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Documentos 306

Ruben Cassel Rodrigues


Mtodos de Anlises Bromatolgicas
de Alimentos: Mtodos Fsicos,
Qumicos e Bromatolgicos
Embrapa Clima Temperado
Pelotas, RS
2010
ISSN 1806-9193
Dezembro, 2010
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Embrapa Clima Temperado
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Embrapa 2010
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edio
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impresso (2010): 50 exemplares
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A reproduo no-autorizada desta publicao, no todo ou em parte, constitui violao
dos direitos autorais (Lei no 9.610).
Dados Iinternacionais de Catalogao na Publicao (CIP)
Embrapa Clima Temperado
Rodrigues, Ruben Cassel.
Mtodos de anlises bromatolgicas de alimentos: mtodos fsicos,
qumicos e bromatolgicos / Ruben Cassel Rodrigues. Pelotas:
Embrapa Clima Temperado, 2010.
177 p. (Embrapa Clima Temperado. Documentos, 306 ).
ISSN 1516-8840
Qumica analtica Anlise qumica Manual de laboratrio. I.Ttulo.
II. Srie
CDD 543
Autor
Ruben Cassel Rodrigues
Zootecnista, Mestre, Pesquisador
da Embrapa Clima Temperado,
Pelotas, RS,
cassel.rodrigues@cpact.embrapa.br
Agradecemos especialmente aos
laboratoristas Gilmar Barros dos Santos e
Mauro Antonio Paz Pinto pela colaborao
na consulta de literatura, digitao e
comprovao laboratorial da eficincia dos
mtodos contidos neste trabalho.
Agradecimentos
Apresentao
Esta publicao tem como propsito apresentar procedimentos e
metodologias de determinaes qumico-bomatolgicas de alimentos
destinados alimentao animal. As informaes so oriundas de
consultas de literaturas nacionais e internacionais, disponveis em livros e
artigos cientficos. As metodologias relatadas neste trabalho esto
disponveis em publicaes em bibliotecas de instituies que realizam
trabalhos no ramo de alimentao, bromatologia e nutrio animal.
Em funo da experincia dos autores desta publicao, as metodologias
usuais do Laboratrio de Bromatologia e Nutrio Animal da Embrapa
Clima Temperado sofreram, ao longo dos anos, pequenas modificaes nas
anlises bem como no manuseio de equipamentos. Observamos que as
pequenas modificaes nos mtodos convencionais, indicados nas
metodologias descritas, facilitaram as anlises laboratoriais.
Esta obra se destina a agrnomos, zootecnistas, veterinrios, bem como a
alunos de curso superior, tcnicos e iniciantes em laboratrio de
bromatologia e nutrio animal.
Waldyr Stumpf Junior
Chefe-Geral
Embrapa Clima Temperado
Sumrio
MTODOS DE ANLISES BROMATOLGICAS DE ALIMENTOS.........
1. INTRODUO..............................................................................
1.1. BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL........................................
1.2. IMPORTNCIA DA ALIMENTAO ANIMAL...................................
1.3. ALIMENTO, NUTRIENTE E NUTRIENTE DIGESTVEL.........................
2. MTODO DE WEENDE...................................................................
2.1. PRINCPIO................................................................................
2.2. COLETA DE AMOSTRAS QUE SE DESTINAM AO LABORATRIO........
2.2.1. Preparo da amostra a ser analisada.......................................
2.3. DETERMINAO DA MATRIA SECA...........................................
2.3.1. Princpio.......................................................................
2.3.2. Pr-Secagem (Matria Seca a 65C).............................
2.3.3. Matria Seca Definitiva (Matria Seca 105C)..............
2.3.4. Teor de umidade..........................................................
TABELA 1. DETERMINAO DA % DE PR-SECAGEM.......................
TABELA 2. DETERMINAO DA % DE MATRIA SECAL...................
2.4. CINZAS OU MATRIA MINERAL...................................................
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2.4.1. Princpio.....................................................................
2.4.2. Material necessrio....................................................
2.4.3. Reagentes..................................................................
2.4.4. Procedimento............................................................
2.4.5. Clculo Final..............................................................
2.4.6. Ajuste base de 100 % da matria seca....................
TABELA 3. DETERMINAO DA CINZA E MATRIA ORGNICA....
2.5. EXTRATIVOS NO NITROGENADOS (ENN).................................
2.5.1. Princpio....................................................................
2.5.2. Frmula.....................................................................
2.6. EXTRATO ETREO OU GORDURA...............................................
2.6.1. Princpio....................................................................
2.6.2. Consideraes gerais..................................................
TABELA 4. PORCENTAGEM DE CARBONO, HIDROGNIO E
OXIGNIO NAS GORDURAS E NOS CARBOIDRATOS (AMIDO)........
2.6.3. Materiais/Equipamentos..............................................
2.6.4. Reagentes.................................................................
2.6.5. Mtodo a quente........................................................
2.6.6. Mtodo a frio.............................................................
2.6.7. Cuidados com os solventes........................................
2.6.8. Procedimento............................................................
2.6.9. Frmula.....................................................................
2.6.10. Ajuste base de 100 % da matria seca..................
TABELA 5. DETERMINAO DA % DE EXTRATO ETREO..............
2.7. FIBRA BRUTA........................................................................
2.7.1. Princpio....................................................................
2.7.2. Materiais/equipamentos..............................................
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2.7.3. Reagentes e solues.................................................
2.7.4. Procedimento.............................................................
2.7.5. Recomendaes..........................................................
2.7.6. Frmula......................................................................
2.7.7. Ajuste base de 100 % da matria seca.....................
TABELA 6. DETERMINAO DA % DE FIBRA BRUTA......................
2.8. CELULOSE..............................................................................
2.8.1. Princpio.....................................................................
2.8.2. Consideraes gerais...................................................
2.8.3. Material necessrio.....................................................
2.8.4. Reagentes e Solues..................................................
2.8.5. Procedimento.............................................................
TABELA 7. DETERMINAO DA % DE CELULOSE...........................
2.9. DETERMINAO DA ENERGIA BRUTA.........................................
2.9.1. Princpio.....................................................................
2.9.2. Consideraes gerais...................................................
2.9.3. Material necessrio.....................................................
2.9.4. Reagentes e solues..................................................
2.9.5. Procedimentos............................................................
2.9.6. Equivalente hidrotrmico da bomba calorimtrica.........
2.9.7. Determinao da Energia Bruta da Urina (amostra
lquida)........................................................................
TABELA 8. DETERMINAO DA % DA ENERGIA BRUTA.................
2.10. DETERMINAO DO NITROGNIO TOTAL..................................
2.10.1. Princpio.................................................................
2.10.2. Material necessrio.................................................
2.10.3. Reagentes e solues..............................................
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2.10.4. Digesto...................................................................
2.10.5. Destilao................................................................
2.10.6. Titulao..................................................................
2.10.7. Procedimento (Processo semimicro) A.O.A.C (1975)..
2.10.8. Frmula para clculo da protena...............................
2.10.9. Ajuste base de 100 % da matria seca...................
TABELA 9. DETERMINAO DA % DE NITROGNIO TOTAL...........
3. DETERMINAO DE DIGESTIBILIDADE IN VITRO DA MATRIA
SECA OU ORGNICA......................................................................
3.1. PRINCPIO...............................................................................
3.2. MATERIAIS/EQUIPAMENTOS......................................................
3.3. REAGENTES E SOLUES.........................................................
3.3.1. Soluo de cido clordrico 6 N....................................
3.3.2. Soluo de carbonato de sdio.....................................
3.3.3. Soluo de pepsina 1:10.000 20% p/v.........................
3.3.4. Soluo de saliva artificial (volume da soluo 500 ml).
3.3.5. Soluo de Uria 8% p/v............................................
3.4. PROCEDIMENTO......................................................................
3.5. DIGESTIBILIDADE DA MATRIA ORGNICA..................................
3.5.1. Clculo para DIVMO...................................................
3.6. RESULTADOS..........................................................................
3.6.1. Ajuste base de 100 % da matria seca.....................
TABELA 10. DETERMINAO DA % DE DIGESTIBILIDADE IN
VITRO DA MATRIA SECA.............................................................
4. DETERMINAO DE PH E CIDO LTICO EM SILAGEM..............
4.1. PRINCPIO...............................................................................
4.2. DETERMINAO DE PH............................................................
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4.2.1. Materiais/Equipamentos...............................................
4.2.2. Reagentes e solues..................................................
4.2.3. Procedimento.............................................................
4.3. DETERMINAO DE CIDO LTICO.....................................
4.3.1. Materiais/Equipamentos...............................................
4.3.2. Reagentes e solues..................................................
4.3.3. Procedimento.............................................................
TABELA 11. PADRES DE LEITURA.................................................
4.3.4. Resultados..................................................................
5. O MTODO VAN SOEST NA DETERMINAO DA QUALIDADE
DE FORRAGEIRAS............................................................................
TABELA 12. COMPARAO ENTRE O MTODO DE VAN SOEST E
WEENDE NA DIVISO DA MATRIA ORGNICA DE FORRAGEIRAS.
5.1. DETERMINAO DA FIBRA EM DETERGENTE NEUTRO (FDN)..........
5.1.1. Princpio.....................................................................
5.1.2. Material e mtodos.....................................................
5.1.3. Reagentes e solues..................................................
5.1.4. Procedimento.............................................................
5.1.5. Frmula Final para FDN...............................................
5.1.6. Ajuste base de 100 % da matria seca.....................
TABELA 13. DETERMINAO DA % DE FIBRA EM DETERGENTE
NEUTRO...........................................................................................
5.2. DETERMINAO DE FIBRA EM DETERGENTE CIDO (FDA).............
5.2.1. Princpio.....................................................................
5.2.2. Material e mtodos.....................................................
5.2.3. Reagentes e solues..................................................
5.2.4. Procedimento.............................................................
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5.2.5. Frmula Final para FDA...............................................
5.2.6. Ajuste base de 100 % da matria seca....................
TABELA 14. DETERMINAO DA % DE FIBRA EM DETERGENTE
CIDO.............................................................................................
5.3. DETERMINAO DE LIGNINA EM DETERGENTE ACIDO (LDA)........
5.3.1. Princpio.....................................................................
5.3.2. Material necessrio....................................................
5.3.3. Reagentes e solues..................................................
5.3.4. Procedimento.............................................................
5.3.5. Frmula......................................................................
5.3.6. Correo base de 100 % da matria seca................
5.4. DETERMINAO DE LIGNINA MTODO DO PERMANGANATO.....
5.4.1. Material necessrio...................................................
5.4.2. Reagentes e solues.................................................
5.4.3. Procedimento.............................................................
5.4.4. Resultados.................................................................
5.4.5. Correo base de 100 % da matria seca................
TABELA 15. DETERMINAO DA % DE LIGNINA CIDA................
6. VALOR RELATIVO NUTRICIONAL (V.R.N.)...................................
6.1. PRINCPIO..............................................................................
6.2. FRMULA..............................................................................
6.3. COMENTRIO.........................................................................
7. AVALIAO ENERGTICA DOS ALIMENTOS..............................
7.1. INTRODUO.........................................................................
7.2. FRMULAS DE CLCULOS DAS ENERGIAS PARA SILAGENS.........
7.2.1. Nutrientes digestveis totais (NDT)..............................
7.2.2. Digestibilidade da matria seca (DMS).........................
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7.2.3. Energia digestvel (ED).................................................
7.2.4. Energia metabolizvel (EM)..........................................
7.2.5. Fibra bruta (FB)...........................................................
7.2.6. Energia lquida (EL)......................................................
7.3. FRMULAS DE CLCULOS DAS ENERGIAS PARA RAO ANIMAL..
7.3.1. Nutrientes digestveis totais % (NDT)...........................
7.3.2. Energia lquida lactao (Mcal/kg)...............................
7.4. ENERGIA LQUIDA DE MANTENA (ELM) (MCAL/KG)..............
7.5. ENERGIA LQUIDA DE GANHO (ELG) (MCAL/KG)...................
8. MACRONUTRIENTES (N, P, K, CA E MG) EM PLANTAS E RESDUOS
ORGNICOS....................................................................................
8.1. PRINCPIO..............................................................................
8.2. METODOLOGIA ADOTADA........................................................
8.2.1. Nitrognio..................................................................
8.2.2. Fsforo.......................................................................
8.2.3. Potssio.....................................................................
8.2.4. Clcio e Magnsio.......................................................
8.3. MATERIAL NECESSRIO...........................................................
8.4. REAGENTES E SOLUES.........................................................
8.4.1. Soluo de perxido de hidrognio (H
2
O
2
) a 30%..........
8.4.2. Mistura de digesto....................................................
8.4.3. Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 10 mol..............
8.4.4. Soluo de indicador de cido brico...........................
8.4.5. Soluo de cido sulfrico (H
2
SO
4
) 0,025 mol..............
8.4.6. Soluo de molibdato de amnio.................................
8.4.7. Soluo de estrncio a 0,3% em HCl 0,2 M................
8.4.8. Soluo de magnsio (1.200 mg L
-1
de Mg
2+
)..............
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8.4.9. Soluo de padro misto de P, K, Ca e Mg..................
8.5. PROCEDIMENTO......................................................................
8.5.1. Digesto das amostras................................................
TABELA 16. DILUIES PARA 50 ML DA DIGESTO DA AMOSTRA.......
TABELA 17. CONCENTRAES FINAIS.......................................
8.5.2. Determinao de nitrognio (N)...................................
8.5.3. Determinao de fsforo (P).......................................
8.5.4. Determinao de potssio (K)......................................
8.5.5. Determinao de clcio e magnsio (smbolo qumico
Ca e Mg)....................................................................
9. MICRONUTRIENTES (ZN, CU, MN E FE), ENXOFRE E SDIO EM
PLANTAS E RESDUOS ORGNICOS........................................................
9.1. PRINCPIO...............................................................................
9.2. METODOLOGIA ADOTADA........................................................
9.3. MATERIAIS/EQUIPAMENTOS......................................................
9.4. REAGENTES E SOLUES.........................................................
9.4.1. Padro de Cu de 1.000 mg L
-1
.....................................
9.4.2. Padro de Zn de 1.000 mg L
-1
......................................
9.4.3. Padro de Fe, Mn e Na................................................
9.4.4. Padro diludo.............................................................
9.4.5. BaCL
2
-gelatina............................................................
9.5. PROCEDIMENTO......................................................................
9.5.1. Digesto das amostras................................................
TABELA 18. DILUIES PARA 20 ML DA DIGESTO DA
AMOSTRA TABELA 19. CONCENTRAES FINAIS.........................
9.5.2. Determinao de enxofre............................................
9.5.3. Determinao do cobre, zinco, ferro, mangans e sdio
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10. MTODOS TITULOMTRICOS...................................................
10.1. CONCENTRAO E PREPARO DE SOLUES.......................
10.1.1. Definies............................................................
10.1.2. Normalidade..........................................................
10.1.3. Molaridade............................................................
10.1.4. Concentrao.......................................................
11. SEGURANA EM LABORATRIO QUMICO...............................
11.1. PRINCPIO...........................................................................
11.2. RISCOS QUMICOS...............................................................
11.2.1. Formas de agresso por produtos qumicos.............
11.2.2. Limites de tolerncia.............................................
11.2.3. Medidas bsicas de segurana...............................
12. SOLUES DE LIMPEZA...........................................................
12.1. SOLUO SULFOCRNICA PARA VIDRARIA....................
12.1.1. Reagentes.............................................................
12.1.2. Procedimento........................................................
12.2. SOLUO DE CIDO CLORDRICO 1% - PARA VIDRARIA.......
12.2.1. Reagentes.............................................................
12.2.2. Procedimento........................................................
12.3. SOLUO DE CIDO FOSFRICO (H
3
PO
4
) 10% V/V. PARA
DESTILADOR........................................................................
12.3.1. Reagentes.............................................................
12.3.2. Procedimento........................................................
13. ANLISES REALIZADAS NO LABORATRIO DE
BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL.........................................
13.1. CLCULO DAS ENERGIAS ATRAVS DE EQUAES...............
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14. REAGENTES USADOS NO LABORATRIO DE BROMATOLOGIA
E UTRIO ANIMAL........................................................................
TABELA 20. TABELA DE ELEMENTOS QUMICOS IMPORTANTES....
TABELA 21. CONCENTRAES USUAIS DE DIVERSOS CIDOS
COMERCIAIS....................................................................................
TABELA 22. INDICADORES DE CIDOS E BASES............................
15. REFERNCIAS............................................................................
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1. Introduo
Mtodos de Anlises
Bromatolgicos de
Alimentos: Mtodos Fsicos,
Qumicos e Bromatolgicos
Ruben Cassel Rodrigues
1.1. BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
Bromatologia ou qumica bromatolgica a cincia que estuda os
alimentos. Sendo que a nutrio animal e alimentao animal so duas
expresses corretamente usadas para significar o mesmo, mas em
verdade, no se superpem exatamente.
Segundo alguns autores, nutrio o processo de fornecer s clulas do
organismo animal aquela poro do meio qumico externo necessria para
o funcionamento das muitas reaes qumicas metablicas envolvidas no
crescimento, manuteno, trabalho, produo e reproduo. Ento,
nutrio envolveria a procura, ingesto e absoro dos alimentos qumicos
que servem como alimento, e o transporte desses alimentos at o interior
das clulas, das formas fsica e qumica mais adequadas para assimilao e
uso por aquelas clulas Phillipson, (1970).
1.2. IMPORTNCIA DA ALIMENTAO ANIMAL
O desempenho de um animal fruto da interao gentipo x meio
ambiente. Ambos componentes so importantes. A produo de leite de
vaca, por exemplo, depende em cerca de 25 a 40% do patrimnio
gentico do animal. O restante devido aos fatores do meio ambiente,
20
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
dentre os quais a alimentao ocupa um lugar de destaque. por este
motivo que a alimentao um fator capital na produtividade zootcnica.
Ela se expressa de quatro maneiras:
a) Como fator de exaltao de capacidade produtiva dos animais;
A potencialidade gentica s aparece na sua plenitude se for dada ao
animal toda a condio favorvel, especialmente alimentao.
b) Como fator indireto de melhoramento animal;
Evidentemente ao se dar oportunidade ao animal, atravs da alimentao,
de mostrar o que ele pode produzir, automaticamente est sendo dada a
oportunidade de ser escolhido para participar do processo de reproduo e
de participar na formao e melhoramento da descendncia.
c) Como fator sanitrio e de preveno de enfermidades;
bastante claro que um animal bem nutrido oferecer maior resistncia
incidncia de doenas, o que vem a se refletir na produtividade.
d) Como fator econmico da produo zootcnica;
O aspecto econmico em zootecnia no pode ser descurado. H
necessidade de se estabelecer um equilbrio econmico desejvel entre
alimentao e custo. A alimentao, como componente de custo, de
vital importncia pela sua participao. Na explorao avcola, por
exemplo, pode ser responsvel por 70 a 80% do custo.
1.3. ALIMENTO, NUTRIENTE E NUTRIENTE
DIGESTVEL
Alimento todo o material que, aps ingesto pelos animais, capaz de
ser digerido, absorvido e utilizado, ou seja, possui valor nutricional para o
animal.
Alimentos podem ser de origem vegetal ou animal, podendo seus principais
grandes componentes ser assim distribudos:
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Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
FIGURA 1- Componentes dos alimentos.
Nutriente, de acordo com a literatura, todo constituinte do alimento, ou
grupo de constituintes do alimento, com uma mesma composio qumica
geral que participa na manuteno da vida. Assim hidratos de carbono,
lipdios, protenas, vitaminas e minerais compreendem os grupos
geralmente reconhecidos como nutrientes, embora ar e gua possam da
mesma forma, ser considerados tambm como nutrientes. H certa
tendncia em esquecer estes dois, talvez pela sua universalidade e
obviedade da sua necessidade, ou talvez porque se pense, sobre os
mesmos, mais em termos do papel fsico que qumico. Mais modernamente
este conceito de nutriente pode ser ampliado, a fim de incorporar
substncias que no so originrias diretamente do alimento, tais como
vitaminas sintticas, aminocidos ou sais minerais preparados
quimicamente.
Nutriente digestvel diz respeito poro do nutriente que digerido e
absorvido pelo organismo animal. Na prtica este termo aplicado
somente s protenas, hidratos de carbono e gorduras.
2. MTODO DE WEENDE
2.1. PRINCPIO
O esquema de Weende consiste num conjunto de determinaes que
caracterizam os grandes grupos de nutrientes, sem levar em conta os
Alimento
gua Matria Seca
Orgnica Inorgnica
Hidratos de carbono Vitaminas Material mineral
PROTENAS
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Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
nutrientes de per se. Em que pese as restries ou imperfeies antes
apontadas, esse esquema tem se mantido at hoje, e a cincia da nutrio
nele tem se apoiado e desenvolvido suas pesquisas na rea de nutrio
animal. Estas determinaes tornaram-se uma linguagem comum para
qumicos, nutricionistas, zootecnistas, fisiologistas e fabricantes de raes.
Em realidade, o esquema de Weende foi fundamental para o
desenvolvimento do clculo de raes, possivelmente por sua simplicidade
e baixo custo, bem como pela concepo de cri-lo em funo da nutrio
dos animais, isto , das suas macro-caractersticas. Embora, ao longo dos
anos, cientistas venham tentando substituir o esquema de Weende por
outras tcnicas mais eficientes, sua aceitao universal. Na dcada de
60, Van Soest, pesquisador norte-americano, props uma alternativa ao
esquema de Weende, a qual obteve grande aceitao nos meios
cientficos.
Pode-se ter uma idia de conjunto do Esquema de Weende no fluxograma
em anexo.
23
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
AMOSTRA SECA AO AR
SECAGEM A 105C

