Instituto Tecnolgico de la Paz

Ingeniera Bioqumica

Anlisis Instrumental
Ingeniera Bioqumica

M.C. Jesus Ignacio Gonzalez Garcia Instituto Tecnologico de la Paz

M.C. Jess Ignacio Gonzlez Garca

Unidad 1
PRINCIPIOS DEL ANLISIS INSTRUMENTAL

1.1 METODOS CLASICOS E INSTRUMENTALES 1.1.1 Relacin de la qumica analtica clsica e instrumental El anlisis qumico se hizo necesario desde que el hombre empez a procesar materiales y en general a manejar compuestos y elementos qumicos. Para hacer esto fue necesario, en ocasiones, la purificacin o separacin de los componentes (analitos) con los que se quera trabajar. As fueron diseados o desarrollados una serie de mtodos que ayudaban a este fin como la precipitacin, sublimacin, destilacin, extraccin con solventes, etc. Muy pronto esto tomo cierto grado de desarrollo y sofisticacin ya que en ocasiones no solo se requera identificar a un analito, si no tambin saber en que proporcin o concentracin exista, y as naci la qumica analtica, una de las 5 ramas o campos en los que se divide la qumica (adems de la orgnica, inorgnica, fisicoqumica y bioqumica), aunque en la actualidad son varias las disciplinas que interaccionan entre si dando lugar a campos como la organometlica, la bioanaltica, etc. El anlisis qumico proporciona informacin sobre la composicin de una muestra de material a travs de un mtodo o protocolo que se compone de una serie de pasos definidos para sacarle informacin a una muestra. Si el resultado del anlisis solo nos indica de que est compuesto un material, o que tipo de grupo funcional tiene o que caractersticas estructurales, etc., se denomina anlisis cualitativo.
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Si por el contrario obtenemos datos numricos como porcentaje de composicin, p p m , mg, etc. entonces se denomina anlisis cuantitativo. En ambos tipos de anlisis, la informacin necesaria es obtenida por medio de la medida de una propiedad fsica o qumica que sea caracterstica con el los componentes de inters, y a esta seal se le denomina "SEAL ANALITICA". Hay muy variadas seales analticas que se pueden utilizar como lo son; la precipitacin ante un reactivo, el vire de color, la absorcin, dispersin o emisin de luz, la conductividad elctrica, ndice de refraccin, etc. Lo que da origen a que los Mtodos Analticos se dividan en: a) Clsicos b) Instrumentales En los clsicos, generalmente, primero se separan los analitos de inters de una muestra por medio de algn mtodo como la extraccin, cristalizacin o destilacin y posteriormente se determina la identidad del mismo por medio de una caracterstica como un color desarrollado, precipitacin y pesado, Pf, Peb, olores, solubilidades, volmenes de reactivos usados, etc. Estos mtodos son utilizados en anlisis macro, trabajo de campo o cuando no se cuenta con el equipo necesario. Si el anlisis es con fines cuantitativos entonces se hace uso de la gravimetra o la volumetra para establecer una concentracin. Estos mtodos se estudian en los cursos introductorios de la qumica analtica denominada qumica analtica en solucin y se denominan mtodos hmedos. Anlisis cualitativo: Que es lo que esta presente? Anlisis cuantitativo: Cuanto esta presente? El uso de otras seales Analticas (ya conocidas desde antes) como la absorcin, dispersin o emisin de una radiacin electromagntica (hv), cambios de espn, relaciones masa/carga, etc solo fue posible con el desarrollo de la tecnologa, y en especial de la electrnica. Aunado a esto, el desarrollo de las separaciones cromatogrficas como mtodo mtodos de separacin o mtodos analtico hace que estas sean incluidas en mtodos modernos que conforman los denominados mtodos instrumentales de anlisis, motivo del presente curso. 1.1.2 Clasificacin de los mtodos instrumentales En los mtodos instrumentales el analito es excitado o estimulado mediante la aportacin de cierta cantidad de energa proporcionada por una fuente en particular; posteriormente se mide una seal analtica para establecer la identidad o la concentracin del mismo. Los mtodos instrumentales se pueden clasificar en funcin de la propiedad fsica o qumica en la que se fundamentan y el nombre del mtodo en ocasiones se compone del fenmeno fsico combinado, por ejemplo, con la regin del espectro en la que trabaja; en otros casos, el nombre no lleva implcito ninguna de estas caractersticas. Cada propiedad fsica puede generar uno o mas mtodos en su aplicacin: FENOMENO
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TIPO DE METODOS
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Emisin gamma Absorcin, emisin, fluorescencia y difraccin de rayos X Transiciones de electrones de enlace Absorcin de radiacin ultravioleta en el vaco (principalmente enlaces transiciones de electrones de enlace y no enlace Absorcin, emisin y fluorescencia de radiacin UV-Vis Rotacin y vibracin molecular Absorcin y dispersin Raman e infrarrojo Rotacin de molculas Absorcin de microondas Cambios de estados de energa de espn Resonancia de espn electrnico electrnico en un campo magntico Cambios de energa de espn de ncleos en un campo magntico Resonancia magntica nuclear

Transicin de electrones internos Transiciones de electrones internos

La clasificacin tambin puede hacerse , mas especficamente, por medio de la seal analtica generada:

Seal analtica Emisin de radiacin

Mtodo Instrumental Espectroscopia de emisin (rayos x, UV, visible, de electrones, Auger); fluorescencia, fosforescencia y luminiscencia (rayos x, UV, visible)

Absorcin de radiacin

Espectroscopia (rayos x, UV, visible, IR); espectroscopia foto acstica; RMN y resonancia de espn electrnico.

