvatos para cada glicose formada na Gliconeognese, caracterizando uma reao dupla. De piruvato para 2 oxalocetato, a gasto de 2 molculas de ATP (gasto de energia). Da converso de oxalocetato convertido em PEP piruvato, onde h gasto de 2 GTP (ATP), gastando energia. GTP e ATP so inter-conversveis na clula. As duas primeiras reaes da Gliconeognese, so gastos 4 ATPs. mais dispendioso para a clula construir uma glicose. Gliconeognese gasta ATP para formar a glicose. H gasto de mais 2 ATP na reao de 7 com transformao de fosfoglicerato para 1,3-bifosfoglicerato. Na reao 6 h consumo de NADH e formao de NAD+. Na reao 1 no h gasto de ATP. Na gliclise h um rendimento de 2 ATP, e na Gliconeognese h gasto de 6 molculas de ATP para cada molcula de gliclise formada, mais NAD+ oxidado. A glicose formada pelo fgado e indo para outros tecidos, onde ela vai ser quebrada na via glicoltica, que nos outros tecidos vai estar ativa o estado de jejum. Quando essa glicose for quebrada pelos outros tecidos, ela vai gerar 2 ATP. Se gasta 6 ATP no fgado para se gerar 2 ATP nos outros tecidos. Os outros tecidos vo depender de glicose para gerar energia. O fgado sintetiza glicose para distribui-la para outros tecidos usarem e para a manuteno da glicemia a valores normais, e no para utilizao prpria. Deslocamento da reao por diferena de concentrao entre substrato e produto.

Gliclise

| Gliconeognese

| N da reao: | |

Hexocinase, glicocinase.

| Glicose-6-fosfatase. | Reao 1 | Reao 3 |

PFK-1. | Frutose-1,6-bifosfatase-1. Piruvato cinase.

| Piruvato carboxilase, PEP carboxicinase.

| Reao 10

Pdf 11 Gliconeognese pg.6: Gliconeognese: piruvato e lactato. Muitos compostos podem gerar glicose atravs da Gliconeognese. Nem todos vo estar na forma de piruvato. Mas piruvato e lactato podem entrar na gliconeogense e formar glicose.

Fase da Gliconeognese que acontece dentro da mitocndria:

A nica enzima que mitocondrial a piruvato carboxilase, a primeira enzima da via Gliconeognese. Ela no tem uma enzima correspondente no citosol. O piruvato entra na mitocndria, sofre ao da piruvato carboxilase, convertido em oxalacetato; o oxalacetato no permevel mitocndria; oxalcetato convertido a malato na mitocndria (pela mitocondrial malato desidrogenase); o malato permevel a membrana mitocondrial, e assim, consegue sair da mitocndria; no citosol, malato convertido a oxalocetato (pela citosol malato desidrogenase). O composto oxalacetato convertido a malato para poder sair da mitocndria. A segunda enzima PEP caboxicinase converte oxalocetato em PEP; PEP segue a via da Gliconeognese.

Oxalocetato malato: reao de reduo; coenzima utilizada o NADH, que oxidado a NAD+. Malato oxaloacetato: reao de oxidao. NAD+ vai ser reduzido a NADH. Piruvato: Se o piruvato estiver entrando na mitocndria, e essa via estiver ativa, o NADH que estava na mitocndria est sendo transferido para o citosol, pelo balano das reaes. Oxida NADH na mitocndria e reduz NADH no citosol. O malato carrega os eltrons do NADH para o citosol. O transporte do oxaloacetato na forma de malato, da mitocndria para o citosol, leva os eltrons para formar NADH para o citosol. Isso importante, porque quando a Gliconeognese comea do piruvato, a converso para malato, e ocorrncia da formao de NADH, faz com que a Gliconeognese consuma muito NADH. Na reao 6 da Gliconeognese h consumo de NADH, e essa transferncia do NADH da mitocndria para o citosol, repe o NADH consumido. Com o consumo do NADH, a via diminuiria a velocidade por falta de NADH. Uma das maneiras de se minimizar a perda de NADH o transporte de eltrons da mitocndria para o citosol, para a reduo de NAD+ para NADH. Malato para oxaloacetato, h formao de NADH, que vai ser consumido na reao 6 da via. a meneira que a clula encontra para manter a formao de NADH no citosol para manter a Gliconeognese. O NADH no permevel a mitocndria, no podendo sair da mitocndria e ir para o citosol; a mitocndria impermevel a NAD+ NADH.

