Determinacin de hierro en harina de trigo por espectrofotometra Jorge Gonzlez Chan 8-808-2430 Principio del mtodo Una muestra

representativa se convierte en cenizas. El residuo se disuelve en cido y se diluye a un volumen conocido. Se toma una alcuota de esta solucin para que reaccione con ortofenantrolina, la cual forma un complejo con el hierro presente. Se mide la absorbancia de la solucin resultante y se convierte este valor en concentracin de hierro a travs del uso de una curva de calibracin. Alcance del mtodo Este mtodo es aplicable virtualmente a todos los cereales y productos derivados de cereales (harinas, etc.), y muchos otros productos alimenticios. Importancia La deficiencia de hierro est causando serios daos al desarrollo econmico y social, a travs de defectos congnitos, disminucin de la capacidad laboral y un incremento de la susceptibilidad a las enfermedades infecciosas. La causa principal en nios y mujeres en edad reproductiva, en los pases en desarrollo, es la ingesta inadecuada de hierro, el cual se encuentra normalmente en forma de hierro hemo y hierro no hemo. La fortificacin incluye la adicin de nutrientes a los alimentos para mantener o mejorar la calidad de la dieta. La fortificacin de los alimentos ha demostrado ser una medida preventiva, buena y adecuada para controlar la anemia por deficiencia de hierro a largo plazo. La fortificacin de la harina de trigo con hierro es una forma atractiva para controlar la anemia por deficiencia de hierro en muchos pases, incluyendo a Panam, como lo establece la norma nacional DGNTI COPANIT 25 389 99 Harina y cereales, harina de trigo, especificaciones; donde seala tambin que la harina producida en nuestro pas debe contener una concentracin mnima de hierro de 60,0 mg / kg. Analizar el contenido de hierro en la harina de trigo determina si est presente el nivel requerido de hierro en la harina fortificada, lo cual es crtico para un programa de fortificacin de harina. Interferencia Como el hierro se determina a travs de la formacin de un complejo de Fe (II) con ortofenantrolina, no hay interferencias significativas con otros iones, ya que a las condiciones de pH de la determinacin, est favorecida la formacin del complejo con hierro, en lugar de la de otros iones. Uso de cada reactivo 1. Solucin de ortofenantrolina: se utiliza para formar un complejo con el Fe (II), que es de color rojo. 2. Solucin estndar de hierro (II): es la solucin madre para preparar los estndares de calibracin para generar la curva que permitir determinar la concentracin de hierro en la muestra.

3. Solucin de clorhidrato de hidroxilamina: su funcin es ajustar el pH de medio en que se encuentra el analito. 4. Solucin de buffer de acetato: se utiliza para mantener el pH del medio en que se dar la reaccin entre el hierro (II) y la ortofenantrolina. Listado de materiales y reactivos Reactivos 1. Solucin de ortofenantrolina: disolver 0,1 g de ortofenantrolina en 80 mL de agua aproximadamente, a 80 C, enfriar y diluir a 100 mL. Almacenar en un frasco mbar en refrigeracin. (Esta solucin es estable por varias semanas). 2. Solucin estndar de hierro 10 g Fe / mL: hay dos opciones para prepararla: - Disolver 0,1 g de cable de hierro grado analtico en 20 mL de HCl concentrado y 50 mL de agua, y diluir a 1 litro. Luego diluir 100 mL de esta solucin a 1 litro. - Disolver 3,512 g de Fe(NH4)2(SO4)2 6 H2O en un poco de agua, aadir dos gotas de HCl concentrado, y diluir hasta 500 mL. Luego diluir 10 mL de esta solucin a 1 litro. 3. Solucin de clorhidrato de hidroxilamina: disolver 10 g de NH2OHHCl en un poco de agua y diluir hasta 100 mL. Almacenar en un frasco mbar, en refrigeracin. (Esta solucin es estable por varias semanas). 4. Solucin de buffer de acetato: Disolver 8,3 g de acetato de sodio anhidro (previamente secado a 100 C) en un poco de agua, aadir 12 mL de cido actico, y diluir hasta 100 mL (puede ser necesario redestilar el cido actico y purificar el acetato de sodio por recristalizacin con agua, dependiendo de la cantidad de hierro presente). 5. Soluciones estndares de hierro para calibracin: Colocar alcuotas de la solucin estndar de 10 g Fe / mL de acuerdo a la siguiente tabla, en matraces volumtricos de 100 mL, aadir 2 mL de HCl concentrado a cada una, y diluir. Mezclar vigorosamente invirtiendo el frasco 10 20 veces. Usar 10 mL de cada una de estas soluciones estndar y continuar a partir del paso 8 de la seccin de procedimiento. mL tomados de la solucin de 10 g Fe/mL Concentracin final de Fe (ppm) 0 0 2 0,2 5 0,5 10 1,0 15 1,5 20 2,0 25 2,5 30 3,0 35 3,5 40 4,0 45 4,5