GUA



AMOSTRA SECA





SOXHLET KJELDAHL
EXTRATO ETREO NITROGNIO X 6,25 = PROTENA

DIGESTO CIDA

FILTRADO

RESDUO

DIGESTO ALCALINA

FILTRADO

RESDUO

INCINERAO A 600C
RESDUO = CINZAS FIBRA BRUTA


Figura 2- Esquema de Weende
2.2. COLETA DE AMOSTRAS QUE SE DESTINAM
AO LABORATRIO
A tcnica da coleta de amostras de alimentos concentrados e das
forragens, visando a anlise qumica, tem por finalidade obter amostra
representativa da mdia do material a ser analisado. Torna-se essencial,
24
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
por tanto, todo o cuidado na coleta de tais amostras, sem o que se obtm
resultados viciados. Os erros cometidos durante a amostragem no
podero ser retificados ou compensados por mais cuidadosa que venham a
ser as futuras anlises.
Do material para estudo, devem-se retirar vrias amostras parciais,
colhidas em diversos pontos do local de interesse. Da amostra mdia de
concentrado ou volumoso, depois de homogeneizada, podem ser tiradas
amostras parciais antes que sejam enviadas ao laboratrio. Aps a coleta
das amostras, elas devem ser colocadas em sacos plsticos ou de papel e
transportadas imediatamente ao laboratrio, a fim de no alterar a
umidade do material, durante o transporte, principalmente de forragem
fresca, e evitar ocorrncia de fermentao. A perda de alguma umidade,
durante o transporte, no ter grande importncia desde que os resultados
sejam dados apenas na matria seca total.
A manipulao da amostra at o momento de sua anlise dever ser to
cuidadosa quanto possvel, para evitar a ocorrncia de alteraes nos
princpios nutritivos existentes. Tratando-se de forragens verdes, fezes,
urina, etc., e quando as anlises no forem processadas imediatamente,
necessrio que as amostras sejam conservadas em congelador, entre -5C
e -10C.
2.2.1. Preparo da amostra a ser analisada
a) Triturao prvia;
Na maioria dos casos, as amostras exigem uma triturao grosseira, antes
de se proceder a qualquer anlise. As forragens verdes, com razes,
tubrculos etc., devero ser cortados inicialmente, com faca de metal
inoxidvel. Os gros sero triturados grosseiramente, em moinhos
adequados, enquanto as forragens ensiladas e as raes fareladas
raramente necessitam de moagem ou triturao prvia.
b) Moagem final
feita aps a moagem ou triturao prvia. Amostras que na origem j
apresentam com elevado teor de matria seca, acima de 80%, quase
25
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
sempre podem sofrer a moagem final diretamente. A moagem final
consiste em se triturar as amostras, de modo que se obtenha um p
bastante fino, usando-se moinhos dotados de peneiras de 20/30 Mesh
(nmero de perfuraes por polegada linear). Costuma-se aquecer a
amostra na mesma temperatura de trabalho, antes da moagem, a fim de
facilitar este processo.
Certas determinaes qumicas, tais como a do nitrognio amnico,
vitamina C, caroteno etc., devem ser feitas na amostra fresca, porque tais
compostos apresentam perdas ou alteraes durante o processo de
secagem.
Aps a moagem de cada amostra, a cmara de moagem do moinho deve
ser cuidadosamente limpa com pincel e jatos de ar comprimido, bem como
as demais partes do moinho, tendo-se que retirar a peneira e seu suporte.
Isto se aplica, rigorosamente, quando o alvo das anlises macro e ou
micro nutrientes, sendo, todavia, permitido um intervalo de cinco amostras
nas demais situaes. O mesmo se aplica com o redutor de Jones.
2.3. Determinao da matria seca
2.3.1. Princpio
A determinao da matria seca o ponto de partida da anlise de
alimentos. de grande importncia, uma vez que a preservao do
alimento pode depender do teor de umidade presente no material e, alm
disso, quando se compara o valor nutritivo de dois ou mais alimentos,
temos que levar em considerao os respectivos teores de matria seca.
o peso do material analisado livre de gua. O conhecimento do percentual
da matria seca contido na amostra importante, pois com base nele
que se estabelece o clculo da dieta, j que o consumo do alimento pelos
animais expresso em kg de matria seca/animal/dia.
Assim, quanto menor o percentual de matria seca maior o consumo. No
entanto, existe uma faixa de percentagem de matria seca que ideal
tanto para o consumo, como para a produo e conservao dos alimentos
que, no exemplo do milho, fica em torno de 28% a 35% de matria seca.
26
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Por outro lado, se desejamos comparar o resultado de anlises em
diferentes pocas, locais ou regies, sempre faremos essa comparao em
base de matria seca, isto , como se o alimento contivesse 100% da
mesma. Convm ressaltar o fato de que somente os princpios nutritivos
que integram a matria seca so aproveitados pelo organismo animal com
fins nutricionais.
A gua contida nos alimentos encontra-se sob as seguintes formas: livre,
de estrutura e de constituio.
Caso seja necessrio conhecer a matria seca com maior brevidade, deve-
se pesar em torno de 10 g de amostra verde, submetendo-a secagem a
105C por 48 horas. Concludo o processo, deve-se deixar a amostra seca
esfriar por no mnimo uma hora em dessecador, para, ento, pes-la.
No Laboratrio de Nutrio Animal/Embrapa Clima Temperado, faz-se essa
determinao pelo processo indireto bifsico, que consiste em duas fases:
secagem prvia ou pr-secagem e a secagem definitiva.
2.3.2. Pr-Secagem (Matria Seca a 65C)
2.3.2.1. Principio
Em geral, a pr-secagem necessria quando a amostra possui alto teor
de umidade ou baixa matria seca; como as gramneas, as silagens etc.
Normalmente feita em temperatura de 60 5C para evitar perda por
volatilizao ou alterao de outros nutrientes, principalmente compostos
nitrogenados.
A operao de pr-secagem deve ser feita de preferncia em estufas de
ar forado. O tempo de pr-secagem varivel, em mdia 72 horas,
dependendo da umidade e da carga que se coloca na estufa, ou seja, o
tempo necessrio para que o material apresente peso constante,
permitindo moagem perfeita. A perda de gua que se verifica na pr-
secagem tem de ser computada no clculo da umidade total, portanto, o
material antes de ser colocado na estufa deve ser pesado em balana
adequada, com preciso de 0,1 g e, para isso, coloca-se o material em um
27
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
recipiente prprio, de peso previamente conhecido, denominado tara.
recomendvel o uso de bandejas (22 x 16 x 6 cm), de tela bem fina ou
sacos de papel perfurados, a fim de facilitar a entrada do ar quente e
apressar a secagem. Para cada amostra deve-se fazer pelo menos duas
determinaes, paralelamente, para a comparao entre os pesos das
amostras.
Ao trmino de dois a trs dias, retira-se o material da estufa, deixando-o
esfriar sobre balces ou mesa do laboratrio durante uma hora, ou seja,
at que a umidade da amostra entre em equilbrio com a umidade do ar,
fazendo-se, a seguir, a pesagem. Chamamos esse procedimento de
amostra seca ao ar (ASA). A seguir, faz-se a moagem final guardando a
amostra em vidros fechados com tampas de polietileno, para a
determinao das anlises subsequentes.
Para anlises mais aprimoradas como a de aminocidos e de cidos
graxos, por exemplo, so necessrios processos especiais de secagem
para preservar a verdadeira forma qumica dos componentes. Dentre esses
processos destacam-se a secagem a vcuo com ou sem elevao de
temperatura e a secagem pelo frio (liofilizao). A ocorrncia de
compostos volteis, como a amnia, encontrada em silagens e cama de
galinheiro, exige cuidados especiais durante a secagem da amostra; a pr-
secagem no deve ser superior a 55C, e, em muitos casos, as
determinaes devem ser feitas no material natural.
2.3.2.2. Material necessrio
a) Saco de papel perfurado (5 kg) ou bandejas metlicas;
b) Estufa de secagem de ar forado (Temperatura = 65C);
c) Estufa de esterilizao (Temperatura = 105C);
d) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg;
e) Moinho Wiley (peneira de 1 mm) de facas;
f) Redutor de Jones.
2.3.2.3. Procedimento
a) Tarar o saco de papel;
28
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
b) Pesar a amostra, cerca de 250 g por repetio (modificao implantada
no Laboratrio de Bromatologia e Nutrio Animal-LBNA/Embrapa Clima
Temperado);
Observao: Separar uma parte para determinao de pH,
aproximadamente 9 g de amostra, caso seja necessrio;
c) Colocar em estufa de ar forado a 60C+ 5C por 48 a 72 horas, a
depender de estgio de secagem da mesma;
d) Retirar da estufa e deixar por 1 hora em contato com a temperatura
ambiente;
e) Pesar e fazer as devidas anotaes das amostras, anotando-se o peso
em ficha adequada;
f) Submeter moagem em moinho de facas. A amostra recolhida em
sacos plsticos ou vidro com tampa, previamente identificado com a
especificao da mesma. Armazenar cerca de 50 g de amostra;
g) Reduzir a amostra para 50 100 g em redutor de Jones, caso seja
necessrio;
h) Limpar cuidadosamente o moinho e o redutor.
2.3.2.4. Utiliza-se a Frmula
100 =
PMV
PMPS
PS
Onde:
PS = Pr-Secagem
PMPS = Peso do material pr-seco
PMV = Peso do material verde
29
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.3.3. Matria Seca Definitiva (Matria Seca 105C)
2.3.3.1. Principio
A matria seca definitiva usada para amostras que foram submetidas
pr-secagem ou para amostras que contm mais de 80% de matria seca,
raes fareladas, gros de cereais etc. Para tal processo, pesa-se de
2,000 a 3,000g de amostra seca ao ar e triturada, em cpsula de
porcelana previamente secas e pesada na tara. Na prtica, quando se
trabalha com grandes quantidades de amostras, deixamos os cadinhos de
porcelana, durante toda noite na estufa, dispensando, desse modo, a
verificao de constncia de peso e aps procede-se secagem em estufa
a 105C, durante quatro horas Lenkeit; Becker, (1956). A seguir, retira-se
os cadinhos da estufa e coloca-os em um dessecador por uma hora
aproximadamente, at que a temperatura deles se iguale com a
temperatura ambiente; e pesa-se novamente. necessria uma balana
analtica de aproximadamente 0,1 mg. A perda de peso representa a
umidade bruta, ou seja, todos componentes volteis temperatura de
105C. Os resultados so apresentados em porcentagem.
Raes ricas em gordura podem aumentar de peso durante uma secagem
demorada, uma vez que poder haver fixao de oxignio, durante o
processo. Em tais casos, torna-se necessrio usar processos especiais de
secagem. As silagens e outras forragens submetidas fermentao podem
sofrer perdas de determinadas substncias durante a secagem como
cidos orgnicos, amonacos, etc. Com estes materiais, o teor exato de
matria seca pode ser obtido pela determinao desses componentes
volteis ou, o que mais prtico, por secagem a vcuo.
2.3.3.2 Verificao da constncia de peso
Esse mtodo adotado quando os materiais a serem utilizados (cadinhos
de porcelana, cpsulas metlicas etc.) no esto devidamente secos.
Procede-se da seguinte maneira: repete-se a secagem, voltando com o
cadinho de porcelana ou cpsula metlica estufa a 105C por mais uma
ou duas horas, deixando-se esfriar em dessecador, realizando novas
pesagens, at permanecer com peso constante. A diferena de peso entre
30
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
as pesagens no deve ser maior que 1%. Se ocorrer uma variao maior
de peso, significa que o material no est devidamente seco. Chama-se a
esta operao de verificao da constncia de peso.
2.3.3.3. Material necessrio
a) Cpsula metlica ou porcelana (cadinho);
b) Estufa de secagem e esterilizao (Temperatura = 105C);
c) Dessecador a vcuo, com luva, tampa e fundo, em vidro borossilicato,
equipado com placa de porcelana e slica gel azul;
d) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg;
e) Sacos plsticos ou vidros com tampa;
f) Bandeja de alumnio.
2.3.3.4. Procedimento
a) Colocam-se as cpsulas metlicas ou cadinhos de porcelana
em estufa para secar durante 12 horas, a uma temperatura de 105C;
b) Retiram-se as cpsulas metlicas ou cadinhos de porcelana da estufa e
coloca-se em dessecador, para esfriar por 1 hora. Quando se trabalha com
uma quantidade superior a 20 cadinhos, deve-se deixar esfriar por mais
alguns minutos, para que haja uma maior estabilizao do peso;
c) Retiram-se as cpsulas metlicas ou cadinhos de porcelanas do
dessecador (uma a uma), tara-se e anota-se o peso em ficha adequada;
d) Pesa-se de 2,500 g a 2,510 g da amostra (modificao implantada no
Laboratrio de Bromatologia e Nutrio Animal-LBNA/Embrapa Clima
Temperado);
31
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) Coloca-se em estufa para secar a 105C por 4 horas (podendo se deixar
de um dia para o outro);
f) Retira-se da estufa a cpsula metlica ou porcelana (cadinho), e coloca-
se em dessecador para esfriar durante 1 hora;
g) Pesam-se as amostras, anotando-se o peso em ficha adequada.
2.3.3.5. Clculo final
2.3.3.5.1 Utiliza-se a Frmula
100
) (
) (
% =
ASA PAN
ASE PAS
MS

Onde:
PAS = Peso da amostra seca (ASE)
PAN = Peso da amostra natural ou mida (ASA)
2.3.3.6. Matria Seca Total (105C)
100
) 105 ( % ) 5 60 ( %
%
C MS C MS
MStotal
+
=
2.3.3.7. Ajuste base de 100 % da matria seca a 105C
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de resultado da anlise a ser corrigida
%MS (105C) = % de matria seca na amostra
32
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.3.4. Teor de umidade
2.3.4.1. Determinao da umidade de plantas e resduos
orgnicos
2.3.4.1.1 Princpio
O teor de umidade em plantas, adubos orgnicos, compostos e resduos de
origem orgnica geralmente determinado em relao temperatura de
secagem de 65-75C, at atingir peso constante.
A esta temperatura as reaes de natureza biolgica cessam e o material
pode ser mantido seco por perodo indeterminado, quando protegido da
umidade.
2.3.4.1.2 Material necessrio
a) Estufa com circulao de ar forado, com temperatura regulvel;
b) Cpsula de porcelana ou ao inox;
c) Balana com sensibilidade de 0,01 g.
2.3.4.1.3 Procedimento
a) Pesar de 40 a 50 g de material mido e homogeneizado e colocar em
recipiente de secagem (tarar o recipiente de secagem, limpo e seco)
(modificao implantada no Laboratrio de Bromatologia e Nutrio
Animal-LBNA/Embrapa Clima Temperado);
b) Manter a 65-75C com circulao de ar forado por 24 a 48 horas (ou
at no se observar mudana de peso com aumento do tempo de
secagem);
c) Pesar o material seco;
d) Aps a pesagem, o material pode ser modo para as anlises qumicas.
33
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.3.4.1.4 Clculos
a) Teor de umidade em base mida

100
) (
) (sec ) (
) ( %

=
mido peso
o peso mido peso
umidade Teor
b) Expressar o resultado com um dgito decimal (em % mm
-1
).
2.3.4.2. Determinao da umidade do solo
2.3.4.2.1. Princpio
A umidade do solo determinada secando-se o mesmo em estufa a 105C,
por duas horas, sendo expressa em base de peso. Esta determinao
utilizada para calcular o fator de correo nas anlises para levantamento
e classificao de solos.
A diferena no teor de umidade de solos minerais secos a baixa
temperatura e a 105C de aproximadamente 1 a 2%.
2.3.4.2.2 Material necessrio
a) Cpsulas metlicas com capacidade de 100-200g;
b) Balana com sensibilidade de 0,01 g.
2.3.4.2.3 Procedimento
a) Pesar 100 a 150 g de solo mido em cpsula metlica; tarar e
identificar as cpsulas secas (modificao implantada no Laboratrio de
Bromatologia e Nutrio Animal - LBNA/Embrapa Clima Temperado);
b) Secar a 105C por 2 horas (de preferncia em estufa com circulao de
ar);
c) Retirar da estufa as cpsulas metlicas e colocar em dessecador para
esfriar durante 1 hora;
34
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
d) Pesar as amostras, anotando-se o peso em ficha adequada.
2.3.4.2.4 Clculos
a) Teor de umidade em base mida;
PSS
PSS PSU
Umidade
100
(%)

=
Onde:
Umidade (%) = Teor de umidade
PSU = Peso do solo mido
PSS = Peso do solo seco
b) Expressar o resultado com um dgito decimal (em % mm
-1
);
c) *ASA = Amostra seca ao ar (65C) Pr-secagem.
A Tabela 1 apresenta modelo de ficha para apresentao de resultados de
pr-secagem.
A Tabela 2 apresenta modelo de ficha para apresentao de resultados de
matria seca definitiva.
35
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 1. Determinao da % de Pr-Secagem
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE PR-SECAGEM A 65C
N do Projeto:
Responsvel:
DATA: N do Lote:
Amostra
N
Tara
(g)
Tara + Amostra
verde
(g)
Tara + ASA
(g)
Amostra
Verde
(g)
ASA*
(g)
ASA
(%)
ASA










*ASA = Amostra seca ao ar (65C) Pr-secagem
36
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 2. Determinao da % de Matria Seca
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE MATRIA SECA A 105C
N do Projeto:
Responsvel:
DATA: N do Lote:
Amostra
N
Identificao
N
Cpsula
Peso
Cpsula
Peso
Amostra
Cpsula +
Am. seca
Peso
Am. seca
% MS MS











37
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.4. CINZAS OU MATRIA MINERAL
2.4.1. Princpio
Cinza ou matria mineral o produto que se obtm aps o aquecimento de
uma amostra, a temperatura de 500 600
o
C, ou seja, at o aquecimento
ao rubro, porm no superior a 600
o
C, durante 4 horas ou at a
combusto total da matria orgnica.
A determinao da cinza fornece apenas uma indicao da riqueza da
amostra em elementos minerais. Fick (1976).
A cinza, nos alimentos, tem o significado nutricional quase nulo; contm,
principalmente, os seguintes ctions: clcio, potssio, sdio, magnsio,
ferro, cobre, cobalto e alumnio; e nions: sulfato, cloreto, silicato, fosfato,
etc. Na verdade s foi includa no Esquema de Weende para poder-se
calcular os extrativos no nitrogenados (ENN).
Realiza-se a determinao da cinza pelo mtodo de incinerao simples.
Pode-se fazer a calcinao do cadinho em bico de bunsen, cobrindo-se,
antes, a amostra com glicerina lquida. Esse procedimento objetiva evitar a
produo de muita fumaa no incio da calcinao. Entretanto, todo o
processo pode ser feito no prprio forno mufla, desde que se tenha o
cuidado de colocar o cadinho com a amostra no forno mufla frio,
aumentando o aquecimento lentamente, at 500-600C.
Se a temperatura do forno mufla for alm de 600C, alguns ctions e
nions sero parcialmente ou totalmente perdidos por volatilizao.
Outro aspecto importante a ser salientado que o peso da amostra a ser
calcinada est correlacionado com a quantidade de elemento mineral a ser
pesquisado.
Quando mede-se quantitativamente um elemento mineral que est
presente na amostra em pequenas quantidades, torna-se necessrio que se
faa a calcinao de amostra mais representativa ou a de maior peso.
38
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.4.2. Material necessrio
a) Cpsula de porcelana;
b) Forno de mufla com controlador de temperatura;
c) Dessecador a vcuo, com luva, tampa e fundo, em vidro borossilicato,
equipado com placa de porcelana e slica gel azul;
d) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg;
e) Bandeja de alumnio;
f) Pinas.
2.4.3. Reagentes
a) cido ntrico concentrado (HNO
3
);
b) Nitrato de amnio (NH
4
NO
3
).
2.4.4. Procedimento
a) Colocar os cadinhos de porcelana em forno mufla para queimar por
quinze minutos. Para secagem dos cadinhos a temperatura de 550C,
retira-se do forno mufla e coloca-se no dessecador para resfriar, durante 1
hora;
b) Retirar os cadinhos do dessecador (um a um) e tarar, anotando o peso
em ficha adequada;
c) Pesar, a seguir, de 1 a 3 g da amostra (modificao implantada no
Laboratrio de Bromatologia e Nutrio Animal-LBNA/Embrapa Clima
Temperado);
d) Proceder incinerao durante 4 horas, a 550C, at obter a cor cinza
clara. Aps esse tempo, caso persista a cor escura das cinzas, colocar de
3-5 gotas de HCO
3
ou alguns cristais de nitrato de amnio dentro do
cadinho e lev-lo novamente ao forno mufla, por mais 1 hora. Ao incinerar
as amostras, colocar temperatura inicial em 200C; aps 1 hora
39
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
aumentar a temperatura para 550C. Observa-se que a temperatura
inicial de 200C adotada para evitar a queima brusca do material e,
consequentemente, as perdas (modificao implantada no Laboratrio de
Bromatologia e Nutrio Animal-LBNA/Embrapa Clima Temperado);
Observao:
Os cadinhos de vidro devem ser aquecidos gradativamente (subir
temperatura de 100 em 100C) para evitar que se danifiquem, at
atingirem 550C;
e) Retirar as amostras do forno mufla e coloc-las em dessecador para
resfriar por 1 hora;
f) Pesar as amostras, anotando-se o peso em ficha adequada.
2.4.5. Clculo Final
2..4.5.1. Utiliza-se a Frmula
( )
100
) (
/ % =
amostra Peso
cinza Peso
N C
Para se determinar matria orgnica utiliza-se a frmula:
cinza MO % 100 =
2.4.6. Ajuste base de 100 % da matria seca
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de matria orgnica na amostra
%MS (105C) = % de matria seca na amostra
Ver a seguir, na Tabela 3, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
40
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 3. Determinao da Cinza e Matria Orgnica
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE MATRIA MINERAL (Cinza) e M. ORGNICA
N do Projeto:
Responsvel:
DATA: N do Lote:
Amostra
N
Identificao
N
Cpsula
Peso
Cpsula
Peso
Amostra
Cpsula
Cinza
%Cinza

Cinza

MO










Anlises corrigidas a 100% da Matria Seca 105C
2.5. EXTRATIVOS NO NITROGENADOS (ENN)
2.5.1. Princpio
Para obter-se a percentagem de ENN, somam-se as cinco determinaes
laboratoriais do Esquema de Weende: matria seca a 65C (MS), extrato
etreo (EE), protena bruta N x 6,25 (PB), fibra bruta (FB) e matria
mineral (MM). Este total subtrado de 100.
41
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Esto contidos nos ENN, os acares, amido, dextrinas, glicognio,
hemiceluloses e, variavelmente, a lignina. Essa frao do esquema de
Weende corresponde predominantemente aos hidratos de carbono mais
digestveis ou, como se diz comumente, hidratos de carbono solveis.
Como se pode perceber, os ENN compreendem vrias substncias,
variveis em suas quantidades, mas que esto unidas entre si por serem
fontes no especficas de energia e de alta digestibilidade.
Alm dessa variao entre seus componentes, a determinao dos ENN,
por exemplo, pode ser feita por clculo, situao em que evitam-se todas
as imprecises pessoais e imperfeies relacionadas s outras
determinaes laboratoriais, as quais acumulam todos os erros por ventura
cometidos durante a execuo das anlises.
Consideram-se, portanto, os ENN como uma medida til, tendo-se em vista
que sua impreciso considerada pequena e sua determinao muito mais
rpida e simples que a determinao dos vrios acares e polissacardeos
solveis.
2.5.2. Frmula
100 % + + + + = MM FB PB EE MS ENN
Onde:
%ENN = Percentagem de extrativo no nitrogenado
MS = Matria seca a 65
o
C
EE = Extrato etreo
PB = Protena bruta
FB = Fibra bruta
MM = Matria mineral (cinza)
42
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.6. EXTRATO ETREO OU GORDURA
2.6.1. Princpio
A determinao do extrato etreo (EE) consiste em submeter a amostra
seca do material extrao com ter sulfrico ou ter de petrleo,
partindo do principio da solubilidade dos lipdios. Esse trabalho
desenvolvido num aparelho para extrao de gordura e acessrios, tipo
Goldfisch. O ter usado no processo aquecido at tornar-se voltil e,
ao condensar-se, circula sobre a amostra em anlise, arrastando toda a
frao gordurosa e demais substncias solveis em ter. O eter
recuperado em outro recipiente, enquanto a gordura extrada calculada
por diferena de peso.
2.6.2. Consideraes gerais
As gorduras ou lipdeos so produtos naturais de origem animal ou vegetal
nos quais predominam steres de cidos graxos superiores. So
substncias insolveis em gua, mas solveis no ter, clorofrmio, benzeno
e outros solventes orgnicos chamados de extratores.
O grupo de substncias que compem o extrato etreo formado pelos
lipdios e outros compostos intimamente ligados ou associados, tais como:
fosfatdeos, esteris (colesterol), clorofila, leos volteis, resina, etc.
A gordura constitui a frao mais energtica dos alimentos e, como os
carboidratos, composta de carbono (C), hidrognio (H) e oxignio (O).
Entretanto a proporo dos dois primeiros (C e H) bem maior nas
gorduras que nos carboidratos, como indica a tabela abaixo, em ndices
percentuais.
TABELA 4. Porcentagem de carbono, hidrognio e oxignio nas gorduras e
nos carboidratos (amido).
C a r bo n o Hi d ro g n io O xi g n io
G o r du r a 7 7 1 2 1 1
A m id o 4 4 0 6 5 0
Fonte: Maynard; Loosli (1974).
43
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Como foi visto antes, as gorduras so bem mais energticas que os
hidratos de carbono e as protenas, de modo que fcil de entender que
sua presena no alimento influencia seu valor energtico de maneira
marcante.
O valor alimentar do extrato etreo no constante: considera-se que um
grama de gordura produz 9,35 Kcal de energia bruta, quando medido na
bomba calorimtrica, o que corresponde, aproximadamente, a 9 Kcal de
energia metabolizvel. Os alimentos com maior teor de gordura tm
valores mais altos de NDT, pelo fato de a gordura fornecer 2,25 vezes
mais energia que os carboidratos.
2.6.3. Materiais/Equipamentos
a) Extrator e acessrios, tipo Goldfisch;
b) Papel de filtro tipo 10 ou equivalente, com dimetro de 12,5 cm;
c) Dessecador a vcuo, com luva, tampa e fundo, em vidro borossilicato,
equipado com placa de porcelana e slica gel azul;
d) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg (com 4 dgitos
aps a vrgula).
2.6.4. Reagentes
a) ter de petrleo p.a. (faixa de destilao de 30-60C).
2.6.5. Mtodo a quente
A extrao feita com a temperatura mais elevada, usando, neste caso,
ter de petrleo cujo ponto de ebulio esteja entre 40-65C. A extrao
feita entre 4 a 6 horas em extrator tipo Goldfisch. No laboratrio da
Embrapa Clima Temperado, utiliza-se o mtodo a quente com extrator tipo
Goldfisch.
2.6.6. Mtodo a frio
realizado no extrator Soxhlet e utiliza-se o ter sulfrico como
solvente, cujo ponto de ebulio de 35C, aproximadamente. A extrao
44
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
feita em vinte e quatro horas, aproximadamente.
2.6.7. Cuidados com os solventes
Em qualquer metodologia usada, deve-se ter o mximo de cuidado com os
reagentes. Frequentemente, certas impurezas ocorrem nos solventes
como: gua, lcool e oxidantes (perxidos) que acarretam erros nas
anlises. Assim, deve-se fazer uso de reagentes p.a., apenas.
2.6.8. Procedimento
a) Pesar de 2 a 3 gramas de amostra em um cadinho de porcelana ou
pesa-filtro e colocar em estufa a 105C, durante 3 horas (secagem
definitiva). Em certos casos, torna-se recomendvel um processo especial
de secagem, em estufa a vcuo (modificao implantada no Laboratrio de
Bromatologia e Nutrio Animal - LBNA/Embrapa Clima Temperado);
b) Aps esfriar a amostra, colocar em dessecador por trinta minutos; faz-
se um embrulho com papel de filtro em forma de cartucho, e pesa-se a
amostra contida no cadinho de porcelana ou no pesa-filtro;
c) Tarar os bquers, tendo cuidado para no tocar neles com as mos, pois
absorvem gordura, alterando o resultado final da amostra;
d) Numerar o papel de filtro lpis (papel de filtro em formato de
cartucho, fechado em uma das extremidades)(modificao implantada no
LBNA/Embrapa Clima Temperado);
e) Anotar o nmero do bquer onde foi colocado cada papel de filtro
(cartucho de papel)(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima
Temperado);
f) Proceder conforme exemplos a seguir;
Papel Bquer
01 01
02 02
03 16
04 12
45
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
g) Tarar o balo (recipiente apropriado do aparelho) com o cartucho de
papel de filtro e o bquer (modificao implantada no LBNA/Embrapa
Clima Temperado);
h) Pesar 1 grama da amostra em papel de filtro e colocar no suporte de
vidro (balo), fixando-o na presilha da entrada do condensador do aparelho
de extrao)(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima
Temperado);
i) Adicionar de trinta a quarenta mililitro de ter de petrleo no bquer
previamente tarado, encaixando-o com o anel de rosca sob o condensador
(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
Observao:
Caso seja necessrio repor o ter de petrleo, em caso de evaporao,
deve-se no mximo, adicionar 2 vezes o ter de petrleo; se isto ocorrer
mais de 2 vezes, deve-se repetir a amostra novamente para fazer lavagem
do material utilizado segue-se o mesmo processo inicial. Toda vez que o
bquer for retirado do aparelho, deve-se colocar a tampa protetora em
cima da chapa aquecedora, para evitar exploso e acidentes com
queimadura. No devem ser deixados frascos com ter prximos ao
aparelho quando estiver sendo feita a extrao de extrato etreo.
j) Destravar o disco aquecedor, fazendo-o tocar na base do bquer. Ligar a
gua de circulao dos condensadores;
k) Ligar a resistncia do disco, na posio HI, e aguardar at que a
destilao/condensao do ter inicie; neste ponto posicionar o controle na
graduao 6. O processo estar concludo aps 4 a 6 horas. Devem-se
fazer verificaes ocasionais no decorrer deste perodo. Verificar se no
h evaporao de ter de petrleo durante a fervura e condensao. Aps
comear a ferver, deixar por mais 2 horas no aparelho (modificao
implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
l) Desligar o aquecimento, baixar o disco (posio inicial) e remover o
bquer e o suporte com a amostra. Colocar o tubo coletor de ter na
presilha da entrada do condensador;
46
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
m) Reconectar o bquer e suspender o disco at o contato. Religar o
aquecimento na posio 6. Antes que o ter do bquer evapore, retir-lo e
verter o solvente, recuperando-o em recipiente prprio;
n) Adaptar o suporte para o bquer, dispondo-o em posio inclinada sobre
o disco aquecedor desligado, a fim de evaporar o ter remanescente;
o) Completar a secagem do bquer contendo a gordura extrada,
submetendo a secagem em estufa a 105C durante trinta minutos
(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
p) Resfriar em dessecador por trinta minutos e pesar. A diferena entre
este ltimo peso e o bquer vazio (tara) corresponde ao peso da gordura
extrada.
2.6.9. Frmula
100 %
+
=
PA
PCV GE PC
Gordura
Onde:
PC = Peso do cadinho
GE = Gordura extrada
PCV = Peso do cadinho vazio
PA = Peso da Amostra
Observao: Aps, necesrio corrigir pela Matria Seca a 105C
Cuidar para no secar o ter no bquer, enquanto est fervendo no
aparelho.
2.6.10. Ajuste base de 100 % da matria seca
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
47
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Onde;
%resultado = % de gordura na amostra
%MS(105C) = % de matria seca na amostra a 105C
Ver a seguir, na Tabela 5, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
TABELA 5. Determinao da % de Extrato Etreo
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE EXTRATO ETREO OU GORDURA
N DO PROJETO:
RESPONSVEL:
DATA: N do Lote:
Amostra
N Identificao
N
Papel
Peso
Amostra
N
Cadinho
Tara
Cadinho
Tara
Cad.+Gord
%Gord Gord