Lactato: A Gliconeognese tambm pode vir do lactato. O lactato do citosol convertido a piruvato, para que o piruvato seja convertido na Gliconeognese. Na converso de lactato para piruvato, pela enzima lactato desidrogenase, h formao de NADH no citosol; lactato para piruvato uma reao de oxidao, e a coenzima NAD+ se reduz a NADH. Na reao de lactato para piruvato, j se tem formao de NADH no citosol. Piruvato entra na mitocndria, passa pela ao da enzima da piruvato carboxilase (enzima existente apenas na mitocndria), convertida em oxaloacetato; oxaloaceteto no pode sair livremente, mas no necessrio o transporte de NADH para o citosol, pois a converso de lactato para piruvato j reduz NAD+ para NADH no citosol. Ento, a enzima PEP carboxilase (que tambm tem uma isoforma na mitocndria) converte oxaloacetato em PEP, ainda na mitocndria, e o PEP sai da mitocndria, e segue a via da Gliconeognese. A Gliconeognese vai ter dois caminhos diferentes; vai

depender de qual o substrato da via. Como j se tem produo de NADH no citosol, no necessria o transporte de NADH mitocondrial para o citosol. A regulao pelo balano de NAD+ e NADH e a definio o substrato energtico da via.

Regulao das enzimas regulatrias da gliconeognese. --41---- Pdf 11 Gliconeognese pg. 7: Regulao: piruvato carboxilase: Piruvato carboxilase: Dois tipos de regulao, um exclusivo da Gliconeognese, e a outra uma regulao casada de glicose e Gliconeognese. Piruvato carboxilase a primeira (e exclusiva) enzima mitocondrial que catalisa a converso de piruvato para oxaloacetato. A enzima piruvato carboxilase ativada por acetil-coa. Observao: o acetil-coa vem da via da gliclise, onde a glicose convertida em piruvato; se o piruvato seguir uma via oxidativa, o piruvato pode ser convertido em acetil-coa, para depois entrar no ciclo de Krebs. O acetil-coa que entra no ciclo de Krebs, no necessariamente vem da via glicoltica, podendo vir tambm da degradao de cidos graxos. Na via glicoltica, Glicose convertida em acetil-coa (via oxidativo) ou lactato (via no oxidativo); o acetil-coa entra no Ciclo de Krebs e depois gera ATP. O acetil-coa pode advir dos cidos graxos. O acetil-coa advindo dos cidos graxos tambm entra no ciclo de Krebs para gerar ATP. O acetil-coa, que o composto convergente entre metabolismo de cidos graxos e de gliclise, vai ativar a enzima piruvato carboxilase (enzima da Gliconeognese), favorecendo a ativao da via Gliconeognese. E o acetil-coa tambm vai inibir a piruvato desidrogenase (enzima da gliclise oxidativa), inibindo a gliclise oxidativa. O acetil-coa desta regulao no advinda da via glicoltica, pois gliclise e Gliconeognese no vo estar ativas simultaneamente. O acetil-coa formado pela degradao de cidos graxos no fgado. Em um jejum mais prolongado, o fgado degrada em grande quantidade os cidos graxos e forma elevadas quantidades de acetil-coa. Essa elevada concentrao de aceti-coa, indicativo de que muitos cidos graxos esto sendo degradados porque o organismo se encontra em estado de jejum. Se est em estado de jejum, nesse momento que necessrio ativar a Gliconeognese, para se formar mais glicose disponvel para os tecidos. Ento o acetil-coa envia sinal para que a piruvato carboxilase da via Gliconeognese fique ativa. No acetil-coa da via glicoltica. A Gliconeognese vai ser ativada, quando o fgado estiver oxidando cidos graxos, e produzindo acetil-coa em grandes concentraes. O acetil-coa advindo da degradao de cidos graxos, alm de ativar a Gliconeognese, vai inibir, no fgado, a enzima piruvato desidrogenase, inibindo a converso de piruvato para acetil-coa, porque se o piruvato continua sendo convertido a acetil-coa, ele no pode mais entrar na Gliconeognese. O acetil-coa faz com que o piruvato no seja gasto, e sim convertido em glicose. Acetil-coa j se tem em grande quantidade na clula. Ento, o acetil-coa poupa o