Procedimiento 1. Pesar con exactitud entre 2 10 g de muestra (dependiendo de la concentracin de hierro esperada) en un crisol limpio. 2. Colocar en un plato calentador o bajo una lmpara de luz infrarroja (opcional). 3. Convertir la muestra a cenizas dejndola una noche en una mufla a 550 C. 4. Remover el crisol de la mufla y enfriar a temperatura ambiente. (Empezar a preparar la solucin blanco a partir de este punto como lo hace con la muestra). 5. Aadir 5 mL de HCl concentrado cuidadosamente, enjuagando por porciones el crisol, luego evaporar a sequedad en un bao mara. 6. Disolver el residuo aadiendo 2 mL de HCl concentrado, medidos con exactitud; cubrir con un vidrio reloj y calentar 5 minutos en un bao mara. 7. Enjuagar el vidrio reloj con agua, filtrar cuantitativamente en un matraz volumtrico de 100 mL, aforar, y agitar vigorosamente. 8. Pipetear una alcuota de 10 mL y colocarla en un matraz volumtrico de 25 mL, y aadir 1 mL de clorhidrato de hidroxilamina en solucin. Agitar vigorosamente. 9. Despus de 5 minutos, aadir 5 mL de solucin buffer y 1 mL de ortofenantrolina, aforar. Agitar vigorosamente. 10. Esperar 30 minutos, luego medir la absorbancia de las muestras, soluciones estndar, y solucin blanco, en un espectrofotmetro a 510 nm. Nota: a. Si la intensidad del color es demasiada, hacer una dilucin apropiada de la solucin de las cenizas y proceder hasta el paso 8. b. El color producido se mantiene por varias horas. Evitar exponer a la luz solar directamente.

Clculos 1. Graficar absorbancia vs concentracin (en ppm) para las solucione estndar. 2. Obtener la concentracin de las soluciones muestra a partir de la curva estndar, restndole el valor del blanco a cada una. 3. El contenido de hierro est expresado como: ( donde )

= concentracin de la solucin muestra (en ppm) = factor de dilucin (si lo hay) del paso 10 nota a. = peso de la muestra en gramos

Bibliografa - AACC International. Approved methods of analysis, First Edition. Method 40-41A. Iron Quantitative method. Approved May 5, 1960. AACC International, St. Paul, MN, USA. - Hosseinimehr, S.J.; Bagheri, G.; Gholipoor, M.; and Mokarami, H. 2007. Comparative spectrophotometric and atomic absorption determination of iron content in wheat flour. Journal of Biological Sciences. 7(2): 451-453. - Norma nacional DGNTI-COPANIT 25-389-99: Especificaciones para harina y cereales, harina de trigo.

Preguntas 1. Qu es la fortificacin? 2. Para qu sirve la fortificacin de los alimentos con hierro? 3. Cul es la norma nacional que regula la fortificacin con hierro para la harina de trigo? 4. Qu reactivo forma un complejo con el hierro (II) para determinar ste espectrofotomtricamente?