Anlises corrigidas a 100% da matria seca a 105C
48
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.7. FIBRA BRUTA
2.7.1. Princpio
O termo fibra bruta engloba as fraes de celulose e lignina insolvel. Do
ponto de vista qumico, fibra bruta a parte dos carboidratos resistente ao
tratamento sucessivo com cido e base diludos.
A maior frao da fibra bruta, a celulose, bem aproveitada pelos
ruminantes, uma vez que os microorganismos do rmen so capazes de
desdobr-la formando cidos graxos volteis, que so fontes de energia
absorvida pelo organismo destes animais. A fibra necessria para o
funcionamento do rmen. Quando em nveis elevados, baixa o consumo de
matria seca por animal e a concentrao de energia por kg de matria
seca.
A fibra inversamente relacionada com o teor de energia. Quanto maior a
fibra, menor ser o valor da energia. o contedo de fibra que determina
o consumo voluntrio do animal.
Os volumosos atravs da sua quantidade de fibra tem como papel dar
consistncia ao bolo alimentar, regulando a velocidade de passagem pelo
trato digestivo.
Quando a silagem possui muita fibra, a passagem pelo trato digestivo
lenta, ocasionando baixa digesto e absoro dos nutrientes. J, quando a
silagem possui pouca fibra, a passagem pelo trato digestivo rpida,
provocando fermentaes indesejveis, alterando o metabolismo do
animal.
2.7.2. Materiais/equipamentos
a) Aparelho digestor de fibra bruta;
b) Gooch de placa porosa, em vidro sinterizado, porosidade 2 (mdia),
capacidade 50 ml;
c) Funil analtico 60C, raiado, haste curta, com dimetro de 100 mm.
49
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.7.3. Reagentes e solues
a) cido sulfrico p.a.(H
2
SO
4
95-97%, d = 1,84);
b) lcool etlico (CH
3
CH
2
OH) 95%;
c) Hidrxido de sdio (NaOH).
2.7.3.1. Soluo de cido sulfrico 0,255N/1,25% p/v.
a) Pesar 13,03 g de cido sulfrico p.a.(H
2
SO
4
95-97%, d = 1,84) em um
bquer e depois transferir para balo volumtrico de 1.000 ml, contendo
aproximadamente 500 ml de gua;
b) Lavar o recipiente da pesagem com gua e verter no meio de
dissoluo;
c) Esperar esfriar antes de aferir o volume
d) Completar e aferir o volume, homogeneizando em seguida;
e) Executar a operao em capela;
f) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
2.7.3.2. Soluo de hidrxido de sdio 0,313N/1,25% p/v.
a) Pesar 12,65 g de hidrxido de sdio p.a. (99% de pureza);
b) Dissolver previamente em bquer (PVC, PTFE, Polietileno) com
aproximadamente 300 ml de gua destilada;
c) Transferir para balo volumtrico de 1.000 ml;
d) Submeter o bquer a sucessivas lavagens (trplice lavagem);
e) Deixar esfriar, aferir e homogeneizar;
f) Executar a operao em capela;
g) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
50
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.7.4. Procedimento
a) Pesar 1 g de amostra e transferir para bquer de 600 ml (modificao
implantada no Laboratrio de Bromatologia e Nutrio Animal - LBNA/
Embrapa Clima Temperado);
b) Adicionar 100 ml de cido Sulfrico 0,255N e colocar imediatamente
no aparelho digestor aquecido;
c) Ligar a gua de circulao dos condensadores. Aps o incio da ebulio
marcar trinta minutos.
d) Concluda a etapa, proceder filtrao em papel de filtro (modificao
implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado), fazendo-se lavagens
sucessivas com gua quente sobre o resduo;
e) Transferir o material retido no papel de filtro para o bquer de digesto
com 110 ml de hidrxido de sdio 0,313N quente;
f) Colocar aproximadamente quinze prolas de vidro (modificao
implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado). Seguir os mesmos
princpios da digesto cida (trinta minutos);
g) Filtrar a frao fibrosa em gooch de placa porosa (modificao
implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado), lavando o bquer com
gua quente e, a seguir, lavando-o duas vezes com lcool etlico 95%;
h) Secar os gooch em estufa a 105C durante 4 horas, esfriar em
dessecador e pesar;
i) Calcinar em mufla a 550C durante 1 hora, esfriar em dessecador e
pesar.
2.7.5. Recomendaes
a) Usar as solues de H
2
SO
4
e NaOH com titulo exato (soluo de cido
sulfrico 0,255N/1,25% p/v. e soluo de hidrxido de sdio 0,313N/
1,25% p/v);
51
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
b) Observar o tempo de digesto que deve ser de exatamente trinta
minutos, iniciando a fervura um minuto aps a amostra entrar em contato
com o cido e/ou com a base;
c) As filtraes devem ser efetuadas o mais rpido possvel, sem deixar o
material esfriar e as lavagens devem ser feitas com gua quente;
d) Material rico em gordura deve ser previamente desengordurado, para
evitar excesso de saponificao da gordura, durante a hidrlise bsica e,
consequentemente, prevenir a formao de espuma.
2.7.6. Frmula
100
) 105 ( %
) % ( ) % (
%

+ +
=
C MS PA
C PC FB PC
FB
Onde:
FB = Fibra bruta
PC = Peso do cadinho
C = Cinza
PA = Peso da amostra
MS(105C) = Matria seca a 105C
2.7.7. Ajuste base de 100 % da matria seca
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de fibra bruta na amostra
%MS(105C) = % de matria seca na amostra
Ver a seguir, na Tabela 6, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
52
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 6. Determinao da % de Fibra Bruta
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE FIBRA BRUTA
N do Projeto: Responsvel:
DATA: N do Lote:
Amostra
N
Identificao
N
Cpsula
Peso
Cpsula
Peso
Amostra
Cadinho
+ Fibra
Bruta
Cpsula
+ Cinza
% FB FB








Anlises corrigidas a 100% da Matria Seca a 105C
2.8. CELULOSE
2.8.1. Princpio
O mtodo baseia-se na dissoluo de todos os componentes da amostra,
com exceo da celulose e dos minerais, por meio de um reagente cido
especfico.
2.8.2. Consideraes gerais
Na realidade, o termo fibra bruta emprico e engloba a frao da celulose
e da lignina. Sabe-se que parte da frao da lignina dissolvida nas
hidrlises cida e bsica, durante o processo de determinao da fibra
bruta, indo essa frao fazer parte do Extrato No Nitrogenado (ENN), que
53
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
se calcula por diferena. Sabe-se, tambm que aproximadamente 97% da
fibra bruta composta de celulose e lignina; sendo que a maior frao a
da celulose. Assim, uma informao mais exata sobre o teor de celulose e
de lignina dos alimentos seria obtida pela determinao direta de cada uma
dessas fraes. Van Soest (1968).
Na determinao dos teores de celulose e de lignina das forrageiras,
observa-se que sua soma sempre maior que o teor de fibra, isso porque,
como j foi dito, na determinao da fibra bruta, parte da celulose e da
lignina dissolvida durante as hidrlises: cida e bsica.
Sabe-se que os ruminantes desdobram a celulose, por meio de sua flora
bacteriana, at cidos Graxos Volteis (AGV) principalmente, cido
actico, cido propinico e cido butlico. A fermentao da celulose se
processa no rmen-retculo, por intermdio de bactrias e protozorios ali
existentes. Crampton (1959), Annison (1959).
Em termos de aproveitamento pelos ruminantes, a celulose igual ao
amido. Durante muito tempo, os AGV foram considerados como
subprodutos, sem maior importncia. Em 1952, descobriu-se que eles so
a maior fonte de energia para os ruminantes, quando alimentados base
de forragem. Os trs principais AGV esto assim constitudos, em termos
do total de cidos graxos produzidos no rmen: cido actico, de 54 a
74% ; cido propinico, de 16 a 27% e cido butlico, de 6 a 15%.
2.8.3. Material necessrio
a) Aparelho banho-maria, com temperatura controlada;
b) Forno mufla, com temperatura controlada a mais ou menos 600C;
c) Gooch ou cadinho filtrante de porcelana, com capacidade de 50-60 ml;
d) Amianto branco, devidamente tratado;
e) Tubos de ensaio com capacidade de 100 ml (usa-se de 2,8 a 3,0 cm e
16 cm de altura);
54
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
f) Balana analtica com preciso de mais ou menos 0,1 mg;
g) Dessecador a vcuo, com luva, tampa e fundo, em vidro borossilicato,
equipado com placa de porcelana e slica gel azul.
2.8.4. Reagentes e Solues
a) cido actico glacial (CH
3
COOH);
b) cido ntrico concentrado (HNO
3
);
c) lcool etlico 96-98% (CH
3
CH
2
OH);
d) Benzeno (C
6
H
6
);
e) ter sulfrico (etlico) [(CH
3
CH
2
)
2
O];
f) gua destilada ou deionizada.
2.8.4.1. Soluo reagente cido
Constitudo de (fazer uso de reagentes puros para anlise p.a.):
a) 800 ml de cido actico glacial;
b) 200 ml de gua destilada;
c) 100 ml de cido ntrico concentrado.
2.8.5. Procedimento
a) Pesar aproximadamente 1 g da amostra pr-seca, em tubo de ensaio;
b) Adicionar 16,5 ml do reagente cido ao tubo de ensaio com a amostra.
Tampar o tubo com bola de vidro e levar ao banho-maria, em ebulio,
durante trinta minutos. Esta fase chamada de digesto das protenas e
carboidratos (cidos digestveis);
c) Aps a digesto, retirar os tubos do banho-maria e adicionar 20 ml de
etanol (lcool etlico) e deixar esfriar;
55
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
d) Separar a parte lquida da slida, por filtrao em gooch, preparando-as
para a anlise de fibra, na bomba a vcuo;
e) O material deve ser transferido, quantitativamente, para o gooch, com
auxilio de uma peseta contendo lcool;
f) Aps a filtrao, fazer a lavagem do material com 20 ml de etanol
quente;
g) A seguir, adicionar na filtrao 20 ml de benzeno quente e, finalmente,
adicionar 20 ml de ter sulfrico;
h) Secar os gooch, em estufa a 105C, durante 4 horas;
i) Resfriar em dessecador e fazer a pesagem (gooch + celulose +
minerais);
j) Incinerar em forno mufla a 550C, obtendo-se o peso de celulose.
Ver a seguir, na Tabela 7, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
56
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 7. Determinao da % de Celulose
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE CELULOSE
N do Projeto:
Responsvel:
DATA: N do Lote:
Tubo Gooch
Amostra
N
N
Tara
(g)
Tara
+
ASA
ASA
(g)
N
Resduo
(g)
Cinza
(g)
Celulose
(g)
Celulose
ASA (%)
ASE
(%)
Celulose
MS
(%)
Celulose
M.
Natural*
(%)








Anlises corrigidas a 100% da Matria Seca a 105C
2.9. DETERMINAO DA ENERGIA BRUTA
2.9.1. Princpio
A energia bruta refere-se quantidade de calor liberado (Kcal/kg ou Kcal/
g) de determinada amostra, quando esta completamente oxidada em
ambiente rico de oxignio (vinte e cinco a trinta atmosferas de oxignio).
2.9.2. Consideraes gerais
O aparelho usado na determinao da energia bruta dos alimentos a
bomba calorimtrica (calormetro adiabtico de Parr). A bomba
57
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
calorimtrica consiste basicamente em um cilindro metlico e
hermeticamente fechado, onde a amostra colocada em recipiente
prprio com vinte e cinco a trinta atmosferas de oxignio. A combusto
feita atravs de um circuito eltrico que determina a queima de um
fusvel, que se encontra em contato com a amostra, liberando uma fasca
eltrica para inicio da combusto.
Visto que a bomba calorimtrica mergulhada num recipiente com 2.000
ml de gua destilada, em condies adiabticas, a combusto da amostra
provoca a elevao da temperatura da gua na qual a bomba se acha
imersa. Medindo-se a elevao da temperatura da gua, em condies
adiabticas e, conhecendo-se o equivalente hidrotrmico da bomba
(fazendo-se as correes para a energia liberada pela oxigenao do
fusvel e produo de gases), calcula-se a energia bruta da amostra.
A energia bruta dos alimentos, por si, tem pouca aplicao, porm o
ponto de partida para se determinar outras medidas energticas dos
alimentos: energia digestvel, metabolizvel etc.
Os nutrientes apresentam diferentes valores de energia bruta. Os
carboidratos fornecem, em mdia, 4,15 Kcal/g; as protenas, 5,65 Kcal/g
e as gorduras, 9,40 Kcal/g.
2.9.3. Material necessrio
a) Bomba calorimtrica tipo Parr e acessrios;
b) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1g;
c) Bureta automtica;
d) Erlenmeyer de 100 ml;
e) Peseta;
f) Pina metlica;
g) Cpsula metlica;
h) Balo de oxignio;
58
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
i) Erlenmeyer;
j) Bquer.
2.9.4. Reagentes e solues
a) Carbonato de sdio (Na
2
CO
3
);
b) Alaranjado de metila (C
14
H
14
N
3
NaO
3
S);
c) Tabletes de combusto de cido benzico, padronizados.
2.9.4.1. Soluo padro de carbonato de sdio
a) Pesar 3,658 gramas de Na
2
CO
3
por litro de gua destilada.
2.9.5. Procedimentos
a) Flambar, ao rubro, as cpsulas metlicas que serviro de recipiente das
amostras e deixar esfriar, em dessecador.
b) Pesar, aproximadamente de 0,5 a 1,0 g da amostra, dependendo do tipo
de material a ser analisado.
c) Colocar a cpsula com a amostra no eletrodo e instalar o fusvel
metlico de dez cm entre os eletrodos da bomba. O fusvel deve ter
contato com a amostra, mas no deve tocar na cpsula.
d) Colocar, aproximadamente, 1 ml de gua nas paredes da bomba com a
ajuda de uma peseta a fim de umedec-las. Isso no ser necessrio se as
paredes do cilindro ainda estiverem midas da determinao anterior.
e) Fechar bem a tampa da bomba e a vlvula de liberao de gases.
Adaptar a vlvula de entrada de gases ao balo de oxignio e adicionar,
lentamente, o oxignio at atingir de vinte e cinco a trinta atmosferas.
f) Colocar 2.000 ml de gua destilada no recipiente oval do calormetro
fazendo em seguida imerso na bomba (a gua colocada suficiente
para a realizao de vrias determinaes; depois de 4 a 5 determinaes,
aproximadamente, medir de novo a gua contida no recipiente e completar
59
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
at os 2.000 ml; com isso, repe-se a gua que normalmente perdida no
manuseio da bomba entre as determinaes). A temperatura da gua deve
estar entre os valores mensurveis nos termmetros, preferencialmente
prxima ao limite inferior de suas escalas. Ligar o eletrodo que se
comunica fonte de energia e fechar o circuito.
g) Fechar o calormetro, observando se os termmetros esto
corretamente posicionados. Abaixar os termmetros e ligar o motor que
faz a gua circular. Observar se o recipiente no qual o calormetro est
contido encontra-se cheio de gua. Caso no esteja, encher com gua at
a sada pelo ladro (esta operao necessria somente na primeira
determinao do dia).
h) Ajustar a temperatura da gua da parte externa do calormetro com a
da interna pela adio de gua quente ou fria. Esperar at que o equilbrio
trmico dos dois termmetros seja mantido por 3 a 5 minutos,
aproximadamente, observando-se as temperaturas em intervalos de um
minuto.
Observao
O ideal seria que as temperaturas da gua do calormetro e da gua que o
circunda fossem iguais, para realmente ter-se uma condio adiabtica.
Como na prtica esta coincidncia de temperatura morosa, procura-se
aproximar ao mximo as temperaturas, admitindo-se, todavia, uma
amplitude trmica mxima de 0,1 graus entre as temperaturas da gua.
Ler e registrar a temperatura do termmetro que est em contacto com a
gua do calormetro (temperatura inicial da determinao) e acionar o
interruptor que provocar o fechamento do circuito eltrico.
necessria a entrada de gua quente ou fria no recipiente externo,
mantendo sua temperatura mais prxima possvel do calormetro,
medida que a temperatura deste for aumentando.
Ler e registrar a temperatura final, aps ter-se mantido estvel durante 3
minutos, a intervalos de 1 minuto.
60
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Desligar o motor que faz a gua circular e levantar os termmetros. Abrir
o calormetro, desligar a bomba do circuito externo do calormetro e retir-
la do recipiente com gua, tendo-se o cuidado de no deixar que se perca
muita gua do recipiente.
Retirar o excesso de presso da bomba, abrindo a vlvula.
Remover os restos do fusvel metlico que no tenham sido
completamente oxidados e medi-los. As calorias do fusvel so
determinadas sabendo-se que 1 cm de fusvel queimado produz 2,3
calorias.
Lavar as paredes internas da bomba, usando uma peseta com gua
destilada e colocar os lavados em um frasco de erlenmeyer.
Titular, usando soluo de carbonato de sdio padronizado e metil orange
como indicadores, para determinar a quantidade de cido formado pela
oxidao. Cada ml da soluo de Na
2
CO
3
gasto na titulao corresponde a
uma caloria.
2.9.6. Equivalente hidrotrmico da bomba calorimtrica
Equivalente hidrotrmico a quantidade de calorias necessrias para
elevar em um grau a temperatura de 2.000 ml de gua, na qual est
imersa a bomba calorimtrica.
Quando no se conhece o equivalente hidrotrmico da bomba, torna-se
necessria sua determinao, usando-se, para isso, substncias cujos
valores calricos so previamente conhecidos.
comum o uso do cido benzico padronizado, em tabletes, cujo calor de
combusto conhecido (6.318 cal/g). Os tabletes so secos em estufa a
105C, por uma noite, e deixados no dessecador para futuras pesagens
nas cpsulas metlicas. Deve-se fazer de seis a oito determinaes, a fim
de se obter um valor mdio confivel.
Uma vez que se conhea o aumento da temperatura da bomba
calorimtrica, provocado pela combusto das amostras do cido benzico,
61
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
pode-se determinar o equivalente hidrotrmico, usando-se a frmula
segunte.
2.9.6.1. Frmula do equivalente hidrotrmico
TI TF
CO Na ml C CF PAAcB CCAB
Hid Eq

+ +
=
) / (
. .
3 2
Onde:
Eq.Hid.= Equivalente hidrotrmico
CCAB = Calor combusto cido benzico
PAAcB = Peso da amostra cido benzico
CF = Calorias do fusvel
C(ml/Na
2
CO
3
) = Calorias
TF = Temperatura final
TI = Temperatura inicial
Exemplo:
Peso do cido benzico seco = 0,7701g
Fusvel queimado = 4,5 cm X 2,3 = 10,3 calorias
Gasto Na
2
CO
3
na titulao = 8,0 ml X 1,0 = 8,0 calorias
Diferena de temperatura = 3,60F
) / ( 356 , 1
60 , 3
0 , 8 3 , 10 7701 , 0 318 , 6
. . F cal Hid Eq =
+ +
=
O equivalente hidrotrmico da bomba, uma vez determinado, ser sempre
usado, a menos que alguma parte da bomba seja substituda.
Conhecendo o equivalente hidrotrmico, pode-se conhecer o calor de
62
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
combusto (Kcal/kg ou Kcal/g) de determinada amostra, no laboratrio,
usando-se a seguinte frmula.
2.9.6.2. Frmula do calor de combusto
PA
CO Na ml C CF DT EHB
CC
) / (
3 2
+ +
=
Onde:
CC = Calor de combusto
EHB = Equilbrio hidrotrmico da bomba
DT = Diferena de temperatura (final-inicial)
CF = Calorias do fusvel
C(ml/Na
2
CO
3
) = Calorias
PA = Peso da amostra
2.9.7. Determinao da Energia Bruta da Urina (amostra
lquida)
2.9.7.1. Princpio
Na determinao da energia bruta (EB) da urina, devem-se preparar
convenientemente as amostras, a fim de que se obtenham melhores
resultados na determinao, por meio de bomba calorimtrica. A urina
deve ser previamente acidificada na coleta, durante a realizao
experimento.
comum o uso de cpsula de polietileno, com capacidade de 5 ml. A
energia bruta das cpsulas de polietileno, previamente determinadas (Kcal/
g), obtida tomando-se a mdia da determinao de quatro cpsulas.
2.9.7.2. Preparo da amostra
Para melhor eficincia do trabalho no laboratrio, recomenda-se pipetar
63
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
inicialmente 5 ml de urina, por cpsula, previamente pesada em balana
analtica. As amostras de urina precisam ser descongeladas at a
temperatura ambiente e no devem ser agitadas.
As cpsulas contendo urina (5 ml) so levadas estufa de ventilao
forada a 55C, at quase completa secagem das amostras (dezoito a
vinte e quatro horas). Em seguida, adicionam-se mais 5 ml de urina s
cpsulas, a fim de se ter um total de 10 ml por amostra. Retorna-se
estufa nas mesmas condies (dezoito a vinte e quatro horas), tendo-se o
cuidado de no deixar a amostra secar completamente.
2.9.7.3. Queima das amostras
Na combusto da cpsula e da urina, usa-se bomba calorimtrica tipo
Parr.
Na determinao da energia bruta total (cpsula + urina), a frmula usada
para determinao a seguinte:
EHB TI TF g Kcal EBT = ) / (
Onde:
EBT(kcal/g) = Energia bruta total
TF = Temperatura final
TI = Temperatura incial
EHB = Equivalente hidrotrmico da bomba
A determinao da energia bruta dos 10 ml de urina obtida calculando-
se:
) 10 ( ) ( ) ( ml EBU Kcal EBC Kcal EBT =
Onde:
EBT(kcal) = Energia bruta total
EBC(Kcal) = Energia bruta da cpsula
64
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
EBU = Energia bruta da urina
Exemplo:
Mdia da energia bruta das cpsulas = 10,500 Kcal/g
Energia bruta da casula (0,2530g) = 2,656 Kcal
Energia bruta total (cpsula + 10 ml de urina) = 3,064 Kcal
Energia bruta de 10 ml urina = 0,408 Kcal
O clculo da quantidade de energia bruta excretada pelo animal pela via
urinria, baseia-se na estimativa da energia bruta da urina.
Ver a seguir, na Tabela 8, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
TABELA 8. Determinao da % da Energia Bruta
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DA ENERGIA BRUTA
N do Projeto: Responsvel:
DATA:
Temperatura em F Kcal/kg*
Amostra
Tara
(g)
Tara
+
ASA (g)
ASA
(g)
Inicial Final
Diferena de
Temperatura
Final-Inicial
ASE
(%)
MS
M.
Natural