piruvato, que um composto que pode gerar glicose, e simultaneamente, ativa a via da Gliconeognese. Todo esse processo acontece no fgado, e em estado de jejum.

--50---: Pdf 11 Gliconeognese pg. 8: Regulao gliclise e Gliconeognese: frutose-2,6-bisfosfato. 2 regulao da via glicoltica: No fgado. A via glicoltica e a via da Gliconeognese no vo estar ativas ao memo tempo. A frutose-2,6bifosfato, ao mesmo tempo ativa uma via e inibi a outra via. A frutose-2,6-bifosfato regula a reao 3. --52---

Frutose-2,6-bifosfato modulador alostrico da PFK-1 e da FBPase-1. Frutose-2,6-bifosfato no faz parte da via glicoltica e da Gliconeognese. Ela um composto externo as vias. A Frutose-2,6-bifosfato ativa a gliclise e inibi a Gliconeognese. A baixa concentrao deste composto, tem-se Gliconeognese e no se tem gliclise. A frutose-2,6-bifosfatase sofre modulao alostrica. A frutose-2,6-bifosfatase, quando presente em alta concentrao, ativa alostericamente a PFK-1 (enzima da via glicoltica) (que converte frutose-6-fosfato em frutose-1,6-bifosfato), e tambm inibi alostericamente a FBPase-1 (enzima da Gliconeognese) (que converte frutose-1,6-bifosfato em frutose-6fosfato), favorecendo a ativao da via glicoltica e a inibio da Gliconeognese.

A frutose-2,6-bifosfato vai ser formada pela ao da enzima PFK-2, que converte frutose-6fosfato em frutose-2,6-bifosfato. O acontecimento externo a via glicoltica; a frutose-6fosfato externo a via glicoltica. PFK-2 enzima externa as vias metablicas estudadas e produz o composto frutose-2,6-bifosfato que regula as duas vias, e modula alostericamente a PFK-1. -11--A PFK-2 tem na mesma protena, duas atividades catalticas diferentes. Ela possui dois stios ativos. A PFK-2 capaz de converter frutose-6-fosfato em frutose-2,6-bifosfato, favorecendo a gliclise e inibindo a Gliconeognese, porque frutose-2,6-bifosfato modulador alostrico positivo da PFK-1 e modulador alostrico negativo da enzima inversa na via da Gliconeognese.

A PFK-2 tambm capaz de remover o fosfato da frutose-2,6-bifosfato e formar glicose-6fosfato, ativando assim, a gliconeognese e inibindo a gliclise, porque se est diminuindo um ativador da gliclise e tambm diminuindo um inibidor da gliconeognese. Gliconeognese fica mais ativa. A enzima PFK-2 sofre modulao por modificao covalente por fosforilao. Quando a enzima estiver desforforilada, ela produz frutose-26-bifosfato, ativando a via glicoltica e inativa a gliconeognese. Quando a PFK-2 estiver fosforilada, ela consome frutose-26-bifosfato, favorecendo a gliconeognese e inibindo a gliclise. Gliconeognese ativa no fgado, quando se est em estado de jejum. Portanto:

