REFRACTOMETRO Cuando un rayo de luz pasa de un medio a otro de distinta naturaleza (por ejemplo del aire al agua) sufre

una desviacin. Este es el motivo por el que una cuchara introducida parcialmente en un vaso con agua, se ve torcida. Tcnicamente, el ndice de refraccin, en un determinado medio, se define como la relacin entre la velocidad de la luz en el vaco y la velocidad de la luz en el medio: n = c / v, donde c, es la velocidad de la luz en el vaco (3x108 m/s) y v, la velocidad de la luz en el medio, por ejemplo agua. Al tratarse de una relacin, el ndice de refraccin no tiene unidades y el mnimo valor que puede tomar es 1, porque la luz no se puede mover en ningn medio ms rpido que en el vaco. La medida del ndice de refraccin permite determinar la concentracin de disoluciones acuosas. Este procedimiento analtico se utiliza, adems de en anlisis clnicos, en procesos de control de calidad para determinar de forma fcil y rpida, por ejemplo, la concentracin de azcar en zumos. El refractmetro es el aparato que se utiliza para determinar ndices de refraccin. El ms empleado en el laboratorio es el refractmetro de Abbe. En este caso (acondicionamiento de durazno) mide la concentracin de azcar en 100 gr de muestra. Su uso es sencillo: con solo unas gotas de la mermelada sobre el prisma del refractmetro, se obtiene los grados brix de la muestra.

USO DEL REFRACTOMETRO (acondicionamiento del durazno): El refractmetro es un aparato ptico muy delicado y por tanto habr que tomar algunas precauciones a la hora de manejarlo. Cuando se deposita la muestra sobre el prisma de refraccin hay que tener cuidado de no rayarlo. Para ello, conviene utilizar una pipeta de plstico. Si no se dispone de una, y se utiliza una de vidrio, hay que evitar todo contacto entre sta y el prisma. Antes de comenzar, el refractmetro debe estar limpio y calibrado.

La muestra se deposita sobre el prisma de refraccin de manera que forme una pelcula uniforme y sin burbujas de aire. Se cierra, asegurndolo, con el mando de cierre. Con el mando de ajuste de la dispersin, hay que conseguir que se vea una lnea de horizonte completamente ntida. Con el mando de enfoque, situar la lnea horizonte en el centro de la cruz de ajuste. En ese momento, se efecta la lectura. Entre lectura y lectura, se limpiar, tanto el prisma de refraccin como el de incidencia, primero con agua y despus con una mezcla de alcohol-acetona, utilizando un algodn o pao adecuado. Cuando se termine de trabajar, se guardar con una tira de papel de filtro colocada entre ambos prismas El acondicionamiento empieza desde la seleccin del alimento (muestra), que en este caso va ser mermelada de durazno 1 ETAPA : SELECCIN Se inicia con la seleccin de los duraznos, los cuales debern estar maduros para que desarrollen al mximo sus caractersticas de aroma y sabor. No es recomendable emplear frutas sobre maduras aunque no es condicin limitante, siempre y cuando estn en una proporcin armnica. 2 ETAPA : LAVADO Una vez seleccionados los duraznos que se van a utilizar se sumergen en agua con lavandina (3 gotas por litro de agua) y se mantienen en remojo durante por lo menos 30 minutos. Luego se lavan bien con agua potable. 3 ETAPA : PELADO Para una pequea escala, el pelado se puede realizar manualmente, pero a un nivel un poco mayor, habra que pensar en otro tipo de pelado. 4 ETAPA : CORTADO Una vez que los duraznos estn limpios y pelados, se cortan en trozos de igual tamao y se les saca el carozo. Hay que tener en cuenta que los utensilios deben ser de ACERO INOXIDABLE y las tablas de plstico ya que stos sern sumergidos en lavandina. Desde esta etapa, las reas de trabajo no deben necesariamente estar separadas unas de otras sino que cada espacio puede estar uno a continuacin del otro. Esto evita que se produzcan cruces de materiales e insumos. 5 ETAPA : PESADO Pesar todos los ingredientes slidos y medir los lquidos utilizando balanza y recipiente con escala de medidas respectivamente. El pesado no debe realizarse por aproximacin ni utilizando medidas como la pizca, el puado, etc. Esta etapa es importante para mantener la calidad constante del producto.