* O equivalente hidrotrmico da Bomba Calorimtrica de 1,356 cal/F (PARR.
MOD. 1200).
65
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.10. DETERMINAO DO NITROGNIO TOTAL
2.10.1. Princpio
O termo protena bruta envolve um grande grupo de substncia com
estruturas semelhantes, porm com funes fisiolgicas diferentes. Com
base no fato de que as protenas tm percentagem de nitrognio quase
constante, em torno de 16%, o que se faz determinar o nitrognio. A
frao de componentes orgnicos, alvos de dosagens na forma
mencionada, incluem o nitrognio protico, propriamente dito, e outros
compostos nitrogenados no proticos, tais como: aminas, amidas,
lecitinas, nitrilas e aminocidos.
Considerando que o concentrado tem o papel de suplementar o dficit
protico oriundo do volumoso, importante conhecer o nvel protico das
silagens, volumosos e raes concentradas e rao total, que normalmente
varia de acordo com o material a ser analisado.
Durante a digesto da matria orgnica, o sulfato de amnio (NH
4
)
resultante, na presena da soluo concentrada de hidrxido de sdio, que
libera amnia (NH
3
), recebido na soluo de cido brico.
A amnia, na soluo de cido brico, titulada com cido sulfrico ou
clordrico de ttulo conhecido e, assim, determina-se o teor de nitrognio
da amostra.
Para o clculo da protena bruta, basta multiplicar o resultado pelo fator
6,25. Processa-se em trs fases: digesto, destilao e titulao.
2.10.2. Material necessrio
a) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg;
b) Dessecador a vcuo, com luva, tampa e fundo, em vidro borossilicato,
equipado com placa de porcelana e slica gel azul;
c) Tubos de digesto de 25250 mm;
d) Aparelho de destilao de nitrognio;
66
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) Bureta automtica com capacidade de 50 ml;
f) Bloco digestor para 40 provas;
g) Frasco lavador;
h) Pipetador;
i) Pipeta de 5 ml;
j) Dosador com capacidade 10 ml (bico de papagaio);
k) Erlenmeyer de 125 ml.
2.10.3. Reagentes e solues
a) cido sulfrico concentrado (H
2
SO
4
96-98%, p = 1,84);
b) Hidrxido de sdio (NaOH);
c) cido brico (H
3
BO
3
);
d) Sulfato de potssio (K
2
SO
4
) ou sulfato de sdio (NaSO
4
) anidro;
e) Sulfato de cobre (CuSO
4
.5H
2
O);
f) Selnio metlico em p (Na
2
S
2
O
3.
5H
2
O);
g) Vermelho de metila (C
15
H
15
O
2
N
3
);
h) lcool etlico 95% (CH
3
CH
2
OH);
i) Verde de bromocressol (C
21
H
14
B
14
O
5
S).
2.10.3.1. Soluo de cido sulfrico 0,05 N para titulao de
protenas
a) Adicionar gua destilada no garrafo graduado com capacidade de 5
litros at a metade;
b) Adicionar 7,5 ml de cido sulfrico p.a. Quando se dispe de cidos de
marcas diferentes, deve-se preparar a soluo considerando informaes
67
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
do rotulo tais como, pureza e ttulo (massa utilizada considerando o grau
de pureza dos reagentes);
c) Completar o volume do recipiente com gua destilada;
d) Separar trs erlenmeyer e adicionar, em cada um, 10 ml de hidrxido de
sdio 0,1N (padro primrio);
e) Adicionar 0,5 ml vermelho de metila em cada erlenmeyer;
f) Encher a bureta com a soluo preparada;
g) Titular os erlenmeyer at ficarem com a cor rosada. Anotar os volumes
e fazer a mdia;
h) Executar a operao em capela;
i) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
2.10.3.2. Titulao para determinar o fator conhecido do
H
2
SO
4
0,05 N
a) Descartar qualquer resduo de cido que permanea no depsito de
vidro da bureta.
b) Lavar o depsito de vidro da bureta com gua destilada e fazer a trplice
lavagem; logo aps, secar em estufa de ar forado.
c) Esvaziar a bureta e lavar com gua destilada vrias vezes, at que no
restem resduos do cido anterior.
d) Pegar o depsito de vidro devidamente seco e ench-lo com a nova
soluo, para a padronizao do novo cido; aps montar a bureta.
e) Encher a bureta com o novo cido, descartando-o para eliminar qualquer
resduo de gua destilada oriunda da lavagem anterior; fazer esse processo
por trs vezes, no mnimo.
f) Pegar trs erlenmeyer de 125 ml.
g) Pipetar 10 ml de hidrxido de sdio 0,1 N, em cada erlenmeyer.
68
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
h) Adicionar 0,5 ml de vermelho de metila a 0,2%, em cada erlenmeyer.
i) Anotar a quantidade de soluo gasta para o ponto de viragem da
titulao.
j) Aplicar na frmula a seguir.
2 . 2 1 . 1 V N V N =
Onde:
N1V1 = Hidrxido de sdio 0,1N
N1 = Normalidade de hidrxido de sdio 0,1N
V1 = Volume gasto de hidrxido de sdio 0,1N
N2 = Normalidade desconhecida
V2 = Volume gasto da soluo desconhecida para o ponto de viragem na
titulao
Exemplo:
Titulao 1 = 17,8 ml
Titulao 2 = 17,9 ml
Titulao 3 = 17,8 ml
83 , 17
3
8 , 17 9 , 17 8 , 17
=
+ +
= Mdia
ml
V1.N1 = V2.N2
V1 = 10 ml
N1 = 0,1 N
V2 = 17,83 ml
10 x 0,1 = 17,83 x N2
69
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
83 , 17
1
2 = N
N2 = 0,0561 N
2.10.3.3. Padronizao do cido com TRIS
O TRIS ou THAM (Tris-(hidroximetil) amino metano) um padro primrio
para a estandartizao de solues diludas de cidos. Possui alto peso
molecular, incolor, no higroscpio e pode ser obtido com alta pureza.
No absorve CO
2
quer na forma slida quer em soluo. Seu pH no ponto
de equivalncia de 4,7. As solues revelam-se estveis temperatura
ambiente por, no mnimo, trs meses.
2.10.3.3.1. Procedimento
a) Pesar 0,7 g de TRIS (reagente Merck n 8382) e secar por uma hora a
102C (no deixar nesta temperatura por mais de duas horas).
b) Dissolver 0,6057 g do reagente seco em balo volumtrico de 100 ml
com gua destilada livre de CO
2
.
c) Ajustar o volume e homogeneizar. A soluo assim preparada 0,050
molc L-1.
d) Pipetar 10,00 ml da soluo 0,050 molc L-1 de TRIS para um frasco de
erlenmeyer de 125 ml (em duplicata).
e) Adicionar 10 ml de gua destilada (livre de CO
2
).
f) Adicionar 5 ml do indicador cido brico e titular com o cido. No ponto
de viragem o indicador passa da cor verde-clara rosa-claro permanente.
H
H
05 , 0 10
=
Onde:
H = mol por litro
Observao: Para a titulao do cido 0,0025 M utilizarmos somente 2,00
70
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
ml da soluo de TRIS 0,050 mol
c
L
-1
.
2.10.3.4. Soluo indicadora de cido brico
a) Pesar 40 g de cido brico (massa utilizada considerando grau de pureza
dos reagentes) em um bquer de 1000 ml e dissolver em 400 ml o cido
com gua destilada quente.
b) Deixar esfriar e transferir para o balo volumtrico de 2000 ml.
c) Medir 40 ml de soluo obtida pela dissoluo de 0,66 g de verde de
bromocressol e 0,33 g de vermelho de metila em balo de 100 ml com
etanol 95%, em proveta de 50 ml e 400 ml de lcool etlico, ou com
etanol comum em proveta de 500 ml.
d) Misturar as solues no balo volumtrico de 2000 ml e adicionar
cuidadosamente o NaOH 0,1 N (de 1 em 1 ml, no mximo at 9 ml), at
que se observe uma mnima mudana da cor roxa para a verde clara.
e) Para saber se a soluo est pronta, no ponto certo, pegar um bquer
de 50 ml e colocar 1 ml de gua destilada e 1 ml do indicador de cido
brico que est sendo feito; o ponto de virada da cor verde clara.
f) Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
g) Guardar em frasco escuro.
2.10.3.5. Mistura digestora
2.10.3.5.1. Princpio
A mistura digestora tem como finalidade assemelhar a digestibilidade dos
alimentos que ocorre no rmen do animal.
A mistura digestora torna a digesto das amostras mais rpida, elevando o
ponto de ebulio do cido sulfrico de 180C para, aproximadamente,
400C.
71
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
2.10.3.5.2. Reagentes
a) Sulfato de potssio (K
2
SO
4
) ou sulfato de sdio (NaSO
4
);
b) Sulfato de cobre (CuSO
4
);
c) Selnio metlico (Se).
2.10.3.5.3. Procedimento
a) Pesar nove partes do sulfato de potssio (K
2
SO
4
) ou sulfato de sdio
(NaSO
4
), considerando-se a massa atmica utilizada. Deve-se respeitar o
grau de pureza dos reagentes;
b) Pesar uma parte do sulfato de cobre (CuSO
4
), considerando-se a
massa atmica utilizada. Deve-se respeitar o grau de pureza dos
reagentes;
c) Triturar at a completa homogeneizao. A mistura deve ficar com uma
colorao uniforme;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
Observao:
A mistura digestora pode variar, conforme o mtodo a ser utilizado; j
para os micros e macronutrientes deve-se acrescentar selnio metlico na
proporo de 0,8 partes.
2.10.3.5.4. Clculo
Para obter-se em torno de 500 gramas da mistura digestora, faz-se o
clculo atravs de regra de trs simples.
parte X
partes g
1 _ __________
9 __________ 500
9
1 500
= X
55 , 55 = X
72
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Equivalente:
500 g de sulfato de potssio = 9 partes
55,55 g de sulfato de cobre = 1 parte
2.10.3.6. Verde de bromocressol + vermelho de metila
A combinao de verde de bromocressol mais vermelho de metila
utilizada para a determinao de Nitrognio.
2.10.3.6.1. Mtodo para Volume de 100 ml
a) Pesar 0,33 g de verde de bromocressol;
b) Pesar 0,165 g de vermelho de metila;
c) Transferir para balo volumtrico de 100 ml;
d) Completar o volume do balo, com etanol 95%;
e) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
2.10.3.7. Fenolftalena 1% p/v
a) Pesar 1 g de fenolftalena p.a.;
b) Transferir para balo volumtrico de 100 ml;
c) Colocar 60 ml de lcool etlico p.a. 95%;
d) Agitar at dissolver, acrescentar gua destilada e deixar esfriar;
e) Aferir e homogeneizar;
f) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
2.10.3.8. Verde de bromocressol 0,1% p/v
a) Pesar 0,1 g de verde de bromocressol p.a.;
b) Transferir para balo volumtrico de 100 ml;
73
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
c) Colocar 20 ml de lcool etlico p.a. 95%;
d) Agitar at dissolver, acrescentar gua destilada e deixar esfriar;
e) Aferir e homogeneizar;
f) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
2.10.3.9. Vermelho de metila 0,2% p/v
a) Pesar 0,2 g de vermelho de metila p.a.;
b) Transferir para balo volumtrico de 100 ml;
c) Colocar 60 ml de lcool etlico p.a. 95%;
d) Agitar at dissolver, acrescentar gua destilada e deixar esfriar;
e) Aferir e homogeneizar;
f) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
2.10.3.10. Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 10N
2.10.3.10.1. Material necessrio
a) Bquer de PVC (policloreto de vinila) 1000 ml;
b) Balo volumtrico 1000 ml
c) Basto de vidro;
d) NaOH (400 g).
2.10.3.10.2. Procedimento
a) Pesar 400 g de NaOH (considerando-se a massa atmica utilizada, deve-
se respeitar o grau de pureza dos reagentes) em bquer de PVC
(policloreto de vinila) 1000 ml;
b) Colocar 500 ml de gua destilada (colocar aos poucos e mexer para no
agregar no fundo do bquer de PVC (policloreto de vinila); se isso ocorrer,
74
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
aquecer para dissolver em banho maria). Preparar um banho com gelo para
o preparo da soluo de hidrxido de sdio. Nessa soluo ocorre uma
reao exotrmica;
c) Deixar esfriar e passar a soluo para a balo volumtrico de 1000 ml,
lavando bem o bquer de PVC (policloreto de vinila), e completando o
volume de 1000 ml;
d) Executar a operao em capela;
e) Transferir para recipiente apropriado de PVC (policloreto de vinila) e
etiquetado.
2.10.3.11. Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 1N
a) Medir 10 ml de NaOH 10N (que o NaOH 40%, que se usa na
protena), em balo volumtrico de 100 ml;
b) Completar o volume do balo volumtrico com gua destilada;
c) Transferir para recipiente apropriado de PVC (policloreto de vinila) e
etiquetado.
2.10.3.12. Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 0,1N
a) Medir 10 ml de NaOH 1N (que o NaOH 40%, que se usa na protena),
em balo volumtrico de 100 ml;
b) Completar o volume do balo volumtrico com gua destilada;
c) Transferir para recipiente apropriado de PVC (policloreto de vinila) e
etiquetado.
2.10.4. Digesto
O nitrognio orgnico transformado em amnia e os compostos
orgnicos so convertidos em CO
2
, H
2
O etc.
2.10.4.1. Procedimento
a) Selecionar os tubos de ensaio de 50 ml de borda grossa, devidamente
identificados;
75
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
b) Pesar 0,200 g da amostra (modificao implantada no Laboratrio de
Bromatologia e Nutrio Animal-LBNA/Embrapa Clima Temperado);
c) Adicionar a mistura cataltica ou mistura digestora de sulfato de
potssio (K
2
SO
4
) ou sulfato de sdio (NaSO
4
) com o sulfato de cobre
(CuSO
4
) na proporo de 9/1, coloca-se 0,7 g da mistura em cada tubo de
ensaio (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
d) Colocar 2 ml de H
2
SO
4
p.a. (modificao implantada no LBNA/Embrapa
Clima Temperado);
e) Colocar em bloco digestor a 400C de temperatura, at ficar verde
cristalino, o que leva em torno de 2 a 3 horas dependendo do tipo de
amostra a ser analisada (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima
Temperado).
2.10.5. Destilao
Fase em que a amnia separada e recolhida em uma soluo receptora.
2.10.5.1. Procedimento
a) Verificar o nvel da gua da caldeira; aps, completar o nvel, a cada
trs amostras realizadas; conferir novamente o nvel, para no danificar o
aparelho (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
b) Colocar a amostra no destilador;
c) Colocar 10 ml de NaOH 10 N com a torneira aberta (d-se uma lavada
aps colocar NaOH)(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima
Temperado);
d) Colocar o erlenmeyer contendo o indicador de cido brico na
quantidade de 5 ml; ligar o destilador antes de colocar o erlenmeyer com o
indicador. A destilao estaro completa quando se obtiver 40 ml de
amnia, que assume a colorao verde cristalino. Caso a amostra tenha se
solidificado, adiciona-se um pouco de gua destilada nos tubos e
homogeneiza-se antes de colocar no destilador para dissolver a amostra. O
NaOH destina-se a neutralizar o cido sulfrico da amostra e liberar a
76
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
amnia (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
e) Retirar o erlenmeyer do aparelho, desligando-o (aquecimento);
f) Deixar diminuir a ebulio, abrir a torneira e retirar a amostra.
2.10.6. Titulao
Fase em que feita a determinao quantitativa da amnia contida na
soluo receptora.
2.10.6.1. Procedimento
a) A leitura feita pela quantidade de cido gasto na titulao, at trocar
a cor de verde cristalino para vermelho. Fazer a leitura pelo ml gasto de
H
2
SO
4
0,05 N padronizado na titulao da amostra;
Observao: Sempre se faz prova em branco, ou seja, a mistura cataltica
mais 2 ml de H
2
SO
4
.
b) Zerar a bureta;
c) Anotar o volume gasto;
d) Diminuir a prova em branco de volume gasto e anotar o resultado na
ficha.
2.10.7. Procedimento (Processo semimicro) A.O.A.C
(1975)
a) Pesar 0,200 g da amostra, embrulhar em papel impermevel e colocar
no tubo de digesto. Caso no se disponha de quantidade de amostra
suficiente, ou o teor de nitrognio se situe em torno de 7%, pesar 0,100 g
de amostra e fazer os clculos com a seguinte Frmula: %N = 0,28 x f x
Vm (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
b) Adicionar mais ou menos 0,7 g de mistura cataltica ou mistura
digestora [sulfato de sdio (NaSO
4
) na proporo de 9 partes e 1 parte de
sulfato de cobre (CuSO
4
)] e, em seguida, 2 ml de cido sulfrico
concentrado (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima
77
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Temperado);
c) Colocar a galeria com os tubos no bloco digestor, ligar o termostato e
posicionar a temperatura em 400C. O aquecimento se prolongar por
duas a trs horas, sendo o processo alvo de verificaes ocasionais;
d) No incio da digesto o material apresentar colorao escura, devido a
forte ao oxidante do cido sulfrico sobre a matria orgnica, contudo,
prximo ao trmino do processo, o extrato ter, geralmente, cor verde
clara. No tocante verificao, deve-se tomar muito cuidado, visto que o
processo deve ser realizado em capela. No resfriamento da amostra
poder haver choque trmico e, consequentemente, quebra do tubo e
projeo de vapores cidos na mo do operador;
e) Desligar o bloco e retirar a galeria, deixar esfriar por mais ou menos 5
minutos e adicionar gua destilada para evitar cristalizao do sulfato de
amnio. O extrato dever ficar com aproximadamente o dobro do seu
volume inicial (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima
Temperado);
f) Transferir a amostra para o destilador, adicionar 10 ml de hidrxido de
sdio 10 N (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
g) Em erlenmeyer de 125 ml colocar 5 ml de cido brico e adaptar
extremidade do condensador. Abrir a torneira da gua de circulao do
condensador. Ligar a fonte de aquecimento. A soluo de acido brico
deve passar para cor verde devido presena de amnia (modificao
implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
h) Desligar o destilador de nitrognio quando se obtiver aproximadamente
40 ml do extrato;
i) Titular a soluo com cido sulfrico 0,05 N padronizado. O ponto de
viragem do verde para o vermelho.
2.10.8. Frmula para clculo da protena
Para peso de amostras em gramas.
78
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
PA
FA N V
Nitrognio
100 014 , 0
%

=
Onde:
V = Volume gasto na titulao
N = Normalidade de cido
FA = Fator do cido
PA = Peso da amostra
% Protena = % de N (nitrognio) x 6,25
2.10.9. Ajuste base de 100 % da matria seca
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de protena bruta na anlise
%MS(105C) = % de matria seca na amostra
Ver a seguir, na Tabela 9, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
79
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 9. Determinao da % de Nitrognio Total
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE NITROGNIO TOTAL E PROTENA BRUTA
N DO PROJETO:
RESPONSVEL: N do Lote:
FATOR DE NORMALIDADE DO CIDO: DATA:
Amostra
N
Identificao
N
Tubo
Peso
Amostra 1
Peso
Amostra 2
ml gasto
Amostra 1
ml gasto
Amostra 2
% N PB









Anlises corrigidas a 100% da Matria Seca a 105C
3. Determinao de digestibilidade in vitro da
Matria Seca ou Orgnica
3.1. PRINCPIO
A tcnica, desenvolvida por Tilley e Terry (1963) e modificada por Van
Soest e Moore (1966), consiste em se deixar amostras de alimentos
(geralmente trabalha-se com forrageiras), num primeiro estgio
(fermentao pr-gastrica), em contato com o contedo lquido do rmen
(inculo), no interior de um tubo de ensaio, no qual busca-se reproduzir as
condies predominantes no rmen-retculo (presena de microorganismos,
anaerobiose, temperatura mdia de 39C, poder tampo com pH de 6,9);
80
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
j, num segundo estgio, processa-se a digesto pela adio de pepsina e
cido clordrico concentrado. A quantia de matria seca ou orgnica que
desaparece aps os dois estgios considerada como tendo sido digerida.
3.2. MATERIAIS/EQUIPAMENTOS
a Banho Maria com termostato eletrnico (ajuste finssimo), temperatura
controlada de 0 a 120C, preciso de mais ou menos 0,5C, circulao
interna de gua;
b) Galeria de alumnio;
c) Gs carbnico (CO
2
);
d) Garrafa trmica grande;
e) pH-metro, faixa de 0 a 14;
f) Papel de filtro TIPO 389, com dimetro de 12,5 mm;
g) Rolhas de borracha com vlvulas de bunsen;
h) Tubos de ensaios de 25x150 mm, com parede reforada de 1,5 mm;
i) Suporte de madeira para tubos de ensaio;
j) Forno de mufla;
k) Bomba a vcuo ou eltrica;
l) Termmetro de mxima e mnima;
m) Potencimetro;
n) Provetas de 500 e 1000 ml;
o) Kitazato de 2000 ml;
p) Cadinhos de porcelana.
81
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
3.3. REAGENTES E SOLUES
a) cido clordrico (HCl);
b) Carbonato de sdio (Na
2
CO
3
);
c) Pepsina;
d) Saliva artificial;
e) Uria (NH
4
).
3.3.1. Soluo de cido clordrico 6 N
a) Adicionar aproximadamente 100 ml de gua destilada em balo
volumtrico de 500 ml;
b) Adicionar 240 ml de cido clordrico concentrado p.a. (d = 1,19;
38,32% v/v);
c) Deixar esfriar, aferir e homogeneizar;
d) Executar a operao em capela.
3.3.2. Soluo de carbonato de sdio
a) Pesar 15,8964 g de carbonato de sdio (considerando-se a massa
atmica utilizada, deve-se respeitar o grau de pureza dos reagentes);
b) Transferir para balo volumtrico de 100 ml;
c) Adicionar 50 ml de gua destilada, agitar at dissolver completamente;
d) Deixar esfriar, aferir e homogeneizar.
3.3.3. Soluo de pepsina 1:10.000 20% p/v
a) Pesar na proporo de 1g/5 ml de soluo a preparar;
b) Submeter o meio dissoluo em agitador magntico 30 a 40 minutos
antes do incio do 2 estgio do ensaio de digestibilidade.
82
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
3.3.4. Soluo de saliva artificial (volume da soluo 500
ml)
a) Pesar e dissolver em aproximadamente 250 ml de gua as seguintes
substncias: (considerando-se a massa atmica utilizada, deve-se respeitar
o grau de pureza dos reagentes);
2,0445 g de fosfato dicido de potssio (KH
2
PO
4
);
5,4674 g de fosfato de dissdico diidratado (Na
2
HPO
4
.2H
2
O);
0,7503 g de sulfato de magnsio heptaidratado (MgSO
4
.7H
2
O);
0,2501 g de cloreto de potssio (KCl);
b) Conservar em geladeira at o dia do incio do ensaio de digestibilidade
(1 parte da saliva);
c) Adicionar, em seguida, 10 ml de carbonato de sdio (Na
2
CO
3
) e 5 ml de
uria;
d) Pesar 0,0825 g de cloreto de clcio (CaCl
2
.2H
2
O) e 0,0125 g de sulfato
de sdio pentaidratado (Na
2
S.5H
2
O) e dissolver na 1 parte da saliva [a
dissoluo do cloreto de clcio e do sulfato de sdio somente completa-se
com a adio de gs carbnico (CO
2
)];
e) Completar o volume e saturar o meio com (CO
2
) por 3,5 minutos, a uma
presso de vazo de mais ou menos 0,2 Kgf/cm
2
;
Observao: A operao de uso do CO
2
deve obedecer rigorosamente os
seguintes passos:
Aps certificar-se de que o regulador da presso de trabalho (4), a vlvula
de bloqueio da linha (3) e o fluxmetro da linha (2) esto devidamente
fechados, abrir lentamente e por completo a vlvula do cilindro de gs (1);
Regular a vazo de forma que o indicador do fluxmetro situe-se no nvel
30;
Abrir a vlvula de bloqueio e estabelecer a presso de trabalho no
83
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
regulador, ambos no laboratrio;
Concluda a operao com o CO
2
, fechar o regulador 4 e a vlvula 3.
Logo aps, fechar a vlvula 1. Tornar a abrir a vlvula 3 e o regulador
4, purgando o gs remanescente da linha para um recipiente com mais
ou menos 1 litro de gua. Fechar o regulador 4, a vlvula 3 e o
fluxmetro 2;
f) Ler o pH (deve-se ligar o pH-metro 30 minutos antes do preparo da 2
parte da saliva artificial, com a soluo tampo pH = 7,0, na
temperatura de trabalho do aparelho (mais ou menos 22C), visando
estabilizao do equipamento). Se este estiver situado na faixa de 6,8 a
6,9, conduzir o ensaio; se no, tornar a saturar com gs carbnico at
fixar o pH na referida faixa.
3.3.5. Soluo de Uria 8% p/v
a) Pesar 4 g de uria;
b) Transferir para balo volumtrico de 50 ml, adicionar gua, agitar at
dissolver completamente;
c) Deixar alcanar a temperatura ambiente, aferir e homogeneizar.
3.4. PROCEDIMENTO
a) Pesar 0,500 g de amostra (em cada corrida/bateria introduzir 03 provas
em branco e 03 controles) e transferir para os tubos de ensaio;
b) Adicionar 10 ml de saliva artificial, injetar gs carbnico e arrolhar. Em
seguida, acondicionar em banho-maria a uma temperatura de 39C;
c) Coletar o lquido ruminal em kitazato ambientado com o gs carbnico e
em banho de gua a mais ou menos 42C. Filtrar diretamente na garrafa
trmica com temperatura interna de mais ou menos 40C;
d) Injetar gs carbnico no liquido da garrafa;
e) Adaptar pipeta automtica de 12 ml garrafa trmica e tornar a injetar
gs carbnico atravs da mesma. Agitar os tubos e adicionar o lquido
84
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
ruminal, arrolhado a seguir;
f) Inocular gs carbnico em todos os tubos durante 20 segundos, a uma
presso de mais ou menos 0,2 Kgf/cm
2
. Deixar no banho-maria por 48
horas, agitando 3 vezes ao dia;
g) Aps 48 horas, acrescentar a cada tubo 0,9 ml (1,0 ml nos tubos
contendo o branco) de cido clordrico 6 N e 0,5 ml de soluo 20% de
pepsina 1:10.000. Segue-se outro estgio de 48 horas, tambm agitando
os tubos 3 vezes ao dia;
h) Ao termino da 2 etapa, filtrar o resduo indigestvel em papel filtro
previamente tarado;
i) Submeter o resduo secagem por uma noite a 105C. Esfriar em
dessecador por 1 hora e pesar anotando o peso em ficha adequada.
3.5. DIGESTIBILIDADE DA MATRIA ORGNICA
Para determinao de digestibilidade da matria orgnica (DIVMO),
acrescentam-se os seguintes passos:
a) Colocar os papis de filtro com resduos secos e pesados em cadinhos
de porcelana previamente tarados;
b) Incinerar por 4 horas a 550C;
c) Esfriar em dessecador por 1 hora e pesar.
3.5.1. Clculo para DIVMO
100 %

=
I
IND I
MO
MO MO
DIVMO
Onde:
MO
I
= Matria orgnica inicial
MO
IND
= Matria orgnica indigestvel
85
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
M.O
i
= M.S
i
(M.S
i
x % Cinza/100)
M.O
ind
= M.O
r
M.O
br
; onde:
M.O
r
= M.S
r
- cinza
r
M.O
br
= M.S
br
- cinza
br
3.6. RESULTADOS
i
ind i
M.S
100 x M.S - M.S
% = DIVMS
Onde:
M.S
ind
= M.S
r
M.S
br
M.S
i
= Matria seca inicial
M.S
ind
= Matria seca indigestvel
M.S
r
= Matria seca residual
M.S
br
= Matria seca do branco
Ver a seguir, na Tabela 10, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
3.6.1. Ajuste base de 100 % da matria seca:
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de digestibilidade na anlise
%MS(105C) = % de matria seca na amostra
86
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 10. Determinao da % de Digestibilidade in vitro da Matria
Seca
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE Digestibilidade in vitro da Matria seca
N do Projeto:
Responsvel:
DATA: N do Lote:
Tubo Amostra Resduo
Digestibilidade
(%)
Amostra
N
Tara
(g)
Tara
+
ASA
ASA
(g)
ASE
(%)
MS
(g)
Tubo +
Resduo
(g)
Resduo
(g)
Resduo
(-) Branco
(g)
Mat. Seca
Digerida
(g)
Mat.
Seca

Mat.
seca






Anlises corrigidas a 100% da Matria Seca a 105C
4. Determinao de pH e cido Ltico em Silagem
4.1. PRINCPIO
A silagem o produto do armazenamento da forragem verde depois de
fermentada, na ausncia de oxignio. O armazenamento processado em
silos, depois da forragem ter sido convenientemente picada e compactada.
A fermentao consequncia da atividade bacteriana, a qual produz
entre outros os cidos ltico e actico durante a fermentao do material
ensilado. A forragem ensilada continua ainda em fermentao durante
algum tempo, dependendo da maior ou menor quantidade de oxignio
presente no silo aps a compactao.
87
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
As bactrias produtoras do cido ltico so sacarolticas; da a importncia
de um teor elevado de carboidratos solveis em gua na forragem, a fim
de obter maior produo deste cido.
O teor de matria seca de grande importncia, a fim de se obter silagem
de boa qualidade e rendimento. Silagem de boa qualidade caracterizada
por apresentar de 30 a 40% de matria seca, pH entre 3,8 a 4,5, cido
ltico superior a 3,0% e cido butlico inferior a 0,2%, na matria seca.
4.2. DETERMINAO DE PH
4.2.1. Materiais/Equipamentos
a) pH-metro com escala de 0 a 14;
b) Eletrodo combinado para anlises de pH;
c) Bquer de 250 ml;
d) Frasco lavador;
e) Bastonete de vidro;
f) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg.
4.2.2. Reagentes e solues
a) cido ctrico (C
6
H
8
O
7
);
b) Fosfato dissdico heptaidratado (Na
2
HPO
4
.7H
2
O).
4.2.2.1.Soluo tampo, pH 4,0 e 7,0
A 9,605 g cido ctrico __________________ 500 ml gua destilada
ou 1,921 cido ctrico _______________ 100 ml gua destilada
B 26,825 g Na
2
HPO
4
.7H
2
O _______________ 500 ml gua destilada
ou 10,73 g Na
2
HPO
4
.7H
2
O ___________ 200 ml gua destilada
pH 4,0 = 30,7 ml A + 19,3 ml B ! elevar a 100 ml com H
2
O
88
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
pH 7,0 = 6,5 ml A + 43,6 ml B ! elevar a 100 ml com H
2
O
4.2.3. Procedimento
a) Pesar 9,0 g de silagem fresca em bquer de 250 ml e adicionar 60 ml
de gua destilada;
b) Fazer a leitura aps um repouso de 30 minutos; usando pH-metro
aferido com solues tampo pH 4,0 e 7,0;
c) Agitar o meio durante as leituras;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
4.3. DETERMINAO DE CIDO LTICO
4.3.1. Materiais/Equipamentos
a) Conjuntos de cilindros extratores;
b) Prensa hidrulica, capacidade 15 toneladas;
c) Liquidificador;
d) Espectrofotmetro, escala de leitura de 400-700 mm;
e) Papel de filtro, tipo 3892 ou equivalente, com dimetro de 18,5 cm.
4.3.2. Reagentes e solues
a) cido clordrico concentrado (HCl);
b) Cloreto de brio (BaCl
2
.2H
2
O);
c) Cloreto frrico (FeCl
3
.6H
2
O);
d) Hidrxido de sdio (NaOH);
e) Lactato de ltio (soluo padro estoque);
f) Sulfato de zinco (ZnSO
4
.7H
2
O).
89
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
4.3.2.1. Soluo de cido clordrico 1 N
a) Em balo volumtrico de 500 ml, adicionar cerca de 250 ml de gua
destilada;
b) Acrescentar 40 ml de cido clordrico p.a. concentrado
(d=1,19;38,32%);
c) Aferir e homogeneizar;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
4.3.2.2.Soluo de cloreto de brio 9,88% p/v
a) Pesar 98,91g de cloreto de brio (considerando-se a massa atmica
utilizada, deve-se respeitar o grau de pureza dos reagentes), dissolver em
mais ou menos 300 ml de gua destilada;
b) Transferir para balo volumtrico de 1.000 ml, lavando o bquer com
gua destilada;
c) Aferir e homogeneizar;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
4.3.2.3. Soluo de cloreto frrico 5% p/v
a) Pesar 5,0075 g de cloreto frrico (considerando-se a massa atmica
utilizada, deve-se respeitar o grau de pureza dos reagentes), e dissolver em
12,5 ml de HCl 1 N;
b) Transferir para balo volumtrico de 100 ml, lavando o bquer com
gua destilada;
c) Aferir e homogeneizar;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
4.3.2.4.Soluo de hidrxido de sdio 0,66 N
90
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
a) Pesar 26,67 g de hidrxido de sdio (considerando-se a massa atmica
utilizada, deve-se respeitar o grau de pureza dos reagentes), e dissolver em
mais ou menos 250 ml de gua destilada;
b) Transferir para balo volumtrico de 1.000 ml, lavando o bquer com
gua destilada;
c) Deixar esfriar, aferir e homogeneizar;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
4.3.2.5. Soluo de lactato de ltio 1% p/v (soluo padro
estoque)
a) Pesar 1,0101 g de lactato de ltio p.a. (considerando-se a massa
atmica utilizada, deve-se respeitar o grau de pureza dos reagentes);
b) Transferir para balo volumtrico de 100 ml, adicionar
aproximadamente 50 ml de gua destilada, agitando at completar a
dissoluo;
c) Aferir e homogeneizar;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
4.3.2.6. Soluo de sulfato de zinco 22,5% p/v:
a) Pesar 225,49 g de sulfato de zinco (considerando-se a massa atmica
utilizada, deve-se respeitar o grau de pureza dos reagentes), e dissolver em
mais ou menos 300 ml de gua destilada;
b) Transferir para balo volumtrico de 1.000 ml, lavando o bquer com
gua destilada;
c) Aferir e homogeneizar;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
91
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
4.3.3. Procedimento
4.3.3.1.Curva de calibrao
4.3.3.1.1. Preparo dos padres de leitura
Colocar em liquidificador:
a) 4,0 ml de soluo de lactato de ltio 1%;
b) 71 ml de gua deionizada;
c) 30 ml de cloreto de brio 9,88%;
d) 30 ml de hidrxido de sdio 0,66 N;
e) 15 ml de sulfato de zinco 22,5%.
Processar por 2 minutos. Filtrar em papel de filtro (o filtrado deve ser
lmpido). Quando se obtiver 100 ml de filtrado cessar a filtrao. Veja a
seguir, na Tabela 11, os padres de leitura.
TABELA 11. Padres de leitura.
Concentrao no
filtrado %
Volume A tomar
do filtrado (ml)
Volume Final (ml) Concentrao Final
(%)
1,0 5 25 0,2
10 0,4
15 0,6
20 0,8
1,0 25 25 1,0

