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Procedimento Operacional Padro (POP) CREATININA CINTICA

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CREATININA CINTICA
FINALIDADE Mtodo para a determinao da creatinina. Teste cintico colorimtrico, somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO DE AO Metodologia: Cintica colorimtrica. Cintico de Tempo Fixo: a creatinina reage com o picrato alcalino em meio tamponado, obtendo-se um cromgeno cuja absorbncia proporcional concentrao de creatinina na amostra. Os cromgenos inespecficos so eliminados por uma pr-leitura, pois estes tem formao imediata. REAGENTE UTILIZADO CREATININA CINTICA CATLOGO: K067 ANVISA: 10269360201

QUIBASA QUMICA BSICA Ltda. Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: (31) 3439.5454 Fax: (31) 3439.5455 E-mail: sac@bioclin.com.br Site: www.bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira COMPONENTES Nmero 1 - Tampo - Conservar entre 15 e 30C. Contm: Hidrxido de Sdio 110 mmol/L, Carbonato de Sdio 75 mmol/L. Nmero 2 - cido Pcrico - Conservar entre 15 e 30C. Contm: cido Pcrico 60 mmol/L. Nmero 3 - Padro - Conservar entre 15 e 30C. Aps o manuseio, conservar na geladeira entre 2 e 8C para evitar evaporao. Contm: Creatinina 3,0 mg/dL. ESTABILIDADE Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando conservados de acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao do produto durante o uso para no afetar a sua estabilidade. CUIDADOS ESPECIAIS 1- Somente para uso diagnstico in vitro. 2- Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos. 3- A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. 4- Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados. 5- Recomendamos aplicar as normas locais, estaduais e federais de proteo ambiental para que o descarte dos reagentes e do material biolgico seja feito de acordo com a legislao vigente. 6- Para obteno de informaes relacionadas biossegurana ou em caso de acidentes com o produto, consultar as FISPQ (Ficha de Informaes de Segurana de Produtos Qumicos) disponibilizadas no site www.bioclin.com.br ou atravs de solicitao pelo SAC (Servio de Assessoria ao Cliente) da Quibasa. EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS Procedimento Manual Equipamento: Espectrofotmetro termostatizado Pipetas e tubos de ensaio Relgio ou cronmetro Biocontrol N e Biocontrol P Bioclin

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Procedimento Automatizado Equipamento: Equipamento bioqumico automatizado Biocontrol N e Biocontrol P Bioclin Inserir nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. AMOSTRA Soro ou plasma colhido com heparina, oxalato, fluoreto, citrato ou EDTA-Bioclin. O analito estvel por 07 dias entre 2 e 8C. A urina deve ser colhida por um perodo de 24 horas e con servada em geladeira at o momento da dosagem. PREPARO DO REAGENTE DE TRABALHO Misturar uma parte do Reagente N1 com uma parte do Reagente N2. Armazenar em frasco mbar. Estvel 24 horas entre 15 e 30C. Homogeneizar o reagente de trabalho antes de iniciar a tcnica. TCNICA A Bioclin recomenda, para uso do kit, utilizar como soro controle os kits Biocontrol N e P Bioclin. Procedimento Manual Adicionar 100 L de padro ou amostra (soro, plasma ou urina) a 1 mL de reagente de trabalho (previamente homogeneizado), misturar e transferir imediatamente para uma cubeta termostatizada a 37C. Medir as absorbncias do padro e da amostra em 510 nm, aos 30 e 90 segundos. Dosagem na Urina Anotar o volume colhido em mL, centrifugar uma alquota da amostra de urina a ser dosada e proceder uma diluio de 1:25 (100 L de urina e 2,4 mL de gua destilada). Em seguida, fazer a dosagem como na tcnica descrita acima. Multiplicar o resultado obtido por 25. Procedimento Automatizado Mencionar o manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar a programao dos reagentes para o equipamento automtico. CLCULOS A do Padro = Abs. 90 segundos - Abs. 30 segundos ou da Amostra

Creatinina = (mg/dL)

A da amostra x Concentrao do padro (3mg/dL) A do padro

Como a reao segue a Lei de Lambert-Beer, o fator de calibrao pode ser usado. Fator de = Concentrao do padro (3 mg/dL) calibrao A do padro Creatinina (mg/dL) = A da Amostra x Fator de Calibrao Creatinina na urina (mg/24h) = mg/dL x Volume de 24h(mL) 100 DEPURAO Hidratar o paciente, com no mnimo 600 mL de gua e, em seguida, orient-lo para esvaziar a bexiga. A depurao da creatinina dever ser realizada em amostra colhida com 4, 12 ou 24 horas. Em qualquer momento do intervalo de tempo escolhido, colher uma amostra de sangue. Medir o volume total de urina e calcular o volume por minuto (VM).