Dispersin de la radiacin

Turbidimetria, nefelometra y espectroscopia Raman

Refraccin de la radiacin

Refractometria; interferometria

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Seal analtica Difraccin de la radiacin

Mtodo Instrumental Difraccin de rayos x y de electrones

Rotacin de la radiacin

Polarimetra; dispersin rotatoria ptica; dicrosmo circular

Potencial elctrico

Potenciometria; cronopotenciometria

Carga elctrica

Coulombimetria

Corriente elctrica

Polarografia; amperometria

Resistencia elctrica

Conductimetria

Razn masa/carga

Espectroscopia de masas

Velocidad de reaccin

Mtodos cinticos

Propiedades trmicas

Conductividad trmica y mtodos de entalpia

Radiactividad

Mtodos de activacin y de dilucin isotpica

1.1.3 Componentes de los instrumentos de medicin En los mtodos instrumentales de anlisis la informacin que se obtiene de los tomos, iones, molculas o compuestos, procede de las seales analticas relacionadas con las propiedades fsicas o qumicas de los mismos, sin embargo estas seales no son interpretables por nuestros sentidos por lo que requerimos del uso de instrumentos o equipos especiales que las transformen en una forma comprensible o medible por el analista; de hecho, un instrumento analtico es una interface que hace la comunicacin entre entre analitos y analistas.
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Los componentes de un equipo analtico dependen del tipo de fenmeno que se esta midiendo o de la seal analtica en observacin, es decir, si es una radiacin electromagntica, una corriente elctrica, un voltaje, una flama, etc pero en la mayora de los casos se requiere un generador de seales o una fuente de energa para generar las seales (en otros casos el mismo analito genera la seal, pH, un dispositivo que la convierta o interprete (transductor de entrada), un procesador de la seal (generalmente un amplificador) y un transductor de salida (convierte la seal procesada en una seal entendible por el analista).

1.1.4 Dominio de los datos Los dispositivos analticos transforman las seales de una forma a otra que sea manejable por el analista y as se obtenga la informacin que debe ser proporcional a la propiedad fsica o qumica que se esta midiendo. La informacin obtenida por las propiedades medidas debe ser codificada para su interpretacin. A esta codificacin se le denomina dominio de los datos. Los dominios de los datos se clasifican en: dominios no elctricos y dominios elctricos. Dominios no elctricos: cuando se miden propiedades fsicas o qumicas como la longitud, densidad, composicin qumica, intensidad de luz o color, volumen, presin, etc. Este dominio de datos esta asociado, generalmente a mtodos clsicos aunque la mayor parte de estas mediciones, en la actualidad se encuentran asociadas a dispositivos electrnicos que hace que estos dominios de datos estn asociados a dominios elctricos. La obtencin o manejo de datos de dominio puramente no elctrico se encuentra en franca extincin debido al avance de los dispositivos modernos. Dominios elctricos: la seal se pasa de una forma a otra codificndola como una seal elctrica. Existen tres modalidades de codificar la informacin como una cantidad elctrica generando varios dominios de este tipo: Dominios analgicos, Dominios de tiempo y Dominios digitales. En un anlisis se pueden combinar dominios elctricos con dominios no elctricos como en los digitales que tienen que arrojar un numero. Dominios analgicos: la informacin se codifica como la magnitud de una carga elctrica (carga, potencia e intensidad de corriente). Son continuas en amplitud y tiempo y se pueden medir continuamente o en determinados tiempos. Dominios del tiempo: la informacin se guarda como variaciones de la seal con respecto al tiempo, es decir como se comportan los mximos y mnimos en diferentes tiempos. En estos dominios se utiliza la frecuencia y los periodos. Los dominios elctricos del tiempo son frecuencia, amplitud y fase. Dominios digitales: las seales se codifican en dos niveles y actan sobre dispositivos que solo tienen dos posiciones posibles, por ejemplo una lmpara solo puede estar encendida o apagada, una palanca arriba o abajo, un diodo emitiendo o no emitiendo luz, una seal de nivel lgico solo puede ser HI o LO. La interpretacin de que es abierto o cerrado o que es HI o LO es una decisin arbitraria dependiente de un nivel de medicin dependiente del
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equipo utilizado o del experimento. Por ejemplo cuando se rebasan mediciones en un nivel o una cantidad de veces con un contador que hace que aparezca un numero en una pantalla o una alerta. Los dominios digitales son computo, en serie, en paralelo y numero. Aqu la codificacin es generalmente en nmeros binarios (base 2) ya que es mas eficiente que hacerlo en serie. Esta codificacin puede accionar, por ejemplo diferentes diodos. PARAMETROS DE CALIDAD DE UN METODO ANALITICO 1.2.1 Parmetros cualitativos Existe una gran diversidad de mtodos analticos instrumentales que hacen difcil en ocasiones la decisin del uso de un mtodo instrumental u otro para resolver un problema analtico. Los equipos tienen criterios cuantitativos que permiten reducir el numero de instrumentos a utilizar en funcin del problema a resolver; estas caractersticas se dan en trminos numricos y se denominan parmetros de calidad. Una vez que los criterios cuantitativos reducen la eleccin se puede recurrir a los criterios cualitativos para tomar la decisin.

Parmetros cualitativos 1. Velocidad

2. Facilidad y comodidad

3. Habilidad del operador

4. Costo y disponibilidad

5. Costo unitario

1.2.2 Parmetros cuantitativos

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Son criterios numricos que se deben considerar en funcin de las necesidades del anlisis y de la informacin que se desea extraer.