4.3.3.1.2. Desenvolvimento da cor
a) Pipetar 10 ml de cada soluo padro e transferir para tubo de ensaio;
b) Adicionar 1,0 ml de soluo de cloreto frrico 1:4 e agitar. Repetir este
procedimento com o branco;
92
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Observao:O branco deve ser preparado antes dos padres ou mesmo
das amostras, da seguinte forma:
Medir e misturar: 50 ml de gua destilada com 20 ml de cloreto de brio
9,88%, com 20 ml de hidrxido de sdio 0,66 N e com 10 ml de sulfato
de zinco 22,5%;
Processar em liquidificador por 2 minutos. Filtrar em papel de filtro.
Coletar duas alquotas de 10 ml do filtrado obtido e adicionar 1 ml de
soluo de cloreto frrico 1:4 a cada uma destas. Incluir um branco a cada
bateria de amostras.
4.3.3.1.3. Leitura no Espectrofotmetro
a) Ligar o aparelho 1 hora antes da leitura, fixando o comprimento de onda
em 425 nm;
b) Fazer ajuste de 0% de absorbncia e 100% de transmitncia com o
branco;
c) A seguir, ler os padres em ordem crescente de concentrao;
d) Verificar o ajuste com o branco a cada leitura do padro.
4.3.3.2. Preparo da amostra
4.3.3.2.1. Extrao do suco de silagem
a) Pesar 100 g de silagem (em duplicata);
b) Submeter a prensagem at uma presso mxima de 10 toneladas;
c) O suco de silagem recebido em proveta graduada;
d) Os cilindros extratores devero ser lavados com gua destilada (sem
tratamento) a cada amostra prensada, isto , entre duplicatas e amostras
distintas.
93
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
4.3.3.2.2 Processamento do suco
Colocar em liquidificador:
a) 4,0 ml de suco da silagem;
b) 71 ml de gua destilada;
c) 30 ml de cloreto de brio 9,88%;
d) 30 ml de hidrxido de sdio 0,66 N e 15 ml de sulfato de zinco 22,5%.
Processar por 2 minutos. Filtrar em papel de filtro at que o filtrado
alcance mais ou menos 50 ml.
4.3.3.2.3. Desenvolvimento da cor e leitura
a) Pipetar 10 ml do filtrado de cada amostra e transferir para tubo de
ensaio;
b) Adicionar 1 ml de soluo de cloreto frrico 1:4 e agitar;
c) Proceder leitura em espectrofotmetro, ajustando para comprimento
de onda 425 nm, observando os mesmos procedimentos de uso quando do
preparo da curva de calibrao.
4.3.4. Resultados:
PS
Ccurva Vsuco
ltico cido

= %
Onde:
Vsuco = Volume de suco extrado por prensagem
Curva = Concentrao de cido ltico obtido com equao de regresso
linear
PS = Peso seco da amostra.
94
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
5. O MTODO VAN SOEST NA DETERMINAO
DA QUALIDADE DE FORRAGEIRAS
A tradicional anlise de alimentos, que vem sendo aplicada nos
laboratrios de nutrio animal, tambm denominada anlise aproximativa
de Weende, parece no satisfazer mais os pesquisadores que, diariamente,
procuram conhecer mais e melhor cada um dos nutrientes contidos nos
alimentos.
O esquema de anlise proposto por Weende, apesar de fornecer uma idia
de valor nutritivo do alimento, falho em vrios aspectos bem conhecidos
pelos que esto familiarizados com este esquema: a anlise da fibra bruta,
alm do empirismo de sua tcnica, composta de celulose e parte da
lignina insolvel. O extrativo no nitrogenado (ENN), calculado por
diferena, fica, sujeito a erros que, normalmente, so cometidos nas
demais anlises, e, consequentemente, no representa muito bem a frao
de carboidratos solveis ou digestveis.
Um novo mtodo de anlise, para avaliar a qualidade de forrageiras, foi
proposto por Van Soest (1965), o qual permite melhor fracionamento dos
diversos componentes da frao fibrosa.
Neste captulo, objetivou-se proporcionar maiores conhecimentos, a
respeito deste novo mtodo, aos que trabalham em laboratrios de
nutrio animal, alm de acrescentar um pouco da experincia que se tem
dele.
Na Tabela 12 faz-se uma comparao entre o mtodo clssico de Weende
e o sistema proposto por Van Soest, numa anlise da matria orgnica de
forrageiras.
O novo mtodo de determinao da qualidade das forrageiras
proporcionado por Van Soest (1965) baseado na separao das diversas
fraes constitudas nas forrageiras, por meio de reagentes especficos,
denominados detergentes.
Assim, por meio do detergente neutro, possvel separar o contedo
celular (parte da forragem solvel no detergente neutro) constitudo,
95
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
principalmente, de protenas, gorduras, carboidratos solveis, pectina e
outros constituintes solveis em gua, da parede celular (parte da
forragem insolvel em detergente neutro), tambm chamada Fibra em
Detergente Neutro (FDN) que constituda, basicamente, de celulose,
hemicelulose, lignina e protena lignificada.
Continuando em seu fracionamento, Van Soest (1967) prope um
detergente cido especfico, a fim de solubilizar o contedo celular e a
hemicelulose, alm de maior parte da protena insolvel, obtendo-se um
resduo insolvel no detergente cido, denominado Fibra em Detergente
cido (FDA), constituda, em sua quase totalidade, de lignina e celulose
(lignocelulose). Finalmente, por intermdio de reagentes: cido sulfrico
(H
2
SO
4
) 72% ou pelo mtodo do permanganato de potssio (KMnO
4
), a
lignina solubilizada, completando-se, deste modo, o fracionamento dos
constituintes da parede celular. A celulose ser conhecida, por diferena
de pesagens, antes e depois de se conduzir os cadinhos para o forno de
mufla.
O mtodo de Van Soest, para determinao da qualidade de forrageiras,
apresenta vantagens em relao a outros, em virtude de sua maior
preciso, alm de fornecer informaes sobre importantes componentes:
fibra em detergente cido, celulose, lignina, cinza, slica etc.
No Laboratrio de Bromatologia e Nutrio Animal-LBNA/Embrapa Clima
Temperado foram feitas adaptaes do mtodo de Van Soest para
melhorar o rendimento das anlises realizadas (quantidade de amostras).
96
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 12. Comparao entre o mtodo de Van Soest e Weende na
diviso da matria orgnica de forrageiras.
Componentes da Forragem
VAN SOEST
Nitrogenados No nitrogenados
WEENDE
Protena
solvel
Gorduras
Extrato
etreo
Solveis em gua
Extrato no

CONTEDO CELULAR
(solvel em detergente
neutro)
Nitrognio
no protico
Amido
Pectina nitrogenado

Solvel em
dertegente cido

Protena
insolvel

HEMICELUL0SE
PAREDE CELULAR
(Fibra em detergente
neutro)

LIGNOCELULOSE
(Fibra em
detergente cido)
Nitrognio
lignificado

LIGNINA
(soluo em lcali)

LIGNINA
(insolvel)

Fibra Bruta
CELULOSE

(Van Soest; Moore, 1966).
5.1. DETERMINAO DA FIBRA EM DETERGENTE
NEUTRO (FDN)
5.1.1. Princpio
A FDN indica a quantidade total de fibra dentro do volumoso, que o
relaciona com o consumo. Assim, quanto menor o nvel de FDN, maior o
consumo de matria seca. Os nveis de FDN variam conforme a espcie
vegetal e o seu estdio vegetativo. Normalmente os nveis de FDN nas
leguminosas so mais baixos do que nas gramneas. Dentro da mesma
espcie vegetal, as plantas mais novas apresentam nveis de FDN mais
97
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
baixos, o que facilmente detectado, com o maior consumo pelos animais.
Van Soest, (1963).
Os nveis de FDN em silagem de milho variam bastante, porem
considerado um bom nvel ao redor de 50%. Atualmente, com base em
pesquisas, estabeleceu-se, por exemplo, que o consumo total de FDN nas
vacas em lactao deve ficar em 1,2% do seu peso vivo, em que 75%
devem ser oriundos dos volumosos (silagem, pastagem, feno) e 30% nas
raes.
A fibra em detergente neutro (FDN) mede toda a fibra ou o componente de
volume (volumoso) do feno hemicelulose, celulose e lignina, sendo til
para estimar o consumo voluntrio. Quanto mais alto a valor de FDN, mais
baixo ser o consumo esperado.
Para amostras com alto teor de amido, dever ser feito tratamento
preliminar, com soluo de uria 8,0 mol L
-1
e de amilase termoestvel.
Deve-se ter cuidado, pois as atividades das enzimas so variveis em
funo da sua concentrao, meio (pH e temperatura) e substrato.
Qualquer enzima pode perder ou diminuir a sua atividade em funo de
vrios fatores (tempo, condio de armazenamento, etc.). As enzimas
devem ser armazenadas em geladeira.
5.1.2. Material e mtodos
Para o desenvolvimento do procedimento necessria a utilizao dos
seguintes materiais:
a) Estufa de secagem e esterilizao (temperatura = 105C);
b) Cadinho filtrante de vidro borossilicato com placa porosa de vidro
sinterizado, porosidade mdia a grossa (100 a 160 mm);
c) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg;
d) Dessecador a vcuo, com luva, tampa e fundo, em vidro borossilicato,
equipado com placa de porcelana e slica gel azul;
98
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) Forno de mufla com controlador de temperatura;
f) Bloco digestor para 40 provas;
g) Tubos de digesto de 25250 mm;
h) Sistema de vcuo.
5.1.3. Reagentes e solues
As solues so preparadas com reagentes qumicos de grau analtico,
gua destilada e ou deionizada.
a) Etilenodiaminotetraacetato dissdico (Na
2
C
10
H
14
N
2
O
8
+2H
2
O, EDTA sal
dissdico);
b) Borato de sdio decaidratado (Na
2
B
4
O
7
+10H
2
O);
c) Lauril sulfato de sdio [CH
3
(CH
2
)10CH
2
OSO
3
Na] detergente;
d) Fosfato cido de sdio (Na
2
HPO
4
);
e) 2 metoxietanol ou ter monometlico do etilenoglicol (C
3
H
8
O
2
) ponto de
ebulio de 124C;
f) Acetona, p.a. [(CH
3
)
2
CO];
g) Sulfito de sdio anidro p.a. (Na
2
SO
3
);
h) Deca-hidronaftaleno, p.a. (C
10
H
18
) (decalina - antiespumante);
i) Soluo de uria (H
2
N)
2
CO) 8,0 mol L
-1
: dissolver 480 g de uria em 1 L
de gua destilada e ou deionizada;
j) Uria p.a. [(NH
2
)
2
CO];
k) Enzima alfa-amilase termoestvel (Termamyl 120 L).
5.1.3.1. Soluo de fibra em detergente neutro (FDN)
Inicialmente necessrio o preparo das seguintes solues:
99
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
a) Pesar 93,05 g de EDTA e 34,05 g de borato de sdio, transferir para
bquer de 1000 ml com 400 ml aproximadamente de gua destilada e
aquecer at que se dissolvam;
b) Pesar 150 g de lauril sulfato de sdio e juntar soluo (d). Dissolver
com gua quente;
c) Pesar 22,80 g de fosfato cido de sdio anidro que ser tambm
dissolvido, por aquecimento, e misturado aos demais reagentes;
d) Transferir quantitativamente as solues (a), (b) e (c) para garrafo de
vidro devidamente calibrado e etiquetado; adicionar 50 ml de etileno glicol
e completar o volume com gua destilada ou deionizada. Evitar a formao
de espuma;
e) Volume final da soluo ser de 5000 ml.
5.1.4. Procedimento
a) Organizar as amostras;
b) Pesar 0,300 g da amostra em tubos de ensaio graduado de 50 ml
(modificao implantada no Laboratrio de Bromatologia e Nutrio
Animal-LBNA/Embrapa Clima Temperado);
c) Colocar 35 ml da soluo de fibra em detergente neutro (FDN). Levar os
tubos ao bloco digestor a uma temperatura entre 120C 125C. Colocar
metade dos tubos no bloco digestor dando um intervalo de 5 a 10 minutos
para colocar o restante dos tubos no bloco digestor. Cuidar para no
ferver acima da temperatura indicada (controla-la a mesma), para no
derramar no bloco digestor. Quando comear a ferver deixar por mais 1
hora no bloco, mexendo os tubos quando a amostra se depositar acima da
soluo de FDN (modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima
Temperado);
d) Colocar os gooch para secar em estufa a 105C por 1 hora;
e) Retirar os gooch da estufa e colocar em dessecador para esfriar por 1
hora. Aps, deve-se tara-los;
100
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
f) Filtrar em cadinho (gooch), usando pequena suco (em bomba de
vcuo). Durante a filtragem, recomenda-se utilizar basto de vidro para
auxiliar na lavagem do resduo, lavar duas vezes no mnimo, com gua
quente (90 100C), tendo o cuidado de lavar as paredes do tubo. Fazer
duas lavagens com acetona (30-40 ml) at que ela se torne incolor, em
toda a amostra, a fim de que o solvente entre em contato com as
partculas de fibra;
g) Secar em estufa a 105C, durante 4 horas, ou deixar durante a noite
(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
h) Colocar em dessecador por 1 hora para esfriar e pesar;
i) Se houver formao de espuma durante a digesto, adicionar 1,0 ml de
decalina como antiespumante;
j) Para amostras com alto teor de amido, dever ser feito tratamento
preliminar, adicionando-se 10 ml de soluo de uria 8,0 mol L
-1
e 0,2 ml
de amilase termoestvel e incubar durante 5 minutos entre 80-90C ou 4
horas a temperatura ambiente. A seguir, adicionar 35 ml da soluo em
detergente neutro, levar ebulio com temperatura a 125C; aps 40
minutos, adicionar mais 0,2 ml de amilase termoestvel, completar a
digesto em at 60 minutos e seguir os procedimentos j descritos;
k) Como a saliva muito rica em amilase, deve-se evitar que a mesma
contamine o material e os reagentes utilizados, assim no deve-se soprar a
pipeta usada para medir a gua, amostras e reagentes. Uma diminuio
maior que 10% na absorbncia do controle indica contaminao do
substrato com saliva;
l) Para limpeza dos cadinhos, estes devero ser calcinados em forno de
mufla por 1 hora a 500C, aps o termino das anlises (modificao
implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
m) Utilizar a matria seca a 105C para corrigir os resultados com base
em 100% da matria seca.
101
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
5.1.5. Frmula Final para FDN
100
) (
) ( ) (
%
+
=
Amostra Peso
gooch Peso Amostra Gooch
FDN
5.1.5.1. Resultado final
Considerar como fibra em detergente neutro a porcentagem dos
constituintes da parede celular, calculada pela diferena entre as
pesagens.
5.1.6. Ajuste base de 100 % da matria seca
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de Fibra em Detergente Neutro na amostra
%MS(105C) = % de matria seca na amostra
Ver a seguir, na Tabela 13, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
102
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 13. Determinao da % de Fibra em Detergente Neutro
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE FIBRA EM DETERGENTE NEUTRO
N DO PROJETO:
RESPONSVEL:
DATA: N do Lote:
Amostra
N
Identificao
N
Cpsula
Peso
Cpsula
Peso
Amostra
Peso
Gooch
Gooch +
Amostra
% FDN FDN








Anlises corrigidas a 100% da Matria Seca a 105C
5.2. DETERMINAO DE FIBRA EM DETERGENTE
CIDO (FDA)
5.2.1. Princpio
A FDA indica a digestibilidade, ou seja, a quantidade de fibra que no
digestvel j que contm a maior proporo de lignina, frao de fibra
indigestvel. O nvel mximo permitido de FDA de 21% da matria seca
da dieta.
A FDA um indicador do valor energtico da silagem: quanto menor a
FDA, maior o valor energtico. Negativamente correlacionados com a
digestibilidade, os valores mais altos indicam menor digestibilidade.
103
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
A fibra em detergente cido (FDA) mede os componentes mais
indigestveis do feno, celulose e lignina. A FDA usada para se estimar o
valor de energia do alimento, expressado como energias lquidas (Eli) ou
nutrientes digestveis totais (NDT). Van Soest, (1963).
5.2.2. Material e mtodos
Para o desenvolvimento do procedimento necessria a utilizao dos
seguintes materiais:
a) Estufa de secagem e esterilizao (temperatura = 105C);
b) Cadinho filtrante de vidro borossilicato com placa porosa de vidro
sinterizado, porosidade mdia a grossa (100 a 160 mm);
c) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg;
d) Dessecador a vcuo, com luva, tampa e fundo, em vidro borossilicato,
equipado com placa de porcelana e slica gel azul;
e) Forno de mufla com controlador de temperatura;
f) Bloco digestor para 40 provas;
g) Tubos de digesto de 25250 mm;
h) Sistema de vcuo.
5.2.3. Reagentes e solues
A soluo preparada com reagentes qumicos de grau analtico e gua
destilada ou deionizada.
a) Brometo de cetil trimetilamnio - CTAB, [C
16
H
33
N(CH
3
)
3
Br];
b) cido sulfrico concentrado, 97-98% (H
2
SO
4
);
c) Acetona, p.a. [(CH
3
)
2
CO];
d) Deca-hidronaftaleno, p.a. (C
10
H
18
) (decalina - antiespumante);
e) Soluo de cido sulfrico 0,5 mol L
-1
.
104
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
5.2.3.1. Soluo de fibra detergente cido (FDA)
a) Colocar a metade de gua destilada em um garrafo de 5000 ml;
b) Pesar 255,4 g de cidos sulfricos e adicionar ao garrafo, completando
a seguir o volume de 5000 ml com gua destilada;
c) Pesar 102,0 g de CTAB em um bquer de 1000 ml e diluir o CTAB com
a soluo de cido sulfrico (H
2
SO
4
) j preparada anteriormente;
d) Colocar no agitador magntico para dissolver a soluo, observando
para que fique bem homogeneizada;
e) Colocar com cuidado no garrafo devidamente calibrado e etiquetado
para que no ocorra espuma.
5.2.4. Procedimento
a) Organizar as amostras;
b) Pesar 0,300 g da amostra em tubos de ensaio graduado de 50 ml
(modificao implantada no Laboratrio de Bromatologia e Nutrio
Animal-LBNA/Embrapa Clima Temperado);
c) Colocar 35 ml da soluo de fibra em detergente cido (FDA)
(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
d) Levar os tubos ao bloco digestor a uma temperatura entre 120C a
125C. Colocar metade dos tubos no bloco dando um intervalo de 5 a 10
minutos para colocar o restante. Cuidar para no ferver acima da
temperatura indicada (controlar a mesma), para no derramar no bloco
digestor. Quando comear a ferver deixar por mais 1 hora no bloco,
mexendo os tubos para a amostra no subir acima da soluo de FDA
(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
e) Colocar os cadinhos de vidro (gooch) para secar em estufa a 105C por
1 hora;
f) Retirar os cadinho de vidro (gooch) da estufa e colocar em dessecador
para esfriar. Aps, tar-los;
105
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
g) Filtrar em cadinho de vidro (gooch), usando pequena suco (em bomba
de vcuo). Dispersar o resduo com basto de vidro e lavar duas vezes, no
mnimo, com gua quente (90 a 100C), tendo o cuidado de lavar as
paredes do tubo at sair todo o resduo da amostra (modificao
implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
h) Fazer duas lavagens com acetona (30-40 ml) at que a amostra se
torne incolor, em toda a amostra, afim de que o solvente entre em contato
com as partculas da fibra;
i) Secar em estufa a 105C, durante 4 horas, ou deixar durante a noite
(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado);
j) Colocar em dessecador por 1 hora para esfriar e pesar.
Ver a seguir, na Tabela 14, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
5.2.5. Frmula Final para FDA
100
) (
) ( ) (
%
+
=
Amostra Peso
gooch Peso Amostra Gooch
FDA
5.2.6. Ajuste base de 100 % da matria seca
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de Fibra em Detergente cido na amostra
%MS(105C) = % de matria seca na amostra
106
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 14. Determinao da % de Fibra em Detergente cido.
EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE FIBRA EM DETERGENTE CIDO
N DO PROJETO:
RESPONSVEL:
DATA: N do Lote:
Amostra
N
Identificao
N
Cpsula
Peso
Cpsula
Peso
Amostra
Peso
Gooch
Gooch +
Amostra
%FDA FDA









Anlises corrigidas a 100% da Matria Seca a 105C
5.3. DETERMINAO DE LIGNINA EM DETERGENTE
CIDO (LDA)
5.3.1. Princpio
O termo lignina usado para designar um grupo de substncias com
unidades bsicas qumicas semelhantes. A determinao da lignina feita
a partir da fibra em detergente cido (celulose, lignina, cutina, minerais e
slica). Existem dois mtodos de determinao: o mtodo do cido sulfrico
a 72% e do permanganato de potssio. A escolha de um ou outro mtodo
vai depender do tipo de material a ser analisado e do objetivo dos dados
que se quer obter.
107
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
O detergente remove a protena e outros materiais solveis em cido, os
quais interferem com a determinao da lignina. O princpio do processo
o de que o resduo da fibra em detergente cido primeiramente
lignocelulose no qual a celulose dissolvida pela soluo de H
2
SO
4
a 72%.
O resduo remanescente consiste de lignina e cinzas insolveis em cido:
entretanto, em amostra contendo altas quantidades de cutina, ela ser
medida como parte da lignina. Quicke, (1959).
A maioria dos vegetais superiores contm, pelo menos, alguma frao de
lignina. O contedo de lignina varia de 4 a 12%, podendo chegar, nas
forrageiras mais fibrosas, a 20 % da matria seca. a frao menos
digestvel do alimento. Van Soest, (1968).
5.3.2. Material necessrio
a) Estufa de secagem e esterilizao (temperatura = 105C);
b) Cadinho filtrante de vidro borossilicato com placa porosa de vidro
sinterizado, porosidade mdia grossa (100 a 160 mm);
c) Balana analtica com preciso mais ou menos 0,1 mg;
d) Dessecador a vcuo, com luva, tampa e fundo, em vidro borossilicato,
equipado com placa de porcelana e slica gel azul;
e) Forno de mufla com controlador de temperatura;
f) Bloco digestor para 40 provas;
g) Tubos de digesto de 25250 mm;
h) Sistema de vcuo;
i) Bandeja de vidro ou plstica apropriada;
j) Basto de vidro (bastonetes).
5.3.3. Reagentes e solues
Est soluo deve ser preparada com reagentes qumicos de grau analtico
108
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e gua destilada e deionizada.
a) cido sulfrico concentrado, 97-98% (H
2
SO
4
);
b) Soluo de cido sulfrico a 72%;
c) Soluo de fibra em detergente cida;
d) Acetona p.a.;
e) gua destilada ou deionizada quente.
5.3.3.1. Soluo de H
2
SO
4
a 72%
a) Preparar dentro da capela devido liberao de gases txicos;
b) Em uma proveta de 1000 ml, medir 280 ml de gua destilado ou
deionizada e adicionar 720 ml de H
2
SO
4
concentrado;
c) Deixar esfriar e completar o volume, somente uma vez, com gua
destilada;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
5.3.4. Procedimento
a) Pesar 0,700 g de amostra em tubo de ensaio de 50 ml, (modificao
implantada no Laboratrio de Bromatologia e Nutrio Animal-LBNA/
Embrapa Clima Temperado);
b) Determinar a fibra em detergente cido FDA (conforme item 5.2);
c) Cobrir o cadinho filtrante (porosidade N1) com cido sulfrico a 72%
(AS-72%) a 15C. Mexer com basto de vidro at formar uma pasta
macia, com objetivo de desmanche de todos os grumos;
d) Encher o cadinho filtrante com cido sulfrico a 72% (AS-72% mais ou
menos pela metade) e homogeneizar. Deixe o basto de vidro dentro do
cadinho;
e) medida que o cido vai sendo filtrado, colocar mais cido sulfrico a
109
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
72% (AS-72%); no necessrio encher o cadinho. Proceder assim a
cada hora, trs adies so suficientes;
f) Deixar o cadinho durante 3 horas em repouso temperatura ambiente;
g) Filtrar o cadinho em sistema de vcuo para retirar o mximo de cido
sulfrico 72% da amostra;
h) Lavar a amostra com gua quente at que esteja livre de cido sulfrico
72%. Sempre mexendo com basto de vidro; lavar o basto durante a
lavagem at que esteja livre de resduo de amostra;
i) O cadinho com a amostra deve ser colocado em estufa a 105C por 4
horas;
j) Pesar o cadinho com a amostra e anotar o peso em ficha apropriada;
k) Incinerar a amostra em forno de mufla a 550C por 4 horas, sendo que
a temperatura deve ser aumentada de 100 em 100C para evitar-se a
quebra dos cadinhos filtrante (gooch), pois materiais de vidro sofrem
danificaes a temperaturas bruscas elevadas; aps essa etapa colocar no
dessecador e pesar novamente; anotar o peso em ficha apropriada
(modificao implantada no LBNA/Embrapa Clima Temperado).
5.3.5. Frmula
100 %

=
PA
PC PAAc
Lig
Onde:
%Lig = Percentual de lignina cido
PAAc = Peso da amostra cida
PC = Peso do cadinho (gooch)
PA = Peso da amostra
110
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
5.3.6. Correo base de 100 % da matria seca
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de Lignina cido na amostra
%MS(105C) = % de matria seca na amostra
5.4. DETERMINAO DE LIGNINA MTODO DO
PERMANGANATO
5.4.1. Material necessrio
a) Bandeja plstica ou de vidro (profundidade mnima de 4 cm);
b) Bomba a vcuo.
5.4.2. Reagentes e solues
a) Etanol p.a 95% (CH
3
CH
2
OH);
b) cido oxlico (H
2
C
2
O
4
.2H
2
O);
c) cido clordrico (HCl);
d) Permanganato de potssio p.a. (KMnO
4
);
e) Nitrato frrico p.a. [Fe(NO
3
)
3
.9H
2
O];
f) Nitrato de prata p.a. (AgNO
3
);
g) Acetato de potssio p.a. (C
2
H
3
KO
2
);
h) cido actico glacial (CH
3
COOH);
i) lcool butlico tercirio p.a. [(CH
3
)
3
COH].
111
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
5.4.2.1. Soluo de etanol 80% v/v
a) Misturar 845 ml de etanol p.a. 95% com 155 ml de gua destilada.
5.4.2.2. Soluo desmineralizante
a) Pesar 50 g de cido oxlico e dissolver em 700 ml de etanol p.a. 95%;
b) Transferir para balo volumtrico de 1.000 ml;
c) Adicionar 50 ml de cido clordrico 12 N, deixar esfriar, aferir e
homogeneizar;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
5.4.2.3. Soluo de permanganato de potssio 5%
a) Pesar 50 g de permanganato de potssio p.a. e dissolver
gradativamente sob aquecimento em mais ou menos 400 ml de gua
destilada;
b) Transferir para balo volumtrico de 1.000 ml, lavando o recipiente da
dissoluo com gua destilada. Deixar esfriar, aferir e homogeneizar;
c) Guardar esta soluo em frasco mbar livre da incidncia direta da luz
solar.
5.4.2.4. Soluo tampo
a) Pesar 6 g de nitrato frrico p.a. e 0,15 g de nitrato de prata p.a. e
dissolver em 100 ml de gua destilada;
b) Dissolver 5,0 g de acetato de potssio p.a. em 500 ml de cido actico
glacial p.a.; adicionar, primeira soluo, com mais 400 ml de lcool
butlico tercirio p.a. e homogeneizar;
c) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado
112
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
5.4.2.5. Soluo combinada
a) Misturar a soluo de permanganato de potssio e a tampo na razo
2:1 v/v, respectivamente;
b) Esta soluo deve ser guardada por uma semana, no mximo, em
refrigerador, e na ausncia de luz, caso no venha a ser utilizada;
c) A colorao normal desta soluo violeta;
d) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
5.4.3. Procedimento
a) Pesar 0,700 g de amostra em tubo de ensaio de 50 ml, (modificao
implantada no Laboratrio de Bromatologia e Nutrio Animal-LBNA/
Embrapa Clima Temperado);
b) Colocar os cadinhos, contendo a fibra em detergente cido (conforme
item 5.2); em bandeja com uma camada de gua de 2-3 cm de altura;
c) Adicionar 30 ml da soluo combinada (conforme item 5.4.2.5) em
cada cadinho;
d) Observar que o nvel da soluo e da gua na bandeja seja o mesmo;
e) Colocar um basto de vidro em cada cadinho, a fim de agitar o
contedo do mesmo, deixando-o por 90 minutos;
f) Filtrar a soluo combinada por suco a vcuo, renovar a gua da
bandeja e colocar 20 ml da soluo desmineralizante;
g) Agitar o meio e deixar por mais ou menos 10 minutos, succionar e
renovar a soluo desmineralizante (20 ml). Deixar por 30 minutos,
agitando duas vezes;
h) Lavar com etanol 80% e acetona, respectivamente, por duas vezes com
quantidade suficiente para cobrir a amostra;
i) Secar os cadinhos por, no mnimo, 4 horas em estufa a 105C. Esfriar
em dessecador e pesar;
113
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
j) Incinerar em forno de mufla a 500C por 2 horas. Esfriar em dessecador
e pesar.
5.4.4. Resultados
100
) 105 ( %
%


=
C MS PA
B A
Lig
100
) 105 ( %
%


=
C MS PA
C B
Cel
Onde:
%Lig = Percentual de lignina
%Cel = Percentual de celulose
PA = Peso da amostra
MS(105C) = Matria seca a 105C
A = Peso do cadinho + FDA
B = Peso do cadinho + Celulose + cinza residual
C = Peso do cadinho + cinza residual
5.4.5. Correo base de 100 % da matria seca
100
) 105 ( %
%
sec

=
C MS
resultado
a Base
Onde:
%resultado = % de Lignina cida na amostra
%MS(105C) = % de matria seca na amostra
Ver a seguir, na Tabela 15, modelo de ficha para apresentao de
resultados.
114
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 15. Determinao da % de Lignina cida
Amostra
N
Identificao
N
Gooch
Peso
Amostra
Peso
Gooch
Gooch +
Amostra Ac.
Gooch +
Cinza
% Lig. Lig.








