VIRUSOLOGIE GENERALA Caractere generale ale virusurilor 1.

Sunt considerate forme acelulare de via fiind n afara organismelor vii, lipsite de capacitatea de cretere i multiplicare. Ele sunt replicate (multiplicate) de celula gazd pe care o paraziteaz. 2. Sunt lipsite de aparat enzimatic i metabolism propriu fiind obligatoriu parazite a celulelor animale, vegetale sau bacteriene. 3. Au o structur simpl formate din genomul viral i un nveli protector care se numete capsid. 4. Genomul viral conine un singur acid nucleic ADN sau ARN i niciodat ambii acizi. 5. Virusurile care conin ARN pot depozita i transmite informaia genetic, caz unic n biologie, rolul de purttor al informaiei genetice fiind ADN, pentru restul vieuitoarelor. 6. In natur virusurile se gsesc sub trei forme biologice: - virus complet sau virion dotat cu infeciozitate i capabil de a supravieui un timp limitat n afara celulei gazd - virus vegetativ prezent numai n celula parazitar i neinfecios - virus integrat (provirus) integrat n genomul celulei gazd unde rmne un timp nelimitat replicndu-se odat cu acesta. In esen virusurile sunt sisteme bioide care se comport ca fiine vii n interiorul celulei parazitate i ca o subatan organic complex n afara acesteia.

CONSTANTELE VIRIONULUI Virionii pot avea forme variate. La examenul cu un microscop electronic cu o mic putere de rezoluie se pot distinge 3 tipuri principale de forme: - alungit - corpuscular - spermatozoidic La examenul electronooptic, la un aparat cu mare putere de erzoluie care permite observarea tuturor detaliilor ultrastructurale, virionii se pot nfia ntr-o gam mai variat de forme, ca de exemplu: - bastona drept - filament pliat - icozaedru - corpuscul sferic - crmid cu colurile rotunjite - ghiluea - spermatozoid (ali termeni de comparaie pentru aceeai form: cirea cu coad, ac cu gmlie mare, mormoloc) Determinant pentru forma vironului la majoritatea virurusirlor este tipul de simetrie al capsidei, iar la unele virusuri prezena nveliului pericapsidal. Dimensiunile Dimensiunile virusurilor variaz ntre limite cuprinse ntre 8-10 nm pn la 300-350 nm. Virusurile cele mai mici, ca de exemplu Picorna i Parvovirusurile se apropie de dimensiunile unor macromolecule organice, n timp ce virusurile cele mai mari, ca de exemplu Poxvirusurile au dimensiuni identice cu cele mai mici bacterii. Volumul virusurilor reprezentative ale celor dou extreme este de 0,00001 microni3 pentru virusul poliomielitei (un Picornavirus) i de 0,01 microni3 pentru Poxvirus.

STRUCTURA VIRIONULUI Virionul este constituit dintr-un nveli i un coninut. La toate viruruile, nveliul este format din uniti proteice numite capsomere aezate dup un tip de simetrie bine definit, constituind n ansamblul lor capsida viral. La unele virusuri, exterior capsisei, se gsete un al doilea strat al nveliului numit pericapsid (anvelop, peplos). Din punct de vedere al prezenei nveliului pericapsidal, virusurile se mpart n dou categorii: nude i nvelite n pelos. Coninutul virionului este un genom format dintr-un singur tip de acid nucleic fie ADN, fie ARN. Nici un virus nu conine ambii acizi nucleici. Unitatea constituit din genom + capsid poart i numele de nucleocapsid. Capsida viral Termenul de capsid deriv de la cuvntul grecesc kapsa-cutie. El desemneaz nveliul extern al virionului prezentat n forma sa cea mai simpl de un strat unic de uniti identice numite capsomere (meros parte) aezate n mod regulat dup un tip de simetrie bine definit. Puine virusuri au capsida constituit din dou sau mai multe straturi concentrice. Compoziia chimic a capsidei este exclusiv proteic. Proteinele constituiente ale capsidei sunt antigenice, fiind responsabile pentru structura antigenic specific fiecrui virus. La majoritatea virusurilor, cu excepia virusurilor helicoidale prevzute cu nveli pericapsidal, capsida este determinant pentru forma virionului. Rolul capsidei este de a proteja genomul viral de aciunea factorilor de mediu. La adpostul capsidei, acidul nucleic viral este vehiculat de la o gazd receptiv la alta. Cu toate c, n condiii experimentale au putut fi reproduse numeroase infecii virale numai cu acizii nucleici ai virusurilor respective nu s-a semnalata nc un fenomen similar n condiii naturale, protecia capsidei fiind indispensabil conservrii i circuitului virusurilor n natur. Subunitile componente ale capsidei, sunt formate din una sau mai multe molecule proteice constituite la rndul lor din lanuri polipeptidice. In funcie de numrul moleculelor din care sunt formate, capsomerele pot fi de dou feluri: - monomere constituite dintr-o singur molecul proteic, avnd o mas molecular n jurul a 20 000-30 000 daltoni; ele sunt caracteristice pentru virusurile de form alungit, iar asamblarea lor n arhitectura capsidei este dup tipul de simetrie helicoidal - oligomere constituite din mai multe monomere, dispuse circular, formnd un inel sau buton; oligomerele sunt aranjate n cadrul capsidei dup tipul de simetrie icozaedral sau cubic. In funcie de numrul monomerelor componente, oligomerele sunt de dou feluri: - hexamere sau hexoni formate din ase monomere; ele alctuiesc feele triunghiulare i laturile (muchiile) capsidelor icozaedrale - pentamere sau pentoni formate din 5 monomere; ele sunt aezate la colurile (vrfurile) capsidelor icozaedrale. Numrul capsomerelor este constant pentru un virus, mai ales la virusurile icozaedrale. Simetria capsomerelor poate fi de trei feluri: icozaedral sau cubic, helicoidal, binar sau dubl. Capsida helicoidal (helical) are forma unui tub cilindric. Unitile ei structurale sunt molecule identice de form ovoid sau puin alungit. Aranjamentul lor este n form de spiral helicoidal regulat, asemntoare cu al unui resort n stare comprimat. Spirala capsomerelor delimiteaz pe fa intern a tubului un an n care este aezat, tot helicoidal, ntr-un perfect paralelism cu capsida, genomul (acidul nucleic) viral. Extremitile interne ale capsomerelor nu se ating, fiind desprite de fragmentul de acid nucleici care se interpune. Numrul capsomerelor variaz n funcie de lungimea virionului. Capsidele helicoidale pot fi de dou feluri: rigide i flexibile. Capsida rigid este de regul caracteristic virusurilor fitopatogene. Un exemplu de virus care poate fi considerat de referin, fiind studiat n cele mai mici detalii, este virusul
2

