COMPARACIN DEL EFECTO GENOTXICO DE DISTINTAS AGUAS RESIDUALES Lopez, Laura Christina; Bassi, Marcelo y Moretton, Juan.

Catedra de Higiene y Sanidad, Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA Junn 956 4 piso 1113 Buenos Aires Fax (54-1) 962-5341 (54-1) 964-8274 Palabras claves: Genotxicos, efluentes industriales, aguas. RESUMEN La legislacin vigente en muchos paises (incluso en Argentina) exige que se controle la carga genotxica de los efluentes peligrosos. El objetivo del presente trabajo fue demostrar la utilidad del ensayo de Ames para comparar la genotoxicidad de los efluentes crudos correspondiente a las siguientes actividades: a)produccin de colorantes, b)curtido al cromo de cueros, c)revelado fotogrfico y d)laboratorio de anlisis biolgicos. Los resultados obtenidos permitieron demostrar efectos genotxicos en a), b) y c), resultado no esperado para los efluentes b) y c) que contenan altas concentraciones de sales de metales no mutagnicos. En el caso d) no se produjo el resultado mutagnico esperado por antagonismo entre los colorantes genotoxicos y otros elementos presentes en el efluente.

INTRODUCCION Las aguas residuales generadas por una gran variedad de procesos industriales y actividades relacionadas a los mismos, pueden ser consideradas como residuos peligrosos debido a sus efectos txicos tanto para la biota de los ecosistemas en general como para el ser humano en particular. Los procesos fsicos, qumicos y biolgicos destinados a la depuracin de dichos efluentes han sido diseados para disminuir o eliminar principalmente los compuestos responsables de la toxicidad aguda. En los ltimos aos se ha comenzado a considerar los efectos txicos crnicos, es decir aquellos que aparecen luego de una administracin y/o contacto prolongado con pequeas dosis de agentes ambientales. Uno de estos efectos crnicos es la genotoxicidad que puede definirse como la capacidad de algunas sustancias para alterar el material gentico de distintas especies. Esta alteracin lleva a mutaciones en clulas somticas o germinales, en el primer caso se aumenta el riesgo de aparicin de cancer y en el segundo los efectos adversos sobre el feto pueden llevar a malformaciones conocidas como teratognesis. Por estas razones la legislacin vigente en muchos paises (incluso en Argentina) exige que se controle la carga genotxica de los efluentes peligrosos durante distintas etapas de su depuracin. Este control no es sencillo. En primer lugar se debe seleccionar un sistema biolgico que permita estimar en forma rpida y econmica el dao inducido al material gentico. En segundo lugar se debe prestar atencin a las caractersticas de los efluentes en s. Se trata de mezclas complejas de distintos compuestos cuya composicin puede variar, muchas veces en forma no controlada, en distintas etapas del proceso de depuracin y luego del vertido a cursos de agua. A esto se suma que muchos agentes que se encuentran en muy baja concentracin pueden sinergizar o inactivar a compuestos genotxicos de la mezcla. A pesar de su importancia pocos son los estudios que se han realizado en Argentina acerca de este tema. El objetivo del presente trabajo fue comparar la carga genotxica relativa de una serie de efluentes crudos representativos de los siguientes grupos de industrias y actividades relacionadas: -Produccin de colorantes para cueros y telas. -Curtido al cromo de cueros -Revelado fotogrfico -Laboratorio de anlisis biolgicos (seccin Microbiologa). Estos efluentes se seleccionaron debido a que presentan caractersticas similares en su composicin con presencia de residuos de colorantes y metales pesados.