EMBRAPA CLIMA TEMPERADO
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
DETERMINAO DA % DE LIGNINA CIDA
N DO PROJETO:
RESPONSVEL:
DATA: N do Lote:
Anlises corrigidas a 100% da Matria Seca a 105C
6. VALOR RELATIVO NUTRICIONAL (V.R.N.)
6.1. PRINCPIO
um ndice que mede a quantidade da silagem ou forragens em geral,
combinando a Digestibilidade e o Potencial de Ingesto. Uma forrageira de
tima qualidade apresenta valor relativo nutricional (V.R.N.) de mais ou
menos 150. Peixoto (1993).
A forragem de referncia a alfafa em florao plena (41% F.D.A. e
53% F.D.N.) para qual se fixou um V.R.N. igual a 100.
O calculo do V.R.N. pode ser feito atravs da frmula a seguir.
115
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
6.2. FRMULA
29 , 1
) ( IMS DMS
VRN

=
) 779 , 0 ( 9 , 88 FDA DMS =
FDN
IMS
120
=
Onde:
VRN = Valor relativo nutricional
D.M.S. = Digestibilidade da matria seca
I.M.S. = Ingesto da matria seca
6.3. COMENTRIO
Na prtica, o conhecimento do V.R.N. faz com que haja um
direcionamento em funo do potencial do animal. Quanto maior o V.R.N.
melhor o seu aproveitamento pelos animais de alto potencial produtivo.
7. AVALIAO ENERGTICA DOS ALIMENTOS
7.1. INTRODUO
Na Zootecnia, em nutrio animal, existe um tema dos mais importantes
para o qual a informao, embora em abundncia, no se encontra
abordada de modo completo nas literaturas existentes. Trata-se do estudo
do valor nutritivo dos alimentos, assim como a maneira de express-lo, de
forma prtica, de modo a permitir o clculo de raes balanceadas.
muito difcil, se no impossvel, estabelecer um denominador comum em
relao ao valor nutritivo dos alimentos, j que uma forragem rica em
protena, por exemplo, pode ser pobre em vitaminas ou mineral. A farinha
de osso, por exemplo, excelente como fornecedora de minerais, mas,
116
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
praticamente a isso limita-se o seu valor. No compatvel, por exemplo,
com o farelo de soja, cuja funo na rao a de um suplemento protico.
Ambos, dentro das suas finalidades, so importantes e necessrios, face
s diferentes exigncias nutritivas dos animais, a fim de tornar os
alimentos compatveis, no aspecto da nutrio animal, com o aspecto
econmico. Peixoto (1993).
Por esse motivo, cientistas de vrios pases pesquisaram metodologias que
permitissem o desenvolvimento de padres em vrios centros de pesquisa,
destacando-se os europeus e os americanos. Todos foram unnimes em
fixar que o principal valor de um alimento est no seu contedo
energtico. A condio principal para o organismo animal o fornecimento
de quantidades adequadas de energia, necessrias ao desenvolvimento e
manutenso de suas funes vitais. (De nada adianta riqueza em
nutrientes como o ligoelementos, vitaminas, aminocidos etc.). A energia
que o organismo animal requer provm da matria orgnica que compe o
alimento, que pode provir, tanto dos hidratos de carbono, das gorduras,
bem como das protenas. Todos esses nutrientes so importantes para,
uma vez assimilados pelo animal, cederem energia.
Deseja-se obter uma idia de uma magnitude, fazendo-se a sua
mensurao, ou seja, comparando-a com outra magnitude bem conhecida,
considerada como unidade padro. Ento, a amostra padro com valor
conhecido, serve para fazer as comparaes com os valores medidos nas
amostras estudadas.
So caractersticas fundamentais das unidades de medida:
Valores conhecidos universalmente;
Rigorosamente constantes desde um ponto de vista quantitativo;
Homogneas com as magnitudes que se medem, desde um ponto de vista
qualitativo;
Proporcionais nas magnitudes que se medem.
A magnitude que se mede, neste caso, o valor nutritivo das forragens,
117
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
ou mais precisamente, o valor energtico. Veremos mais adiante, como os
diversos mtodos preconizados preenchem esses requisitos. Teixeira
(1998).
7.2. FRMULAS DE CLCULOS DAS ENERGIAS
PARA SILAGENS
7.2.1. Nutrientes digestveis totais (NDT)
Nutrientes digestveis totais (NDT) uma medida do valor energtico dos
alimentos usada nos Estados Unidos, sendo muito conhecida no Brasil.
A sua determinao baseia-se na determinao qumica, dentro do
esquema de Weende, dos componentes orgnicos do alimento, e do
conhecimento dos correspondentes coeficientes de digestibilidade.
Determina-se a fibra em detergente cido; aps, aplica-se na Frmula do
NDT que se segue:
) % 7 , 0 ( 84 , 87 FDA NDT =
7.2.2. Digestibilidade da matria seca (DMS)
A digestibilidade a relao entre a quantidade de alimento que o animal
ingere e a que digere, sendo esta ltima aquela parcela que efetivamente
assimilada, que entra no metabolismo propriamente dito do organismo
animal.
Determina-se a fibra em detergente cido; aps, aplica-se na Frmula da
DMS que segue:
) % 779 , 0 ( 9 , 88 FDA DMS =
7.2.3. Energia digestvel (ED)
Energia digestvel de um alimento a energia expressa em calorias
provenientes da diferena da sua energia bruta e da energia bruta contida
nas fezes (ED = E.B.A. - E.B.F.). , no entanto, essencialmente, um
118
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
conceito que envolve a fase da digestibilidade do animal.
Pode-se, assim, obter o valor dos alimentos expressos em E.D. a partir de
valores conhecidos de NDT, considerando que 1 kg de N.D.T., contm 4,4
quilocalorias, conforme foi estabelecido por Crampton e Harris (1969) e
outros autores que tomaram como base trabalhos em que foram feitas
determinaes, simultaneamente, de N.D.T. e E.D. Enfim, para se obter a
Energia Digestvel, utiliza-se a frmula abaixo:
04409 , 0 = NDT ED
7.2.4. Energia metabolizvel (EM)
Como viu-se anteriormente, a E.D. leva em conta somente a perda que
ocorre nas excrees slidas, que embora seja a de maior magnitude, no
a nica. Perdas ocorrem tambm na urina e nos chamados gases de
combusto (metano) provenientes de fermentaes, principalmente por
parte dos ruminantes.
A medida energtica que leva em considerao tais perdas a chamada
Energia Metabolizvel, constituindo-se, pois, em um sistema perfeito.
Da fibra em detergente cido, calcula-se o NDT, e do NDT calcula-se a
energia metabolizvel, conforme frmula abaixo.
82 , 0 = ED EM
7.2.5. Fibra bruta (FB)
O termo fibra bruta engloba as fraes de celulose e lignina insolvel. Do
ponto de vista qumico, fibra bruta a parte dos carboidrato resistente ao
tratamento sucessivo com cido e base diludos.
119
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Fibra bruta em si no um nutriente. Integram-se nutrientes como a
celulose e hemiceluloses, mas tambm a lignina, substncia orgnica de
composio varivel e no bem definida, altamente indigestvel.
A partir da fibra em detergente cido aplica-se a equao abaixo:
83 , 0 = FDA FB
7.2.6. Energia lquida (EL)
sabido que aps uma refeio h, no organismo animal, uma elevao de
temperatura, elevao essa que variar com a natureza dos alimentos
digeridos. Tal elevao de temperatura chamada de incremento de
calor e considerada intil j que, como se sabe, o animal incapaz de
transformar energia trmica em outra forma de energia.
Ao deduzir-se o incremento de calor da Energia Metabolizvel, obtm-se o
que chamamos de Energia Liquida, ou seja, aquela parte da energia bruta
do alimento que efetivamente til ao metabolismo do animal.
Esta concepo do valor energtico da forragem considerada
teoricamente a mais perfeita.
) ( / MS de KG KCal
MSA
IC EM
EL =

=
Onde:
EL = Energia lquida
EM = Energia metabolizvel
IC = Incremento de calor
MSA= Matria seca do alimento
120
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
7.3. FRMULAS DE CLCULOS DAS ENERGIAS
PARA RAO ANIMAL
7.3.1. Nutrientes digestveis totais % (NDT)
7.3.1.1. Rao Total
) 03 , 1 ( 53 , 93 FDA NDT =
7.3.1.2. Rao Concentrada
) 60 , 0 ( 41 , 81 FB NDT =
7.3.1.3. Milho (gro)
) 927 , 1 ( 72 , 99 FDA NDT =
7.3.1.4. Gros Pequenos
) 767 , 40 ( 898 , 4 + = EL NDT
7.3.2. Energia lquida lactao (Mcal/kg)
7.3.2.1. Rao Total
12 , 0 ) 0245 , 0 ( = NDT EL
7.3.2.2. Rao Concentrada
12 , 0 ) 0245 , 0 ( = NDT EL
7.3.2.3. Milho (gro)
( ) { } 454 , 0 / 0203 , 0 036 , 1 FDA EL =
7.3.2.4. Gros Pequenos
( ) { } 454 , 0 / 00793 , 0 9265 , 0 FDA EL =
7.4. ENERGIA LQUIDA DE MANTENA (ELM) (MCAL/
KG)
( ) ( ) ( ) ( ) { } 454 , 0 0105 , 0 137 , 0 12 , 1 37 , 1
3 2
+ = EM EM EM ELm
121
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
7.5. ENERGIA LQUIDA DE GANHO (ELG) (MCAL/KG)
( ) ( ) ( ) ( ) { } 454 , 0 0122 , 0 174 , 0 65 , 1 42 , 1
3 2
+ = EM EM EM ELg
8. MACRONUTRIENTES (N, P, K, CA E MG) EM
PLANTAS E RESDUOS ORGNICOS
8.1. PRINCPIO
Esta metodologia possibilita determinar cinco macro elementos com uma
nica digesto por perxido de hidrognio (H
2
O
2
)

e cido sulfrico (H
2
SO
4
)
com mistura de digesto. A recuperao destes nutrientes semelhante
obtida com os mtodos de Kjeldahl Bremner (1965) para N e por digesto
nitro-perclrica para os outros nutrientes. Johnson; Ulrich (1959).
Os mtodos de determinao selecionados so isentos de interferncias
nas condies recomendadas.
8.2. METODOLOGIA ADOTADA
A mistura de H
2
O
2
mais H
2
SO
4
propicia uma pr-digesto da amostra
atingindo uma temperatura de 180-190C. Esta oxidao parcial de
compostos orgnicos evita a formao de espuma e a frequente perda de
material aps a adio de H
2
SO
4
, no incio do aquecimento Tedesco,
(1982).
Deve-se elevar e manter a temperatura a 350-375C para obter a
digesto completa do material no bloco digestor (verificar a temperatura
com termmetro).
So utilizados para a digesto das amostras tubos de ensaio (tambm
denominados de tubos de digesto) de 25x250 mm em vidro pyrex. Estes
tubos devem ser adquiridos j marcados nas capacidades de 20 e 50 ml.
A diluio no prprio tubo de digesto facilita o procedimento. O erro
visual de aproximadamente 1%. A homogeneizao da mistura feita
com ar comprimido (utilizando bomba de laboratrio, com filtro na linha do
122
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
ar para evitar contaminao das amostras com leo). Pode-se, tambm,
agitar no prprio tubo com agitador vortex.
Aps a decantao (6 12 horas), so retiradas alquotas do extrato para
as vrias determinaes, no havendo necessidade de filtrao.
8.2.1. Nitrognio
O teor de N varia com a espcie, variedade botnica, cultivar, parte do
desenvolvimento e estado nutricional da planta. Em geral situa-se entre
0,5 e 5%.
A recuperao quantitativa do N dificultada pela presena no tecido
vegetal de compostos heterocclicos refratrios como o nicotnico e
piridina, ou outros contendo ligaes N-N e N-O. Devem ser utilizados,
portanto, na digesto, catalisadores (cobre e selnio) e alta temperatura
(esses so os motivos de se utilizar temperatura entre 350-375C): a
adio de sais como Na
2
SO
4
eleva o ponto de ebulio do cido.
O procedimento adotado baseado no mtodo recomendado por Bremner
(1965) para solos, com incluso da H
2
O
2
. As propores de reagentes
foram mantidas.
Para a determinao do NH
4
+, uma alquota de 10-20 ml destilada em
micro-destilador, conforme descrito por Bremner e Edwards (1965) e
modificado por Tedesco e Gianello (1979), aps a adio de NaOH,
coletando-se o destilado em indicador cido brico e titulando-se com
H
2
SO
4
diludo.
8.2.2. Fsforo
O teor de P no tecido vegetal varia em geral entre 0,08 e 1,5%.
Adiciona-se uma alquota do extrato aps adio de molibdato de amnio e
cido aminonaftolsulfnico e determina-se por espectofotometria. Este
mtodo possui sensibilidade adequada sendo livre de interferncias por
H
2
O
2
e sais da mistura de digesto.
123
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
8.2.3. Potssio
O teor de K no tecido vegetal varia na maior parte dos casos entre 0,2 e
10%.
determinado por fotometria de chama aps a diluio do extrato,
ajustando-se a sensibilidade do aparelho para os padres adequados.
A presena de Na = (aproximadamente 420 mg/L
-1
) no causa
interferncia, observando-se, entretanto, o efeito supressor de ionizao
Tedesco (1982).
8.2.4. Clcio e Magnsio
Os teores de Ca no tecido vegetal variam geralmente entre 0,05 e 2,5%,
e os de Mg entre 0,02 e 1,5%. So determinados por espectrofotometria
de absoro atmica aps a diluio do extrato e a adio de La ou Sr em
soluo cida.
8.3. MATERIAL NECESSRIO
a) Bloco digestor para tubos de digesto de 25 x 250 mm com controle
eletrnico de temperatura com capacidade para 40 provas;
b) Espectrofotmetro de absoro atmica;
c) Fotmetro de chama;
d) Espectrofotmetro (visvel);
e) Destilador de arraste de vapor (micro-Kjeldahl), conforme descrio no
captulo;
f) Microbureta de 5 ml com carregamento automtico (graduao de 0,01
ml).
8.4. REAGENTES E SOLUES
a) cido sulfrico concentrado (H
2
SO
4
);
b) Perxido de hidrognio (H
2
O
2
);
124
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
c) Sulfato de sdio (Na
2
SO
4
);
d) Sulfato de cobre (CuSO
4
.5H
2
O);
e) Hidrxido de sdio (NaOH);
f) cido brico (H
3
BO
3
);
g) Molibdato de amnio (NH4)6Mo7O24.4H2O 0,38%).
8.4.1. Soluo de perxido de hidrognio (H
2
O
2
) a 30%
a) Perxido de hidrognio (H
2
O
2
) a 30%: volatilizado o O
2
com o tempo,
necessitando de armazenamento em frasco adequado protegido da luz
(pode ser usado o produto comercial de 130 volumes, de baixo custo).
8.4.2. Mistura de digesto
a) Moer 100 g de Na
2
SO
4
, 10 g de CuSO
4
.5H
2
O e 1 g de selnio (ou
selenito, fazer converso teor de gua, para calcular o peso necessrio de
selenito em equivalncia ao selnio), e misturar bem.
8.4.3. Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 10 mol
a) Dissolver 400 g de NaOH (produto tcnico) em 800 ml de H
2
O destilada
em copo de bquer de pyrex (ou ao inox);
b) Aps esfriar, transferir para balo volumtrico de 1 litro e completar o
volume;
c) Guardar em recipiente plstico.
8.4.4. Soluo de indicador de cido brico
a) Pesar 40 g de cido brico em um bquer de 1000 ml dissolvendo o
cido com gua destilada quente (em torno de 400 ml de gua destilada);
b) Deixar esfriar e transferir para o balo volumtrico de 2000 ml;
c) Medir 40 ml de soluo obtida pela dissoluo de 0,660 g de verde de
bromocressol e 0,330 g de vermelho de metila em balo de 100 ml de
125
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
etanol 95% (produto tcnico), em proveta de 50 ml, e 400 ml de lcool
etlico ou comum em proveta de 500 ml;
d) Misturar as solues no balo volumtrico de 2000 ml e adicionar
cuidadosamente cerca de no mximo 9 ml de NaOH 0,1N sendo que deve
ser colocado de 1 ml em 1 ml, at que observe-se uma mnima mudana
de cor de roxo para verde claro;
e) Para saber se a soluo est pronta, adicionar em um bquer de 50 ml,
1 ml de gua destilada e colocar 1 ml do indicador de cido brico. (O
ponto de viragem verde claro);
f) Completar o volume com gua destilada e homogeneizar. Guardar em
frasco escuro.
8.4.5. Soluo de cido sulfrico (H
2
SO
4
) 0,025 mol
a) Dissolver 1,4 ml de H
2
SO
4
concentrado e elevar a 1000 ml com gua
destilada (1 ml desta soluo gasto na titulao corresponde a 700 g de
N).
8.4.6. Soluo de molibdato de amnio
8.4.6.1. Preparo de 10 L de soluo P-B (HCl 0,87M e
(NH
4
)
6
Mo
7
O
24
.4H
2
O 0,38%):
a) Dissolver 38,0 g de molibdato de amnio (NH
4
)
6
Mo
7
O
24
.4H
2
O 0,38%)
em 1500 ml de gua destilada previamente aquecida a 60C em copo de
bquer de 2.000 ml;
b) Deixar esfriar e transferir para um balo volumtrico de 2.000 ml e
completar o volume com gua destilada;
c) Transferir para um tambor plstico com capacidade de 10 L;
d) Colocar aproximadamente 800 ml de gua destilada ou deionizada em
balo volume de 2.000 ml;
e) Adicionar 707 ml de HCl concentrado (d = 1,191:37,7% e 12,31M) e
126
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
agitar (se o cido no tiver estas especificaes consultar a Tabela 21
para a modificao da quantidade a usar);
f) Completar o volume com gua destilada e agitar;
g) Transferir para o tambor plstico de 10 L onde j se encontra a soluo
de molibdato de amnio e agitar;
h) Adicionar 6 L de gua destilada ou deionizada utilizando bales
volumtricos de 2.000 ml e agitar bem o tambor para uma perfeita
homogeneizao da soluo.
8.4.6.2. Preparo da soluo P-C (cido 1-amino-2naftol-4-
sulfnico, sulfito de sdio e metabissulfito de sdio):
a) Preparar um estoque de p redutor, misturando e triturando em um
almofariz os seguintes reagentes:
I. cido 1-amino-2naftol-4-sulfnico: 2,50 g;
II. sulfito de sdio (Na
2
SO
3
): 5 g;
III. metabissulfito de sdio (Na
2
S
2
O
5
): 146 g.
b) Guardar o p redutor em vidro fosco, envolto com folha de alumnio (no
mximo 40 dias);
c) Dissolver 32 g do p redutor (item I, II e III) em 200 ml de gua
destilada morna (50-60C) em copo de bquer;
d) Transferir para um vidro e deixar em repouso at cristalizar. O tempo
de cristalizao de 3 a 6 dias. Depois de cristalizado pode ser filtrado.
necessrio preparar nova soluo a cada 3 semanas.
8.4.7. Soluo de estrncio a 0,3% em HCl 0,2 M
a) Diluir 5,42 g de SrCl
2
e 16,7 ml de HCl concentrado a 1 L com gua
destilada ou deionizada.
127
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
8.4.8. Soluo de magnsio (1.200 mg L
-1
de Mg
2+
)
a) Pesar 0,600 g de Mg metlico. Dissolver em 10 ml de HCl a 50%.
Completar o volume a 500 ml com gua destilada ou deionizada.
8.4.9. Soluo de padro misto de P, K, Ca e Mg
a) Pesar 1,999 g de CaCO
3
(seco a 105C por 2 horas) e colocar em balo
volumtrico de 1 litro;
b) Adicionar 20 ml de HCl 50% para dissolver. Adicionar 1,318 g de
KH
2
PO
4
e 3,472 g de KCl (secos a 105C por 2 horas);
c) Adicionar 200 ml da soluo de magnsio (com 1,200 mg/L-1 de Mg) e
completar o volume com gua destilada;
d) Esta soluo contm 300 mg/L-1 de P, 2,200 mg/L-1 de K, 800 mg/L-1
de Ca e 240 mg/L-1 de Mg.
8.5. PROCEDIMENTO
8.5.1. Digesto das amostras
a) Pesar 0,200 g da amostra e colocar em tubo de digesto seco. (usar
funil de haste longa e dimetro interno de 10 mm);
b) Adicionar 1 ml de H
2
O
2
;
c) Adicionar vagarosamente 2 ml de H
2
SO
4
concentrado (a reao
rpida); fazer o procedimento na capela;
d) Adicionar 0,7 g da mistura de digesto (usar medida calibrada (dosador)
e funil de haste longa e dimetro interno de 10 mm);
e) Colocar no bloco digestor a 160-180C at evaporar a gua, para
evitar projeo do lquido para fora do tubo (a soluo escurece devido
oxidao de compostos orgnicos solveis no decompostos, por
apresentar temperatura mais baixa);
128
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
f) Aumentar a temperatura 350-375C. Aps clarear (cor amarelo-
esverdeada) manter esta temperatura por 1 hora;
g) Retirar os frascos do bloco e deixar esfriar (colocar o conjunto numa
placa de amianto ou madeira para evitar choque trmico);
h) Completar o volume com gua destilada at a marca de aferio de 50
ml (o tubo deve ter a temperatura de 50-60C, suportvel ao tato, para
evitar solidificao da amostra);
i) Agitar com ar comprimido (usar um tubo capilar ou pipeta de 1 ml,
colocando um filtro de algodo no tubo flexvel. Lavar e enxaguar o capilar
entre o processamento de cada amostra);
j) Transferir para frascos snap-cap de 90 ml. Deixar decantar algumas
horas antes de retirar as alquotas para as determinaes de P, K, Ca e
Mg (pode-se, tambm, deixar decantando durante a noite).
8.5.1.1. Observaes
a) Para as curva padro, medir (com microbureta) 0,0 0,5 1,0 2,0
3,5 e 5,0 ml da soluo padro misto para tubos de digesto, seguindo o
procedimento descrito a partir do item 8.5.1.b. Aps a diluio a 50 ml,
ter-se- (Tabela 16):
TABELA 16. Diluies para 50 ml da digesto da amostra.
ml de padro: mg/L
-1
0,0 0,5 1,0 2,0 3,5 5,0
P 0,0 3,0 6,0 12,0 21,0 30,0
K 0,0 22,0 44,0 88,0 154,0 220,0
Ca 0,0 8,0 16,0 32,0 56,0 80,0
Mg 0,0 2,4 4,8 9,6 16,8 24,0
a) Com as diluies e os mtodos de determinao descritos abaixo, as
concentraes finais sero em mg/L-1

