Sistemas de Endomembranas e o Transporte Celular

Prof. Luiz Henrique Garcia Pereira

Introduo
As clulas eucariticas so compartimentalizadas

Compartimento com funes especficas

Carioteca

Diviso de tarefas

Especificidade e Complexidade

Eficincia

Introduo
As clulas eucariticas possuem uma rede complexa de processos bioqumicos para seu funcionamento e manuteno

Membranas

Citosol

Sistema de Endomembranas

rea de membrana

Criam compartimentos isolados

Composio qumica especializada

Introduo
Compartimentalizao Sistema de endomembranas

Organelas citoplasmticas

Organelas Celulares
Ncleo Guarda o genoma Citosol Metade do volume da clula Retculo Endoplasmtico (RE) Sntese, modificao (dobramento e glicosilao) e transporte de protenas (RER) e lipdeos (REL) sntese e degradao de protenas sntese de DNA e RNA

Organelas Celulares
Complexo de Golgi Modificao (etapa final da produo de molculas) e transporte de protenas e lipdeos Lisossomos Digesto intracelular degradao de macromolculas e partculas englobadas pela clula Peroxissomos Vesculas envolvidas em reaes oxidativas

Organelas Celulares
Mitocndrias

Respirao celular

produo de energia (ATP)

Cloroplastos

Fotossntese produo de energia (NADPH e ATP) e sntese de acares (energia)

Organelas Celulares
Volumes relativos ocupados pelos principais compartimentos intracelulares em uma clula do fgado (hepatcito)

Organelas Celulares

Organelas Celulares
Origem e Evoluo

Mitocndrias e Cloroplastos

Organismos procariontes de vida livre

Endossimbiose

Organelas Celulares
Origem e Evoluo

Ncleo; Retculo Endoplasmtico; Complexo de Golgi. Lisossomos; Peroxissomos

Invaginao e dobramento da membrana plasmtica

especializao

Organelas Celulares
Organelas

Especializao

Conjunto de molculas especficas

Complexidade

Nmero e pos de produtos bioqumicos

1 clula animal

10 bilhes de molculas de 10 mil tipos diferentes sntese comea no citosol

> Das molculas

COMO AS MOLCULAS CHEGAM AO SEU DESTINO?

Sistema de endereamento e transporte celular

Clula ncleo
RER Golgi
Ncleo Fora Golgi REL Fora Ncleo REL Fora Fora Fora Golgi Ncleo Ncleo Golgi REL Golgi REL Golgi

Ncleo

Transporte Intracelular
Mecanismos de transporte Celular A sntese de todas as protenas comeam nos ribossomos no citosol Do citosol as protenas devem ser direcionadas aos seus destinos finais

Transporte Intracelular
Mecanismos de transporte Celular

3 mecanismos
Transporte mediado entre citosol e ncleo mediado pelos complexos de poro nuclear (NPC) Transporte transmembrana ocorre por meio de protenas translocadoras transmembrana Transporte vesicular ocorre por meio de vesculas formadas por um compartimento/organela que se funde a outro compartimento/organela entregando as molculas transportadas

Transporte Intracelular
Sistema de endereamento
As protenas possuem uma pequena sequncia de aminocidos (a.a.) em sua composio (15 a 60) que funcionam como sinais de endereamento especficos para cada destino. SEQUNCIAS-SINAL OU REGIO-SINAL Maioria localiza-se no incio do polipeptdeo Maioria eliminada por uma enzima peptidase-sinal assim que seu transporte finalizado Protenas receptoras de endereamento reconhecem as sequnciassinal e direcionam o polipeptdeo ao seu destino Protenas que devem ficar no citosol NO possuem sequnciassinal

Transporte Intracelular
Sequncias-Sinal

Transporte Citosol-Ncleo
TRANSPORTE MEDIADO
Trfego intenso e continuo de molculas entre ncleo e o citosol

Ncleo exporta para o citosol RNA (mensageiro, transportador)

Ncleo importa do citosol histonas, DNA e RNA-polimerases, preotenas reguladoras de genes e de processamento do RNA