mozaicului tutunului. El se prezint sub forma unui bastona rigid de 300 nm lungime, 17 nm lime cu un diametru interior de 4 nm. Genomul lui este constituit dintr-un filament de ARN, lung de 2 microni. avnd masa molecular de 2x106 daltoni, aezat n anul delimitat de o spiral helicoidal format din 130 de capsomere. Fiecare capsomer este o molecul proteic, compus din 158 de aminoacizi. Capsida flexibil se ntlnete la unele virusuri zoopatogene. Forma ei este tot tubular, dar se poate plia sub forma unui ghem. In aceast stare se dispun nucleocapsidele helicoidale la interiorul nveliului pericapsidal care are o form aproximativ sferic. Exemple de virusuri pentru care este caracteristic o astfel de structur sunt Orthomyxovirusurile, din care fac parte virusurile influenelor i Paramyxovirusurile n care se ncadreaz virusul pseudopestei aviare. Ele au o form sferic cu un diametru de 80-120 nm. La interiorul unei pericapside groase de 8-10 nm se gsete nucleocapsida helicoidal, de lungimi varibile, cu diametrul transversal de 9-10 nm. La Myxovirusuri exist o corelaie ntre forma global a virionului (sferic) i cea a nucleocapsidei (alungit, filamentoas). Determinant pentru tipul de simetrie al oricrui virus este ns nucleocapsida. Capsida icozaedral (izometric, cu simetrie cubic) rezult din asamblarea ntr-o form geometric regulat a unui numr fix de hexa i pentamere care alterneaz dup un plan de organizare foarte precis. Icozaedrul este un poliedru constituit din 20 fee, fiecare avnd forma unui triunghi echilateral. Ca orice structur geometric regulat, el are trei tipuri de axe de simetrie (p). O rotaie 2/p n jurul axei aduce structura respectiv ntr-o poziie identic cu cea inial. Icozaedrul are 12 vrfuri (unghiuri sau coluri) i 6 axe de simetrie de tip 5 care travereseaz fiecare 2 unghiuri opuse, 20 fee i 10 axe de simetrie de tip 3 care trec prin punctele centrale a 2 fee triunghiulare opuse, 30 laturi i 15 axe de simetrie de tip 2 care unesc 2 laturi opuse exact la jumtatea acestora. Succesiunea capsomerelor n structura capsidei icozaesrale este urmtoarea: feele i laturile sunt formate din hexamere, iar colurile sau vrfurile din pentamere. Alternana suprafeelor hexagonale cu cele pentagonale ntr-o anumit succesiune n structura unei figuri geometrice care poate fi nscris ntr-o sfer este o condiie obligatorie pentru stabilirea acestei structuri. In domeniul arhitecurii, aceast regul s-a confirmat pentru construcia domului geodezic de ctre Fuller i, mai recent, a pavilionului american de la expoziia universal de la Montreal n 1967 (dup Zarnea, 1974). Klug i Caspar (1962) explic primii structura capsidelor virale icozaedrale pe baza ndeplinirii aceluiai deziderat. Numrul total de capsomere (N) al unui virion icozaedral este dat de formula: N = 10 (n-1)2 + 2 n care este egal cu numrul de capsomere al unei laturi. In tabelul nr. 2 este redat numrul capsomerelor obinute pe baza acestei formule la 4 grupe de virusuri. In cazul unor virusuri foarte mici, ca de exemplu virusul poliomielitei n care n=2 (o fa triunghiular este format din laturi a cte 2 capsomere care ncadreaz o capsomer central) formula se modific astfel: N + 30 (n-1)2 + 2 Capsida icozaedral este forma cea mai economic de organizare arhitectonic a unor uniti proteice identice prin care se asigur nveliul protector genomului viral. Numrul capsomerelor la 2 grupe de virusuri Grupa Bacteriofag mic Reovirus n 2 4 N 12 92

Dou virusuri avnd masele moleculare ale virionilor egale, dar cu tipuri de simetrie a capsidelor, unul helicoidal i altul icozaedral, difer sensibil i n ceea ce privete numrul
3