Na diminuio da glicemia; Quando o individuo est em jejum, haver a liberao de glucagon; glucagon sinaliza para a clula a fosforilao da PFK-2; a PFK-2 fosforilada consome/degrada Frutose-26-bifosfato; Frutose-26-bifosfato fica diminuda sua concentrao celular; Frutose-26bifosfato modulador positivo da PFK-1 (gliclise) e modulador negativo da FBPase-1 (gliconeognese); h inibio da gliclise e maior ativao da gliconeognese. Jejum, ento, favorece a gliconeognese. No aumento da glicemia; Quando o individuo est no estado alimentado, haver a liberao de insulina; insulina sinaliza para a clula a desfosforilao da PFK-2; a PFK-2 desfosforilada produz Frutose-26-bifosfato; Frutose-26-bifosfato fica aumentada sua concentrao celular; Frutose-26-bifosfato modulador positivo da PFK-1 (gliclise) e modulador negativo da FBPase-1 (gliconeognese); h ativao da gliclise e inibio da gliconeognese. Estado alimentado, ento, favorece a gliclise.

Pdf 11 Gliconeognese pg.11: Interao entre tecidos: Ciclo de Cori. -112--No jejum inicial, a principal via para a liberao de glicose para o sangue vai ser a glicogenlise. A glicose vai ser usada pelo crebro, pelos eritrcitos e por outros tecidos. E se vai ter formao da gliconeognese a partir de lactato, de aminocidos e de glicerol. No jejum prolongado, j no se tem mais glicognese, e a partir desse momento, a gliconeognese passa a ser a principal fonte de glicose para manter a glicemia. Lactato, aminocidos e glicerol vo se converter em glicose; a glicose vai ser liberada, e principalmente essa glicose vai ser utilizada por crebro e eritrcitos. Os outros tecidos, no jejum prolongado, j passam a utilizar menos glicose, para se poupar essa glicose que est tendo um custo energtico para ser produzida. A gliconeognese vai ser importante quando se fala em ciclo de Cori.

Ciclo de Cori acontece no exerccio. Em exerccio anaerbico, msculo faz glicogenlise e, o msculo faz gliclise no oxidativa, liberando lactato. O fgado, neste momento, capta lactato e converte esse lactato em glicose atravs da gliconeognese, gastando ATP. Glicose formada no fgado enviada de volta a corrente sangunea. Essa glicose captada de novo pelo msculo que armazena em forma de glicognio. Ciclo de Cori uma cooperao entre tecidos. um momento que se vai ter via glicoltica e glicogenlise ativa no msculo, e no fgado vai se ter gliconeognese. No exerccio fsico, vai ser degradado muito glicognio muscular e tambm vai haver captao de glicose no sangue pelo msculo. Baixa-se a glicemia, e assim o fgado compensa fazendo gliconeognese e tambm quebrando seu prprio glicognio. Ciclo de Cori tambm acontece nos eritrcitos. Os eritrcitos, a todo instante, est quebrando glicose pela vi glicoltica e produzindo lactato. O fgado capta esse lactato, e pela gliconeognese forma glicose e liberar no sangue. Somente no estado alimentado, que o fgado ativa sua via glicoltica e a gliconeognese inibida.

Pdf 11 Gliconeognese pg. 13: Fgado: No estagio inicial, a glicogenlise vai suprir a glicose sangunea. Em um jejum mais prolongado, a gliconeognese a principal via que vai suprir os tecidos de glicose com a manuteno da glicemia. A gliconeognese ativada junto com a glicogenlise, porm a glicogenlise uma via de ativao rpida, ento ela supri o corpo de glicose em um momento inicial. E quando a glicose do sangue comea a cair, a gliconeognese assume um papel mais importante. As duas vias, portanto, podem estar ativas simultaneamente, mas a glicogenlise predomina em um jejum mais inicial, e a gliconeognese predomina em um jejum mais prolongado. Em jejum muito prolongado, a gliconeognese passa a ser a via exclusiva de fornecimento de glicose. No estagio inicial aps a ingesta, se tem trs fontes de fornecimento de glicose; a glicose ingerida propriamente dita; a glicogenlise; a gliconeognese.