(Tabela 17):
129
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 17. Concentraes finais
P 0,0 0,5 1,0 2,0 3,5 5,0
K 0,0 2,0 4,0 8,0 14,0 20,0
Ca 0,0 2,0 4,0 8,0 14,0 20,0
Mg 0,0 0,2 0,4 0,8 1,4 2,0
a) No necessrio repetir a curva a cada bateria (quando em trabalho
continuado com as mesmas solues e condies de trabalho), mas
somente a prova em branco e 2 padres.
8.5.2. Determinao de nitrognio (N)
a) Pipetar 10 ml do extrato para balo de destilao de 100 ml (ajustar a
vazo do vapor a 35-40 ml em 3 a 4 minutos);
b) Adicionar 5 ml de NaOH 10 mol/L
-1
e iniciar a destilao imediatamente
(receber o destilado em erlenmeyer de 50 ml contendo 5 ml de indicador
de cido brico);
c) Destilar at coletar 35-40 ml;
d) Titular com H
2
SO
4
0,025 mol (usar microbureta de 5 ml).
8.5.2.1. Observaes
a) Iniciar com a prova em branco e observar se o valor obtido aceitvel;
b) A determinao de N geralmente feita por ltimo, no sendo afetada
pela presena do precipitado na alquota;
c) O tempo requerido para a digesto, em geral, menor nas anlises de
tecido, devido a menor quantidade de compostos refratrios presentes;
d) Cada ml de H
2
SO
4
0,025 mol utilizado na titulao (descontando o
branco) corresponde a 700 g/L
-1
de N. Caso a concentrao do cido
utilizado for diferente desta, calcular a concentrao de N utilizando o
fator;
130
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) A sensibilidade do mtodo (com as especificaes dadas) de 0,017%
de N (para 0,01 ml de cido utilizado na titulao). Maior sensibilidade
pode ser obtida destilando 20 ml do extrato;
f) Para maiores detalhes quanto operao do destilador semimicro-
kjeldahl consultar o manual do aparelho.
8.5.2.2. Clculos
a) Utilizar a frmula:
000 . 10
5 5 700
%

|
|
.
|

\
|

=
+ +
br H ml am H ml
N
(no caso de utilizar 0,200 g da amostra, destila-se 10 ml do extrato (aps
a diluio a 50 ml) e titula-se com H
2
SO
4
0,025 mol).
b) Expressar o resultado em % de N (mm
-1
), com 2 dgitos decimais.
8.5.3. Determinao de fsforo (P)
a) Transferir uma alquota de 1 ml do extrato obtido atravs da digesto
da amostra para copo plstico descartvel de 50 ml. (usar seringa
calibrada);
b) Adicionar 2 ml de gua destilada. (usar seringa calibrada);
c) Adicionar 3 ml de soluo P-B. (usar seringa calibrada);
d) Adicionar 3 gotas de soluo P-C;
e) Agitar e determinar a absorbncia em 660 nm aps quinze minutos.
(aps 20-35 minutos em dias frios).
8.5.3.1. Observaes
a) Utilizar as mesmas seringas calibradas para a preparao das amostras
e padres;
131
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
b) Amostras com alto teor de P (absorbncia situada fora da parte reta da
curva padro) devem ser diludas convenientemente com o extrato da
prova em branco;
c) A sensibilidade do mtodo (absorbncia igual 0,002) corresponde a
aproximadamente 0,0015% de P na amostra. Pode-se determinar at
aproximadamente 0,66% de P na amostra sem diluio;
d) Para leitura direta, pode-se ajustar o valor de 0,30% com o padro de
2,0 mg/L
-1
de P.
8.5.3.2. Clculos
a) Curva padro de P;
Curva padro de P
y = 0,2015x
R
2
= 0,9996
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
0 1 2 3 4 5
P na soluo final (mg.L
-1
)
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a
b) Fator de concentrao; determinado pela curva padro.
c) Fator de diluio;
500 , 1
3
6
1
3
20 , 0
50
= = FD
132
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
A diluio pelo P-C no est sendo considerada.
a) Teor de P;
000 . 10
(%)
FD FC L
P

=
Onde:
P(%) = o teor de fsforo em porcentagem
L = Leitura
FC = Fator de concentrao
FD = Fator de diluio
b) Expressar o resultado em % de P (mm
-1
), com 2 dgitos decimais.
8.5.4. Determinao de potssio (K)
a) Retirar uma alquota de 1 ml e transferir para um copo plstico
descartvel. (usar seringa calibrada);
b) Adicionar 10 ml de gua destilada ou deionizada;
c) Determinar a emisso de luz no fotmetro de chama.
8.5.4.1. Observaes
a) Nos fotmetros que dispem de controle de sensibilidade, ajusta-se o
mximo da escala com padro adequado conforme as amostras. Se houver
amostras com baixo teor, estas podem ser determinadas utilizando como
ajuste mximo um padro intermedirio. As amostras com teor alto de K
podem ser analisadas utilizando como ajuste mximo o padro maior.
Evita-se assim a necessidade de diluir as amostras;
b) A sensibilidade do mtodo (leitura = 1), para o caso de ajustar o ponto
100 da escala com o padro de 8 mg/L
-1
de K na soluo final corresponde
a 0,022% de K na amostra. O teor mximo que pode ser determinado com
133
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
a diluio recomendada de 5,5% de K na amostra (ajustando-se a leitura
100 com o padro de 20 mg/L
-1
);
c) Para leitura direta em fotmetro com escala iluminada fixa pode-se
desenhar uma escala (em %) sobreposta escala do aparelho, ajustando-
se o valor de 2,2% para o padro de 8 mg/L
-1
.
8.5.4.2. Clculos
a) Curva padro de K;
b) Concentrao na soluo final (cs), determinada pela curva padro;
c) Fator de diluio;
d) Teor de K;
Curva padro de K y = 0,0012x
2
+ 0,1079x
R
2
= 0,9975
0,0
4,0
8,0
12,0
16,0
20,0
0 20 40 60 80 100
Emisso (unidade da escala)
K

n
a

s
o
l
u

o

f
i
n
a
l


(
m
g
/
L
-
1
)

750 , 2
1
11
20 , 0
50
= = FD

10000
(%)
FD CS L
K

=
134
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Onde:
K(%) = o teor de potssio em porcentagem
L = Leitura
CS = Concentrao na soluo final
FD = Fator de diluio
e) Expressar o resultado com 2 dgitos decimais (em % mm
-1
).
8.5.5. Determinao de clcio e magnsio (smbolo
qumico Ca e Mg)
a) Transferir uma alquota de 2,5 ml do extrato para copo plstico
descartvel (usar seringa calibrada);
b) Adicionar 2,5 ml de gua destilada ou deionizada;
c) Adicionar 5 ml da soluo de Sr 0,3% em HCl 0,2 M;
d) Determinar a absorbncia do Ca no fotmetro de absoro (Observar as
instrues peculiares de cada aparelho);
e) Retirar uma alquota de 5 ml (do copo plstico aps a leitura da
absorbncia do Ca);
f) Adicionar 10 ml de gua destilada;
g) Determinar a absorbncia do Mg no fotmetro de absoro.
8.5.5.1. Observaes
a) Amostras com alto teor de Ca e Mg devem ser diludas
convenientemente com o extrato da prova em banco [2 ml do extrato, 2
ml de gua destilada e 4 ml da soluo de estrncio (Sr)];
b) Com a metodologia adotada possvel determinar entre 0,002% e
0,83% de Ca e entre 0,001% e 0,57% de Mg na amostra, sem
necessidade de diluio;
135
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
c) Para a leitura direta do teor de Ca, ajustar o aparelho para 0,80% de
Ca com o padro de 8,0 mg/L-1;
d) Para a leitura direta do teor de Mg, ajustar o aparelho para 0,24% de
Mg com o padro de 8,0 mg/L-1.
8.5.5.2. Clculos
8.5.5.2.1. Clcio
a) Curva padro de Ca;
b) Fator de concentrao: determinado pela curva padro;
c) Fator de diluio;
d) Teor de Ca;
Curva padro de Ca y = 0,0418x
R
2
= 0,999
0,00
0,15
0,30
0,45
0,60
0,75
0 4 8 12 16 20
Ca na soluo final (mg.L
-1
)
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

000 . 1
5
10
5 , 2
5
20 , 0
50
= = FD

000 . 10
(%)
FD FC L
Ca

=
136
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Onde:
Ca(%) = o teor de clcio em porcentagem
L = Leitura
FC = Fator de concentrao
FD = Fator de diluio
e) Expressar o resultado com dois dgitos decimais (% mm
-1
).
8.5.5.2.2. Magnsio
a) Curva padro de Mg;
b) Fator de concentrao: determinado pela curva padro;
c) Fator de diluio;
d)Teor de Mg;
Curva padro de Mg
y = 0,6644x
R
2
= 0,9999
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
0 0,3 0,6 0,9 1,2
Mg na soluo final (mg.L
-1
)
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

000 . 3
5
15
5
10
5 , 2
5
20 , 0
50
= = FD

000 . 10
(%)
FD FC L
Mg

=
137
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Onde:
Mg(%) = o teor de magnsio em porcentagem
L = Leitura
FC = Fator de concentrao
FD = Fator de diluio
e) Expressar o resultado com dois dgitos decimais (% mm
-1
).
9. MICRONUTRIENTES (ZN, CU, MN E FE),
ENXOFRE E SDIO EM PLANTAS E RESDUOS
ORGNICOS
9.1. PRINCPIO
A digesto de tecido vegetal e outros materiais orgnicos com HNO
3

HClO
4
amplamente utilizada na determinao do teor total de vrios
nutrientes Blanchar et. al., (1965); Chapman; Pratt (1961); Johnson;
Ulrich, (1959); Sarruge; Haag, (1974); Tabatabai, Bremner, (1970). Os
procedimentos adotados variam conforme a sensibilidade desejada, os
nutrientes a determinar, a vidraria, os equipamentos utilizados, etc.
9.2. METODOLOGIA ADOTADA
A digesto com HNO
3
HClO
4
deve ser feita com cuidado Johnson e
Ulrich (1959) alertam para os cuidados que devem ser observados no uso.
Apresenta, entretanto, as seguintes vantagens:
a) No h perda de elementos por volatilizao, com exceo de B e Cl,
porque a temperatura no ultrapassa o ponto de ebulio do HClO
4
(203C), e;
b) No ocorre absoro de elementos metlicos na slica (o que se observa
na queima a 500-600C). portanto, amplamente utilizada para a
extrao de Zn, Cu, Fe, Mn, Na e S no tecido de plantas e outros materiais
(composto, adubos orgnicos, resduos de origem animal e vegetal, etc.).
138
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Outros elementos podem tambm ser determinados no extrato, como
metais pesados (Pb, Ni, Cd, Cr, etc) e macronutrientes (P, K, Ca e Mg).
Na digesto de amostras de adubos organo-minerais, com altos teores de
minerais pode ocorrer a exploso do perclorato, sendo recomendada, neste
caso, a digesto com Br-CCl
4
BR-MA-Lanarv, (1983).
A concentrao dos micronutrientes no tecido das plantas em geral
menor que 20 mg/kg
-1
para o cobre, entre 10 e 100 mg/kg
-1
para o zinco,
entre 20 e 1.000 mg/kg
-1
para o mangans, e entre 20 e 1.000 mg/kg
-1
para o ferro. O sdio pode variar entre 10 e 200 mg/kg
-1
(em solos salinos
os teores so maiores). O teor de S compatvel ao do P, variando entre
0,05 a 1,2%.
No procedimento adotado, as quantidades de HNO
3
HClO
4
recomendadas
foram reduzidas ao mximo para agilizar a etapa de digesto e manter
uma concentrao de HClO
4
de, aproximadamente, 0,5M no extrato (aps
diluio a 20 ml, supondo no haver perda de cido), compatvel com a
leitura direta no fotmetro de absoro com nebulizador especial (para
evitar corroso).
Para evitar a perda de HClO
4
(e secagem de extrato) adotado o uso de
um pequeno funil tampado nos tubos de digesto, para propiciar a
condensao do cido, que ento escorre pelas paredes do tubo. Este
procedimento oferece as vantagens de lavar as paredes de resduos que
aderem durante a fase de digesto com HNO
3
e evitar que as mesmas
sequem, o que pode provocar perdas de S, As e P.
Tubos de digesto podem ser adquiridos j calibrados a 20 ml. Deve-se ter
cuidado ao ajustar o volume at a marca de 20 ml, pois um erro de 0,5 ml
(facilmente visvel) representa um desvio de 2,5%. Com cuidado, este erro
pode ser reduzido a menos de 1%.
Ateno especial deve ser dada limpeza dos tubos de digesto. Aps a
digesto com H
2
O
2
-H
2
SO
4
(para macronutrientes), os tubos apresentam em
geral um depsito persistente de silicatos nas paredes, resistente soluo
139
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
de limpeza (H
2
SO
4
-K
2
Cr
2
O
7
). Este depsito pode, entretanto, ser removido
com um banho de HF concentrado. Deixa-se o cido em contato com o
vidro por alguns segundos (3 a 4), passando-se o mesmo de um tubo a
outro, lavando-se, em seguida, com gua da torneira (o melhor dispor de
dois conjuntos para macro e micronutrientes deve-se ter cuidado com o
uso do HF: se derramado nas mos, lavar imediatamente com bastante
gua e gelo para neutralizar o cido). Aps, livre de depsitos, a vidraria
pode ser lavada com HCl 1M e, a seguir, por vrias vezes, com gua
destilada.
No procedimento adotado, o extrato deixado em repouso para
decantao da slica (e frao mineral), determinando-se os elementos
metlicos no extrato por fotometria (absoro ou emisso), aps diluio
adequada. O S determinado por turbidimetria conforme o mtodo
descrito por Tabatabai e Bremner (1970).
9.3. MATERIAIS/EQUIPAMENTOS
a) Bloco digestor, para tubos de digesto de 25 x 250 mm, com 40
provas, com temperatura regulvel at 300C;
b) Funil para depositar o tecido no fundo do tubo de digesto (haste de 18
mm de dimetro externo e comprimento de 20 cm);
c) Funis (condensador) de 30 mm de dimetro na parte mais larga, 45 mm
de comprimento e 5 mm de dimetro externo da haste;
d) Fotmetro de absoro atmica;
e) Fotmetro de chama;
f) Calormetro (UV - visvel) ou turbidimetro;
g) Capela A forma ideal de ventilao dos vapores de HClO
4
seria o
borbulhamento em gua, ou absoro em soda (JOHNSON; ULRICH,
1959). Pode ser utilizada uma capela de PVC, com a condensao do
cido. No se deve trabalhar com compostos orgnicos na mesma capela.
140
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
9.4. REAGENTES E SOLUES
a) Cobre (Cu);
b) Zinco (Zn);
c) Ferro (Fe);
d) Mangans (Mn);
e) Sdio (Na);
f) Cloreto de sdio (NaCl);
g) cido ntrico concentrado (65%; d = 1,40), p.a. (HNO
3
);
h) cido perclrico concentrado (70%; d = 1,67), p.a. (HClO
4
);
i) Sulfato de Potssio anidro p.a. (K
2
SO
4
).
9.4.1. Padro de Cu de 1.000 mg L
-1
a) Pesar 1.000 g de Cu metlico;
b) Dissolver com 20 ml de HNO
3
a 50%;
c) Diluir a 1 litro com HCl 0,1M.
9.4.2. Padro de Zn de 1.000 mg L
-1
a) Pesar 1.000 g de Zn metlico;
b) Dissolver com 20 ml de HNO
3
a 50%;
c) Diluir em 1 litro.
9.4.3. Padro de Fe, Mn e Na
a) Pesar 0,600 g de Fe metlico e 0,450 g de Mn metlico;
b) Dissolver em 20 ml de HNO
3
50%, utilizando balo volumtrico de 500
ml;
141
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
c) Adicionar aproximadamente 300 ml de gua destilada ou deionizada;
d) Adicionar 1,524 g de NaCl (seco a 105C por 2 horas);
e) Completar o volume;
f) Esta soluo possui 1.200 mg/L
-1
de Fe, 900 mg/L
-1
de Mn e 1.200 mg/
L
-1
de Na.
9.4.4. Padro diludo
a) Dissolver 7,175 g de K
2
SO
4
(seco a 105C por 2 horas) em
aproximadamente 300 ml de gua destilada e completar com gua
deionizada em um balo volumtrico de 1000 ml;
b) Adicionar 40 ml da soluo 9.4.1. (1.000 mg/L
-1
de Cu), 24 ml da
soluo 9.4.2. (1.000 mg/L
-1
de Zn) e 200 ml da soluo 9.4.3. (Fe, Mn e
Na);
c) Completar o volume;
d) Esta soluo contm 40 mg/L
-1
de Cu, 24 mg/L
-1
de Zn, 240 mg/L
-1
de
Fe, 180 mg/L
-1
de Mn, 240 mg/L
-1
de Na e 1.320 mg/L
-1
de S.
9.4.5. BaCL
2
-gelatina
a) Dissolver 0,6 g de gelatina (pode-se usar produto comercial incolor) em
200 ml de gua destilada ou deionizada aquecida a 60-70C;
b) Colocar em geladeira (-4C) por 16-18 horas;
c) Trazer temperatura ambiente (20-25C);
d) Adicionar 2,0 g de BaCl
2
nessa soluo e agitar at a completa
dissoluo;
e) Esta soluo deve ser guardada em geladeira temperatura entre 4-8C
(mantm-se estvel por aproximadamente 10 dias);
f) Antes de usar, trazer temperatura ambiente e agitar.
142
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
9.5. PROCEDIMENTO
9.5.1. Digesto das amostras
a) Pesar 1.000 g de amostra e colocar no tubo de digesto (os tubos
devem ser marcados a 20 ml. Usar funil com haste longa);
b) Adicionar 6,0 ml de HNO
3
concentrado (usar seringa calibrada);
c) Deixar em repouso at o dia seguinte (na capela);
d) Agitar manualmente cada tubo (tomar cuidado para no elevar a
mistura nas paredes do tubo);
e) Aquecer a 80-90C por trinta minutos (tomar cuidado para no elevar a
mistura nas paredes do tubo);
f) Aumentar a temperatura para 120C [desprende fortes vapores de
xidos de nitrognio do HNO
3
(cor marrom)];
g) Manter esta temperatura at restar 0,5-1,0 ml de cido (retirar os
tubos que tendem a secar);
h) Deixar esfriar por 10 minutos (sobre placa de amianto ou madeira);
i) Adicionar 1,0 ml de HClO
4
concentrado (usar seringa calibrada);
j) Aquecer a 180-190C (desprende vapores de xidos de nitrognio do
HNO
3
remanescente);
k) Quando comear o desprendimento de vapor de HClO
4
(branco), colocar
os funis de 30 mm de dimetro nos tubos de digesto (para evitar perda de
HClO
4
e secagem do material);
l) Manter a esta temperatura por 2 horas;
m) Deixar esfriar e adicionar aproximadamente 5 ml de gua destilada
[sobre placa de amianto ou madeira, at poder tocar o tubo com a mo
(50-60C). Se houver formao de cristais aquecer levemente];
143
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
n) Ajustar o volume a 20 ml com gua destilada (a concentrao final do
cido 0,57M);
o) Homogeneizar cada tubo (manualmente);
p) Deixar decantar at o dia seguinte (em frascos snap-cap de 90 ml).
9.5.1.1. Observao
a) Para as curvas padro, medir (com microbureta) 0,0 0,5 2,5 e 4,0
ml do padro misto para tubos de digesto, seguindo o procedimento
descrito a partir do item 9.5.1.n. Aps a diluio para 20 ml, verificar-se-
(Tabela 18):
TABELA 18. Diluies para 20 ml da digesto da amostra
ml de padro 0,0 0,5 1,0 1,5 2,5 4,0
Teor de Cu (mg/L
-1)
0,0 1,0 2,0 3,0 5,0 8,0
Teor de Zn (mg/L
-1
) 0,0 0,6 1,2 1,8 3,0 4,8
Teor de Fe (mg/L
-1
) 0,0 6,0 12,0 18,0 30,0 48,0
Teor de Mn (mg/L
-1
) 0,0 4,5 9,0 13,5 22,5 36,0
Teor de Na (mg/L
-1
) 0,0 6,0 12,0 18,0 30,0 48,0
Teor de S (mg/L
-1
) 0,0 33,0 66,0 99,0 165,0 264,0
a) Com as diluies e os mtodos de determinao descritos abaixo, as
concentraes finais sero (sem diluio para Cu, diluio de 3x para Zn,
Fe, Mn e Na e diluio de 11x para S) (Tabela 19):
TABELA 19. Concentraes finais
Teor de Cu (mg/L
-1
) 0,0 1,0 2,0 3,0 5,0 8,0
Teor de Zn (mg/L
-1
) 0,0 0,2 0,4 0,6 1,0 1,6
Teor de Fe (mg/L
-1
) 0,0 2,0 4,0 6,0 10,0 16,0
Teor de Mn (mg/L
-1
) 0,0 1,5 3,0 4,5 7,5 12,0
Teor de Na (mg/L
-1
) 0,0 2,0 4,0 6,0 10,0 16,0
Teor de S (mg/L
-1
) 0,0 3,0 6,0 9,0 15,0 24,0
144
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
c) Em trabalho quotidiano, no necessrio repetir as curvas padro a
cada batelada, somente a prova em branco e 2 padres.
9.5.2. Determinao de enxofre
a) Pipetar 1,0 ml de sobrenadante (pode-se usar seringa calibrada e copos
descartveis);
b) Adicionar 10 ml de HCl 0,1M (usar seringa calibrada);
c) Adicionar 1,0 ml da soluo BaCl
2
-gelatina. Agitar alguns segundos (usar
seringa calibrada e agitar com pequeno basto de vidro);
d) Deixar em repouso por 30 minutos;
e) Agitar novamente e determinar a absorbncia no fotmetro em 440 nm
(fazer a leitura entre 30 e 60 minutos aps a adio de BaCl
2
-gelatina).
9.5.2.1. Observaes
a) A sensibilidade (absorbncia igual 0,002) de 0,052 mg/L
-1
na soluo
de leitura (para o ponto 2,5 mg/L
-1
na curva do item 9.5.2.2), ou 25 mg/
kg
-1
(0,0011%) na amostra (diluio de 220 vezes);
b) Com o procedimento descrito podem-se determinar teores de at
0,35% de S no tecido, sem outra diluio;
c) Para a leitura direta do teor de S na amostra, ajustar a absorbncia de
0,095 com o padro de 2,5 mg/L
-1
de S na soluo final.
145
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
9.5.2.2. Clculos
a) Curva padro de S;
b) Fator de concentrao: determinado pela curva padro;
Fator de concentrao = 0,0265 mg/L
-1
por mil absorbncias;
c) Fator de diluio;
d) Teor de enxofre;
Onde:
S(%) = o teor de enxofre em porcentagem
L = Leitura
FC = Fator de concentrao
FD = Fator de diluio
Curva padro de S
y = 0,0523x
R
2
= 0,9947
0,00
0,10
0,20
0,30
0,40
0,50
0,60
0 2 4 6 8 10
SO
4
2-
na soluo final (mg.L
-1
)
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

220
1
11
1
20
= = FD

000 . 10
(%)
FD FC L
S

=
146
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) Expressar o resultado com dois dgitos decimais (% mm
-1
).
9.5.3. Determinao do cobre, zinco, ferro, mangans e
sdio
a) Pipetar 10 ml de sobrenadante (usar seringa calibrada e copos plsticos
descartveis);
b) Determinar a absorbncia de Cu no fotmetro de absoro;
c) Pipetar 5,0 ml da soluo restante e adicionar 10 ml de gua destilada
(usar seringa calibrada, com cuidado para evitar contaminao);
d) Determinar as absorbncias de Zn, Fe, e Mn no fotmetro de absoro;
e) Determinar a emisso de Na no fotmetro de chama (regular o
fotmetro de chama com os padres convenientes).
9.5.3.1. Observaes
a) Amostras com altos teores devem ser diludas convenientemente com o
extrato da prova em branco;
b) Para o Cu, a sensibilidade (absorbncia = 0,002) de
aproximadamente 0,057 mg/L
-1
na soluo de leitura (fator de
concentrao para o ponto 4,0 mg/L
-1
na curva do item 9.5.3.2.1.), ou
1,14 mg/kg
-1
na amostra (diluio de 20x). Concentraes de at 120 mg/
kg
-1
na amostra podem ser determinadas pelo procedimento descrito, sem
outra diluio;
c) Para o Zn, a sensibilidade (absorbncia = 0,002) de aproximadamente
0,016 mg/L
-1
na soluo de leitura (fator de concentrao para o ponto
1,0 mg/L
-1
na curva do item 9.5.3.2.2.), ou 0,98 mg/kg
-1
na amostra
(diluio de 60x). Concentraes de at 95 mg/kg
-1
na amostra podem ser
determinadas pelo procedimento descrito, sem outra diluio;
d) Para o Fe, a sensibilidade (absorbncia = 0,002) de aproximadamente
0,06 mg/L
-1
na soluo de leitura (fator de concentrao para o ponto 2,0
mg/L
-1
na curva do item 9.5.3.2.3.), ou 3,60 mg/kg
-1
na amostra (diluio
147
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
de 60x). Concentraes de at 365 mg/kg
-1
na amostra podem ser
determinadas pelo procedimento descrito, sem outra diluio;
e) Para o Mn, a sensibilidade (absorbncia = 0,002) de
aproximadamente 0,045 mg/L
-1
na soluo de leitura (fator de
concentrao para o ponto 1,0 mg/L
-1
na curva do item 9.5.3.2.4.), ou
2,70 mg/kg
-1
na amostra (diluio de 60x). Concentraes de at 140 mg/
kg
-1
na amostra podem ser determinadas pelo procedimento descrito, sem
outra diluio;
f) Na determinao do Na, o fotmetro de chama pode ser ajustado para
registrar 80 nm com o padro de 4 mg/L
-1
na soluo de leitura. A
sensibilidade neste caso (para a leitura de uma unidade) de
aproximadamente 0,05 mg/L
-1
na soluo de leitura, ou 3,0 mg/kg
-1
na
amostra (diluio de 60x). Concentraes de 300 a 600 mg/kg
-1
na
amostra podem ser determinadas pelo procedimento descrito, sem outra
diluio (determinar o teor de Na na soluo pela curva);
g) Para a leitura direta dos teores de Cu, Zn, Fe e Mn da amostra, ajustar
o fotmetro de absoro para obter os valores de 40 mg/kg
-1
de Cu, 24
mg/kg
-1
de Zn, 240 mg/kg
-1
de Fe e 180 mg/kg
-1
de Mn com o extrato com
um ml do padro misto, diludo conforme as amostras (cuja concentrao
final de 2 mg/L
-1
de Cu, 0,4 mg/L
-1
de Zn, 4 mg/L
-1
de Fe e 3 mg/L
-1
de
Mn).
148
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos

20
1
20
= = FD

FD FC L kg mg Cu =

) / (
1
Curva padro de Cu
y = 0,0523x
R
2
= 0,9947
0,00
0,10
0,20
0,30
0,40
0,50
0,60
0,70
0 2 4 6 8 10 12
Cu na soluo final (mg.L
-1
)
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a
9.5.3.2. Clculos
9.5.3.2.1 Cobre
a) Curva padro de Cu;
b) Fator de concentrao: determinado pela curva padro;
Fator de concentrao = 0,0288 mg/L
-1
por mil absorbncias.
c) Fator de diluio;
d) Teor de cobre;
Onde:
Cu = o teor de cobre em (mg/kg
-1
)
L = Leitura
FC = Fator de concentrao
FD = Fator de diluio
149
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) Expressar o resultado em nmero inteiro (mg/kg
-1
).
9.5.3.2.2. Zinco
a) Curva padro de Zn;
b) Fator de concentrao: determinado pela curva padro;
Fator de concentrao = 0,00820 mg/L
-1
por mil absorbncias.
c) Fator de diluio;
d) Teor de zinco;
Onde:
Zn = o teor de zinco em (mg/kg
-1
)
L = Leitura
FC = Fator de concentrao
FD = Fator de diluio
Curva padro de Zn
y = 0,1982x
R
2
= 0,9988
0,00
0,10
0,20
0,30
0,40
0,50
0,60
0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00
Zn na soluo final (mg.L
-1
)
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

60
5
15
1
20
= = FD

FD FC L kg mg Zn =

) / (
1
150
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) Expressar o resultado em nmero inteiro (mg/kg
-1
).
9.5.3.2.3. Ferro
a) Curva padro de F;
b) Fator de concentrao: determinado pela curva padro;
Fator de concentrao = 0,00820 mg/L
-1
por mil absorbncias.
c) Fator de diluio;
d) Teor de ferro;
Onde:
Fe = o teor de ferro em (mg/kg
-1
)
L = Leitura
FC = Fator de concentrao
FD = Fator de diluio
Curva padro de Fe
y = 0,0502x
R
2
= 0,9986
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0
Fe na soluo final (mg.L
-1
)
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

60
5
15
1
20
= = FD

FD FC L kg mg Fe =

) / (
1
151
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) Expressar o resultado em nmero inteiro (mg/kg
-1
).
9.5.3.2.4. Mangans
a) Curva padro de Mn;
b) Fator de concentrao: determinado pela curva padro;
Fator de concentrao = 0,0227 mg/L
-1
por mil absorbncias.
c) Fator de diluio;
d) Teor de mangans;
Onde:
Mn = o teor de mangans em (mg/kg
-1
)
L = Leitura
FC = Fator de concentrao
FD = Fator de diluio
Curva padro de Mn
y = 0,0398x
R
2
= 0,9995
0,00
0,04
0,08
0,12
0,16
0,20
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0
Mn na soluo final (mg.L
-1
)
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

60
1
15
1
20
= = FD

FD FC L kg mg Mn =

) / (
1
152
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
e) Expressar o resultado em nmero inteiro (mg/kg
-1
).
9.5.3.2.5. Sdio
a) Curva padro de sdio (Na): ajustar a leitura (na escala de zero a 100)
com o padro de 20 (mg/L
-1
);
b) Concentrao na soluo final (CS), determinado pela curva padro;
c) Fator de diluio;
d) Teor de sdio;
Onde:
Na = o teor de sdio em (mg/kg
-1
)
L = Leitura
CS = Fator de concentrao na soluo final
FD = Fator de diluio
e) Expressar o resultado em nmero inteiro (mg/kg
-1
).
10. MTODOS TITULOMTRICOS
10.1. CONCENTRAO E PREPARO DE SOLUES
10.1.1. Definies
10.1.1.1. Dissociao
Processo de separao de ons, oriundos de uma ligao inica.