Criterio 1. Precisin

Parmetro de calidad Desviacin estndar absoluta, desviacin estndar relativa, coeficiente de variacin, varianza

2. Exactitud

Error absoluto, error relativo

3. Sensibilidad

Sensibilidad de calibracin, sensibilidad analtica

4. Limite de deteccin

Blanco mas tres veces la desviacin estndar del blanco

5. Intervalo de concentracin

Concentracin entre el limite de cuantificacin (LOQ) y el limite de linealidad (LOL)

6. Selectividad

Coeficiente de selectividad

1.3 RELACION SEAL-RUIDO Cuando se realiza una medicin analtica se obtienen generalmente dos componentes, una que lleva la informacin del analito que estamos buscando y otra que contiene informacin indeseable que nos afecta la medicin de muy diversas formas. 1.3.1 Fuentes de ruido Hay bsicamente dos tipos de ruidos que afectan una medicin analtica: el ruido qumico y el ruido instrumental. Ruido qumico: hay muchas variables o factores que pueden afectar el ambiente qumico de una muestra. Por el principio de Le Chatelier, la posicin de un equilibrio qumico se puede ver afectada, por ejemplo, al variar la temperatura o la presin, por la fluctuacin en la humedad relativa, as como por vibraciones que pueden afectar la estructura de slidos, la variacin en la intensidad de luz que afecta a sustancias sensibles a la misma, de la misma
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forma que la presencia de humos que interactan con muestras o reactivos. Estos son algunos entre muchos otros factores que son considerados como fuentes de ruido qumico. Ruido Instrumental: este es el tipo de ruido generado en una medicin por la afectacin de los diferentes componentes del equipo instrumental utilizado para realizar la misma. Todos los componentes de un equipo (fuentes de energa, transductores, procesadores de seales, etc.) pueden ser susceptibles de ser afectados por ruidos de diversas fuentes, dependiendo del componente en cuestin. Al final el ruido detectado o medido que aparece en el equipo va a ser la resultante de la mezcla de todos estos ruidos, lo que va a dificultar la caracterizacin del tipo de ruido y por lo tanto el control sobre el mismo. Sin embargo, existen algunos ruidos instrumentales que son reconocibles y que es recomendable identificar sus caractersticas para tratar de minimizarlos. Los ruidos identificables son: el ruido trmico (o ruido de Johnson), el ruido de disparo, el ruido de parpadeo (o ruido 1/f) y el ruido ambiental. 1. Ruido trmico: es debido a la agitacin trmica de los electrones u otros transportadores de carga en los diversos dispositivos como resistencias, condensadores, detectores de radiacin o celdas electroqumica, entre otros. Este tipo de ruido genera variaciones de voltaje por la heterogeneidad de la carga y solo es posible que desaparezca en el cero absoluto, con ausencia de vibraciones. 2. Ruido de disparo: este se presenta cuando hay una corriente que genera movimiento de electrones o partculas cargadas a travs de una unin. Ejemplos de esto se presentan en los circuitos electrnicos con interfaces p y n (con dopaje con indio y arsnico), en interfaces entre electrodos (de vidrio), etc. 3. Ruido de parpadeo: las causas de este ruido no son del todo conocidas pero se reconocen por su dependencia de la frecuencia y su valor es inversamente proporcional a esta, razn por la que se le denomina tambin como 1/f. Este ruido es muy significativo para frecuencias menores a 100 Hz. Este ruido se observa en amplificadores de corriente y en galvanmetros. 4. Ruido ambiental: este tipo de ruido proviene del entorno. Entre mas radiaciones electromagnticas haya en los alrededores, producidas por lneas de alimentacin de corriente alterna, emisores de ondas de radio o televisin, sistemas de encendido de motores de gasolina, conmutadores de arco elctrico, alumbrado, perturbaciones ionosfricas, entre muchos otros, este ruido se convierte en significativo ya que en los instrumentos analticos cada conductor funciona como una antena capaz de detectar estas radiaciones y convertirla en una corriente elctrica. 1.3.2 Aumento de la relacin seal-ruido Regularmente la seal analtica es muy superior al ruido lo que hace relativamente fcil mantener a este ultimo bajo control tomando algunas medidas en funcin del conocimiento de los tipos de ruidos principales y reconocibles. A pesar de esto, finalmente, la relacin seal-ruido afecta la precisin de una medida, por lo que es conveniente aumentar esta relacin. Existen dos formas de hacerlo, a travs de hardware y/o a travs de software.

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En el diseo de los equipos (hardware) actualmente se estn incorporando componentes como filtros, cortadores, escudos, moduladores y detectores sincrnicos que eliminan o atenan al ruido y que no afectan a la seal analtica. Por otro lado, existe software con algoritmos digitales que extraen ruidos despus de convertir la seal de salida de analgica a digital, utilizando para tal efecto el uso de una computadora. 1.4 CALIBRACION DE LOS METODOS INSTRUMENTALES Para tener las certeza de que los resultados obtenidos con un mtodo instrumental son correctos, el mtodo debe ser calibrado relacionando la respuesta del mismo (la seal analtica) con la concentracin del analito. Existen diferentes maneras o mtodos de realizar la estandarizacin de los mtodos instrumentales, dependiendo, principalmente, de la composicin de la matriz en la que se encuentra el analito. Los principales mtodos, que no los nicos, para la calibracin son: - Mtodo de Comparacin de estndares - Mtodo del Estndar externo - Mtodo de la Adicin de estndar - Mtodo del Patrn interno La estandarizacin se puede hacer hacer por un camino muy simple utilizando un solo punto (una solucin nica del estndar de concentracin conocida) o se puede realizar haciendo una estandarizacin de puntos mltiples (lo mas deseable) en la que se utilizan al menos tres soluciones del estndar a diferente concentracin. 1.4.1 Comparacin de estndares En la variante de este mtodo denominada de Comparacin directa se realiza la comparacin de una propiedad del analito con estndares o patrones. La propiedad probada debe ser muy similar entre ambos. Como ejemplo de estos podemos considerar el color producido por una reaccin aplicada tanto al analito como al estndar. En otra variante, el analito se hace reaccionar con un reactivo estandarizado en una reaccin estequiometrica. 1.4.2 Estndar externo En este mtodo, el estndar se prepara por separado de la muestra. Es una tcnica utilizada cuando la matriz no interfiere en la medicin y existen dos variantes: haciendo una sola medicin del estndar a cierta concentracin (estandarizacin de un solo punto), para encontrar la constante de proporcionalidad que se aplicara posteriormente al analito problema o utilizando soluciones de estndar con las que se realiza una curva denominada curva patrn o curva estndar o curva de calibracin. Se utiliza un blanco que emula la matriz, para corregir la seal medida. En el primer caso se prepara una solucin de concentracin conocida del estndar, Cst, y se mide su seal analtica, Sst. Con estos datos se calcula el valor de k (la sensibilidad del mtodo).