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VM = Vol. urinrio do tempo determinado (mL) Tempo determinado (em minutos) Dosar a creatinina srica e urinria seguindo as metodologias propostas. Fazer o clculo da depurao de creatinina: U = Creatinina urinria (mg/dL) S = Creatinina srica (mg/dL) VM = Volume/minuto A = Valor da superfcie corporal do paciente em m2 Depurao da creatinina = U x VM (mL/min) S Obs.: Este valor dever ser corrigido para a superfcie corporal do paciente. Usar o nomograma de correlao peso-altura. Multiplicar o valor da depurao por 1,73 e dividir pela superfcie corporal do paciente. Depurao da creatinina = U x VM x 1,73 (mL/min./1,73 m) S A Exemplo: Depurao (Urina de 24 horas) U = Creatinina urinria = 110 mg/dL S = Creatinina srica = 0,9 mg/dL Volume urinrio de 24 horas: 1,480 mL em 24 horas (1,440 minutos) Volume / minuto = VM = 1,480 = 1,0277 1,440 Peso do paciente = 60 kg Altura do paciente = 165 cm Superfcie corporal = 1,66 m Depurao (mL/min) = 110 x 1,0277 = 125,60 0,9 Depurao (mL/min./1,73 m) = 110 x 1,0277 x 1,73 0,9 1,66 Depurao (mL/min./1,73 m) = 130,889 RESULTADOS Unidade de Medida (Soro ou plasma): mg/dL; Fator de Converso de Unidades (SI): mg/dL x 0,0884 = mmol/L Unidade de Medida (urina): mg/24h; Unidade de Medida (depurao): mL/min/1,73 m VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia, em mg/dL, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao de creatinina em populaes sadias do sexo masculino e feminino. Soro ou plasma .................................0,4 a 1,4 mg/dL Urina Homem ...................................1500 a 2500 mg/24 horas Urina Mulher......................................800 a 1500 mg/24 horas Depurao Homem..........................97 a 137 mL/min/1,73 m Depurao Mulher. ..........................88 a 128 mL/min/1,73 m

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Depurao Criana .........................70 a 140 mL/min/1,73 m mg/Kg peso = mg/24h dividido pelo peso corporal Para converter os valores de mg/dL em mmol/L (SI), multiplicar por 0,0884. LIMITAES DO PROCESSO Este processo s poder ser realizado em espectrofotmetro com cubeta termostatizada a 37C, devido ao pequeno intervalo de tempo de reao. A metodologia descrita no dever ser utilizada para amostras extremamente lipmicas. INTERFERENTES No se aplica. SENSIBILIDADE A sensibilidade indica o limite de deteco do mtodo. Foi calculada a partir de vinte (20) determinaes de Creatinina Cintica, em uma amostra isenta desses analitos. Foi encontrado um valor mdio igual a 0,165 mg/dL, com desvio padro de 0,006 mg/dL. A sensibilidade, que corresponde a soma da mdia encontrada com 3 vezes o desvio padro, para este mtodo, igual a 0,183 mg/dL. LINEARIDADE A reao de cor linear at a concentrao de 10 mg/dL. Para valores maiores, diluir a amostra com cloreto de sdio 0,85% e repetir a determinao. Multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits. Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a preciso e exatido das dosagens. Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade. Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. SIGNIFICADO DIAGNSTICO A Creatinina, sintetizada principalmente no fgado e nos rins, produzida e excretada em um ritmo constante independente da dieta, grau de hidratao e metabolismo protico. Com a falncia da funo renal, os dados laboratoriais proporcionam ndices seguros quanto a capacidade renal de excretar, reabsorver e secretar a creatinina. A creatinina est elevada na insuficincia renal aguda e crnica, na obstruo do trato urinrio, na insuficincia cardaca congestiva, na desidratao, no choque e no diabetes melittus. Nveis diminudos podem ser observados nas distrofias musculares, desnutrio, diminuio da massa muscular e doena renal severa. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - SLOT, C.; Sand. J. Clin. Lab. Invest. 17:381, 1965. 2 - HENRY, R. J.: Clinical Chemistry - Principles and Technics, 4 Ed., Harper and Row. New York, 1964.