capsomerelor. Astfel, virusul mozaicului galben al napului, cu aceeai mas molecular, dar cu capsida icozaedral, este alctuit din numai 180 molecule (dup Zarnea G., 1974). Capsida cu simetrie binar Capsida cu simetrie binar sau dubl este caracteristic bacteriofagilor cu cap i coad. Capsida capului este de tip icozaedral, n timp ce capsida cozii este organizat dup tipul de simetrie helicoidal. Ea va fi descris mai amnunit la virusurile bacteriofagice. Pericapsida (anvelopa, peplosul) Pericapsida, pentru desemnarea creia se folosesc la fel de frecvent i termenii de anvelop sau peplos (manta n limba greac) este un nveli suplimentar, ntlnit numai la unele virusuri, aezat exterior capsidei. In funcie de prezena sau absena pericapsidei, corelat cu tipul de simetrie al pericapsidei, virionii sunt de 4 feluri : - virion helicoidal nud - virion icozaedral nud - virion helicoidal nvelit de pericapsid - virion icozaedral nvelit de pericapsid Virionii nvelii de pericapsid au totdeauna o form globuloas, aproximativ sferic, indiferent de tipul de simetrie al nucleocapsdei (virionii helicoidali sunt pliai n interiorul pericapsidei sub forma unui ghem). Grosimea pericapsidei este n jur de 100-150 . Analog capsidei, ea este constituit din uniti structurale numite peplomere (peplos-manta). Peplomerele sunt ns puin conturate electronooptic, comparativ cu capsomerele i nu sunt aranjate dup un tip precis de simetrie. Comparativ cu capsida, pericapsida este o form mai puin regulat, este mai puin rigid avnd un anumit grad de flexibilitate i elasticitate. Pe suprafaa pericapsidei se gsesc de obicei protuberane sub forma unor spiculi sau antene de aproximativ 100 lungime. Ele sunt aezate la distane de 70-80 una de alta i constituie hemaglutiniele sau neuraminidazele. Compoziia chimic a pericapsidei, predominant proteic, este caracterizat i prin prezena altor compui organici glucide, dar mai ales lipide, care mpreun cu proteinele formeaz complexe glico sau lipidoproteice. Lipidele, compuii chimici ai pericapsidei concur i ei la determinarea structurii antigenice a virusului. Originea componentelor poate fi proprie sau derivat din membrana celulei gazd n care a fost sintetizat virionul. Partea proprie este numit i homeopeplos, iar cea provenit din componenii celulei gazd heteropeplos. Acestea sunt considerate ca fcnd parte din cadrul proprietilor virusurilor caracterizate ca induse de celula gazd. Constituirea heteropeplosului are loc cu prilejul eliberrii virionilor nou formai din celuel prin procesul de nmugurire (burjeonare). Rol: pericapsida concur, mpreun cu capsida la protejarea genomului viral la factorii de mediu i asigur fixarea virionului pe celula gazd. Prezena ei confer ns virusurilor anumite nsuiri, absente la virusurile nude. Acestea sunt sensibilitatea la eter i cloroform datorat componentelor lipidice din structura peplomerelor, capacitatea de absorbie pe diferite substraturi celulare i activitatea hemaglutinant de care sunt responsabili spiculii (antenele) de pe suprafaa capsidei numii de aceea hemaglutinine. La Myxovirisuri, pericapsida conine enzime numite neuraminidaze care nlesnesc ptrunderea virusului n celula sensibili. Genomul viral Genomul viral este reprezentat de acidul nucleic viral. Urmtoarele nsuiri ale acidului nucleic trebuie considerate eseniale pentru caracterizarea unui virus: tipul de acid nucleic, structura, masa molecular n strns relaie cu capacitatea de codificare, proporia

de acid nucleic raportat la masa virionului, compoziia n baze azotate, configuraia i modul de dispunere n interiorul capsidei. Tipul de acid nucleic poate fi ARN sau ADN. In funcie de natura acidului nucleic, virusurile se mpart n ribovirusuri cu ARN i dezoxiribovirusuri cu ADN. La virusurile fitopatogene, acidul nucleci este totdeauna ARN, n timp ce la virusurile zoopatogene i bacteriofagice poate fi unul sau cellalt. Structura acidului nucleic poate fi n funcie de numrul lanurilor din care este constituit molecula monocatenar sau dublucatenar. Ca regul general, dezoxiribovirusurile au ADN dublu catenar, cu excepia parvovirusurilor i a fagului X 174 al cror ADN este monocatenar. Ribovirusurile au ARN monocatenar, cu excepia reovirusurilor, al cror ARN este dublu catenar. Masa molecular a acidului nucleic este corelat cu mrimea i masa virionului. Masa molecular este n funcie de lungimea i masa virionului. Masa molecular este n funcie de lungimea lanurilor i implicit de numrul nucleotidelor componente care la rndul lor sunt determinante pentru informaia genetic, respectiv capacitatea de codificare a genomului, Cel mai mic genom este acela al virusului necrozei tutunului, format dintr-o molecul de ARN constituit din aproximativ 10000 nucleotide, capabil s codifice sinteza unui singur tip de protein. Simplitatea genomului acestui virus i determin defectivitatea, sinteza lui nefiind posibil n celula vegetal dect n prezena unui virus helper al crui genom conine circa 6000 de nucleotide. Genomul celui mai mic virus ADN (virusul poliomei) are masa molecular de 3x108 i este format din aproximativ 5 000 perechi de nucleotide. Masa molecular a ARN constituient al genomului virusului febrei aftoase, cel mai mic virus zoopatogen, este de 2,4 x106 daltoni. Masa molecular maxim a proteinelor a cror sintez este capabil s o codifice acest genom este de 240 000 daltoni. Virusurile complexe, ca de exemplu colifagul T, au i genomul mult mai complex. In cazul bacteriofagului amintit, genomul are n structura sa n jurul a 100 de gene ale cror responsabiliti sunt bine cunoscute n procesul complex de biosintez i morfogenez al acestui virus. Proporia acidului nucleic raportat la masa virionului este un raport adoptat de mai muli ani de Comitetul Internaional de Clasificare i Nomenclatur a Virusurilor ca i criteriu taxonomic. Masa molecular a genomului este, n general, mult mai mic, reprezentnd 5-30% din masa total a virionului. Astfel, n cazul virusului febrei aftoase, masa genomului este de 2,4x106 daltoni, n timp ce aceea a ntregului virion este de 7,2x106. Compoziia genomului n baze azotate. In cazul majoritii virusurilor, acizii nucleici virali nu difer biochimic de restul acizilor nucleici prezeni n celula animal sau vegetal. Unii bacteriofagi au ns n compoziia genomului viral o baz azotat 5 hidroximetilcitozina inexistent n compoziia acizilor nucleici ai celulei bacteriene, vegetale sau animale. Configuraia (topologia) acizilor nucleici poate fi de 3 feluri: - linear ntlnit mai ales la acizii nucleici monocatenari i o parte din cei bicatenari - ciclic simpl sau circular ciclic evideniat la ADN constituient al unor Papovavirursuri (virusul poliomei i ale papilomatozelor) - ciclic supersucit evideniat tot la viruisurile poliomei, aceast topologie rezult din mpletirea ntre ele a dou lanuri dublu catenare de ADN. Genomul virusului poliomei se poate de altfel prezenta n oricare din cele 3 tipuri de configuraie, n funcie de viteza de turaie la ultracentrifugare. La 20 S ADN se depune prezentnd o configuraie ciclic superrsucit, la 16 S una ciclic simpl, iar la 14 S una linear. Acest mod de comportare al genomului virusului poliomei a determinat emiterea