MATERIALES Y METODOS Las muestras de agua se obtuvieron en recipientes de vidrio y se conservaron en fro hasta su examen biolgico. En los casos en los que se consider necesario se detemin la composicin qumica parcial de las muestras mediante las tcnicas descriptas en Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 16 Ed. (1985). Las muestras se esterilizaron por pasaje a traves de membranas de acetato de celulosa de 0,22 m de tamao de poro (Millipore) previo a su ensayo biolgico. Como sistema para deteccin de genotxicos se utiliz el de Salmonella/microsomas conocido como test de Ames, de amplia difusin internacional. La tcnica empleada fue la descripta pro Maron y Ames (Mutation Res. 113: 173-215; 1983) que basicamente consiste en poner en contacto las cepas bacterianas con distintas concentraciones de agua residual cruda y, si correspondiera, fraccin microsomal para activacin de promutgenos (S9mix). El conjunto se incuba 24 horas y se cuentan el nmero de colonias revertantes inducidas en cada placa de petri. Los resultados se consideran positivos cuando el nmero de colonias promedio en las placas tratadas duplica el correspondiente a los controles. RESULTADOS En las Figuras 1 y 2 se muestran los resultados obtenidos al ensayar los efluetes correspondientes a la industria de curtiembre y al revelado fotogrfico que poeseen en comn la presencia de una alta concentracin de metales pesados, cromo trivalente y plata respectivamente. En ambos casos se obtuvo un resultado positivo que indica que, an diluidos estos efluentes pueden resultar genotxicos. Tambin en ambos casos la carga genotxica desapareci al tratar el efluente crudo con una solucin alcalina (OHNa 1N) para precipitar las sales de metales. En las figuras 3 y 4 se observan los resultados obtenidos al ensayar los dos efluentes con una mayor carga de compuestos orgnicos, en particular colorantes, Las muestras correspondientes a la industria de colorantes produjeron una notable genotoxicidad tanto en presencia como en ausencia de fraccin microsomal. Un caso completamente distinto se detect en las aguas del laboratorio de microbiologa donde no se observ ni genotoxicidad ni toxicidad inespecfica. DISCUSION Los efluentes con un alto contenido de sales de metales pesados (2.500 ppm de Cr(III) + y 1.000 ppm de Ag para curtiembre y fotografa respectivamente) deberan haber inducido unicamente un efecto txico ya que ninguno de estos compuestos puros ha generado mutagenicidad en ensayos previos realizados por otros autores. En estos casos puede postularse que la genotoxicidad se debe a la compleja mezcla en si, donde aparecen efectos sinrgicos de distintas sustancias lo que hace casi imposible predecir efectos biolgicos a partir de datos de anlisis qumicos de efluentes. Para los efluentes de la industria productora de colorantes tanto la toxicidad como la genotoxicidad observadas si podan predecirse a partir de los datos qumicos de la composicin del efluente. Muchas de las estructuras de las sustancias presentes haban sido descritas como agentes mutagnicos en ensayos previos. Un caso similar lo representa el laboratorio de analisis biolgicos pero en estas muestras, en forma sorprendente, el efecto genotxico esperado no se detecta. Si bin este tipo de aguas residuales merece un estudio ms profundo es muy probable que se produzcan fuertes interferencias entre los compuestos presentes en el mismo. En conclusin estos datos demuestran la importancia de los ensayos biolgicos de efluentes para su caracterizacin y la adecuacin de los procesos de depuracin para eliminacin de la actividad genotxicos. AGRADECIMIENTOS: este trabajo fue financiado con un subsidio de la Universidad de Buenos Aires (FA092)

Figura 1 Ensayo de Ames con agua cruda de curtiembre

300

promedio de colonias revertantes/placa

200

TA98 TA100

100

TA98+S9
TA100 + S9

0.1

0.2

10

20

100

Volumen ensayado (l)

Figura 2 Ensayo de Ames con aguas residuales de procesado fotografico

200

numero promedio de revertantes/placa

TA98 TA98+S9 TA100 TA100+S9

100

0,1

10

100

volumen ensayado (l)

Figura 3 Ensayo de Ames con efluente de un laboratorio de analisis microbiologicos

150

numero promedio de revertantes/placa

100

TA98 TA100 TA98 + S9 TA 100 + S9

50

0.0

100.0

10.0

1.0

0.1

volumen ensayado (l)

Figura 4 Ensayo de Ames con efluente de una industria productora de colorantes

2000

umero promedio de revertantes/placa

TA98 TA100 TA98 + S9 TA100 + S9

1000

0.0

1.0

0.1

volumen ensayado (l)