MUERTECELULARPROGRAMADA(APOPTOSIS)EN ELINTERDGITO. LicenciaturaenQumicoFarmacutico Biotecnlogo. Biol.AlbertoJessRosFlores.

CONTENIDO I.- Resumen.

II.- Introduccin. a. Antecedentes. b. Apoptosis. c. Regulacin gentica de la apoptosis. d. Activacin Bioqumica de la apoptosis. Mecanismo intrnseco. Mecanismo extrnseco.

III.- Apoptosis en el desarrollo embrionario.

IV.- Desarrollo de la extremidad.

V.- Maquinaria molecular en la apoptosis de la extremidad.

VI.- Las protenas morfogenticas de hueso (BMPs) promueven la apoptosis.

VII.- El cido retinoico induce la apoptosis interdigital a travs de las BMPs.

VIII.- Interrelacin entre cido retinoico, BMPs y el factor de crecimiento fibroblstico 8 (FGF8).

IX.- Conclusiones.

X.- Bibliografa.

I. RESUMEN La muerte celular programada o apoptosis es uno de los fenmenos ms estudiados. A partir de las investigaciones hechas por John F. R. Kerr en 1972, se determin que esta muerte celular presenta ciertas caractersticas, por ejemplo, la reduccin del tamao celular, la membrana celular se pliega, la cromatina se condensa, el ncleo se fragmenta y se forma cuerpos apoptticos que en su mayora son englobados por mcrofagos. La activacin de la apoptosis puede ocurrir mediante dos vas, una intrnseca y otra extrnseca: la primera involucra la liberacin del citocromo c de la mitocondria al medio intracelular activando a una serie de caspasas, mientras que la extrnseca implica la activacin de las caspasas por un receptor transmembranal que inicia el proceso de muerte celular, ambas convergen en la activacin de caspasas especficas. Existen otros tipos de muerte celular, por ejemplo la autofagia y la citoplasmtica, tambin llamada no lisosomal. Los estudios demuestran que la maquinaria molecular de la apoptosis se ha conservado desde el gusano C. elegans hasta el humano. El destino que toman las clulas de morirse es algo normal en el desarrollo embrionario, ya que es un mecanismo para eliminar aquellas defectuosas; controlar la cantidad y para esculpir tejidos como la

formacin de las manos. Recientemente se han descrito una serie de molculas que participan en la muerte interdigital para dar forma a los dedos, entre ellas se encuentran las protenas morfogenticas del hueso (BMPs), el cido retinoico y el factor de crecimiento fibroblstico (FGF). La regulacin entre stas ltimas seales activan o inhiben el proceso de apoptosis en el interdgito

II. INTRODUCCIN. La muerte celular programada o apoptosis es un proceso complicado. Una vez tomada la decisin, la ejecucin del programa de muerte requiere de la activacin y coordinacin de una serie de subprogramas que conllevan a la muerte de la clula, ya sea para beneficio del organismo o para dar forma a rganos u estructuras como los dedos de las manos. Al inhibirse esta muerte por errores en el mecanismo de muerte celular, se provoca una serie de malformaciones en el desarrollo del organismo, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer o el mal de Parkinson padecimientos asociados con la muerte neuronal, mientras que una inhibicin de la apoptosis puede ser crtica para el surgimiento del cncer (Debbas M y While E, 1993) o provocar que los dedos estn unidos por una membrana (sindactilia).

a. ANTECEDENTES. Virchow en 1858 describi por primera vez la muerte celular. A partir de ese momento surgieron trminos como degeneracin, mortificacin y necrosis. El trmino de necrosis es utilizado para describir un estado avanzado de ruptura tisular, similar a la que ocurre en la gangrena. Virchow cre una categora especial en la que incorpor el trmino de necrobiosis que le da a las clulas un significado de muerte lenta en el tejido y que permite la sobrevivencia del organismo. Posteriormente este trmino result ser ambiguo y finalmente entr en desuso. Otro trmino propuesto por el mismo investigador fue la degeneracin, concepto utilizado en patologas donde los axones de las neuronas pierden el contacto con otras neuronas (neurodegeneracin) o al perder el contacto de la matriz extracelular con el cartlago en patologas como la osteoartritis (Majno y Joris, 1995). El trmino necrosis es el ms utilizado para definir la muerte celular accidental (Wyllie et al, 1980), que presenta caractersticas como el hinchamiento marcado de la clula acompaado por la condensacin de la cromatina, que eventualmente ocasiona una ruptura celular y una lisis nuclear que conlleva a una inflamacin (Wyllie et al, 1980).