ipotezei, deocamdat nedemonstrat, a caracterului general al configuraiei ciclice a genomurilor virale, linearitatea fiind considerat rezultatul unui artefact. Genomurile constituite din mai multe fragmente legate ntre ele prin puni de hidrogen au fost evideniate mai ales la unele virusuri ARN, dar cu acelai grad de incertitudine privind realitatea acestui mod de existen. Dispunerea acidului nucleic n interiorul capsidei difer n funcie de simetria acesteia. La virusurile helicale exist un paralelism perfect ntre spirala helical a capsomerelor i dispunerea helical ntre irurile de nucleotide a lanului de acid nucleic. La virusurile icozaedrale, acidul nucleic este pliat sub forma unui ghem. La aceste virusuri nu exist un paralelism n raporturile dintre capsid i acidul nucleic viral. Proprietile antigenice ale acizilor nucleici sunt slabe n comparaie cu proteinele; de aceea, genomul viral are un rol minor n detrminismul structurii antigenice a virusurilor, comparativ cu capsida i peplosul. Genomul viral este componenta esenial a virusului care poart informaia genetic necesar devierii metabolsimului celulei gazd, n sensul sintezei constituienilor virali. Ribovirusurile reprezint un unicat n biologie, n ceea ce privete posibilitatea pstrrii informaiei genetice de ctre ARN. Particularitati structurale ale unor virusuri zoopatogene complexe Unele virusuri zoopatogene se abat de la modelul clasic descris anterior prin structura mai complex a nveliului particulei virale. Poxvirusurile au urmtoarele componente structurale de la interior spre exterior: - genomul viral (inima sau smburele) asemntoare unui dusc biconcav, n form de haltere pe seciune, este constituit din ADN cu o mas molecular de 150x106/ particul - o membran proteic neted cu grosimea de 50 , un strat compus din uniti proteice de form cilindric de 50 lime i 100 nlime, analoage capsomerelor - doi corpi proteici i corpi laterali, cu diametrul de 600 800 situai n depresiunile rezultate din forma biconcav a smburelui - o membran extern format dintr-o mpletitur de structuri tubulare, asemntoare cu nite capside helicoidale goale Rhabdovirusurile avnd ca reprezentant de referin virusul stomatitei veziciuloase, au form de ghiulea i urmtoarele componente structurale de la interior spre exterior: - genomul viral constituit din ARN monocatenar, dispus helicoidal, diametral spiralelor este de150-180 - o capsid constituit din capsomere dispuse n dublu strat helicoidal cu diametrul spiralelor externe de 500 - un peplos format din peplomere de 100 asimetrice avnd ca form comparabil cu un buton par sau bec regulat aezate cu extremitatea mai ngust ataat de membrana neted

PARTICULARITATI STRUCTURALE ALE BACTERIOFAGILOR Bacteriofagii (virusuri parazite pentru bacterii) au genomul constituit n majoritatea cazurilor din ADN i mai rar din ARN. Genomul viral este dispus n interiorul capsidei ca la virusurile icozaedrale. Capsida viral poate avea diferite forme i grade de complexitate structural. Majoritatea bacteriofagilor, la examenul electronooptic, cu o putere de rezoluie mai mic, au aspect de spermatozoid, cirea cu coad, mormoloc distingADNu-se ca pri componente ale virionului un cap i o coad.

Studiile de finee din ultimii ani au permis observarea mai multor tipuri morfologice. BRADLEY (1971) deosebete 6 tipuri morfologice principale (fig. 14): - fagi cu coada lung i contractil - fagi cu coada lung necontractil - fagi cu coada scurt - fagi fr coad, cu capsomere mari la coluri - fagi fr coad, numai cu capsomere mici, la coluri - fagi filamentoi, fr cap Fagii cu coad lung i contractil reprezint tipul cel mai complex al crui reprezentat cunoscut i descris n cele mai fine detalii este colifagul T2 (fig. 15). Prile lui structurale sunt urmtoarele: - capul fagului constituit dintr-un poliedru hexagonal, bipiramidal cu o lungime de 950-1050 i o mas molecular de 8,5x106 este format din: - genomul viral reprezentat de o molecul de ADN dublu catenar cu masa molecular de 120x106 format din 200 perechi de nucleotide avADN o lungime de 49 4 microni - capsida capului este un icozaedru alungit format din dou piramide de cate 5 fee triunghiulare ntre care se interpun dou benzi ecuatoriale constituite fiecare din 10 fee triunghiulare - structura capsomerelor nu difer de cea a virusurilor icozaedrale zoopatogene - coada fagului, format la rADNul ei din: - smburele cozii sau cilindrul axial cu o compoziie proteic i diametrul de 70 - teaca cozii format dintr-un cilindru cu o lungime de 800 n stare necontractat, diametrul tecii este de 160 , structura tecii cozii este identic cu cea a capsidelor helicoidale, n timpul contraciei, coada se scurteaz cu 50% prin alunecarea una peste alta a spiralelor constituiente ale capsidei helicoidale a acesteia - gulerul fagului, interpus ntre cap i coad, de forma unui disc hexagonal subire cu diametrul de 306 - placa terminal este un disc hexagonal similar gulerului la extremitatea cozii - croetele sunt n numr de 6, aezate la unghiurile plcii terminale - fibrilele cozii sunt formaiuni filamentoase proteice cu lungimea de 1300 diametrul de 20 i masa molecular 400 000, formADN o reea n jurul tecii cozii Placa terminal, mpreun cu croetele i fibrele cozii formeaz aparatul de fixare al bacteriofagului la nivelul cruia se gsete enzima numit lizozim fagic, capabil s permeabilizeze peretele celulei gazd.
TROPISMUL VIRUSURILOR

Tropismul virusurilor const n afinitatea acestora fa de gazd, esut, celul. Genotropismul sau afinitatea pentru specia biologic pe care o paraziteaz permite mprirea virusurilor, n funcie de numrul speciilor receptive n monopatogene i patogene pentru 2,3 sau mai multe specii (virusuri cu spectru larg), dup apartenena de reegn a speciilor receptive, se mpart n zoopatogene, fitopatogene, bacteriofagi i micofagi. Histotropismul sau afinitatea pentru anumite esuturi permite mprirea virusurilor n urmtoarele categorii: - virusuri epiteliotrope (dermotrope) cu afinitate pentru celulele epiteliale ale pielii i mucoaselor ex. virusurile din grupa Pox, virusul febrei aftoase etc - virusuri neurotrope cu afinitate pentru celula nervoas ex. virusul rabic, virusul poliomeileitei, alte virusuri encefalitice etc. - virusuri organotrope (viscerotrope) cu afinitate pentru anumite organe interne, la rndul lor acestea pot fi clasificate, dup organul afectat, n: - pneumotrope ex. virusul jigodiei, virusurile influenelor