Transporte Citosol-Ncleo
Estrutura nuclear
Membrana nuclear = envelope nuclear = carioteca 2 membranas (interna e externa) Contnua com o Retculo endoplasmtico Barreira seletiva entrada e sada de molculas

Transporte Citosol-Ncleo
Transporte mediado pelo Complexo de poro nuclear (NPC) Formados por ~30 protenas Atravessam o envelope nuclear formando grandes poros Ncleo 4 a 5 mil NPC

Transporte fluxo bidirecional 500 molculas por segundo

Transporte Citosol-Ncleo
Pequenas molculas passam passivamente pelos NPCs (at 5 mil dltons)

Grandes macromolculas s podem passar ativamente

Protenas fibrilares do centro do NPC forma um emaranhado (rede) que atuam como regio de seletividade

Transporte Citosol-Ncleo
O transporte de macromolculas

Sinal de localizao nuclear

Receptores de importao nuclear

Pode estar localizado em qualquer parte da protena No eliminado aps transporte Gasto de energia

Protenas citoslicas que possuem um domnio de reconhecimento do sinal de localizao nuclear e outro domnio de interao com o poro nuclear

Interagem com as fibrilas do NPC

GTP

Ran-GTP

Transporte Citosol-Ncleo
Ligao dos receptores de importao nuclear regio do sinal de localizao nuclear da protena a ser transporta

Pode requerer protenas adaptadoras

ligao receptor-sinal

Transporte Citosol-Ncleo
Fonte de energia para o transporte Fonte de energia Direcionalidade do transporte Ran-GDP Ran-GTP CITOSOL NCLEO Ran-GTP

Participao de enzimas que convertem Ran-GDP RanGTP (Ran-GEF) e RanGTP Ran-GDP (Ran-GAP) Ran-GDP tem seu prprio receptor de importao nuclear

Transporte Citosol-Ncleo

Transporte Citosol-Ncleo
Exportao Nuclear

Sinais de exportao nuclear Receptores de exportao nuclear Dependentes de Ran-GTP

Transporte para Mitocndria

TRANSPORTE TRANSMEMBRANA
Mecanismo bsico protena sequncias-sinal + translocadores de

Diferentes sequncias-sinal dependente do destino final da protena matriz, espao intermembranas, membrana externa ou membrana interna Protenas so produzidas no citosol e transportadas desenoveladas (sem sua estrutura tridimensional (terciria) para a mitocndria facilita o transporte Protenas chamadas CHAPERONAS atuam no enovelamento das protenas

Transporte para Mitocndria

Sequncias-sinal

Reconhecimento pela sequncia de aminocidos

Reconhecimento pela estrutura em -hlice

Transporte para Mitocndria

Translocadores de membrana
Sequncias-sinal interagem com poro receptora dos translocadores Complexo TOM membrana externa insere a protena no espao intermembranas e/ou na membrana externa Complexo SAM membrana externa insere a protena no espao intermembranas e/ou membrana externa Complexo TIM membrana interna insere a protena no espao intermembranas e/ou membrana interna Complexo OXA membrana interna na membrana interna insere protenas da matriz

Transporte para Mitocndria

Translocadores de membrana

Transporte para Mitocndria

Os translocadores de membrana trabalham em conjunto A sequncia-sinal eliminada por uma peptidase de sinal quando a protena atinge o destino final Obs.: apenas a sequncia-sinal inicial Chaperonas mitocondriais enovelam as protenas transportadas

Transporte para Mitocndria

O transporte transmembrana envolve gasto de energia

ATP

Potencial eletroqumico de H+

(o mesmo da cadeia respiratria)

Transporte para Mitocndria

Sequncias-sinal adicionais indicam o destino final da protena na mitocndria

Transporte para Cloroplasto

TRANSPORTE TRANSMEMBRANA
Mecanismo bsico protena sequncias-sinal + translocadores de