El trmino apoptosis se da de acuerdo a los estudios de John F. R. Kerr (1971), en la que indujo una atrofia en el hgado de rata y describi la muerte de los hepatocitos, caracterizados por una peculiar morfologa que incluye una reduccin del tamao celular, la membrana se pliega, la cromatina se condensa y eventualmente se forman numerosas vesculas, que en su mayora son englobados por macrfagos. A este fenmeno se le da el nombre primeramente de necrosis, pero un ao despus se le dio el nombre de apoptosis (Kerr et al, 1972). En 1970 el profesor Currie, observ las fotografas de microscopia electrnica de Kerr, en la que describi una necrosis peculiar. En ese momento, Andrew Wylle suprimi a la hormona adenocorticotropica (ACTH) que secreta la hipfisis e identific un proceso con las caractersticas reportadas por Kerr, entre sus observaciones sugiri que este tipo caracterstico de necrosis es regulado por hormonas. Allison Crawford observ que el proceso de muerte se puede inducir, ya que al inyectar un teratgeno en fetos de rata provoc una muerte necrtica en los arcos branquiales, dando origen a una espina vertebral bfida. Un significado importante en la evolucin del concepto de la apoptosis se dio al observar que la muerte celular ocurre de manera normal en el desarrollo del embrin; estas ideas contribuyeron a la formulacin del concepto de apoptosis. Esta terminologa de apoptosis y necrosis son consideradas como dos formas de muerte celular (Wyllie et al, 1980). A continuacin se describe el proceso de la apoptosis como una forma de muerte celular distinta, con cambios estructurales activos, sugiriendo un programa inherente sobre el fenmeno, adems del papel que juega en el desarrollo.

b. APOPTOSIS. La muerte celular programada o apoptosis, es la ms estudiada, su impacto es evidente ya que en la dcada de los aos 70 el nmero de publicaciones alcanzaba alrededor de 34, en la dcada de los 80 se increment a 220 y en los aos 90 se dispar a 29,188 publicaciones convirtindose en uno de los principales tpicos de estudio dentro de la biologa (Moreno et al, 2000), actualmente existen ms de 180,551 citas sobre el tema (Marzo, 2010) reportadas (U.S. National Library of Medicine National Institutes of Health, Pub Med). Durante el proceso de apoptosis ocurre la separacin de la membrana celular con el citoesqueleto, la prdida del contacto celular, as como el intercambio de la fosfatidil serina (fosfolpido de la membrana celular) hacia el exterior de la membrana plasmtica, lo que favorece la fagocitosis por macrfagos (Fadock et al, 1992). Otros mecanismos de fagocitosis estn mediados por los receptores de vitronectina y ciertos carbohidratos (Duball et al, 1985; Savill et al, 1990). En la actualidad se han descrito tres formas distintas de muerte: la forma tipo I, denominada apoptosis; la forma tipo II o autofagia y la forma tipo III llamada muerte celular citoplasmtica (Clarke, 1990).

En la apoptosis se descubre que la fragmentacin del cido desoxirribunucleico (ADN) es un proceso natural y que induce muerte celular, estos fragmentos forman una escalera tpica (mltiplos de 180 pares de bases) en un gel de electroforesis (Wyllie et al, 1980). Esta caracterstica en especial ha permitido identificar mediante un marcaje al ADN de cadena sencilla por medio de una transferasa terminal, que adiciona nucletidos al extremo 3 del ADN, que pueden estar marcados con fluorescencia o bien se pueden detectar por mtodos de inmunohistoqumica. Esta tcnica se conoce como TUNEL por sus siglas en ingls (transferasa-mediated dUTP nick endlabeling).