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3- TODD,SANFORD,DAVIDSOHN;Diagnsticos Clnicos, 16 Ed., Editora Manole, 1983. 4 - CARL, A. B. and EDWARD, R. A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed., 1994, 1531-1539. 5 - Bioclin Dados de arquivo.

Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias

Assinatura

Data __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__

Destino

Quibasa/Bioclin POP Creatinina Cintica Reviso: Julho/12

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FINALIDAD Mtodo para la determinacin de la Creatinina. Test cintico colorimtrico, solamente para uso diagnstico in vitro. PRINCIPIO DE ACCIN Metodologa: Cintica colorimtrica. Cintico de Tiempo Fijo: la Creatinina reacciona con el Picrato alcalino en medio tamponado, obteniendose un cromogeno que tiene una absorbancia proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra. Los cromgenos inespecficos son eliminados por una prelectura pues estos tienen su formacin inmediata. REACTIVO UTILIZADO CREATININA CINTICA CATLOGO: K067 ANVISA: 10269360201

QUIBASA QUMICA BSICA Ltda. Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: +55 (31) 3439.5454 Fax: +55 (31) 3439.5455 E-mail: sac@bioclin.com.br Site: www.bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira COMPONENTES Nmero 1 - Tampn - Almacenar entre 15 y 30C. Contiene: Hidrxido de sdio 110 mmol/L, Carbonato de sdio 75 mmol/L. Nmero 2 - cido Pcrico - Almacenar entre 15 y 30C. Contiene: cido pcrico 60 mmol/L. Nmero 3 - Patrn - Almacenar entre 15 y 30C. Despues de manipular, almacenar en heladera en temperaturas entre 2 y 8C para evitar evaporacin. Contiene: Creatinina 3,0 mg/dL. ESTABILIDADE Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta cuando se almacena en la temperatura recomendada. Evitar la contaminacin del producto durante su uso para no afectar a su estabilidad. CUIDADOS ESPECIALES 1- Solamente para uso diagnstico in vitro. 2- Seguir con rigor la metodologia propuesta para obtencin de resultados exactos. 3- El agua utilizada en el lavado del material debe ser reciente e exenta de agentes contaminantes. 4- Columnas deionizadoras saturadas liberan agua alcalina, iones diversos y agentes oxidantes y reductores, que pueden alterar de forma significativa los resultados. 5- Se recomienda la aplicacin de las leyes locales, estatales y federales de proteccin ambiental para que el desecho de reactivos y materiales biolgicos se haga de acuerdo a la legislacin vigente. 6- Para obtener informacin relacionada con la seguridad biolgica o en caso de accidentes con el producto, consultar la FISPQ (Ficha de Informaciones de la Seguridad de Productos Qumicos) disponibles en el site www.bioclin.com.br o solicitando a trave EQUIPAMIENTOS E INSUMOS OPERACIONALES Procedimiento Manual Equipamiento: Espectrofotmetro termostatizado Pipetas y tubos de ensayo Reloj o cronmetro Biocontrol N y Biocontrol P Bioclin Procedimiento automatizado

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Equipamiento: Equipo bioqumico automatizado Biocontrol N y Biocontrol P Bioclin