Aula 11/05/2011: --06--Ciclo de Krebs (CK) e Cadeia de Transporte de Eltrons (CTE), Fosforilao Oxidativa (FO).

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| Glicognio | | | |

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| Glicognese | | | | | | | |

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| Glicogenlise | | | | | | | | | | | | | | | | | |

| Glicose | | | | |

| Gliconeognese | | c. Graxos | | | | | | | | | | | |

| Gliclise | | | | | | | | | | | | | | | | | | CTE

| Piruvato | |

| acetil-coa | | | CK | | | | |

| Lactato | | | |

| NADH | | FADH2

--12--CK e mitocndria: Mitocndria uma organela que est isolada do citoplasma, possui membrana externa e membrana interna. Matriz mitocndrial a parte de dentro. A parte entre as duas membranas o espao inter-membranas. A membrana interna mitocondrial menos permevel do que a membrana externa. Fato importante na CTE, porque esse fato cria dois compartimentos na membrana; a matriz e o espao inter-membranas. Ciclo de Krebs e a fosforilao oxidativa ocorrem na mitocndria. Mitocndria possui uma membrana pouco permevel. Isso compartimentaliza o CK e a FO.

Entra o acetil-coa (vindo da glicose ou dos cidos graxos, ou aminocidos) no ciclo de Krebs, e no CK h liberao de CO2 e saa de eltrons na forma de coenzimas reduzidas. NADH e FADH2 transportam eltrons para a CTE. Na CTE se forma ATP.

Reao de Piruvato acetil-coa:

Reao que no faz parte nem da gliclise e nem do CK. Reao isolada, mas necessria para o encadeamento das reaes. Reao de descarboxilao oxidativa. Piruvato de 3 carbonos perde-se um carbono, que vai ser liberado na forma de CO2; piruvato est sendo oxidado, e o NAD+ est sendo reduzido a NADH. Quem faz a catalise dessa reao o complexo enzimtico piruvato desidrogenase. A piruvato desidrogenase possui trs enzimas acopladas/associadas que exercem atividade dentro de uma mesma protena. Entra piruvato, entra coenzima A, entra NAD+, entra ATP, entra lipocidos, entra FAD, e liberado NADH, CO2. liberado acetil-coa.

Ciclo de Krebs ciclo do cido ctrico: Via que acontece em diferentes tipos de clulas e tecidos. * Respirao celular; * Todos os carbonos da glicose vo ser liberados na forma de CO2; acontece na via oxidativa uma oxidao completa da glicose; a glicose com 6 carbonos perde os 6 carbonos que tinha; rende-se assim, muito mais energia. * Somente saber as enzimas regulatria e sua funo. * Todas as enzimas regulatrias esto na matriz mitocondrial.

Reao 1: Acetil-coa na via mitocondrial; acetil-coa vai se condensar com uma molcula de oxaloaceteto, que vai ser catalizado pela enzima citrato cintase, convertendo esses dois substratos em uma molcula de citrato.

Reao 2: Citrato sofre ao da enzima aconitase, produzindo isocitrato.

Reao 3: Isocitrato sofre ao da isocitrato-desidrogenase, produzindo a-cetoglutarato. H liberao de um carbono na forma de CO2. Sobra 1 carbono para reduzir.

uma reao de oxidao, logo h reduo de coenzima NAD+ para NADH.

Reao 4: a-cetoglutarato sofre ao da enzima a-cetoglutarato desidrogenase, produzindo succinil-coa. Reao de oxidao, e o NAD+ vai ser a coenzima que vai se reduzir para NADH. Tambm h descarboxilao, liberando o carbono na forma de CO2. Os dois carbonos do acetil-coa j forma liberados. Todos os carbonos da glicose, nesse momento, j foram oxidados e liberados na forma de CO2. Falta agora, produzir energia.