6 ETAPA : COCCION Los duraznos cortados y descarozados se colocan junto con el azcar y el limn en una olla. Se lleva al fuego. Se calienta hasta que rompa el hervor y luego se baja el fuego al mnimo, manteniendo una ebullicin suave pero constante y revolviendo permanentemente hasta que se obtenga la consistencia adecuada. El punto final se deber confirmar con el refractmetro: Utilizando una cuchara, se extrae un poco de muestra de mermelada, se deja enfriar a temperatura ambiente y se coloca en el refractmetro, se cierra y se procede a medir. El punto final de la mermelada ser cuando marque entre 65 y 67 grados Brix de concentracin (para una mermelada casera), momento en el cual se deber detener la coccin. La medicin de grados Brix refleja el porcentaje en peso de azcares en la mermelada.

POLARIMETRO: Muchas sustancias qumicas, especialmente las bioqumicas, son pticamente activas. Giran el plano de polarizacin de la luz polarizada que las atraviesa. La direccin de giro y el ngulo de giro especfico son magnitudes caractersticas de una sustancia o una solucin. Su medicin se efecta con polarmetros. La polarimetra es una tcnica de alto rendimiento para el anlisis de lquidos pticamente activos, como, por ejemplo, las soluciones azucaradas, el cido lctico o el cido tartrico. La medicin del ngulo de giro de la luz con polarizacin lineal al atravesar una sustancia pticamente activa pertenece al repertorio estndar de las prcticas de laboratorio qumicas, bioqumicas y farmacuticas. Estas ofrecen informacin valiosa acerca de la estructura qumica y la concentracin de una prueba. FUNCIONAMIENTO Los polarmetros clsicos funcionan de forma manual. La claridad de la luz polarizada y girada se valorar a ojo y el resultado se leer en una escala. El uso de un polarmetro manual requiere que el operario tenga experiencia, que est cualificado y exige un cierto periodo de tiempo. La luz introducida es polarizada en un plano determinado mediante el polarizador y luego se hace pasar a travs de la disolucin de la sustancia que se pretende analizar. A continuacin, esta luz pasa por un nuevo polarizador que deber estar colocado en la posicin adecuada para permitir el paso de la luz hasta el objetivo, para lo cual se dispone de un sistema que permite girarlo alrededor de un eje. Gracias a la lente, se puede leer en el crculo el ngulo que es necesario girar el segundo polarizador para obtener un mximo de intesidad luminosa. Si se mide este ngulo cuando el recipiente est vaco y cuando el recipiente est lleno con una sustancia pticamente activa, la diferencia entre ambos valores permite calcular el poder rotatorio de la disolucin. Para determinar la concentracin de sustancias pticamente activas, este polarmetro est basado en el principio de balance fotoelctrico. Puede usarse para calcular la pureza, la concentracin y el porcentaje de contenido de una sustancia midiendo la composicin qumica de la solucin. Muy til para anlisis de azucares.

ESPECTROFOTOMETRO:

Un espectrofotmetro es un instrumento usado en el anlisis qumico que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentracin o reacciones qumicas que se miden en una muestra. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y microorganismos. Hay varios tipos de espectrofotmetros, puede ser de absorcin atmica o espectrofotmetro de masa y visuales. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones: 1. Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra 2. Indicar indirectamente qu cantidad de la sustancia que nos interesa est presente en la muestra

El espectrofotmetro es un aparato que mide la cantidad de luz que pasa a travs de una solucin. Est compuesto por las siguientes partes: FUENTE DE ENERGIA: lmpara que emite un haz luminoso que contiene un rango de longitudes de onda. MONOCROMADOR: se llama tambin selector de longitud de onda. Consiste en una red de difraccin que separa las diferentes radiaciones procedentes de la fuente y selecciona la longitud de onda requerida. RENDIJA: es un dispositivo que sirve para seleccionar un haz fino de radiacin que ser el que incida sobre la muestra, evitando que la atraviese la luz difusa. COMPARTIMENTO DE MUESTRA: en l se coloca la solucin problema, que va a absorber un haz fino de luz monocromtica. DETECTOR: es un sistema que transforma la energa luminosa que traviesa la muestra en energa elctrica. Posee adems un amplificador de la seal elctrica recibida que posibilita su medicin posterior.