Inserte el nombre, modelo y ubicacin de los equipos, consulte el manual o POE para su uso. MUESTRAS Suero o plasma obtenido con heparina, oxalato, fluoruro, citrato o EDTA-Bioclin. El analito es estable por 7 das a temperaturas entre 2 y 8C. La orina debe ser colectada por un perodo de 24 horas y conservada en heladera hasta el momento de la dosificacin. PREPARO DEL REACTIVO DE TRABAJO Mezclar una parte del Reactivo N1 con una parte del Reactivo N2 . Almacenar en frasco mbar. Estable por 24 horas a temperaturas entre 15 y 30C. Homogenizar el Reactivo de Trabajo antes de iniciar la tcnica. TCNICA La Bioclin recomienda, para uso del kit, utilizar como suero control los kits Biocontrol N y P Bioclin. Procedimiento Manual Adicionar 100 L del Patrn o Muestra (suero, plasma o orina) a 1mL del Reactivo de Trabajo (previamente homogenizado); mezclar y transferir inmediatamente para una cubeta termostatizada a 37C. Medir las absorbancias del Patrn y de la Muestra en 510 nm a los 30 y 90 segundos. Dosificacin en Orina Anotar el volumen en mL, centrifugar una alcuota de la muestra y diluir 1:25 (100 L de orina y 2,4 mL de agua destilada). Despus hacer la dosificacin como en la tcnica descrita antes. Multiplicar el resultado obtenido por 25. Procedimiento automtico La mencin el manual o POE para el uso del equipo de anlisis. Coloque la programacin de los reactivos para el equipo automatizado. CLCULOS A del Patrn o de la Muestra = Abs. 90 segundos - Abs. 30 segundos Creatinina = A de la muestra x Concentracin del patrn (3mg/dL) (mg/dL) A del patrn Como la reaccion siegue la Ley de Lambert-Beer, el factor de calibracin puede ser usado. Factor de calibracin = Concentracin del patrn (3mg/dL) A del patrn Creatinina (mg/dL) = A de la Muestra x Factor de calibracin Creatinina en Orina (mg/24 h) = mg/dL x Volumen de 24 h (mL) 100 DEPURACIN Hidratar a paciente con un mnimo de 600 mL de agua y en seguida orientarlo para eliminar el liquido. La depuracin de la creatinina deber ser realizada en muestra colectada con 4, con 12, o con 24 horas. En cualquier momento de este intervalo de tiempo, colectar una muestra de sangre. Despus colectar la muestra de orina, medir el volumen y calcular el volumen por minuto (VM). VM = Vol. Urinario de tiempo determinado (mL) Tiempo determinado (en minutos) Dosificar la Creatinina srica y urinaria segun las metodologas propuestas.

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Hacer el clculo de la Depuracin de Creatinina: U = Creatinina urinaria (mg/dL) S = Creatinina srica (mg/dL) VM = Volumen/minuto A = Valor de la superfcie corporal del paciente en m2 Depuracin de la Creatinina (mL/min) = U x VM S Obs.: Este valor deber tener correccin por la superfcie corporal del paciente. Usar el nomograma de correlacin peso-altura. Multiplicar el valor de la depuracin por 1,73 y dividir por la superfcie corporal del paciente. Depuracin de la creatinina (mL/min./1,73m2) = U x VM x 1,73 S A Ejemplo: Depuracin (Orina de 24 horas) U = Creatinina urinaria = 110 mg/dL S = Creatinina srica = 0,9 mg/dL Volumen urinario de 24 horas : 1,480 mL en 24 horas(1,440 minutos) Volumen/minuto = VM = 1,480 = 1,0277 1,440 Peso del paciente = 60 kg Altura del paciente = 165 cm Superfcie corporal = 1,66 m2 Depuracin (mL/min) = 110 x 1,0277 = 125,60 0,9 Depuracin (mL/min./1,73m2) = 110 x 1,0277 x 1,73 = 130,889 0,9 1,66 RESULTADOS Unidad de Medida(Suero o plasma): mg/dL Fator de conversin de Unidad (SI): mg/dL x 0,0884 = mmol/L Unidad de Medida (Orina): mg/24h Unidad de Medida(Depuracin): mL/min./1,73m2 VALORES DE REFERENCIA Los valores de referencia en mg/dL, para el presente mtodo fueron obtenidos por determinacin de creatinina en poblaciones sanas de sexo masculino y femenino. Suero o plasma..............................0,4 a 1,4 mg/dL Orina Hombres ............................. 1500 a 2500 mg/24 horas Orina Mujeres ................................800 a 1500 mg/24 horas Depuracin Hombres.......................97 a 137 mL/min/1,73 m2 Depuracin Mujeres.........................88 a 128 mL/min/1,73 m2 Depuracin Nios ...........................70 a 140 mL/min/1,73 m 2 mg/Kg peso = mg/24h dividido por el peso corporal Para convertir los valores de mg/dL en mmol/L (SI), multiplicar por 0,0884. LIMITACIONES DEL PROCESOS Este proceso solamente puede ser realizado en espectrofotmetro con cubeta termostatizada a 37C, por el corto intervalo de tiempo de reaccin. La metodologa descripta no deber ser utilizada para muestras extremamente lipmicas. INTERFERENTES No se aplica.