k=
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Sst Cst
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Ya conocido el valor de k se puede sustituir en la formula el valor de la seal analtica del analito, Sa, despejando encontramos Ca. Este es un mtodo no muy recomendable ya que en la lectura inciden todo tipo de errores, tanto determinados como indeterminados, y as se determina k. Cualquier incertidumbre en el valor de k incide directamente en la medicin de la concentracin del analito. Ejemplo: un mtodo espectroscpico para la determinacin cuantitativa de los niveles de Pb+2 en sangre da una medicin de 0.474 para el estndar, Sstand, de plomo de una concentracin de 1.75 ppb. Cuantas partes por billn de Pb+2 hay en una muestra de sangre si su lectura, Ssamp, es de 0.361? En la estandarizacin de estndar externo de puntos mltiples se construye una curva de calibracin utilizando diversas soluciones del estndar a diferente concentracin. Si la curva de calibracin resultante es lineal (las mas recomendables), la pendiente nos dar el valor de k. Si la curva patrn es no lineal el problema es mas complejo y requiere un mayor numero de mediciones o soluciones estndar, y el valor de k (sensibilidad del mtodo), es funcin de la concentracin del analito, su valor ser mayor cuando la concentracin del analito es pequea y decrece continuamente conforme la cantidad del analito aumenta; el valor de k en cualquier punto es la pendiente de la curva en ese punto. La curva se realiza en el intervalo de concentraciones tiles, en las que se va a encontrar la concentracin del analito. El problema en este tipo de estandarizacin es de que las mediciones del estndar y el analito podran variar en gran medida si la matriz en la que se encuentran ambos (estndar y analito)presenta diferencias. Ejemplo: un mtodo espectroscpico para la determinacin cuantitativa de los niveles en sangre de Pb+2 da una curva lineal normal de calibracin para la cual Sstand = (0.296 ppb-1 ) x Cs + 0.003 Cual es el nivel de plomo (en ppb) en una muestra de sangre si Ssamp es de 0.397? En el mtodo del estndar interno se utiliza una sustancia de referencia que tenga caractersticas fsico-qumicas similares al analito, la cual es adicionada a las soluciones estndar, blanco y muestra. En este caso se mide la relacin que existe entre la respuesta del analito y la respuesta del estndar (el cual se encuentra en las mismas condiciones de deteccin en relacin a reactivos, equipo, presin, pH, etc.). Se hace una curva con la concentracin en el eje x y la relacin de respuestas en el eje y. Cuando se trabaja con matrices muy complejas, difciles de duplicar, se utiliza el mtodo de las adiciones de estndar en el cual lo que se agrega es el mismo analito en forma de una solucin estndar. Se utilizan dos porciones de la muestra, una se mide normalmente y la otra es adicionada con la solucin estndar del analito (mtodo de solucin estndar en un solo punto) y se calcula la concentracin de la muestra suponiendo la relacin lineal entre la respuesta y la concentracin. Una variante es el mtodo de adiciones mltiples en el que a varias alcuotas del analito se les agrega cierta cantidad de solucin estndar, para con estas obtener una curva de calibracin de adiciones mltiples. Este ultimo mtodo, aunque implica mas trabajo y
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tiempo esto es compensado por la eliminacin de efectos de interferencia complejos y en ocasiones desconocidos por el analista. 1.5 PROPIEDADES DE LAS RADIACIONES ELECTROMAGNETICAS Una parte muy importante de los mtodos instrumentales son los denominados mtodos espectroscpicos o espectrometricos, originalmente basados en la interaccin entre la materia y una radiacin electromagntica, pero en la actualidad el termino agrupa tambin a mtodos en los que se hace interactuar a la materia con otras formas de energa como haces de electrones, ondas acsticas o haces de iones. 1.5.1 Dualidad onda-partcula Las radiaciones electromagnticas, o luz, son ciertas formas o manifestaciones de la energa que se trasmiten a la distancia y a velocidades muy altas pero finitas y que, a diferencia del sonido, no requieren de un medio para trasmitirse por lo que lo pueden hacer en el vaco. Todas las radiaciones electromagnticas tienen la misma velocidad en el vaco y su velocidad varia en otros medios debido a las interacciones con el mismo. Estas radiaciones electromagnticas, en funcin de su comportamiento o propiedades, pueden ser descritas tanto como ondas como partculas, es decir presentan un comportamiento dual. El comportamiento ptico de las radiaciones electromagnticas, como la difraccin, es mejor descrito por su comportamiento ondulatorio, en tanto que cuando interacciona con la materia y se observan los fenmenos de absorcin o emisin es el comportamiento corpuscular, como partcula, fotn, el que mejor la describe. Son varias las formas como las radiaciones electromagnticas se manifiestan, siendo la luz visible la mas comn, pero tambin tenemos otras como lo es los rayos X, radiacin infrarroja, radiacin ultravioleta, rayos gamma, ondas de radio, etc. El termino luz, aunque originalmente fue utilizado para referirse a la radiacin visible para el ojo humano, tambin se usa en las radiaciones del tipo ultravioleta e infrarrojo. 1.5.2 El espectro electromagntico Todas estas formas de radiacin o luz, en virtud de ser distintas manifestaciones del mismo fenmeno, se les agrupa en lo que se denomina "El espectro electromagntico", del cual la luz visible es solo una pequea porcin.