MEDIDOR: traslada la energa elctrica producida en el paso anterior hasta un galvanmetro de aguja dnde figuran dos escalas graduadas; una mide la absorbancia y la otra el tanto por ciento de transmitancia. Cuando se mide la concentracin de una solucin se usa la escala de absorbancia. Los espectrofotmetros ms modernos dan una lectura digital y algunos incluso pueden transformarla en concentracin. USO DEL ESPECTROFOTOMETRO 1. Enchufar el aparato. 2. Encender con el mando izquierdo frontal (ON-OFF).Dejar encendido hasta que se acabe de utilizar el aparato. 3. Seleccionar la longitud de onda haciendo rotar el monocromador. Si se van a hacer lecturas por encima de 650 nm. Cambiar el fototubo azul en el interior por el rojo e insertar el filtro rojo. 4. El aparato tarda unos 15 minutos en calentarse. Cuando se ha calentado ajustar la aguja en la escala de absorbancia a infinito (transmitancia a 0) con el mando frontal izquierdo. 5. Insertar el "blanco" en el lugar de la muestra y cerrar la tapa. 6. Leer la absorbancia l %T. 7. Sacar la muestra. Cuidados: a) Coloque el instrumento en un lugar en donde no est sujeto a vibraciones, calor excesivo, humedad o luz directa. b) Proteja el instrumento del polvo. Nunca toque las superficies pticas tales como lentes y filtros. Siga las instrucciones que da el fabricante para la limpieza de tales componentes. c) Permita que el instrumento se caliente antes de hacer algn procedimiento. d) Se debe hacer un chequeo peridico (cada semana) de la calibracin de la longitud de onda, cuando se sospeche que ha variado, con el Tubo de Didimium. e) Verifique el 0 y el 100% T cada vez que se vaya a hacer lecturas y cuando vare la longitud de onda. f) Asegrese de que las cubetas estn limpias y libres de ralladuras yhuellas digitales. Esto debe hacerse cada vez que va a usarse

CROMATOGRAFO: La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en el coeficiente de particin de los compuestos da como resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separacin efectiva en funcin de los tiempos de retencin de cada componente de la mezcla. La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen mutuamente: Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis). Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeas. Clasificacin de los mtodos de separacin en cromatografa:

Procedimiento para condicionar una muestra liquida compleja a travs de una columna. Prueba cromatogrfica clsica. Esquema general:

Procedimiento: Se sujeta la columna a un soporte y se rellena con la fase estacionaria en forma de papilla o en seco segn se nos indique. Opcionalmente se puede aadir a una franja de unos 2-5 mm de espesor, para proteger el frente de la fase estacionaria. Se deposita la muestra en disolucin o adherida a una pequea cantidad de adsorbente sobre la arena, procurando tener una franja horizontal. Aadir la fase mvil con cuidado por la pared de la columna hasta llenarla. Los componentes de la mezcla deben eluirse manteniendo un flujo continuo de disolvente. Las fracciones recogidas debern analizarse mediante una tcnica cromatogrfica analtica: cromatografa de capa fina para comprobar su contenido y pureza. Las fracciones que tengan semejante contenido se juntan en el mismo matraz, reviamente pesado y el disolvente se elimina en el rotavapor.