REGULACIN GENTICA DE LA APOPTOSIS. Ellis y Horvitz en 1986, realizaron una serie de experimentos en el nematodo Caenorhabditis elegans (Gusano) que permiti la identificacin de los genes que codifican las protenas que estn involucradas en la apoptosis. Este gusano en su forma hermafrodita presenta como caracterstica particular, en su estado adulto, un nmero fijo de 959 clulas. En el desarrollo embrionario se generan 1090 clulas, de las cuales 131 mueren siguiendo un programa de desarrollo establecido, lo que sugiere que existe un control en el destino de muerte celular. Los anlisis genticos en C. elegans han permitido la caracterizacin de mutantes deficientes en el proceso de muerte celular, posibilitando la identificacin de cuatro protenas codificadas por los genes egl1, ced-9, ced-4 y ced-3.

Las mutaciones nulas, que eliminan la actividad de los genes ced-3, ced-4, y egl-1, generan animales viables pero con apoptosis inhibida. Mientras la mutacin nula en ced-9 genera animales no viables y con una apoptosis exagerada. Estos datos sugieren que egl-1, ced-3, ced-4 son molculas proapoptticas, mientras que ced-9 es anti-apopttica. Se sabe que el gen ced-4 codifica para la protena encargada de la activacin de ced-3 que codifica para una proteasa que se caracteriza por presentar un residuo de cisteina en su sitio activo y por romper protenas en sitios especficos que contienen cido asprtico, homlogos de estas protenas componen la familia de las caspasas. El gen egl-1 codifica para una protena que acta como un regulador negativo de la seal anti-apottica CED-9. Finalmente, el gen ced-9 codifica para una protena con actividad antiapopttica, que al unirse a la caspasa CED-3 evita que sea activada por CED4. Cabe mencionar que aunque existen muchas diferencias entre el gusano y el hombre el mecanismo de muerte celular programada se conserva. En los vertebrados, la maquinaria apopttica es ms compleja y elaborada que la observada en C. elegans. Los genes implicados en la apoptosis estn bastante conservados entre los nemtodos y los vertebrados. Por ejemplo, el gen Bcl-2 de humanos tiene su homlogo en ced-9 de C. elegans y es capaz de sustituir la funcin de ced-9 en el gusano. Las caspasas se encuentran en vertebrados e invertebrados, incluidos los insectos, los nemtodos y la hidra. Los genes que codifican para las caspasas presentan homologa con ced-3. En los mamferos se conoce al menos una docena de caspasa y una docena de protena de la familia de Bcl-2 con actividad anti-apopttica (Bcl-2 y BclxL) o con actividad pro-apopttica (Bax y Bak). El gen egl-1 tiene homologa con Apaf-1

de mamferos. En esta orquesta de la apoptosis tambin participan una serie de genes que codifican para protenas inhibidoras de la apoptosis (IAP) con capacidad inhibidora sobre las caspasas. Las IAP tal vez protegen a la clula de activacin espontnea de las caspasas. Se han encontrado tambin unas protenas con capacidad inhibidora sobre las IAP, lo que genera la activacin de la apoptosis.

ACTIVACIN BIOQUMICA DE LA APOPTOSIS. La activacin Bioqumica de la apoptosis ocurre por dos mecanismos generales: el intrnseco y el extrnseco. Mecanismo intrnseco: la mitocondrial expulsa el citocromo c debido a una variedad de seales extra e intracelulares de estrs, como el oxidativo, Apaf-1, junto con la caspasa 9 y el citocromo c liberado de la mitocondria, que conforman un complejo denominado apoptosoma, elemento central en la maquinaria apopttica intrnsica. Apaf-1 es una protena que consiste en 3 dominios, el primero; tiene un dominio CARD en el extremo amino-terminal, que le permite interactuar especficamente con la procaspasa-9. En la regin media presenta 50% de similitud con la secuencia primaria de CED-4, la protena pro-apopttica de C. elegans. Dentro de esta regin conservada se encuentra un segundo dominio de unin a nucletidos, esencial para la funcin de Apaf-1 como Ced-4. Mutaciones en este dominio que destruyen la unin de ATP/dATP no pueden inducir apoptosis. En la regin carboxilo-terminal, Apaf-1 tiene varias repeticiones del tercer dominio de interaccin de protenas WD-40,