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Casi cada porcin del espectro electromagntico puede ser utilizada para algn mtodo espectroscpico, el nombre de los mismos depender del tipo de radiacin y el fenmeno que utilicemos. 1.5.3 Propiedades generales de las radiaciones electromagnticas Para entender, entonces, que es lo que diferenca a estas radiaciones, requerimos analizar sus propiedades estudindolas tanto desde el punto de vista clsico, como ondas, como desde el punto de vista cuntico, como partculas. Estas dos formas de analizar al mismo fenmeno no son excluyentes ya que en algunos casos es necesario utilizar un modelo y en otros, donde este modelo no funciona, como es el caso de la absorcin de energa, hay que recurrir al otro, aunque sabemos que en realidad la luz tiene propiedades y un comportamiento mecano-cuntico caracterstico.
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Desde el punto de vista ondulatorio, una radiacin electromagntica es una onda con comportamiento sinusoidal que presenta ciertas caractersticas y parmetros. La onda viajera transporta a la energa y consta de dos campos oscilantes en fase: uno elctrico y otro magntico el cual viaja perpendicularmente al primero (ngulo recto) en la direccin de la propagacin.

Esta es una representacin grfica de una radiacin monocromtica polarizada en un plano. La componente elctrica es, la mayor parte de las veces, la responsable de los fenmenos de interaccin con la materia que se utilizan en los mtodos pticos, y solo en contados mtodos (resonancia magntica nuclear, resonancia de espn electrnico) se utiliza la componente magntica. Los parmetros a considerar en una radiacin electromagntica vista como una onda son:

= Longitud de onda. Distancia entre dos crestas tamao de una onda completa (un ciclo). A = Amplitud. Altura de las crestas desde cero. P = Periodo. Tiempo necesario para que dos mximos mnimos (una onda completa) pasen por un punto fijo. = Frecuencia. Numero de ciclos u oscilaciones del campo que pasan por un punto dado por segundo. x 108 Cabe sealar que la velocidad de todas estas radiaciones en el vaco es de 2.99792 m/s (3x108 m s-1 cuando se redondea) y se representa por la letra C:

Cuando la radiacin viaja a travs de otro medio su velocidad disminuye y si la frecuencia () permanece constante (por lo tanto tambin su energa), lo que se modifica es la longitud de onda y, en ese caso se expresa como:
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Las unidades de la longitud de onda varan segn la regin espectral con la finalidad de trabajar principalmente con nmeros enteros: ngstrom (A = 10-10 m) en rayos X y ultravioleta corto, Nanmetro (nm = 10-9 m) para ultravioleta y visible, Micrmetro (m = 10-6 m) para infrarrojo, etc. Las unidades de frecuencia son cps (ciclos por segundo) mas correctamente Hz (Hertz) y s-1. Algunos mtodos utilizan el denominado numero de onda, el cual es el inverso o reciproco de la longitud de onda y sus unidades son cm-1. _ 1 = Otros trminos utilizados en el fenmeno ondulatorio de la luz son potencia (P) e intensidad (I), relacionados ambos con el flujo de energa de una fuente de radiacin electromagntica. Entendiendo al primer termino como flujo de energa por unidad de tiempo, en tanto que el segundo seria el flujo de energa por unidad de tiempo por rea. 1.5.4 Tipos de espectros Cuando tomos, iones o molculas se relajan a niveles de menor energa despus de ser excitados desprenden el exceso de energa en forma de radiaciones electromagnticas. Si estas radiaciones son caracterizadas en un espectroscopio, presentan lo que se denomina como espectros de emisin. Existen tres tipos de espectros de emisin: de lneas, de bandas (lneas encimadas no resueltas) y espectros continuos. Los primeros son los espectros que presentan los tomos de los elementos luego de ser excitados y emitir el exceso de energa en forma de radiacin. Si esta es descompuesta en un espectroscopio presentara solo ciertas lneas con una longitud de onda (o frecuencia) caracterstica y reproducible en todos los casos. Algunas sustancias presentan una serie de lneas muy cercanas en su longitud de onda que ocasiona que se vean como bandas de lneas. Esto es debido a subniveles vibracionales los cuales en ocasiones son difciles de resolver por algunos equipos de baja resolucin. Cuando algunas sustancias o materiales son llevadas a temperaturas elevadas, por ejemplo, al emitir luz y ser esta descompuesta presentan un espectro continuo con todas las longitudes de onda, como la luz blanca que presenta todos los colores del arco iris. Esta es la denominada radiacin de cuerpo negro y depende mas de la temperatura que del tipo de sustancia.

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Un caso aparte se presenta cuando se pasa radiacin electromagntica a travs de la materia la cual solo absorbe ciertas longitudes de onda dependiendo de la naturaleza de la misma. Si se pasa luz blanca a travs de la materia en estado gaseoso o en soluciona se absorbern selectivamente solo ciertas frecuencias y la luz resultante presentar un espectro con huecos donde estaban las frecuencias absorbidas. Podemos irradiar una muestra con las longitudes de onda de un rango especifico midiendo cual de estas son absorbidas. El resultado es lo que se denomina un espectro de absorcin el cual es un grfico de la absorcin de radiacin electromagntica en funcin de la longitud de onda o de la frecuencia. Es la huella dactilar para propsitos de identificacin.