Diferentes sequncias-sinal dependente do destino final da protena estroma, espao intermembranas, membrana externa, membrana interna, membrana tilacide ou espao intratilacide Protenas so produzidas no citosol e transportadas desenoveladas (sem sua estrutura tridimensional (terciria) para o cloroplasto facilita o transporte CHAPERONAS atuam no enovelamento das protenas

Transporte para Cloroplasto

Fonte de energia ATP e GTP

Sequncia-sinal adicional direciona o protena para o espao tilacoidal sinal exposto aps exciso da sequncia-sinal inicial no estroma

Transporte para Peroxissomo

Peroxissomos so organelas vesiculares especilizadas em promover reaes de oxidao usando oxignio molecular Produzem perxido de hidrognio H2O2 que so utilizados em outras reaes

Desintoxicao em clulas do fgado e rim fenis, cido frmico, etc

etanol,

Quebra de molculas de cido graxo em Acetil-CoA Oxidao Transporte sequncia-sinal curta (Ser-Lys-Leu); receptores citoslicos; translocadores de membrana

Transporte para Retculo Endoplasmtico

RE se organiza em um labirinto de tbulos ramificados e vesculas que se estendem por todo citosol A membrana do RE contnua membrana externa do ncleo Possui um espao interno do RE lmen

Principais funes biossntese de protenas e lipdeos e armazenamento de Ca2+ A membrana do RE contnua membrana externa do ncleo

Transporte para Retculo Endoplasmtico

O RE dividido em Retculo Endoplasmtico Rugoso (RER) e Retculo Endoplasmtico Liso (REL) RER biossntese e transporte de protenas REL biossntese e transporte de lipdeos e armazenamento de Ca2+ RE produo de todas as protenas transmembrana e lipdeos para maioria das organelas RE, complexo de Golgi, lisossomos, endossomos, vesculas secretoras e membrana plasmtica Todas as protenas destinas ao Complexo de Golgi, lisossomos e a serem secretadas para o exterior da clula passam pelo RE

Transporte para Retculo Endoplasmtico

O transporte para o RE dito cotraducional
As protenas comeam a ser transferidas antes de sua sntese estar completa pelo ribossomo Incio da protena comea a ser transportada ainda acoplada ao ribossomo RER

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Mecanismo de transporte

Transporte Transmembrana Sequncia-sinal + partcula de reconhecimento de sinal (citosol) + receptor de membrana no RE + translocador de membrana

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Mecanismo de transporte A traduo sofre uma pausa quando a SRP se liga cadeia nascente da protena A traduo continua quando a protena se encontra ligada ao translocador no RE traduo e transferncia simultnea

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Mecanismo de transporte

Um nico mRNA pode ser traduzido simultaneamente por diversos ribossomos cujas protenas so transportadas para o RE

Transporte para Retculo Endoplasmtico

A sequncia-sinal normalmente eliminada aps a transferncia da protena por uma peptidase de sinal

Chaperonas presentes no lmen do RE enovelam as protenas

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Protenas que devem ser inseridas na membrana do RE possuem sequncias-sinal adicionais Essas protenas podem pertencem membrana do RE ou serem transportadas posteriormente para fazer parte da membrana de outras organelas Essas sequncias-sinal se comportam com sinais de incio e parada da transferncia

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Protenas com mltiplas passagens na membrana possuem uma combinao de sequncias-sinal e de parada

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Outras funes do RE
Modificao das protenas Glicosilao adio de oligossacardeos (acares)

Metade das protenas so glicoprotenas

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Outras funes do RE
Produo de Lipdeos

A maioria das bicamadas lipdicas montada no REL e colesterol

Ex.: fosfolipdios

A sntese realizada por protenas de membrana localizadas na face citoslica do RE que usam cidos graxo precursores presentes no citosol

A produo de novos lipdeos ocorre exclusivamente na face citoslica do RE

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Outras funes do RE
Produo de Lipdeos

Transporte para Retculo Endoplasmtico

Outras funes do RE
Produo de Lipdeos

Um translocador de lipdeos denominado embaralhador (Scramblase) medeia o movimento de flip-flop transferindo parte dos lipdios recm-sintetizados para camada da membrana do RE voltada para o lmen estabelecendo um equilbrio na distribuio dos lipdios entre as camadas

Transporte Vesicular
Medeia uma troca contnua de componentes entre os mais diversos compartimentos celulares Ocorre atravs da continua formao de vesculas carregadas de molculas de uma organela doadora seguida de sua fuso em uma organela receptora com consequente liberao do contedo

Transporte Vesicular

Como as vesculas se formam e selecionam apenas as molculas que devem ser transportadas?