Reao 5: Succinil-coa sofre ao da enzima succinil-coa-sintetase, produzindo succinato. Reao que forma uma molcula de GTP (ATP).

Reao 6: Succinato sofre ao da enzima succinato-desidrogenase, produzindo fumarato. Reao de oxidao. H a reduo de FAD para FADH2. A succinato-desidrogenase a nica enzima que est inserida na membrana interna da mitocndria.

Reao 7: Fumarato sofre ao da enzima fumarase, convertendo-se em malato.

Reao 8: Malato sofre ao da enzima malato-desidrogenase, produzindo oxalacetato. Reao de oxidao. H reduo de NAD+ para NADH.

Balano do Ciclo de Krebs:

Glicose totalmente oxidada at CO2; todos os carbonos da glicose foram liberados na forma de CO2; Produo de um GTP (ATP), mas no em quantidade maior de produo de energia produzida pela via glicoltica; Sntese de ATP a nvel de substrato. No no CK que se produz muito ATP. Formao de coenzimas reduzidas.

Balano 2 do Ciclo de Krebs, simplificado: Reduo de coenzimas (3 NADH e um FADH2); Liberao de CO2; Produo de um GTP (ATP). Produtos: = (3 NADH; 1 FADH2; 2 CO2; 1 ATP) X 2 molculas de glicose. Objetivo do CK: ter coenzimas reduzidas.

As coenzimas reduzidas no CK vo ser as responsveis por levar os eltrons oriundos da glicose ou dos cidos graxos/acetil-coa para a CTE. Na CTE vai se formar ATP. A oxidao da glicose vai se dar em grande parte no CK, e a produo de ATP vai se dar na CTE.

Regulao das enzimas do CK, todas por modulao alostrica.

Piruvato desidrogenase:

Modulao positiva: A piruvato desidrogenase uma enzima regulada. No faz parte do CK. A piruvato desidrogenase forma acetil-coa e abastece o CK. Enzima que sofre modulao alostrica positiva e negativa. A modulao negativa que inibi a enzima realizada pelo ATP, acetil-coa (produzido a partir dos cidos graxos), NADH e cidos graxos. Com ATP e NADH, h indicao que a clula est com estado energtico satisfatrio. Se tem bastante NADH e pouco NAD+, no pode continuar oxidando piruvato a acetil-coa, para que se forme mais NADH.

No fgado; No estado de jejum, h mobilizao dos cidos graxos, porque a glicemia tem que ser controlada pela glicogenlise ativa e pela gliconeognese ativa. Portanto, se j est difcil de se obter glicose, no convm que o piruvato seja convertido em acetil-coa, porque impede a continuao da via gliconeognese, pelo favorecimento da via glicoltica oxidativa. O piruvato poderia entrar na via da gliconeognese. Ento, os cidos graxos, com glicose baixa e no estado de jejum, inibi a piruvato desidrogenase para favorecer a entrada do piruvato na gliconeognese. cidos graxos em alta concentrao evita o desperdcio de piruvato.

Piruvato desidrogenase modulao... | Negativa (inibio): ATP; | AMP; | | Coenzima A; | | | Positiva (ativao):

| |

Acetil-coa;

NADH; | NAD+;

cidos Graxos | Clcio (Ca+) |

Modulao negativa: ADP elevado na clula indica um estado energtico baixo, indicando que necessria a produo de ATP atravs da continuao da via oxidativa. NAD+ elevada, porque existe poucas coenzimas reduzidas a NADH, ento a converso de piruvato a acetil-coa, produz mais NADH. O clcio principalmente importante no msculo, que durante o exerccio, libera clcio; e durante o exerccio necessrio ATP que vai ser produzido pela continuao da via oxidativa, direcionando o piruvato (produzindo pela gliclise) para o CK.

CK; enzimas reguladas: CK; enzimas reguladas: | Citrato cintase. | Reao 1. Isocitrato-desidrogenase. | | | Reao 3. | |

a-cetoglutarato desidrogenase.

| Reao 4.