Las sustancias presentan espectros de absorcin caractersticos, con uno o mas mximos y mnimos, por lo que son tiles en la identificacin o confirmacin de una especie qumica. El color de la solucin (en el visible) se relaciona con su espectro de absorcin, ya que una especie qumica puede absorber uno o mas colores y presentar soluciones con los colores complementarios.
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1.6 PROPIEDADES MECANO-CUANTICAS ELECTROMAGNETICA

DE

LA

RADIACION

Cuando la radiacin interacciona con la materia la radiacin puede ser absorbida y la muestra experimenta un cambio de energa. En estos casos el modelo ondulatorio ya no nos sirve y es necesario considerar a las radiaciones desde el punto de vista corpuscular, en funcin de su energa, por lo que recurriremos al modelo cuntico que nos dice que la luz esta formada por pequeos paquetes de energa denominados fotones. Cuando un fotn es absorbido por una muestra este es destruido y su energa pasa a esta. La energa esta cuantizada y todos los fotones de un tipo de radiacin tendrn la misma cantidad de energa la cual es diferente para los diferentes tipos de radiaciones. Las radiaciones, desde este punto de vista, se analizan desde el punto de vista de su energa, la cual es directamente proporcional a la frecuencia de la radiacin de acuerdo a la siguiente ecuacin: E = h donde h es una constante de proporcionalidad denominada constante de Planck la cual tiene diferentes valores en funcin de las unidades utilizadas: h = 6.63 x 10-34 joule s 6.63 x 10-27 erg s por lo tanto, una alta frecuencia implica indica una alta energa. Podemos relacionar a la energa de la radiacin con su longitud de onda con el numero de onda, que es el numero de ondas por centmetro, a travs de las siguientes ecuaciones:

Ejemplo: calcule el numero de onda de un haz de radiacin infrarroja con longitud de onda de 5.0 m y calcule la energa de los fotones de dicha radiacin y la energa de un mol de fotones de dicha radiacin:
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1.6.1 El efecto fotoelctrico El efecto fotoelctrico es el fenmeno que se presenta cuando la superficie de un metal es irradiada con luz de determinada frecuencia generando una corriente elctrica. El fenmeno fue descubierto por Hertz a finales del siglo XIX cuando coloco dos electrodos en un tubo de vaco y los irradi con diferentes radiaciones electromagnticas observando que algunas generaban un paso de corriente (en forma de chispa) desde el ctodo al nodo. Observo que no todas las frecuencias generaban esta corriente ni aun incrementando la intensidad de la misma, siendo este una de los escollos de la fsica clsica. En 1905 Einstein encontr una respuesta a esto a travs de los cuantos de energa de Planck enunciando que las radiaciones electromagnticas estaban compuestas por pequeos paquetes de energa a los que denomino fotones y estos tenan una energa fija en valores enteros de hv. Cuando uno de estos fotones choca o golpea a un electrn de una tomo el fotn va a transferir su energa al electrn y si esta es suficiente para arrancarlo del tomo y generar una corriente elctrica. Si los fotones no tienen la energa necesaria para arrancar al electrn no se genera la corriente ni aun incrementando la intensidad ya que esta solo aumenta el numero de fotones pero no la energa de los mismos que es una dependencia de su frecuencia. Fue hasta 1916 que Millikan hizo mediciones precisas del fenmeno y con esto confirmo lo expresado por Einstein. Millikan encontr que para cada tipo de metal haba un frecuencia umbral abajo de la cual los electrones no podan ser arrancados (aplicaba un potencial negativo al nodo hasta que la corriente se hacia cero). Arriba de esta frecuencia umbral los electrones adquiran la energa en exceso y la convertan en energa cintica. 1.6.2 Estados de energa de la materia Como resultado de la teora cuntica de Planck, considerando la cuantizacion de la energa, fue posible, gracias a aportaciones posteriores, explicar los espectros de absorcin y de emisin de la materia en base a los postulados de la teora. De esta teora se establece que la materia (tomos, iones o molculas) solo puede existir en ciertos estados discretos de energa. Una sustancia puede pasar de un estado a otro absorbiendo o emitiendo energa por un valor igual al diferencial de los dos estados. Si el cambio de estado se realiza absorbiendo o emitiendo una radiacin electromagntica la longitud de onda o la frecuencia se deber relacionar energticamente con la diferencia entre los estados a travs de la siguiente ecuacin: C E1 E0 = h = h Donde E1 es el estado de mayor energa y E0 es el estado de mayor energa. Los diferentes estados de energa son debidos, en este contexto, a el movimiento de los electrones en torno al ncleo en tomos o iones, o entorno a dos ncleos en las
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molculas. Adems en el caso de las molculas sus cambios energticos tambin pueden ser debidos a vibraciones de sus enlaces o cambios rotacionales de las mismas. A temperatura ambiente el estado de menor energa se denomina estado fundamental o basal en tanto que estados de mayor energa se denominan estados excitados. 1.6.3 Emisin y absorcin de la radiacin electromagntica Cuando una sustancia pasa de un estado de mayor energa hacia un estado de menor energa lo hace desprendiendo o liberando el diferencial de energa. Esta energa puede tener diferentes formas, una de las cuales es como una radiacin electromagntica, como fotones. En este caso la radiacin emitida puede ser caracterizada mediante un espectrmetro y se denomina espectro de emisin, el cual se puede presentar en sus tres modalidades: de lneas, de bandas o continuo.