esenciales para regular la interaccin de Apaf-1 con la procaspasa-9. Mediante el estudio de ratones con mutaciones nulas en los genes de Apaf-1, caspasa-3 y caspasa-9 se ha encontrado in vivo que la activacin de la caspasa-3 se inicia por un dao a la mitocondria que permite la liberacin del citocromo c, el cual se acopla a Apaf-1 y activa a la caspasa9 que a su vez activa a otras caspasas conocidas como caspasas ejecutoras. Mecanismo extrnseco: originado por la activacin de un receptor de muerte en la membrana que induce una trimerizacin y la formacin de un complejo denominado DISC. Este complejo que se localiza en la membrana, recluta a la procaspasa-8 a travs de FADD/MORT1 como molcula adaptadora e induce un cambio conformacional en la procaspasa8 que resulta en la ruptura de la caspasa-8 y su activacin. Actuando directamente e indirectamente con otras caspasas tanto la va extrnseca como la intrnseca dando origen a la activacin de las caspasas ejecutoras 3, 6 o 7 del proceso de muerte celular (Cain K et al, 2002). Recientemente se ha descrito un tercer mecanismo que se origina a partir del retculo endoplasmatico, resultando en la activacin de las caspasas-12 y 9 (Yuan y Yanke 1999., Rao et al 2001., Rao et al 2002., Rao et al 2002b., Morishima et al 2002).

Otros tipos de muerte celular que se han descrito tienen que ver con los lisosomas y la autofagia. La muerte celular lisosomal, se caracteriza por la permeabilizacin de los lisosomas que contribuye a expulsar al citosol enzimas proteo-lticas como la cathepsina B que altera la permeabilidad de la mitocondria, otro mecanismo lisosomal en la permeabilizacin envuelve a la generacin de especies reactivas de oxigeno (ROS). Una vez en el citoplasma, las enzimas lisosomales contribuyen a la ejecucin del programa apopttico, actuando directamente sobre los sustratos conjuntamente con el sealamiento de las caspasas (Leist y Jaattela, 2001a y b). La autofagia es un proceso de muerte celular en el que los organelos y

algunas de las partes de la clula son degradados por componentes de la misma clula. Estudios morfolgicos y bioqumicos han revelado que porciones del citoplasma son secuestradas por una doble membrana que forma una vacuola (autofagosoma) originaria del retculo endoplasmico (RE) (Dunn, 1990). La naciente vacuola autofgica se puede fusionar con lisosomas preexistentes, endosomas o elementos del aparato de golgi formando una vacuola degradativa conocida como autolisosoma (Dunn 1990., Aubert et al, 1996). Adems se ha visto que el neurotransmisor sustancia P y su receptor neurokinina 1 (NK1 R), inducen una muerte celular programada no apopttica que se caracteriza por la presencia de vacuolas en el citoplasma, donde no hay actividad de caspasas y existe una prdida de la fragmentacin nuclear (Castro-Obregn et al, 2002).