60
1
15
1
20
= = FD

FD CS L kg mg Na =

) / (
1
153
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
10.1.1.2. Ionizao
Processo de produo de ons, a partir do rompimento de ligaes
moleculares.
10.1.1.3. Ction
on carregado positivamente, gerado a partir da retirada de eltrons da
estrutura de um tomo.
10.1.1.4. nion
on carregado negativamente, gerado a partir do acrscimo de eltrons da
estrutura de um tomo.
10.1.1.5. Equivalente-grama
definido como a relao entre a massa molar de uma substncia e a
quantidade de cargas positivas e negativas que ela libera durante a reao
que participa. Portanto o clculo do equivalente-grama depende da
natureza da substncia avaliada:
Para cidos:
Para bases:

ionizveis H de N
g molar Massa
g Eq
+

=
) (
/

s disponvei OH de N
g molar Massa
g Eq

=
) (
/
154
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Para sais/xidos:
ou
Para oxidantes/redutores:
ou
10.1.1.6. Massa molar
A massa molar de uma substncia definida pela soma das massas
atmicas dos elementos qumicos que a compem.
Exemplo:
NaOH Massa molar: 40
Elemento: Na O H
Massa atmica: 23 16 1
H
2
SO
4
Massa molar: 98
Elemento: H S O
Massa atmica 1x2=2 32 16x4=64

ction do positivas cargas de total n
(g) molar massa
/ = g Eq

nion do negativas cargas de total n
(g) molar massa
/ = g Eq

oxidante pelo recebidos eltrons de n
(g) molar massa
/ = g Eq

redutor pelo cedidos eltrons de n
(g) molar massa
/ = g Eq
155
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
10.1.1.7. Soluto
Substncia que ao compor uma soluo ou mistura dissolvida em outra.
10.1.1.8. Solvente
Substncia que ao compor uma soluo ou mistura responsvel pela
dissoluo de outra. A gua o solvente universal.
10.1.1.9. Soluo
Sistema homogneo composto por duas ou mais substncias.
10.1.1.10. Diluio
Entende-se por diluio, a reduo da concentrao de uma soluo pela
adio de volume conhecido de solvente. A relao de uso mais comum ao
processar a diluio volume da soluo original/volume de solvente e,
com menor frequncia, volume de soluo original/volume final da soluo.
Convm, entretanto, salientar que, para definir o fator de diluio, utiliza-
se a frmula do quociente entre os volumes final e inicial.
10.1.1.10.1. Diluio de solues
Exemplo:
lcool 70%
Soluo me [C] conhecida
Soluo diluda [D] desejada
Ex.: Dispe-se de lcool 96% = soluo me [C]
Deseja-se lcool 70% [D]

(ml) original soluo da Volume
(ml) diluda soluo da Volume
diluio de Fator =
156
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Como uma regra indireta:
Concluso: Adiciona-se 37 ml de gua destilada (= 137 100) a 100 de
lcool puro, i.e., 96%, resultando lcool 70% p.q. 96 137 = 0.7 ou
70%
10.1.1.11. Densidades Absoluta e Relativa
Entende-se por densidade absoluta, a relao entre a massa de uma
substncia e o volume que ela ocupa, sob determinadas temperatura e
presso.
J a densidade relativa parte da comparao da densidade da substncia
com a gua, sob as mesmas condies.
10.1.1.11.1. Reagente padro primrio
Reagente padro primrio so substncias que tm as seguintes
caractersticas:
Devem ser de fcil obteno, purificao, dessecao e conservao;
So reagentes com pureza acima de 99,9%;
No devem ser higroscpicos;

lcool de partes 70
lcool de partes 96
X
96% lcool ml 100

96
70 100

X

137
7
960
70
100 96
= =

= X


(ml) Volume
(g) massa
absoluta Densidade =
157
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Devem ser bastante solveis.
10.1.1.11.2. Reagente padro secundrio
Um reagente padro secundrio uma substncia que pode ser usada no
preparo de solues atravs de padronizaes em relao a um padro
primrio.
10.1.1.11.3. Solues padres diretas
So aquelas solues preparadas com um padro primrio, nas quais pesa-
se a quantidade desejada de padro primrio e acrescenta-se o volume de
gua desejado.
10.1.1.11. 4. Solues padres indiretas
So aquelas solues preparadas com padres secundrios, nas quais,
aps a pesagem e o acrscimo de gua, deve-se fazer uma padronizao
da soluo obtida em relao a um padro primrio.
10.1.2. Normalidade
A normalidade definida como o nmero de equivalentes de uma
substncia presentes em um litro de soluo.
10.1.3. Molaridade
A molaridade definida como o nmero de moles de uma substncia
presentes em um litro de soluo.
10.1.4. Concentrao
Pressupem-se as mais diversas relaes de peso e volume de substncias.

(L) x volume grama - e Equivalent
(g) massa
= N

(L) lume molar x vo Massa
(g) massa
= M
158
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Algumas destas relaes so de uso mais comum na rotina de um
laboratrio:
Percentagem peso/peso (% p/p);
Percentagem peso/volume (% p/v);
Percentagem volume/volume (% v/v);
Massa por litro (g/L).
10.1.4.1. Percentagem peso/peso (% p/p)
Concentrao definida pela relao entre o peso de soluto e o peso da
soluo.
10.1.4.2. Percentagem peso/volume (% p/v)
Concentrao definida pela relao entre o peso de soluto e o volume da
soluo.
10.1.4.3. Percentagem volume/volume (% v/v)
Concentrao definida pela relao entre o volume de soluto e o volume
da soluo.
10.1.4.4. Massa por litro
Concentrao definida pela massa de soluto presente em um litro da
soluo.

(g) soluo da massa
100 x (g) soluto de massa
/ % = p p

(ml) soluo da volume
100 x (g) soluto de massa
/ % = v p

(ml) soluo da volume
100 x (ml) soluto de volume
/ % = v v
159
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
11. SEGURANA EM LABORATRIO QUMICO
11.1. PRINCPIO
O trabalho em laboratrios qumicos, pelas peculiaridades das tarefas
executadas, motivo de preocupao quanto aos riscos existentes e
observncia das normas de segurana do pessoal, dos trabalhadores
permanentes (laboratoristas) ou eventuais (pessoal de limpeza etc.).
O desconhecimento das situaes de perigo, caracterstica na fase de
aprendizado e mesmo do pessoal j experiente no trabalho, com produtos
novos ou no identificados, acentua ainda mais os riscos citados. Criam-se,
desta forma, situaes que podem causar srios acidentes.
Para preveni-los, devem ser feitas avaliaes dos riscos e tomadas
medidas de controle que, rigidamente observadas, propiciam condies de
trabalho em nveis de segurana adequados.
Entre os riscos mais comuns destacam-se os seguintes:
a) Manuseio de material de vidro e de produtos qumicos;
b) Trabalho a temperaturas elevadas;
c) Trabalho a presses diferentes da atmosfera;
d) Uso de fogo;
e) Uso de eletricidade.
11.2. RISCOS QUMICOS
11.2.1. Formas de agresso por produtos qumicos
Alm do contato direto com a pele, os diversos agentes qumicos podem
entrar em contato com o organismo humano por trs vias:

(L) soluo da volume
100 x (g) soluto de massa
/ % = L g
160
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
a) Por inalao;
Constitui a principal via de intoxicao.
b) Por absoro cutnea;
A pele e a gordura protetora so barreiras bastante efetivas, sendo poucas
as substncias que podem ser absorvidas em quantidades perigosas.
c) Por ingesto;
Pode ocorrer de forma acidental (uso indevido de pipetas), ou ao engolir
partculas que estejam retidas no trato respiratrio, resultantes da inalao
de ps ou fumos.
11.2.2. Limites de tolerncia
As aes de efeitos dos contaminantes dependem de fatores como:
a) Tempo de exposio;
b) Concentrao e caractersticas fsico-qumicos do produto;
c) Suscetibilidade pessoal, alm de outros.
O limite de tolerncia estabelece as concentraes dos agentes qumicos
presentes a um ambiente de trabalho, sob os quais o homem pode ficar
exposto sem sofrer efeitos adversos a sua sade.
A concentrao de um determinado poluente no ar pode ser determinada,
de maneira relativamente simples, com o uso de tubos colorimtricos
especficos para este fim.
11.2.3. Medidas bsicas de segurana
Devem ser tomadas considerando trs itens principais, a saber: medidas
relativas s instalaes, medidas relativas s operaes especficas e
medidas relativas ao pessoal.
161
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
11.2.3.1. Medidas relativas s instalaes
Um laboratrio deve ser instalado em local previsto para este fim.
Inclusive prevendo um plano (esquema) para seu funcionamento racional
dentro de padres de segurana adequados.
A localizao deve ser, de preferncia, em pavimento trreo, tendo ao
redor rea isolada e livre. A construo de laboratrio em andares dificulta
enormemente a tomada de medidas preventivas.
As instalaes eltricas e hidrulicas devem ser aparentes ou sob piso
falso, para facilitar a manuteno.
As canalizaes para gases sob presso devem ser aparentes e os cilindros
de alimentao localizados em rea externa ao laboratrio, bem ventilada
e adequadamente sinalizada.
Para a construo de pisos e bancadas, os materiais devem ser escolhidos
de forma a dificultar a combusto e resistir ao ataque de produtos
qumicos.
Para trabalho com produtos volteis dever ser prevista capela, a qual
periodicamente ser submetida a processo de manuteno.
Os produtos qumicos devem ser armazenados em locais especialmente
destinados para este fim, permanecendo no laboratrio uma quantidade
mnima.
Para prevenir e contornar situaes de emergncia devem ser previstas
instalaes, tais como:
a) Proteo contra incndio;
Os locais de trabalho com substncias inflamveis ou explosivas devem
dispor de sada de emergncia, porta contra fogo e sinalizao de alarme.
b)Chuveiro de emergncia;
So instalados em locais de fcil acesso e em condies de uso a qualquer
momento, devendo, portanto, passar por manuteno peridica.
162
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
c) Lavadores de olhos;
Para atendimento quando da projeo de produtos qumicos nos olhos. Os
lavadores de olhos devem passar por manuteno peridica.
d) Sinalizao de segurana;
Devem ser demarcadas no piso as reas de segurana (equipamentos
contra incndio, chuveiros de emergncia, etc.), sendo mantidas
desobstrudas e em perfeito estado de conservao.
Recomendam-se o uso de cartazes e placas indicando riscos de acidentes,
medidas de orientao e localizao de equipamentos de segurana.
11.2.3.2. Medidas relativas s operaes especficas
a) Manuseio de produtos qumicos;
Todo o trabalho com produtos qumicos em laboratrios deve ser precedido
por pesquisa sobre as propriedades qumicas, fsicas e toxicolgicas dos
produtos, seu manuseio seguro e medidas de primeiros socorros em caso
de acidente, a fim de conscientizar o operador sobre os riscos aos quais
est exposto.
Recomendam-se, para uma primeira tomada de posio, consulta ao Index
Merck, s tabelas de laboratrios previstas para este fim, ou s fichas
toxicolgicas.
a) Rotulagem;
Nenhum produto deve ser manipulado no laboratrio sem que se saiba
exatamente o seu comportamento.
Os rtulos devem conter sempre informaes necessrias para a perfeita
caracterizao, bem como indicaes de riscos, medidas de preveno
para o manuseio e instrues para o caso de eventuais acidentes, tais
como:
163
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Contato ou exposio;
Antdotos e informaes para manuseio e armazenagem de recipientes.
A fim de evitar a dilacerao de rtulos, estes devem ser periodicamente
vistoriados.
b) Operaes envolvendo produtos volteis e txicos;
Devem ser feitas exclusivamente em capelas, locais em que a exausto
dos vapores e gases evita a disseminao dos mesmos no ambiente do
laboratrio.
c) Operaes com vidraria;
A vidraria utilizada dos mais variados tipos e o trabalho com calor
intenso, frio, presso, alm da correo e adaptao de peas de vidro,
frequentemente conduz a acidentes.
A seguir so apresentadas recomendaes bsicas de segurana no
trabalho com vidraria:
Nunca trabalhar com vidro trincado ou quebrado;
Ao introduzir tubos de vidros em rolhas, lubrificar o vidro com vaselina ou
silicone e proteger as mos com luvas grossas ou mesmo toalhas;
Para o trabalho sob presso reduzida, verificar previamente a espessura
das paredes dos frascos e conexes de vidro, usando somente material
resistente a variaes de presso;
Ao usar pipetas, deve-se verificar o seu estado de conservao.
d) Despejos e resduos:
Os resduos qumicos de laboratrios no devem ser jogados diretamente
no esgoto.
164
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
Dependendo das caractersticas dos produtos que o compem, dever ser
feito tratamento que pode envolver operaes tais como:
Diluio;
Neutralizao;
Interao;
Combusto;
Resfriamento;
Filtrao;
Precipitao, tratamentos com resinas, entre outros.
Quando o resduo for gasoso, o tratamento usando frascos lavadores
bastante eficiente.
11.2.3.3. Medidas relativas ao pessoal
e) Uso de equipamento de proteo individual:
O uso de equipamento de proteo individual, tais como: avental de
algodo, culos, luvas, protetores faciais, mscaras para gases so
indispensveis em algumas situaes de laboratrio;
O avental de algodo, alm de proteger contra a projeo dos produtos
qumicos, protege o laboratorista contra o fogo, pois, em situaes nas
quais possa vir a inflamar-se, pode ser rapidamente despido. O tecido deve
ser consequentemente, de material de difcil combusto;
E os aventais de tecidos sintticos pegam fogo com facilidade e no so
recomendados;
O uso de culos e protetores faciais fundamental nos casos em que
pode haver qualquer tipo de projeo (respingos, estilhaos, etc.). Os
culos com filtros especiais so recomendados para proteo contra
165
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
radiaes (ultravioleta e infravermelho), comuns em instrumentos
analticos.
f) Treinamentos peridicos:
Devem ser feitos sistematicamente, com o objetivo de conscientizar o
pessoal sobre as normas de segurana, evitando, com isto, a acomodao
e displicncia no seu cumprimento, assim como verificar a eficincia de
equipamentos e medidas em caso de acidentes.
Os principais itens do treinamento devem envolver:
Medidas de controle a incndios, derrame ou vazamento;
Utilizao de equipamentos de proteo individual;
Atendimento de primeiros socorros;
Manuseio de produtos qumicos.
g) Normas pessoais de segurana:
No fumar em laboratrio;
No comer em laboratrio;
Evitar brincadeiras que possam comprometer as normas de segurana;
Evitar visitas de pessoas estranhas ao laboratrio;
No usar a vidraria de laboratrio para guardar alimentos ou ingerir
lquidos;
Manter rigorosa higiene pessoal diria, lavando cuidadosamente mos,
braos e rosto antes de ingerir bebidas e alimentos aps o trabalho;
Usar, sempre que estiver dentro do laboratrio, mesmo que no esteja
trabalhando, todo o equipamento de proteo individual disponvel, e
conhecer, em detalhes, os produtos ou os reagentes em trabalho.
166
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
12. SOLUES DE LIMPEZA
12.1. SOLUO SULFOCRNICA PARA VIDRARIA
12.1.1. Reagentes
a) Dicromato de Potssio K
2
Cr
2
O
7
;
b) cido sulfrico H
2
SO
4
(pode ser o comercial ou p.a.);
c) gua destilada.
Observao: Soluo utilizada para limpeza de vidraria tais como: pipetas,
tubos de ensaio, cadinhos, placa de petri e outros.
12.1.2. Procedimento
a) Pesar 60 g de dicromato de potssio previamente triturado e dissolvido,
com mais ou menos 200 ml de gua destilada em aquecimento brando em
gua destilada quente; deixar esfriar;
b) Adicionar lentamente 800 ml de cido sulfrico comercial;
c) O recipiente do preparo deve estar parcialmente imerso em banho de
gua gelada;
d) Executar a operao em capela;
e) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
12.2. SOLUO DE CIDO CLORDRICO 1% - PARA
VIDRARIA
12.2.1. Reagentes
a) cido clordrico (HCl) p.a.;
b) gua destilada.
12.2.2. Procedimento
a) Medir em uma proveta 10 ml de cido clordrico;
167
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
b) Colocar em torno de 200 ml de gua destilada em um balo de 1000
ml;
c) Adicionar o HCL lentamente ao balo;
d) Completar o volume de 1000 ml;
e) Executar a operao em capela;
f) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
12.3. SOLUO DE CIDO FOSFRICO (H
3
PO
4
) 10%
V/V. PARA DESTILADOR
12.3.1. Reagentes
a) cido fosfrico p.a.;
b) gua destilada ou deionizada.
12.3.2. Procedimento
a) Tomar 100 ml de cido fosfrico comercial (85%), diluir em gua
destilada e elevar a 1000 ml;
b) A caldeira do destilador deve ficar com a referida soluo por uma
noite;
c) Esta soluo pode ser reutilizada mais vezes;
d) Executar a operao em capela;
e) Transferir para recipiente apropriado e etiquetado.
13. ANLISES REALIZADAS NO LABORATRIO
DE BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
a) Matria Seca a 65
0
C (Pr-secagem) (MS 65C);
b) Matria Seca a 105C (Matria Seca Definitiva) (MS105C);
c) Matria Orgnica (MO);
168
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
d) Matria Mineral (MM);
e) Protena Bruta (PB);
f) Extrato Etreo ou Gordura (EE);
g) Fibra em Detergente Neutro (FDN);
h) Fibra em Detergente cido (FDA);
i) Fibra Bruta (FB);
j) Lignina cida (Lig);
k) Slica (SIL);
l) Fsforo (P);
m) Potssio (K);
n) Clcio (Ca);
o) Magnsio (Mg);
p) Nitrognio Amoniacal (NA);
q) Potencial de Hidrognio (pH).
13.1. CLCULO DAS ENERGIAS ATRAVS DE
EQUAES
a) Nutrientes Digestveis Totais (NDT);
b) Energia Metabolizvel (EM);
c) Digestibilidade da Matria Seca (DMS);
d) Energia Digestvel (ED);
e) Energia Lquida (EL);
f) Fibra Bruta (FB);
169
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
g) Extrativo No Nitrogenado (ENN);
h) Valor Relativo Nutricional (VRN)
14. REAGENTES USADOS NO LABORATRIO DE
BROMATOLOGIA E NUTRIO ANIMAL
a) Acetona;
b) Amylase;
c) cido actico glacial;
d) cido ascrbico;
e) cido brico;
f) cido bromdrico;
g) cido ctrico anidro
h) cido clordrico;
i) cido fluordrico;
j) cido ntrico;
k) cido perclrico;
l) cido sulfrico concentrado;
m) cido 1 amino naftol 4 sulfnico;
n) lcool etlico;
o) Azul de metileno;
p) Brometo de cetil trimetil amnio;
q) Cloreto de potssio;
r) Cloreto de brio;
170
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
s) Cloreto de clcio anidro;
t) Cloreto de mangans;
u) Cloreto de sdio;
v) Clorofrmio;
w) Cromato de potssio;
x) Decalina
y) Dicromato de potssio;
z) EDTA sal dissdico;
aa) ter de petrleo;
bb) ter Etlico;
cc) Etileno glicol;
dd) Fenolftalena;
ee) Ferricianeto de potssio;
ff) Ferro metlico;
gg) Fosfato cido de sdio anidro;
hh) Fosfato de potssio;
ii) Fosfato de sdio;
jj) Hidrxido de sdio;
kk) Hexano;
ll) Iodo metlico;
mm) Lauril sulfato de sdio;
nn) Molibdato de amnio;
171
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
oo) Nitrato de Clcio;
pp) Nitrato de Ferro III;
qq) Nitrato de Potssio;
rr) Nitrato de Prata;
ss) xido de lantnio;
tt) xido de magnsio;
uu) Ortofenantrolina;
vv) Permanganato de Potssio;
ww) Perxido de hidrognio 120V;
xx) Selnio de sdio;
yy) Selenito de sdio;
zz) Sub acetato de chumbo;
aaa) Sulfato de sdio anidro;
bbb) Sulfato de potssio;
ccc) Sulfato de zinco;
ddd) Sulfato de cobre heptaidratado;
eee) Tetraborato de sdio;
fff) Vermelho de metila;
ggg) Verde de bromocresol;
hhh) Zinco 20 Mesh.
172
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 20. Tabela de elementos qumicos importantes
Nmero
atmico
Elementos Smbolo
Peso
Atmico
Densidade
D4
20

Ponto de
Fuso
Ponto de
Ebulio
13 Alumnio AL 26,9815 2,7 658 2057
51 Antimnio Sb 121,75 6,68 630 1380
33 Arsnio As 74,9216 5,72 615 subl. -
7 Azoto N 14,0067 1,25 -210,5 -195,8
56 Brio Ba 137,34 3,5 710 1140
83 Bismuto Bi 208,980 9,8 271 1560
5 Boro B 10,811 3,33 2300 2550
35 Bromo Br 79,909 3,14 -7,3 58,78
48 Cdmio Cd 112,40 8,64 321 767
20 Clcio Ca 40,08 1,55 850 1240
6 Carbono C 12,01115 2,25 3652 -
82 Chumbo Pb 207,19 1134 327 1620
17 Cloro Cl 35,453 1,507 -100,5 -34,6
27 Cobalto Co 58,9332 8,9 1492 2900
29 Cobre Cu 63,54 8,92 1084 2336
24 Cromo Cr 51,996 6,92 1920 2480
16 Enxofre S 32,064 2,07 112,8 444,6
50 Estanho Sn 188,69 7,2 231,8 2270
38 Estrncio Sr 87,62 2,6 757 1150
26 Ferro Fe 55,847 7,86 1535 3000
9 Flor F 18,9984 1,695 -218 -188
15 Fsforo P 30,9738 1,82 44,1 280
31 Glio Ga 69,72 5,9 29,5 1983
1 Hidrognio H 1,00797 0,09 -262 -252,8
53 Iodo I 125,9040 4,93 113,6 184,34
3 Ltio Li 6,939 0,534 179 1336
12 Magnsio Mg 24,312 1,74 657 1107
25 Mangans Mn 54,9381 7,2 1221 1900
80 Mercrio Hg 200,59 13,558 -38,8 356,58
42 Molibdnio Mo 95,94 10,2 2622 4800
28 Nquel Ni 58,71 8,9 1453 2900
79 Ouro Au 196,967 19,25 1063 2600
8 Oxignio O 15,9997 1,429 -218,7 -182,68
46 Paldio Pd 106,4 11,97 1555 2200
78 Platina Pt 195,09 21,45 1773 4300
19 Potssio K 39,102 0,86 63,5 760
47 Prata Ag 107,870 10,5 960 1950
34 Selnio Se 78,96 4,26 220 688
14 Silcio (crit.) Si 28,086 2,4 1414 2355
11 Sdio Na 22,9898 0,97 97,7 880
81 Tlio Tl 204,37 11,84 303 1457
52 Telrio Te 127,60 6,24 452 1390
22 Titnio Ti 47,90 4,4 1800 > 3000
92 Urnio U 238,09 19,0 1689 -
23 Vandio V 50,942 6,07 1726 > 3000
74 Volfrmio W 183,85 19,3 3380 5900
30 Zinco Zn 65,37 7,1 419,4 907

Fonte: Tabela auxiliar MERCK (1971).
173
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA 21. Concentraes usuais de diversos cidos comerciais

Elementos
% em
peso
Densidade
D20
4
Grau
Baum

Normalidade*
cido actico glacial 96 1,06 8 17
cido actico glacial 99-100% 99-100 1,06 8 18
Acido actico diludo 30 1,04 5,4 5
Acido clordrico 25 1,12 16 8
cido clordrico conc. (1,16) 32 1,16 20 10
cido clordrico conc. (1,18) 36 1,18 22 12
cido clordrico fumegante 38 1,19 23 12,5
cido frmico 98-100 1,22 26 26
cido fosfrico 25 1,15 19 9
cido fosfrico conc. (1,71) 85 1,69 59 45
cido fosfrico conc. (1,75) 89 1,75 62 48
cido ntrico 25 1,15 18,6 5
cido ntrico conc. 65 1,40 41 14
cido ntrico fumegante ca.99% 1,51 49 21
cido sulfrico conc. 95-97 1,84 66 36
cido sulfrico diludo 16 1,11 14 4
cido sulfrico fumegante aprox.
65% SO3
- 1,99 72 -
Anidrido actico
Erg. B. 6
90 1,07 10 -


Fonte: Tabela auxiliar MERCK (1971).
*Valores aproximados.
174
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
bromatolgicos
TABELA22. Indicadores de cidos e bases.

Indicador
Zona de
viragem
ph

Mudana de cor
Azul de timol 1,2 2,8 Vermelho amarelo
Prpura de m-cresol 1,2 2,8 Vermelho amarelo
4-Dimetilaminoazobenzeno 2,9 4,0 Vermelho alaranjado-amarelado
Azul de bromofenol 3,0 4,6 Amarelo violeta-avermelhado
Vermelho congo 3,0 5,2 Violeta-azulado alaranjado-avermelhado
Alaranjado de metila 3,1 4,4 Vermelho alaranjado-amarelado
Verde de bromocressol 3,8 5,4 Amarelo azul
Indicador misto 5 Merck 4,4 5,8 Violeta-avermelhado verde
Vermelho de metila 4,4 6,2 Vermelho amarelo-alaranjado
Tornassol 5,0 8,0 Vermelho azul
Prpura de bromocressol 5,2 6,8 Amarelo prpuro
Vermelho de bromofenol 5,2 6,8 Amarelo-alaranjado prpura
Azul de bromotimol 6,0 7,6 Amarelo azul
Vermelho de fenol 6,4 8,2 Amarelo vermelho
Vermelho neutro 6,8 8,0 Vermelho-azulado amarelo-alaranjado
Vermelho de cresol 7,0 8,8 Amarelo prpura
Prpura de m-cresol 7,4 9,0 Amarelo prpura
Azul de timol 8,0 9,6 Amarelo azul
Fenolftalena 8,2 9,8 Incolor violeta-avermelhado
Timolftalena 9,3 10,5 Incolor azul
Amarelo de alizarina GG 10,0 12,1 Amarelo claro amarelo acastanhado
Azul de psilon 11,6 13,0 Alaranjado violeta

Fonte: Tabela auxiliar MERCK (1971).
175
Mtodos de anlises bromatolgicos de alimentos: Mtodos fsicos, qumicos e
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