Estos espectros de emisin se presentan, generalmente, como grficos de potencia relativa de la radiacin en funcin de la longitud de onda o de la frecuencia. El valor de la energa (hv) de la radiacin emitida depende de en que estado superior se encontraba la especie y este se da en funcin de la fuente de excitacin. Un bombardeo con electrones u otras partculas elementales lleva a estados de muy alta energa que se libera como rayos X; la excitacin a travs de un arco elctrico, chispas de corriente alterna, una flama o un horno provee de energa que se libera como radiacin ultravioleta, visible o infrarroja; cuando la energa extra proviene de una radiacin electromagntica se observan espectros de emisin de fluorescencia o fosforescencia en tanto que reacciones qumicas exotrmicas pueden generar espectros de quimioluminiscencia. En otros casos, si se enva una o una serie de radiaciones electromagnticas a travs de una capa de una muestra slida, lquida o gaseosa la energa de los fotones de la radiacin se puede transferir a los iones, tomos o molculas de la sustancia para pasarlos a uno o mas estados excitados. Esto ocurrir solo si los fotones tienen la energa necesaria igual al diferencial energtico entre el estado fundamental y algn estado excitado considerando que estos estn cuantizados. Una representacin grfica de la disminucin de la potencia de la energa radiante en funcin de la frecuencia o de la longitud de onda es lo que se denomina un espectro de absorcin el cual es caracterstico para cada especie qumica ya que estas presentan estados cuantizados de acuerdo a su estructura o interacciones con el medio u otras especies qumicas, entre otros factores. En vista de esto, los espectros de absorcin nos
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pueden servir para caracterizar a una sustancia y utilizando la ley de Lambert-Beer se pueden lograr anlisis cuantitativos de la misma. El espectro de absorcin resultante puede tener diferente estructura dependiendo de si la muestra son tomos, iones o molculas. Se pueden encontrar espectros de picos aislados o combinados o espectros que son curvas continuas sobre todo en molculas con varios enlaces donde se presentan tambin fenmenos vibracionales. 1.6.4 Ley de Lambert-Beer Para utilizar la absorcin de luz con fines cuantitativos se requiere considerar ciertos parmetros y relacionar la dependencia de estos con la cantidad de radiacin absorbida, en este sentido la ley de Lambert-Beer, producto de la fusin de dos leyes, cumple con este cometido al relacionar directamente la absorcin de radiacin electromagntica con el numero de molculas o tomos que esta encuentra a su paso. Ley de Bouguer (Lambert): Para una cierta concentracin de absorbente, la intensidad de luz trasmitida, que previamente se ha logrado que sea paralela, plana y que entre al medio absorbente formando ngulos rectos con el plano, disminuye logartmicamente a medida que la longitud del trayecto aumenta en forma aritmtica. Es decir, la cantidad de radiacin absorbida es proporcional al espesor atravesado. Ley de Beer: Al aumentar la concentracin del absorbente, la intensidad de luz trasmitida disminuye logartmicamente. Es decir, cada molcula de soluto absorber siempre la misma cantidad o fraccin de radiacin incidente independientemente de la concentracin, aunque esta ultima marcara cuantos fotones o fracciones de radiacin sern absorbidos. Ley de Lambert y Beer: La intensidad de la luz trasmitida disminuye logartmicamente con el aumento proporcional de la concentracin de absorbente y el aumento proporcional de la longitud del trayecto de absorcin de la radiacin. La ley de Lambert-Beer tiene gran utilidad en mediciones de tipo cuantitativo (su utilidad es menor cualitativamente hablando) al relacionar a la radiacin (los fotones de la misma) con la cantidad o numero de especies qumicas con las que interacta. Esta ley nos dice que un haz de radiacin electromagntica se ve atenuado (disminuye su energa por unidad de rea) al interactuar con especies qumicas absorbentes.

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DIAGRAMA DE DISMINUCION DE POTENCIA Como consecuencia de las interacciones entre los fotones y las partculas absorbentes, la potencia del haz disminuye de Po (antes Io intensidad) a P. Adems de la absorcin en una medicin de este tipo tambin hay perdidas por reflexin y dispersin, dependiendo de los materiales de la celda, el solvente, la concentracin, el tipo de sustancia y los diversos cambios de interface, por lo que es conveniente trabajar con blancos. Potencia: es la energa de un haz que sale de una fuente por unidad de tiempo y se mide en watts; en el caso de la absorcin se mide la energa de la radiacin que, despus de atravesar la muestra, llega al detector por metro cuadrado del mismo, por segundo. Transmitancia: La transmitancia, T, de una solucin es la fraccin de radiacin incidente trasmitida por la solucin: y generalmente se expresa como porcentaje : Absorbancia: La absorbancia de una solucin es el logaritmo negativo de la transmitancia: La absorbancia de una solucin aumenta cuanto mayor es la atenuacin del haz. De la ley de Lambert-Beer se obtiene que la absorbancia es directamente proporcional a la longitud (b) de la trayectoria del haz a travs de la solucin, y a la concentracin de la especie absorbente: Introduciendo una constante de proporcionalidad esto quedara: A = abc, en donde a es la constante de proporcionalidad, la cual es denominada absortividad y es caracterstica de cada especie. La magnitud de a depende de las unidades de b y c. Cuando b = cm y c = gramos por litro a=

Cuando b = cm y c = moles por litro a= y entonces se denomina absortividad molar y se representa por , por lo tanto: Estas ecuaciones (Lambert-Beer) nos pueden ser tiles cuando deseamos o necesitamos determinar concentraciones o absortividades, parmetro, este ultimo, de gran importancia en algunas espectroscopia como es la de ultravioleta visible.
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Para hacer estudios cuantitativos de una especie se utiliza el pico de mayor absorcin de su espectro de absorcin, siempre y cuando este se encuentre libre de otras absorciones. Se hacen mediciones de un solo punto o de mltiples puntos (curvas de calibracin) que son las mas deseables, utilizando cualquier mtodo de calibracin, dependiendo de la muestra, estndar externo, adiciones mltiples o patrn interno. La seleccin de la longitud de onda debe ser siempre buscando la mayor linealidad con la ley de Beer (concentracin). Se busca un pico en el espectro de absorcin (de preferencia el de la mayor absorcin) donde se observe la mayor sensibilidad del analito a la radiacin, es decir, donde el cambio de absorbancia por cambio en la concentracin sea muy marcado. Se busca que en ese punto la curva de absorcin sea plana para que se afecte menos la lectura por las fluctuaciones o falta de precisin del equipo. En esta longitud de onda no deben de haber interferencias de otras sustancias ni del disolvente, es decir, el pico debe estar libre y no debe tener picos de otras absorciones encimados ni traslapados con el. En el caso de los fotocolormetros de filtros, se utiliza el filtro que nos de la mayor pendiente.