III. APOPTOSIS EN EL DESARROLLO EMBRIONARIO. Durante el desarrollo embrionario, los organismos multicelulares generan distintos tipos celulares que darn origen a mltiples tejidos y rganos. El balance correcto entre la diferenciacin, la proliferacin y la muerte celular determinan el destino de los distintos linajes celulares y el nmero de clulas que conforman un rgano. La apoptosis es parte esencial de la vida de los metazoarios, a menudo en los organismos se produce un mayor nmero de clulas de las necesarias, entonces la apoptosis acta eliminando aquellas que se encuentran en exceso o para esculpir tejidos. Se ha visto que ratones deficientes para bax-/- y bak -/miembros de la familia pro-apopttica de Bcl-2 presentan mltiples defectos en el desarrollo embrionario, incluyendo la permanencia de la membrana interdigital; el canal vaginal no se abre y la excesiva acumulacin de clulas en el sistema nervioso central como del sistema hematopoyetico (Lindsten et al, 200). Los ratones mutantes para la protena citosolica Apaf-1, homloga a CED-4 en C. elegans, presentan malformaciones craneofaciales; sobrecrecimiento del cerebro, dramticas alteraciones en los ojos y la retina, as como la permanencia de la membrana interdigital (Cecconi et al, 1998). Mutaciones para los genes ced-3 o ced-4 dan como resultado una supresin global de la muerte celular, estos genes se encuentran implicados como componentes clave y requeridos para la muerte apopttica (Woo et al, 1998).

IV. DESARROLLO DE LA EXTREMIDAD. El estudio de las extremidades durante el desarrollo embrionario del pollo, ha sido uno de los modelos ms recurrentes para abordar la apoptosis, ya que presenta varias zonas que son eliminadas por este proceso. La zona necrtica anterior (ANZ) y la zona necrtica posterior (PNZ) son reas del mesodermo que, respectivamente rodean los bordes anteriores y posteriores de las extremidades embrionarias. A pesar de su nombre, estas zonas son eliminadas por apoptosis desde etapas tempranas y se han relacionado con la reduccin en el nmero de dedos en las aves -tres dedos en las alas y cuatro en las patas-. En el pollo mutante que presentan polidactilias (incremento en el numero de dedos) no exhiben estas zonas apoptticas (Hinchliffe y Ede, 1967). Adems el pollo mutante wingless caracterstico por la ausencia de alas, presenta durante su desarrollo embrionario una ANZ bastante extendida que correlaciona con la prdida de las alas (Hinchliffe y Ede, 1973). Cabe destacar que en los mamferos con pentadactilia (cinco dedos) no aparecen estas reas de apoptosis. El parche opaco (OP) es otra zona presente en el mesnquima central de la extremidad embrionaria de aves y mamferos, se piensa que esta rea est relacionada con la separacin de la ulna y el radio en las extremidades anteriores y de la tibia y la fbula en las posteriores. El pollo mutante talpid3 carece de esta rea de apoptosis y exhibe la fusin de estos huesos (Hinchliffe y Thorogood, 1974). En los interdgitos de los pollos debido a su tamao y acceso son las reas que ms se utilizan para estudiar el mecanismo de la apoptosis in ovo. Como su nombre lo indica, las zonas interdigitales o interdgitos se localizan entre los dedos y dependiendo de la especie, pueden ser eliminadas o permanecer durante la vida adulta del

organismo, participando de manera importante en la morfognesis de las extremidades. Por ejemplo, en las especies con dedos separados tales como el pollo (Pauto, 1975), el lagarto (Fallon y Cameron, 1977), el ratn y el humano (Miliare, 1977 y Kelley, 1970), la apoptosis se extiende en todo el espacio interdigital, sin embargo, en el pato o en la tortuga, que presentan este tejido permanente, la apoptosis slo se activa en la parte ms distal (Saunders y Fallon, 1967., Saunders, 1972). Las reas de muerte celular en el desarrollo de la extremidad, son positivas a la tcnica de TUNEL lo cual nos indica un proceso apopttico. La caspasa 3 ha sido identificada como el mayor efector de la muerte celular durante el desarrollo de la extremidad (Mirkes et al, 2001., Huang et al, 2002). A favor del mecanismo extrnseco de la apoptosis en la muerte interdigital se ha identificado la expresin de la protena TNF- (receptor de muerte) en la regresin interdigital (Wride et al, 1994) y FLASH, protena que interacta con el dominio de muerte de la caspasa 8 (Choi et al, 2001). Estas molculas se expresan durante la muerte interdigital en embriones de pollo (Zuzuarte-Luis et al, 2005). Adems del mesodermo, la apoptosis tambin es activada en el ectodermo, especficamente en la cresta ectodrmica apical (AER). La AER es un engrosamiento del ectodermo localizado en la parte ms distal de la extremidad embrionaria y es una estructura muy importante que dirige el crecimiento prximo-distal de la extremidad.