- enterotrope ex. virusurile enterocitopatogene, virusul diareei virotice, bolii mucoaselor - virusuri mezenchimotrope (pantrope) cu afinitate pentru celula mezenchimal, indiferent de locul ei n organism ex. virusurile pestelor la diferite specii animale Histotropismul nu se manifest totdeauna foarte strict, unul i acelai virus avnd posibiulitatea ca n decursul infeciei s se localizeze n esuturi diferite. In astfel de situaii, se ia n considerare tropismul pentru esutul n care virusul se localizeaz n faza iniial i din partea cruia se produc simptomele i leziunile cele mai caracteristice ale bolii. Citotropismul reprezint afinitatea virusurilor pentru anumite tipuri de celule din cadrul aceluiai esut. Ex. virusul ravic este neurotrop, dar se multiplic de preferin n celulele piramidale de tip Betz din coarnele lui Ammon, virusul poliomielitei, tot neurotrop, are afinitate pentru neuronii motori din coarnele anterioare ale mduvei. Tropismul virusurilor este determinat pe de o parte de complementaritile de ordin stereochimic, electronostatic i geometric dintre nveliul particulei virale i membrana celulei gazd, complementariti datorit crora are loc fixarea (adsorbia) virusului pe celul, iar pe de alt parte de capacitatea genomului viral de a substitui informaia genetic a genomului celular i de a determina astfel biosinteza de material viral n locul compuilor specifici celulei. MULTIPLICAREA VIRUSURILOR Pentru virusuri, termenul de multiplicare nu reflect de fapt realitatea fenomenelor care au loc n celula gazd, n nteriorul creia virusurile nu se multiplic, ci sunt sintetizate de celul prin activitatea metabolic a acesteia, deviat de la normal n urma substituirii informaiei genetice a celulei cu cea a virusului. innd seama de faptul c nu s-a gsit un termen cu o semnificaie semantic mai adecvat pentru reflectarea realitii fenomenelor care au loc n cursul producerii de ctre celul a materialului viral e menine deocamdat n uz termenul de multiplicare. Multiplicarea virusurilor implic patru etapoe principale: 1. adsorbia sau fixarea virionului pe celula gazd 2. ptrunderea n celul a virionului (la virusurile zoopatogene) sau numai a genomului viral (la virusurile bacteriofagice) 3. multiplicarea intracelular propriu-zis a virusului n cadrul creia se pot deosebi trei categorii de procese: - replicarea aicidului nucleic viral - biosinteza materialului viral - asamblarea (morfogeneza) noilor virioni 4. eliberarea virionilor nou formai din celul In desfurarea acestor etape se constat unele diferene ntre virusurile zoopatogene i bacteriofagi care se refer mai ales la primele dou i la ultima, multiplicarea intracelular prorpiu-zis realizndu-se n esen identic la toate categoriile de virusuri.

MULTIPLICAREA VIRUSURILOR ZOOPATOGENE Prima etap a multiplicrii virusurilor se caracterizeaz printr-un grad relativ redus de specificitate. Responsabilitatea fixrii o poart complementaritile de tip stereo, de natur chimic, electrostatic i geometric dintre capsida sau pericapsida virionului i membrana celulei gazd. Gruprile chimice de pe suprafaa membranei celulare care intervin n determinismul afinitii dintre celul i virion, poart numele de receptori. In general, receptorii acioneaz complementar pro gruprile lor fosfat fa de gruprile aminice ale capsidei virale. La unele virusuri, ca de exemplu virusurile gripale, au fost identificate cu precizie proteinele receptor de pe suprafaa celulelor. Acestea sunt de natur glicoproteic,
8

complementare neuraminidazei - enzima din pericapsida virusurilor gripale care, din punct de vedere al activitii ei biologice este o glucidaz. Datorit specificitii relativ reduse a atraciei dintre majoritatea virusurilor zoopatogene i celulele animale, fixarea virionilor este de cele mai multe ori precedat de un numr mai mic sau mai mare de ciocniri ntmpltoare dintre virus i celul. De aceea, dintro multitudine de particule virale care ptrund n organism, un numr mult mai redus ajung s se fixeze i apoi s strbat nveliul celulei gazd. Rata de fixare a fost stabilit n cazxul unor virusuri zoopatogene, ca fiind 3-5x109. Ptrunderea virionilor n celul In cazul virusurilor zoopatogene, spre deosebire de bacteriofagi, virionul ptrunde n ntregime n celula sensibil printr-un proces activ ntructva asemntor cu fenomele de fagocitoz sau pinocitoz. Membrana celular se invagineaz i se adncete progresiv n dreptul virionului pn cnd acesta este complet nglobat n celul. Fenomenul poart i numele de viropexie. Dup nglobare, marginile opuse ale membranei celulare invaginate fuzioneaz, restabilindu-se astfel integritatea suprafeei celulare. Virusul ptruns n celul este inclus ntr-o vacuol ai crei perei se dezintegreaz treptat. Decapsidarea Decapsidarea este un proces specific numai virusurilor zoo i fitopatogene, absent la bacteriofagii a cror capsid nu ptrunde n celul. Ea const n liza capsidei sub aciunea enzimelor de tip lizozomal numite decapsidaze produse de celula gazd. Pentru desemnarea fenomenului de decapsidare mai sunt utilizai i termenii deproteinare sau dezbrcare, acesta din urm mprumutat din literatura englez de specialitate (uncoating). Sinteza decapsidazelor este sub determinismul genetic al genomului viral. La poxvirusuri s-a emis ipoteza c ADN viral, chiar nainte de decapsidare, este capabil s codifice i s transcrie pe ARNm o secven responsabil de sinteza decapsidazei. Aceast ipotez i gsete confirmarea ntr-o experien cunoscut sub numele de fenomenul Berry-Dedrick: - n celulele infectate cu un poxvirus A nclzit la 560C nu are loc sinteza materialului viral - acelai lucru este valabil i pentru o populaie de celule infectate cu un virus B iradiat cu ultraviolete - n celulele infectate ns, simultan cu virusul nclzit A i virusul iradiat B, se constat sinteza de material viral Explicaia fenomenului este urmtoarea: virusul A, a crui ARN polimeraz este inactivat nu este decapsidat, n timp ce genomul virusului B decapsidat nu se poate replica datorit alterrilor produse de radiaiile ultraviolete; dac cele dou virusuri se amestec, ATN polimeraza eliberat din virusul B nealterat cu ultraviolete va determina sinteza ARNm precoce, din care un segment este responsabil de sinteza decapsidazei, acesta va decapsida virusul B care se va replica declannd multiplicarea normal a virusului. Momentul decapsidrii difer la diferitele grupe de virusuri . In cazul virusurilor picorna, el ncepe din momentul contactului cu membrana celular. La altele, decapsidarea poate s nu aibe loc, fr ca aceasta s mpiedice replicarea acidului nucleici i transcrierea informaiei genetice. Cu privire la dinamica procesului decapsidrii s-a putut stabili, n cazul adenovirusurilor, c ruperea capsidei are loc la nivelul pentamerelor constituiente ale colurilor icozaedrului care reprezint punctele cele mai fragile ale acestuia. O dat cu decapsidarea, virusul pierde infectivitatea n condiii naturale i trece din forma de virion n cea de virus vegetativ, dependena sa de celul devenind total. Multiplicarea propriu-zis Multiplicarea propriu-zis este un proces complex bazat pe substituirea informaiei genetice a genomului celular cu cea a genomului viral. Acesta prin mecanisme care nc nu sunt pe deplin clarificate, scoate din funcie ADN celular n momentul copierii informaiei de pe ADN pe ARNm de o calitate nou transcris de pe genomul viral care va transmite la
9