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SENSIBILIDAD La sensibilidad indica el lmite de deteccin del mtodo. Fue calculada a partir de 20 determinaciones de Creatinina Cintica, en una muestra exenta de ese analitos. Fue encontrado un valor promedio igual a 0,165 mg/dL, com desvio patrn de 0,006 mg/dL. La sensibilidad que corresponde a la suma del promedio encontrado con 03(tres) veces el desvio patrn, para este mtodo, es igual a 0,183 mg/dL. LINEARIDAD La reaccin de color es lineal hasta la concentracin de 10 mg/L Para valores mayores, diluir la muestra con Cloruro de sdio 0,85% y repertir la determinacin. Multiplicar el valor obtenido por el factor de dilucin. CONTROL DE CALIDAD Materiales Identificar el control del material interno y control externo de calidad, citando el fabricante y el nmero de catlogo. Refirindose POE para la limpieza y secado de los materiales utilizados. Control Interno Describa la calibracin peridica de las pipetas, el equipo utilizado, control de temperatura y refrigeradores para el almacenamiento de equipos. Debera ser una prctica habitual del laboratorio clnico utilizando suero de control para comprobar la precisin y la exactitud de las mediciones. Cita POE para el control interno. Control Externo Describir los procedimientos utilizados en las evaluaciones de calidad realizadas por programas de comparacin entre laboratorios u otros controles de calidad. La gestin de los datos obtenidos en el Control interno y externo Establecer como los datos de control se almacenan y gestionan. Consulte el manual de Definido por el aseguramiento de la calidad. SIGNIFICADO DIAGNSTICO La Creatinina, sintetizada principalmente en hgado y en los riones, es producida y excretada en un ritmo constante independiente de la dieta, grado de hidratacin y metabolismo protinico. Con la falencia de la funcin renal, los datos laboratoriales proporcionan ndices seguros con relacin a capacidad renal de excretar, reabsorver y secretar. La Creatinina est elevada en la insuficincia renal aguda y crnica, en la obstrucin del tracto urinario, en insuficiencia cardiaca congestiva, en desidratacin, en choquey en diabets melittus. Niveles disminudos pueden ser observados: en las distrofias musculares, desnutricin, disminuicin de la masa muscular y enfermedad renal severa. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - SLOT, C.; Sand. J. Clin. Lab. Invest. 17:381, 1965. 2 - HENRY, R. J.: Clinical Chemistry - Principles and Technics, 4 Ed., Harper and Row. New York, 1964. 3- TODD,SANFORD,DAVIDSOHN;Diagnsticos Clnicos, 16 Ed., Editora Manole, 1983. 4 - CARL, A. B. and EDWARD, R. A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed., 1994, 1531-1539. 5 - Bioclin Dados de arquivo.

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Nombre Preparado por: Aprobado por: Presentado por: Sustituye POE: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desactivado por: Razn: Nmero Cpias

Firma

Fecha __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__

Destino

Quibasa/Bioclin POE Creatinina Cintica Revisin: Julio/12

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CREATININE KINETIC
FUNCTION Method for determination of Creatinine. Colorimetric Kinetic test, for in vitro diagnostic use only. PRINCIPLE OF ACTION Methodology: Colorimetric Kinetic. Fixed Time Kinetic: creatinine reacts with picrate in alkaline half-tamponed, obtaining a chromogen whose absorbance is proportional to the concentration of creatinine in the sample. The nonspecific chromogens are eliminated by a pre-reading because they have immediate formation. REAGENT USED CREATININE KINETIC CATLOGO: K067 ANVISA: 10269360201