Citrato cintase:

Citrato cintase modulao... | Negativa (inibio): NADH; | ADP. | Succinil-coa; Citrato; ATP. | | | | | |

| |

| Positiva (ativao):

Modulao negativa: NADH produto do ciclo, e se tem elevado a concentrao de NADH, no h necessidade de ativar o CK para produo de NADH. Elevadas concentraes de NADH indicam que essa coenzima est elevada na forma reduzida e no est sendo oxidada. No ATP, segue o mesmo raciocnio. Elevados nveis de ATP, indicam que a clula possui muito ATP e no se est gastando esse ATP. E assim no h necessidade de continuao da via oxidativa para a produo de ATP. O citrato produto da enzima, e elevadas concentraes, no h necessidade de se produzir mais.

Modulao positiva: ADP em alta concentrao, mostra que se tem pouco ATP, e assim, h necessidade de se produzir mais ATP pela continuao da via oxidativa.

Isocitrato-desidrogenase: Isocitrato-desidrogenase modulao... Negativa (inibio): ATP | ADP. | | Clcio. | | | | | | Positiva (ativao): | | |

Modulao negativa:

ATP inibe pelo mesmo motivo da regulao da citrato cintase.

Modulao positiva: Clcio necessrio para a contrao muscular. Contrao muscular necessita de ATP. Se concentrao de clcio est elevada, porque necessrio mais ATP.

A-cetoglutarato desidrogenase. A-cetoglutarato desidrogenase modulao Negativa (inibio): Succinil-coa; | | Positiva (ativao): | | | | |

NADH; | Clcio. | | | |

Motivos j apresentados.

CK uma via central do metabolismo. Muitas vezes os intermedirios so usados para sintetizar outros compostos, em algumas fases de necessidade. Mas se os intermedirios sintetizam outros compostos, eles no vo estar mais presentes para entrar no CK. Exemplo, fgado, no estado de jejum. Est acontecendo gliconeognese. O piruvato entra na mitocndria, convertido em oxalacetato na via da gliconeognese, e acaba saindo na forma de malato da mitocndria. Mas dentro da mitocndria, j se possui oxalacetato. O oxalacetato j presente na matriz, pode ser desviado do CK para a produo de glicose na gliconeognese, pois oxalacetato intermedirio desta via. Ento h um desvio do oxalacetato do CK para a gliconeognese. Mas quando voltar o estado alimentado, haver a necessidade de repor o oxalacetato. Se h um desvio do intermedirio do CK, uma hora ele deve ser reposto, para que o CK continue sua atividade em momentos necessrios. As reaes que repe intermedirios do CK, so denominadas reaes anaplerticas. Reaes anaplerticas: reaes que repe e aumenta as concentraes dos intermedirios do ciclo de Krebs, porque esses intermedirios se deslocam para outras vias.

4 reaes anaplerticas: Piruvato oxalacetato; enzima piruvato carboxilase.

PEP oxalacetato; enzima: ?

CTE e FO: -107--Todas as coenzimas reduzidas esto sendo produzidas na matriz mitocondrial. A CTE uma cadeia composta por quatro complexos proteicos (I, II, III, IV) e mais Enzima ATP cintase. Todos os complexos proteicos e a enzima ATP cintase vo estar na membrana interna mitocondrial. Agentes encolvidos: Complexos proteicos (4); Coenzima Q; Citocromo C; ATP cintase; Coenzimas NADH e FADH; Oxignio.

-110--Na matriz mitocondrial, ocorre CK e a consequente produo de coenzimas reduzidas. A membrana interna mitocondrial onde esto todos os complexos proteicos da CTE, tem contato com a matriz mitocondrial. Espao intermembranas; Membrana externa mitocondrial; Citosol e membrana plasmtica.

Transferncia de eltrons: NADH complexo 1 bombeia prtons coenzima Q complexo 3 bombeia prtons Citocromo C complexo 4 bombeia prtons O2. FADH2 complexo 2 == Prtons no espao intermembrana ATP cintase produo de ATP.