V. MAQUINARIA MOLECULAR DE LA APOPTOSIS EN LA EXTREMIDAD El mecanismo intrnseco de la apoptosis en el control de la muerte celular se ve favorecido en la expresin especfica de Bax (perteneciente a la familia Bcl-2) en el rea de muerte interdigital (Dupe et al, 1999). Ratones deficientes a estas protenas Bax y Bak presentan sindactilia (Lindsten et al, 1998). Similarmente el ratn deficiente en Apaf-1, se caracteriza por una deficiente regresin interdigital (Cecconi et al, 1998). VI. LAS PROTENAS MORFOGENTICAS DE HUESO (BMPs) PROMUEVEN LA APOPTOSIS. Entre las seales que regulan la apoptosis en la extremidad est la perteneciente a la de las protenas morfogenticas del hueso (BMP). Las BMPs son miembros de la superfamilia de TGF, molculas difundibles que regulan la proliferacin, diferenciacin, migracin y apoptosis (Hogan, 1996). Varias isoformas de las BMPs tales como BMP2, BMP4, BMP5 y BMP7 participan en la regulacin de la apoptosis en la extremidad embrionaria de aves y mamferos (Macias et al, 1997., Zuzuarte-Luis et al, 2004). El patrn de expresin de estas molculas coincide con la ANZ, la PNZ y la regin interdigital, sugiriendo una posible participacin de la sealizacin de las BMPs sobre el destino de estos tejidos (Zuzuarte-Luis et al, 2004., Laufer et al, 1997). La aplicacin de las formas proteicas de las BMPs en el interdgito resulta en la aceleracin de la apoptosis (Zuzuarte-Luis et al, 2004., Laufer et al, 1997., Gaan et al, 1996., Yokouchi et al, 1996). Contrariamente, la aplicacin de antagonistas de BMPs como Nogina o Gremlin en el interdgito, resulta en la inhibicin de la apoptosis de este tejido (Merino et al 1998., Merino et al, 1999).

De igual manera, la eliminacin de BMP7 en ratones resulta en la inhibicin de la muerte celular en el interdgito, generando sindactilias (dedos unidos por las membranas interdigitales) y polidactilias (Hofmann et al, 1996) sugiriendo la participacin de las BMPs en el control de la apoptosis en los interdgitos y en el nmero de dedos. VII. EL CIDO RETINOICO INDUCE LA APOPTOSIS INTERDIGITAL A TRAVS DE LAS BMPs. El cido retinoico, es un derivado de la vitamina A. Esta molcula es

importante en la induccin de la apoptosis interdigital ya que al administrar un exceso de cido retinoico en el interdgito, se observa la aceleracin de la apoptosis. Adems, la aplicacin de cido retinoico en la punta del dedo lleva a un truncamiento en el desarrollo del mismo, debido a que es capaz de disparar la apoptosis en las clulas pre-condrognicas que los constituyen (RodrguezLen et al, 1999). Por otro lado, la eliminacin de los receptores del cido retinoico resulta en sindactilia, como consecuencia de inhibir la apoptosis (Dup et al, 1999). En el ratn mutante Hammertoe la apoptosis interdigital es inhibida y la administracin de cido retinoico en hembras preadas se rescata el fenotipo (Ahuja et al, 1997), esto sugiere que el cido retinoico es promotor de la apoptosis interdigital. La aplicacin de cido retinoico junto con un antagonista de BMPs en el interdgito, inhibe la apoptosis estableciendo que el proceso de muerte celular inducida por el cido retinoico sea mediada por BMPs (Rodrguez-Len et al, 1999).