QUIBASA QUMICA BSICA Ltda. Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: +55 (31) 3439.5454 Fax: +55 (31) 3439.5455 E-mail: sac@bioclin.com.br Site: www.bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira COMPONENTS Number 1 - Buffer - Store between 15 and 30C. Contains: sodium hydroxide, Sodium 110 mmol/L, Sodium carbonate 75 mmol/L. Number 2 - Picric acid - Store between 15 and 30C. Contains: Picric acid 60 mmol/L. Number 3 - Standard - Store between 15 and 30C. After handling, store in refrigerator between 2 and 8C to prevent evaporation. Contains: Creatinine 3,0 mg/dL. STABILITY The reagents are stable until the expiration date printed on the label when stored under the recommended temperature. Avoid contamination of the product during use to not affect its stability. SPECIAL CARE 1- For in vitro diagnostic only. 2- Strictly follow the methodology proposed to obtain exact results. 3- Water used in material cleaning must to be recent and free of contaminants. 4- Saturated deionizer columns release alkaline water, many ions, oxidizing agents and reducers that may alter the results significantly. 5- We recommend applying the local, state and federal regulations for environmental protection, so the disposal of reagents and biological material can be made in accordance with the current legislation. 6- To obtain information related to biosafety or in case of accidents with the product, consult the MSDS (Material Safety Data Sheet) available in the website www.bioclin.com.br or upon request to Bioclins Customer Services. EQUIPMENTS AND OPERATIONAL INPUTS Manual Procedure Equipment: Thermostated Spectrophotometer Pipettes, test tubes watch or stopwatch Biocontrol N and Biocontrol P Bioclin Automated Procedure Equipment: Biochemistry automated equipment

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Biocontrol N and Biocontrol P Bioclin

Insert name, model and location of the equipment; Refer to the manual or SOP to use. SAMPLE Serum obtained free of hemolysis, plasma (collected with heparin EDTA) and urine. The compound is stable in plasma, serum or urine for three days if kept between 2 and 8C, and 7 days if kept at -10C. PREPARATION OF WORKING REAGENT Mix one part of reagent N1 with a portion of Reagent N2. Store in amber bottle. Stable 24 hours between 15 and 30C. Homogenize the reagent of work before starting the technique. TECHNIQUE Bioclin recommends, as control serum, Biocontrol N and P Bioclin Kits. Manual Procedure Add 100 mL of standard or sample (serum, plasma or urine) to 1 mL of working reagent (previously homogenized), mix and immediately transfer to a thermostated cuvette 37C. Measure absorbance of standard and sample at 510nm at 30 and 90 seconds. Urine Dosage Take note of the volume collected in mL centrifuge an aliquot of urine sample to be measured and make a 1:25 dilution (100 mL of urine and 2.4 ml of distilled water). Then make the estimation as in technique described above. Multiply the result by 25. Automated Procedure Mention the manual or SOP for use of analytical equipment. Attach the programming of reagents for automated equipment. CALCULATION A of Standard or Sample = Abs. 90 seconds Abs. 30 seconds Creatinine = A of sample x standard concentration (3mg/dL) (mg/dL) A of standard Since the reaction follows the Lambert-Beer law, the calibration factor may be used. Calibration factor = Standard Concentration (3mg/dL) A from Standard Creatinine (mg / dL) = A of Sample x Calibration factor Creatine in Urine (mg/24h) = mg/dL x Volume of 24h (mL) 100 DEPURATION Hydrate the patient, with at least 600 mL of water and then guide you to empty the bladder. Creatinine clearance should be performed on a sample taken at 4, 12 or 24 hours. In any time of the chosen time interval, a sample of blood. Measure the total volume of urine and calculate the volume per minute (VM). VM = Urinary volume in determined period of time (mL) Determinated time (in minutes) Dose the serum and urine creatinine following the methodologies proposed. To calculate creatinine clearance: U = urinary creatinine (mg/dL) S = serum creatinine (mg/dL)