Ejemplo 1: Una disolucin patrn de concentracin 1 x 10-3 moles/ L presenta una absorbancia de 1.29 a 275 nm de longitud de onda. Cual es la concentracin de una muestra si su absorbancia es de 0.75 y ambas lecturas se efectuaron en cubetas de paso ptico de 1 cm. solucin: Para aplicar la ley de Lambert-Beer, primero despejamos la concentracin y posteriormente analizamos que datos tenemos y cuales nos faltan: por lo tanto observamos que no tenemos el valor de la absortividad por lo que hay que calcularlo a partir de los datos de la disolucin patrn, tambin
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despejando de la misma ecuacin:

; sustituyendo valores nos queda:

por lo que, en la muestra, la concentracin ser:

Cuando se hace trabajo de laboratorio no es recomendable recurrir a las tablas de absortividad en virtud de que puede haber variaciones debidas al solvente, a la temperatura o a las celdas, entre otros factores, que nos arrojaran datos errneos, por lo que es preferible obtenerla a travs del uso de un patrn. Ejemplo 2: A 510 nm de longitud de onda una disolucin de KMnO4 que contiene 20 ppm de manganeso presenta una absorbancia de 0.7 cuando se mide en cubetas de 1 cm de espesor. Determinar la absortividad molar del KMnO4. Esta ley, sin embargo, no es infalible y esta sujeta a ciertas restricciones ya que en determinadas condiciones o situaciones, pierde su linealidad. Las principales causas son las que se enumeran a continuacin: a) Por concentracin Esta es una ley limite que funciona bien para soluciones diluidas. Concentraciones mayores al 0.01 M hace que la ley pierda linealidad porque al estar muy cerca las molculas interactan entre si y cada una afecta la distribucin de carga de la otra, adems se puede afectar el ndice de refraccin de la solucin y hace que se presenten otros fenmenos como la reflexin, dispersin, etc. Esta perdida de linealidad tambin se observa, en contadas ocasiones, a muy bajas concentraciones de algunas especies como son algunos colorantes (ejemplo el azul de metileno). b)Desviaciones Qumicas Estas se presentan cuando la sustancia bajo anlisis sufre una transformacin, es decir, cuando se disocia, asocia o reacciona con el disolvente. As la sustancia resultante o producto, dar un espectro diferente al esperado. Ejemplo: indicadores Acido-base

FORMULAS DE DESVIACIN QUMICA El pH tambin desplaza este equilibrio. Para trabajar con una de las tres especies hay que manipular el pH. c) Desviaciones instrumentales
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Hay que seleccionar bien la longitud de onda, de lo contrario nos dara una absorbancia diferente y por lo tanto, tambin una absortividad diferente con el consecuente cambio en la concentracin obtenible Hay que utilizar equipos con buenos sistemas de aislamiento o monocromacion de la radiacin, es decir, con bandas angostas de longitudes de onda. tambin hay radiaciones parsitas, producto de dispersiones y reflexiones en las superficies interiores. Se puede incluir aqu tambin a las celdas utilizadas en las mediciones ya que si la calidad de las mismas (grosor, espesor, homogeneidad, etc.) nos pueden arrojar resultados variables. 1.6.5 Clasificacin de los mtodos espectroqumicos Los mtodos espectroquimicos o espectroscpicos estn basados en la interaccin de la materia con radiaciones electromagnticas. Estas radiaciones presentan varias caractersticas entre las que se incluyen su energa, velocidad, amplitud, frecuencia, ngulo de fase, polarizacin y direccin de propagacin. Para que se realice la espectroscopia se requiere que la interaccin de los fotones con la muestra le produzcan a este un cambio en una o mas de las caractersticas mencionadas. As, la espectroscopia se divide en dos grandes clases: la espectroscopia donde se transfiere la energa de los fotones hacia los tomos, iones o molculas de la muestra y, la espectroscopia donde no hay trasferencia de energa entre los fotones y las partculas de la muestra. En la espectroscopia con trasferencia de energa de los fotones a la muestra tenemos espectroscopia de absorcin y de emisin dependiendo como se va a obtener el espectro. La fuente de energa depender del estado energtico al que se llevara al analito. En la espectroscopia de absorcin el analito va a ser llevado de un estado de menor energa hacia un estado de mayor energa:

Posteriormente se va a obtener el grfico de absorbancia contra longitud de onda o frecuencia:

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En la espectroscopia de emisin, por el contrario, se va a excitar a la muestra y posteriormente se obtiene el espectro de la radiacin emitida en el proceso de relajacin o liberacin del exceso de energa o energa absorbida:

ESPECTROSCOPIAS QUE ENVUELVEN CAMBIOS DE ENERGIA Tipo de energa transferida Regin del espectro electromagntico Tcnica espectroscpica

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ESPECTROSCOPIAS QUE ENVUELVEN CAMBIOS DE ENERGIA Absorcin Rayos gamma Rayos X Espectroscopia de Mossbauer Espectroscopia de absorcin de rayos X UV-Vis Espectroscopia de UV-Vis Espectroscopia de absorcin atmica Infrarrojo Espectroscopia de infrarrojo Espectroscopia Raman Microondas Espectroscopia de microondas Ondas de radio Espectroscopia de resonancia de espn electrnico Espectroscopia de resonancia magntica nuclear

Emisin (excitacin trmica)

UV-Vis

Espectroscopia de emisin atmica

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ESPECTROSCOPIAS QUE ENVUELVEN CAMBIOS DE ENERGIA Fotoluminiscencia Rayos X UV-Vis Fluorescencia de rayos X Espectroscopia de fluorescencia Espectroscopia de fosforescencia Espectroscopia de fluorescencia atmica

ESPECTROSCOPIAS QUE NO ENVUELVEN UN CAMBIO DE ENERGA Regin del espectro electromagntico Tipo de interaccin Tcnica espectroscpica

Rayos X

Difraccin

Difraccin de rayos X

UV-Vis

Refraccin Dispersin

Refractometra Nefelometra Turbidimetra Dispersin rotatoria ptica

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