Os NADH (3) produzido no CK, doa os eltrons recebidos para o complexo 1 e convertido em NAD+. O complexo 1 fica reduzido. Dentro do complexo 1, os eltrons vo sendo transferido dentro das protenas do prprio complexo; e a medida que ocorre esse acontecimento, a energia desse transporte de eltrons, o complexo 1 consegue bombear prtons da matriz para o espao intermembranas. O bombeamento realizado por transportadores, j que as membranas so impermeveis a prtons. O complexo 1 fica reduzido depois desse processo. O complexo 1 transfere esse eltrons para a coenzima Q. A coenzima Q uma coenzima lipossolvel, o que permite ela se movimentar na membrana interna mitocondrial. A coenzima Q vai at o complexo 1, pega os eltrons do complexo 1, fica reduzida, e depois leva os eltrons do complexo para o complexo 3. A coenzima Q libera os eltrons para o complexo 3, e a coenzima Q volta a ficar oxidado. O complexo 2 independente; o complexo 2 aceita eltrons do FADH2 e no do NADH. O FADH2 fica acoplado na enzima succinato desidrogenase do CK. A succinato desidrogenato est presa no complexo 2 da CTE. Ento o FADH2, fica prximo ao complexo 2, e j libera seus eltrons para o complexo 2. O complexo 2 recebe os eltrons do FADH2 e j se reduz. Complexo 2 tambm transfere seus eltrons para a coenzima Q, que vo ser transferidos para o complexo 3. O complexo 3 livre para movimentar-se na superfcie externa da membrana. O complexo 3 reduzido, tem reaes de transferncia d eltrons, bombeia prtons da matriz para o espao intermembranas; e transfere seu eltrons para o citocromo C. O citocromo C se desloca at o complexo 4, e transfere seus eltrons para o complexo 4. O complexo 4 se reduz. Complexo 4 bombeia prtons da matriz para o espao intermembrana. O aceptor final de eltrons na CTE o oxignio. O Oxignio recebe os eltrons do complexo 4, reduzido, e convertido em gua. A gua finalmente liberada. Oxignio o aceptor final de eltrons. necessrio respirar para a obteno de oxignio, e a consequente continuao da CTE. Se no tiver oxignio, os eltrons do complexo 4 no vo ter para onde ir; o complexo 4 fica reduzido; impedindo o encadeamento da CTE.

Balano da CTE: Oxidao das coenzimas NADH e FADH2; Consumo de oxignio; Liberao de gua; Acmulo de prtons no espao intermembrana para a posterior sntese de ATP. Sntese de ATP.

O acumulo de prtons no espao intermembrana vai formar um gradiente eletroqumico. Os prtons iro tentar voltar para a matriz por diferena de concentrao; porm a membrana interna mitocondrial impermevel a prtons; a enzima ATP cintase uma enzima que sintetiza ATP e tambm canal de prtons. Os prtons do espao intermembrana iro passar por diferena de concentrao pela ATP cintase; e nessa passagem, h gerao de energia necessria para converter ADP e fosfato inorgnico em ATP. A sntese de ATP est intimamente ligada ao gradiente de prtons. Enquanto o CK est ativo, haver gradiente de prtons, favorecendo a formao de ATP.

Correes +contedo ultima aula + reviso.

Protenas desacopladoras: Protenas desacopladas, termogeninas, UCPs. Protenas desacopladas na fase de bombeamento de prtons e sntese de ATP. Protenas desacopladas so canais de prtons, que fornecem um caminho alternativo para a passagem de prtons do espao intermembrana para a matriz mitocondrial, sem que os

mesmos prtons passem pela ATP cintase, e assim no se produz ATP. A energia da passagem dos prtons pela termogenina vai ser dissipada na forma de calor. Com a diminuio do gradiente de prtons, h a menor produo de ATP. altamente expresso no tecido adiposo marrom, em animais que hibernam e necessitam manter a temperatura corporal na hibernao no frio.