nivelul ribozomilor un mesaj genetic nou care va obliga celula ca n locul enzimelor i a celorlalte proteine proprii s sintetizeze material viral. Paralel cu replicarea acidului nucleic viral are loc inhibarea sintezei proteinelor celulare. In cazul mai multor virusuri ARN se constat ncetinirea sintezei proteinelor celulare n proporie de 70-90% nc din prima or de la ptrunderea virusului n celul. Un alt fenomen caracteristic celulelor infectate cu virus const n nlocuireea treptat a poliribozomilor celulari de tip 200 S cu poliribozomi virali de tip 350 S. Acetia din urm sunt incapabili s recepioneze informaia genetic de la ARNm celulari recepionnd informaia genetic numai de la ARN virali. In transmiterea informaiei genetice nscrise n programul viral se pot deosebi mecanisme diferite determinate de acidul nucleic, constituient al genomului viral (ADN sau ARN) structura acestuia (mono sau dublu catenar) capacitatea i modul de codificare al diferiilor acizi ribonucleici i de unele particulariti ale complexului virus- celul. In funcie de aceti factori au putut fi identificate pn n prezent, la virusurile animalelor, mai multe scheme sau strategii de multiplicare. Indiferent de detaliile schemei de multiplicare, acesta implic totdeauna trei procese: - replicarea genomului viral - biosinteza materiualului viral - asamblarea sau morfogeneza noilor virioni Replicarea genomului viral Acest proces are loc n mod diferit, n funcie de structura mono sau bicatenar a acidului nucleic, dup cum urmeaz: ADN dublu catenar prezent la majoritatea virusurilor ADN se replic semiconservativ, cele dou catene despletindu-se dup modelul clasic al fermoarului (literei Y). La Adenovirusuri s-a demonstrat c replicarea ncepe de regul la extremitatea catenei care este mai bogat n perechi de baze Adenin-Timin. ADN monocatenar caracteristic Parvovirusurilor i construiete sub aciunea unei enzime (replicaz) lanul complementar, devine astfel ADN dublu catenar replicativ, dup care se replic conform modelului menionat mai sus, caracteristic pentru ADN dublu catenar. Unele Parvovirusuri sunt defective, genomul fiind incapabil de replicare. Ele se multiplic numai cu ajutorul unui Adenovirus helper al crui genom este ADN dublu catenar din replicarea creia rezult i lanurile necesare Parvovirusurilor adenoasociate. ARN monocatenar care constituie genomul majoritii virusurilor ARN determin prin enzime (replicaze) sinteza de noi lanuri de ARN prin dou feluri (tipruri) de mecanisme de replicare: - Tipul semisonservativ, precedat de transformarea ARN monocatenar n bicatenar prin sinteza unei catene complementare. Transformat n bicatenar, ARN devine replicativ i se replic dup modelul semisconservativ clasic prin despletirea celor dou catene n form de fermoar sau litera Y. Cele dou catene fiice sunt una + i alte -. - Tipul asimetric caracterizat prin replicarea de pe aceeai caten paralel devenit matrice a mai multor catene complementare; catenelor noi care se formeaz treptat pe msura deplasrii catenei parentale rmn ataate ctva timp de aceasta. In acest fel se formeaz o molecul mare numit intermediar de replicare, ramificat n form de brad, cu un numr de ramuri care variaz de la 1 la 7 i sunt catene +. Formarea intermediarilor de replicare este totdeauna precedat de replicarea de tip semiconservativ. Indiferent de tipul de replicarea, catenele + devin viitoare genomuri virale sau dirijeaz sinteza de material viral, n timp ce catenele, dup ce i-au ndeplinit rolul de suport (matrice) pentru procesul de replicare, se dezagreg.