VIII.

INTERRELACIN

ENTRE

CIDO

RETINOICO,

BMPs

FGFs

DURANTE LA APOPTOSIS INTERDIGITAL. El crecimiento de la extremidad en direccin prximo-distal est controlado por el factor de crecimiento fibroblstico 8 (FGF8), estrechamente relacionado con el control de la muerte celular en los interdgitos teniendo un papel de sobrevivencia y antagnico al del cido retinoico (Hernndez R et al, 2009). FGF8 es un factor presente en la AER, al anular su expresin durante las etapas en las que ocurre el crecimiento de la extremidad se observa un truncamiento asociado a la presencia de apoptosis masiva, sugiriendo el papel de sobrevivencia celular, sin embargo, la aplicacin de FGFs en las zonas interdigitales promueve dos efectos sobre los interdgitos: el primero a corto tiempo en el que la apoptosis es inhibida durante las primeras 12 horas y el segundo a largo tiempo en el que la apoptosis se induce despus de 20 horas. Este efecto sobre la muerte celular de FGF es inhibido por la presencia de antagonistas a la sealizacin de BMPs, lo que sugiere el papel de las BMPs como molculas efectoras de la apoptosis. Estos datos muestran que los FGFs, promueven la sobrevivencia celular al inhibir la apoptosis a tiempos cortos, as como provocar que las clulas sean sensibles a la apoptosis inducida por BMPs (Montero et al, 2001). As mismo, en una clara interrelacin entre cido retinoico/FGFs y BMPs controlan el destino de las clulas a morir por apoptosis en el interdgito.

La formacin de los dedos libres en vertebrados amniotas est acompaada por una apoptosis masiva en el mesodermo interdigital, la cual le da forma a los dedos. La correlacin entre la muerte interdigital y el fenotipo de los dedos se ha observado en especies mutantes con sindactilia (Hinchlieffe y Thorogood, 1974) y en experimentos que inhiben la muerte celular (Hurle et al, 1996). Resulta interesante que la inhibicin de la muerte interdigital presenta una sindactilia y/o la formacin de un dgito ectpico (Gan et al, 1996), esto indica que el mesodermo interdigital adems de ser sensible a las seales que inducen muerte celular, tienen el potencial para formar dedos. IX. CONCLUSIONES. Durante la morfognesis de la extremidad existen reas donde ocurren procesos de muerte celular como: el parche opaco, la zona necrtica anterior, la zona necrtica posterior y la zona interdgital. Estos eventos como el que ocurre en el parche opaco, separan a los elementos esquelticos como el cubito y el radio en la extremidad superior y la tibia y el peron en la extremidad inferior. Por otra parte la ANZ y la PNZ regulan en la forma de la mano a la altura de la mueca inhibiendo la formacin de dedos post-axiales. La zona interdigital donde ocurre el proceso de muerte celular programada o apoptosis (se ha conservado en su mecanismo molecular desde el gusano C. elegans hasta el humano), est regulada por un balance de seales pro-apototicas como el cido retinoico y seales de sobrevivencia celular como el factor de crecimiento fibroblstico 8.

Algo interesante en este balance de seales adems de la separacin de los dedos es el efecto que produce el cido retinoico al inhibir las seales condrognicas para evitar que no se formen ms dedos en las reas interdigitales. Por tanto, el cido retinoico acta de dos formas: como una seal pro-apottica y como una seal anti-condrognica en el interdgito. Por ltimo, cabe mencionar y resulta de suma importancia saber cmo se controla ste mecanismo para solucionar problemas de salud como sindactilias o polidactilias, que en nosotros pueden ser malformaciones en la extremidad, pero que en especies como el pato que presenta membrana interdgital o el panda gigante que presenta seis dedos es algo normal.

AGRADECIMIENTOS Al Dr. Jess Chimal Monroy y al Dr. Alejandro Zentella Dehesa por sus comentarios, y a Patricia Herrera Lazarini por las valiosas sugerencias en la redaccin y estilo del presente trabajo.

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