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VM = volume/minute A = Value of the patients body surface area in m 2 Creatine Deputarion (mL/min) = U x VM S Note: This value should be corrected for patients body surface. Using the nomogram of height-weight correlation. Multiply the value of clearance by 1,73 and divide by the surface of patients body. Creatine Deputarion (mL/min/1,73 m2) = U x VM x 1,73 S A Example: Depuration (24-hour urine) U = urinary creatinine = 110 mg/dL S = serum creatinine = 0.9 mg/dL 24-hour urine volume:1,480 mL in 24 hours (1,440 minutes) Volume/minute = VM = 1,480 = 1,0277 1,440 Patients weight = 60 kg Patient height = 165 cm Body surface area = 1.66 m Depuration (mL/min) = 110 x 1,0277 = 125,60 0,9 Depuration (mL/min./1,73 m) = 110 x 1,0277 = 1,73 0,9 1,66 Depuration (mL/min./1,73 m) = 130,889 RESULTS Unit of measure (Serum or plasma): mg/dL Conversion Factor Units (SI): mg/dL x 0,00884 = mmol/L Unit of measure (Urine): mg/24 hour Unit of measure (Depuration): mL/min/1.73 m REFERENCE VALUES The reference values in mg/dL, for this method were obtained through the determination of creatinine in healthy populations of male and female. Serum or plasma ............................ 0,4 to 1,4 mg/dL Men Urine ...................................... 1500 to 2500 mg/24 hour Women Urine .................................. 800 to 1500 mg/24 hour Depur Men ..................................... 97 to 137 mL/min/1.73 m Depur Women. .............................. 88 to 128 mL/min/1.73 m Depur Child mL/min/1 .................... 70 to 140 mL/min/1.73 m mg/kg weight = mg/24h divided by body weight To convert the values to mg/dL to mmol/L (SI), multiply by 0,0884. PROCEDURE LIMITATIONS This process can only be accomplished with a spectrophotometer cuvette at 37C, due to the small time interval reaction. The methodology described should not be used for extremely lipemic samples. INTERFERING Not applicable. SENSITIVITY The sensitivity indicates the limit of detection. It Was calculated from twenty (20 determinations of Kinetic Creatinine in a sample from these analytes. It was found an average value equal to 0,165

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mg/dL, with a standard deviation 0,006 mg/dL. The sensitivity, which is the sum of the average found in three times the standard deviation for this method is equal to 0,183 mg/dL. LINEARITY The reaction color is linear to the concentration of 10 mg/dL. For higher values dilute the sample with sodium chloride 0.85% and repeat the determination. Multiply the value obtained by the dilution factor. QUALITY CONTROL Materials Identify material internal control and external quality assurance, citing manufacturer and catalog number. Referring SOP for cleaning and drying of materials used. Internal Control Describe the periodic calibration of pipettes, equipment used, temperature control and refrigerators for storage of kits. It should be a routine practice of the Clinical Laboratory using control serum to check the precision and accuracy of measurements. Quote SOP for internal control. External Control Describe the procedures used in quality assessments made by inter-laboratory comparison programs or other quality controls. Management of the data obtained in the Internal and External Control Set as the control data are stored and managed. Refer to the manual or POP for quality assurance. DIAGNOSTIC SIGNIFICANCE Creatinine is synthesized in the liver and kidneys, is produced and excreted at a constant rate independent of diet, degree of hydration and protein metabolism. With renal failure, the laboratory data provide insurance rates and the ability kidneys to excrete, secrete and reabsorb creatinine. Creatinine is elevated in acute and chronic renal failure in urinary tract obstruction, congestive heart failure in dehydration, shock and in diabetes mellitus. Decreased levels may be observed in muscular dystrophies, malnutrition, reduced muscle mass and severe renal disease. BIBLIOGRAPHIC REFERENCES 1 - SLOT, C.; Sand. J. Clin. Lab. Invest. 17:381, 1965. 2 - HENRY, R. J.: Clinical Chemistry - Principles and Technics, 4 Ed., Harper and Row. New York, 1964. 3- TODD,SANFORD,DAVIDSOHN;Diagnsticos Clnicos, 16 Ed., Editora Manole, 1983. 4 - CARL, A. B. and EDWARD, R. A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed., 1994, 1531-1539. 5 - Bioclin Dados de arquivo.

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Quibasa/Bioclin SOP Creatinine Kinetic Review: July/12