Como essas vesculas reconhecem e chegam ao destino final?

Transporte Vesicular

Transporte Vesicular
A membrana de cada organela possui uma constituio nica e especfica Possuem marcadores de membrana fosfolipdios, protenas, glicolipdios e glicoprotenas especficas expostos na superfcie da membrana que combinados funcionam como um endereo molecular Protenas de revestimento auxiliam na formao das vesculas e seleo das molculas em cada vescula

Transporte Vesicular
Existem diversas protenas de revestimento 2 funes principais: Seleciona e concentra as molculas a serem transportadas Modelam e formam a vescula de transporte circulares, tubulares ou irregulares

Transporte Vesicular
3 classes principais bem conhecidas: Clatrina Transporte Complexo de Golgi Membrana plasmtica (passando pelos lisossomos se necessrio) COPI COPII Transporte entre cisternas do Golgi Transporte Complexo de Golgi RE

Transporte Vesicular
Seleo de molculas e formao das vesculas Protenas de revestimento formam a estrutura de revestimento

Protenas adaptadoras se ligam ao revestimento de clatrina e receptores especficos da membrana (incluindo receptores de carga) Receptores de carga protenas transmembranas com afinidade pelas molculas que sero transportadas
Clatrina Clatrina Adaptador Adaptador Receptor de carga Molcula-carga

Receptor de carga

Molcula-carga

Transporte Vesicular
Seleo de molculas e formao das vesculas

Transporte Vesicular
Seleo de molculas e formao das vesculas Liberao das vesculas e remoo da capa proteica (clatrina) Dinamina responsvel pelo estrangulamento e liberao da vescula da organela doadora participam diversas outra protenas acessrias

Transporte Vesicular
Seleo de molculas e formao das vesculas Liberao das vesculas e remoo da capa proteica (clatrina) Aps liberao o capa proteica desmontada Expe os marcadores de membrana organela-alvo reconhecimento vescula

Transporte Vesicular
Controle da montagem e desmontagem dos revestimentos proteicos GTPases recrutadoras de revestimento Protenas denominadas Arf e Sar1 Ligadas a GTP Ligadas a GDP formao da capa proteica Desmontagem da capa proteica

Transporte Vesicular
Transporte e entrega de vesculas ao destino final Reconhecimento assegurado pelas molculas marcadoras na superfcie da membrana da vescula Molculas interagem com molculas marcadoras especficas na membrana da organela-alvo Molculas marcadoras molcula-carga informao de origem, destino e tipo de

Participam de diversas protenas

Aprisionamento

Ancoramento

Fuso das membranas

Transporte Vesicular
Transporte e entrega de vesculas ao destino final 2 famlias de protenas principais: Rab reconhecem os marcadores de membrana e direcionam as vesculas ao destino trilhos de actina e microtbulos Rab interagem com protenas filamentosas de aprisionamento

Rab podem estar no estado ligado (ligado a GTP) ou inativo (ligado a GDP)

Transporte Vesicular
Transporte e entrega de vesculas ao destino final 2 famlias de protenas principais: SNARE promovem o ancoramento e auxiliam na fuso das membranas das vescula-organela-destino v-SNARE ligadas as vesculas

t-SNARE ligadas membranas-alvo

as

35 tipos de especificidade

SNARE

Transporte Vesicular
Transporte e entrega de vesculas ao destino final SNARE

Ancoramento Aproximao Expulso da H2O Fuso

Transporte Vesicular
Os vrus utilizam mecanismos semelhantes para entrar nas clulas-alvo