10

ARN bicatenar constituie o excepie n cadrul virusurilor ARN, fiind prezent numai la Reovirusuri. In celulele infectate cu Reovirusuri au putut fi evideniate trei categorii de ARN monocatenari: mari de 24 S, mijlocii de 18 S i mici de 14 S. Fiecare ARN monocatenar este o copie fidel transcris de pe un ARN bicatenar. In multiplicarea reovirusurilor intervin dou feluri de enzime: una responsabil de transcrierea ARN monocatenar de pe ARN bicatenar, iar a doua respondabil de replicarea ARN bicatenar. Prima este o protein virus specific, fiind identificat n interiorul capsidei virionilor. Aceast enzim este activat n cursul decapsidrii. In nucleocapsida Reovirusurilor au fost identificate i lanuri de ARN monocatenar, reprezentnd a 10-a parte din genom, dar rolul acestuia n-a putut fi stabilit. In cursul replicrii semiconservative a acidului nucleic viral se produce substituirea total sau parial a ADN din genomul celular, ncepnd transcrierea informaiei genetice nscrise n genomul viral de ARN mesager care urmeaz s transmit informaia pentru sinteza constitienilor virali la nivelul ribozomilor celulei gazd. In acest fel se iniiaz cel deal doilea proces esenial al multiplicrii virusurilor biosinteza de material viral. Biosinteza materialului viral In biosinteza materialului viral se disting dou faze. Studiul acestora la virusurile ARN a permis stabilirea urmtoarei dinamici de desfurare a urmtoarelor caracteristici pentru fiecare faz: Faza exponenial de sintez ncepe la 30 minute de la ptrunderea virusului n celul i dureaz 2,5-3 ore, timpul de dublarea a cantitii de ARN din celul este de aproximativ 15 minute Faza linear de sintez se caracterizeaz printr-un ritm constant de acumulare de ARN viral; n celul se sintetizeaz n jur de 3000 molecule de ARN pe minut, meninndu-se n stare activ 500-800 de matrici. O molecul de ARN se sintetizeaz n 50 secunde, ritmul de polimerizare al nucleotidelor fiind de 130 pe secund. In aceast faz ncepe i se desfoar cu o vitez crescnd morfogeneza noilor virioni prin ncapsidarea genomurilor. Biosinteza materialului viral decurge la diferitele grupe de virusuri dup urmtoarea schem: Virusurile ADN sunt sintetizate de celula gazd n dou faze: Faza precoce: ADN viral determin, n cursul replicrii, prin intermediul unei ARN polimeraze ADN dependente sinteza unui ARNm precoce. Originea ARN polimerazelor variaz de la o grup (familie) de virusuri la alta. La unele grupe de virusuri ARN polimeraza preexist n interiorul virionului, fiind o protein virus specific. Majoritatea virusurilor ADN codific ns utiliznd ARN polimeraze celulare. In virionul Poxvirusurilor, pe lng ARN polimeraz, se gsete i o dezoxiribonucleaz i o nucleotidfosfohidrolaz. Acestea intervin n biosinteza materialului viral ca enzime tardive. ARNm precoce codific sinteza de genomuri virale progene i de proteine virale precoce, majoritatea de natur enzimatic. Genomurile progene au aceeai capacitate de codificare ca genomul viral parental. Proteinele precoce produc inhibarea replicrii ADN, ARN i a proteinelor specifice celulei gazd i catalizeaz sinteza unor precursori ai proteinelor virale structurale. Faza tardiv. In momentul cnd n urma replicrii ADN viral s-a ajuns la un anumit numr de genomuri virale patogene este inhibat sinteza proteinelor precoce, declanndu-se prin intermediul unui ARNm tardiv sinteza proteinelor tardive n marea lor majoritate proteine structurale, virus specifice care urmeaz s fie asamblate n procesul de morfogenez a noilor virioni. Echipamentul enzimatic evideniat n celulele n care are loc biosinteza virusurilor ADN este reprezentat cu precdere de enzime corelate cu metabolismul ADN. Astfel, n celule care multiplic un Herpesvirus au fost identificate urmtoarele enzime: timidinkinaza, timidinmonofosfatkinaza, ADN polimeraza i deoxiribonucleaza. Timpul n care decurg cele dou etape ale biosintezei este n funcie de grupa (familia) de virusuri. La Adenovirusuri, faza precoce dureaz 6-8 ore, sinteza proteinelor tardive ncepnd din a 8-a or.

11

Virusurile ARN determin biosinteza metabolismului viral de ctre celula gazd prin mecanisme variate, dar ncadrabile n trei scheme (strategii) mai importnate. a) ARN viral ndeplinete direct rolul de ARNm precoce i poate transmite informaia genetic direct la nivelul ribozomilor printr-un proces de substituire direct sau scurtcircuitare a ARNm celular, acest mecanism este caracteristic pentru Picornavirusuri b)ARN viral nu poate fi citit la nivelul ribozomilor celulei i nu poate deci transmite direct informaia nscris n genomul viral. De aceea, el va determina sinteza unui ARNm precoce de neoformaie care va declana sinteza proteinelor virale precoce, dup care procesul continu ca la celelalte grupe de virusuri. Unele virusuri ARN care se multiplic n acest mod pot conine n virion transcriptaze structurale. Dup aceast schem se sintetizeaz Mixo i Rhabdovirusurile. c) ARN viral, printr-un proces de transcriere invers cu ajutorul unor enzime numite invers sau reverstranscriptaze determin formarea unui ADN proviral. Invers transcriptaza pare a nu fi o singur enzim, ci un complex format din 3 enzime: o ADN polimeraz ARN instruit, o ADN polimeraz hibrid instruit i o ADN polimeraza ADN instruit. Separarea celor trei enzime nu a reuit pn n prezent. Transcrierea invers este un fenomen unic n biologie. Prin acest proces enzimatic se formeaz un ADN proviral care preia conducerea sintezelor celulare dup modelul descris la virusurile ADN. Prin intermediul unui ARN polimeraze ADN dependente el determin sinteza proteinelor virale precoce, restul proceselor fiind aproximativ identice cu ale celorlalte scheme de biosintez. ADN proviral se poate, n unele cazuri, integra n genomul celular sub form de provirus. Multiplicarea dup acest mecanism a fost identificat la unele virusuri tumorale ARN. Asamblarea (morfogeneza) virionului La sfritul fazei de biosintez, dup ce n celul s-au acumulat cantiti mari de acid nucleic i proteine virale, are loc asamblarea noilor virioni. La virusurile mici, aezarea componentelor n jurul genomurilor virale, fenomen numit i ncapsidare, se petrece spontan printr-un proces de autoasmblare. La cele mai multe virusuri, asamblarea implic ns intervenia unor enzime. La virusurile complexe intervin i gene morfogenetice care codific arhitectura proteinelor structurale ale virionului. Incapsidarea se realizeaz prin asocierea unor proteine precursoare n uniti formate mai nti din 3 subuniti, constituind o protein 5 S, iar apoi din subuniti rezultnd o pentamer 14 S. Din asamblarea a 12 pentamere rezult o procapsid 80 S constituit din 60 subuniti aranjate dup tipul de simetrie icozaedral. Asamblarea capsidelor are loc independent de prezena genomurilor virale, fenomenul demonstrat prin experiena lui Jacobson i Baltimore (1967) care, n urma inhibrii replicrii ARN a virusului poliomielitei n prezena guanidinei au constatat acumularea n celul de capside goale. Incorporarea acidului nucleic are loc prin sciziunea ntr-un anumit punct a unei proteine gigante precapsidale. Proteina gigant are masa molecular 40x103, iar proteinele care rezult din scindarea ei n momentul adiionrii ARN au masele moleculare de 28x103 i respectiv 12x103. Timpul de ncapsidare a unui genom ARN este de dou minute. Intre sinteza proteinelor capsidale i apariia lor n structura virionilor nou formai exist ns un interval de 20 minute. Aceasta pledeaz pentru admiterea formrii unui depozit (Pool) intracelular de proteine capsidale care crete cu timpul n volum, depozit din care emisia de proteine capsidale pare a avea loc la ntmplare pe parcursul morfogenezei virionilor. Morfogeneza, ca regul general, are loc pentru virusurile ARN intracitoplasmatic, iar pentru virusurile ADN intranuclear. Materialul viral, dup sinteza lui n citoplasm, migreaz n cazul virusurilor ADN n nucleul celulei gazd asamblndu-se aici. Excepii de la aceast caracteristic general o reprezint poxvirusurile care, fiind virusuri ADN, se asambleaz n citoplasm i myxovirusurile care, fiind virusuri ARN, se ncapsideaz n nucleu. Diferene ntre grupele (familiile) de virusuri exist i n ce privete locul i structurile intracelulare din
12