COLORIMETRO Un colormetro es cualquier herramienta que identifica el color y el matiz para una medida ms objetiva del color. El colormetro tambin es un instrumento que permite medir la absorbancia de una solucin en una especfica frecuencia de luz a ser determinada. Es por eso, que hacen posible descubrir la concentracin de un soluto conocido que sea proporcional a la absorbancia. Los colormetros en el laboratorio juegan un papel vital en muchos tipos de investigaciones cientficas y situaciones clnicas mediante la determinacin de la densidad ptica de una solucin a ciertas longitudes de onda. Tambin miden la concentracin de materia slida. No todos los colormetros son voluminosos, algunos son lo suficientemente pequeos para ser utilizados fuera. Estos porttiles y resistentes, colormetros se utilizan normalmente en los estudios de agua y del medio ambiente.

Esquema del funcionamiento del colormetro El colormetro permite la comparacin de dos disoluciones, una de las cuales, para que pueda ser empleado con fines analticos, debe ser de concentracin conocida. La luz reflejada mediante el espejo inferior atraviesa los recipientes en los cuales se encuentran la muestra patrn y la muestra estudiada. Los tubos de vidrio (TC) permiten regular la distancia recorrida por el haz luminoso en la disolucin. Finalmente, un prisma recoge estos rayos luminosos y los dirige al ocular, en el cual se pueden observar dos semicirculos procedentes cada uno de cada muestra y, de este modo, se puede comparar las intensidades de salida. Si se vara la posicin de los tubos TC, que regulan el valor de la distancia recorrida por el rayo, se pueden obtener en el ocular dos semicirculos de igual intensidad y calcular el valor de la concentracin de la disolucin analizada, mediante el siguiente procedimiento: I1 = Io * e-(k1c1d1) [1] I2 = Io * e-(k2c2d2) [2]

Los valores d1 y d2 representan la longitud de las columnas de lquido que pueden regularse a voluntad, de modo que puede conseguirse que la intensidad final de la luz (I1) que atraviesa la disolucin 1 sea igual a la intensidad final de la luz (I2) que atraviesa la disolucin 2: I1=I2 Igualando las ecuaciones [1] y [2] resulta: Io* e-(k1c1d1) = Io* e-(k2c2d2)y simplificando la expresin queda: k1c1d1 = k2c2d2 Si las sustancias sometidas a anlisis son las mismas, entonces los coeficiente de absorcin molecular deben ser iguales , lo que permite simplificar la ecuacin anterior y obtener un mtodo para calcular la concentracin de una disolucin, si se conoce el valor de la otra: c1 = c2 * d2/d1 Este tipo de instrumentos fueron reemplazados a partir de los aos cuarenta de este siglo por los espectrofotmetros, que renovaron la popularidad de esta tcnica. Estos instrumentos empleaban diversos mtodos para la obtencin de luz monocromtica o, al menos, de un intervalo reducido de longitudes de onda, y la medida de la absorcin se realizaba mediante clulas fotoelctricas, las cuales haban comenzado a ser empleadas con tal fin desde principios de siglo por autores como Otto Berg y August H. Pfund. En la coleccin figura uno de los primeros modelos de colormetro de estas caractersticas, diseado por B. Lange, y procedente tambin de las Facultades de Ciencias. Consta de dos recipientes que sirven para introducir los prismas de cuarzo con la disolucin analizada y una disolucin de concentracin conocida. Una clula fotoelctrica permite medir la intensidad luminosa que atraviesa una y otra muestra, de modo que, si la concentracin de una disolucin es conocida puede calcularse la otra, mediante un procedimiento semejante al descrito en los prrafos anteriores. En este caso, las magnitudes que permanecen constantes son las distancias recorridas por los rayos luminosos y la magnitud calculada es la relacin entre las intensidades de salida.

BIBLIOGRAFIA

D. A. Skoog y D.M. West, Anlisis instrumental, Editorial Interamericana. K.A. Connors, Curso de anlisis farmacutico, Editorial Revert. S. Glasstone, Tratado de Qumica Fsica, Editorial Aguilar. www.wikipedia.com http://equiposdelaboratorio.wordpress.com/2012/02/23/espectrofotometro-uso-ycaracteristicas/