citoplasm i nucleu unde are loc asamblarea lor. Astfel, poxvirusurile i picornavirusurile se pot asambla n diverse zone ale citoplasmei, rhabdovirusurile de obicei pe membranele marginale ale vacuolelor intracitoplasmatice, iar myxovirusurile dup ncapsidarea lor n nucleu i desvresc faza de maturare la periferia celulei, limitrof membranei. Eliberarea virionilor din celul Virionii nou formai pot fi eliberai din celul prin mai multe procese dup cum urmeaz: Inmugurirea sau burjonarea este modul cel mai frecvent de eliberare a virusurilor din celul. El a fost observat i studiat mai nti la virusurile a cror maturare are loc curent n apropierea membranei celulare, mai trziu s-a constatat c este n realitate mult mai extins. Modelul general se caracterizeaz prin includerea ntr-o prim faz a virionilor nou asamblai n vezicule (cisterne) care se ataeaz de faa intern a membranei celulare la suprafaa creia proemin i o bombeaz asemntoare unor muguri. Apoi, acetia se detaeaz de celul prin mici aperturi care apar n membran. Intensitatea fenomenului i aspectul poate mbrca o gam destul de variat de forme. Uneori, eliberarea virionilor are loc exploziv sub form de vacuole care se degaj la suprafaa celulei simultan i asincron. Alteori, la suprafaa celulelor se formeaz nite viloziti, iar virionii ies n mediul extracelular prin extremitile acestora. In urma procesului de nmugurire virusul pstreaz n componena nveliului sau mai ales al pericapsidei anumii compui specific celulei care l-a sintetizat, provenind din membrana intern a cisternei (veziculei) n care fusese inclus n cursul nmuguririi, fapt care determin prezena la aceti virioni a dou categorii de proteine: - proteine virus specifice elaborate de celul conform informaiei genetice a acidului nucleic viral - proteine cu specificitate de gazd care fac parte din compuii obinuii ai celulei i care sunt antrenai n structura nveliului particulei virale (a pericapsidei) n cursul eliberrii virusului din celul Liza celulei gazd sub aciunea unor enzime produse n celul n ultima faz a morfogenezei, acest mecanism caracteristic bacteriofagilor se ntlnete rar la virusurile animale. Eliberarea virionilor consecutiv morii celulei i dezintegrrii acesteia, aceste virusuri apar cel mai trziu, iar punerea lor n libertate se caracterizeaz printr-o frecven moderat.
Trecerea virionilor direct la celula adiacent celei n care a avut loc multiplicarea prin porii membranei celulare.

CARACTERIZAREA TIPURILOR DE COMPLEX VIRUS CELULA Din toate posibilitile de interaciune virus celul prezentate anterior rezult urmtoarele tipuri de stri sau complexe virus celul. - Starea independent (complex virus celul independent) care corespunde situaiei n care virusul se multiplic rezultnd n final noi virioni (ciclul productiv). Termenul de independent nu reflect ntocmai realitatea ntruct nsi existena virusurilor este indisolubil legat de dependena acestora de celula vie. El corespunde realitii numai n sensul c pentru un timp limitat virusul poate fi conservat i vehiculat n afara celulei pn n momentul cnd reuete s infecteze o nou celul sensibili. Starea independent poate fi la rndul ei de dou feluri, n funcie de procesele pe care le sufer gazda: - starea independent cu efect citocid caracterizat prin moartea celulei consecutiv producerii virusului; n acest caz, biosinteza de material viral duce la blocarea total a sintezei proteinelor celulare - starea independent echilibrat corespunznd infeciei endosimbiotice n care procesele de biosintez a materialului viral nu deranjeaz sintezele
13

compuilor celulari proprii, iar producia i eliberarea noilor virioni este compatibil cu continuarea vieii celulei gazde - Starea dependent (complexul dependent) care corespunde formei de virus integrat (ciclul reductiv). In funcie de starea virusului din celul, celulele se mpart n dou categorii: - celule permisive n care se desfoar ciclul productiv finalizat prin eliberarea de noi virioni - celule nepermisive n care nu are loc producia de noi virioni (ciclul reductiv) Modificarile morfologice ale celulelor infectate cu virusuri Multiplicarea virusurilor ntr-o celul provoac o gam larg de modificri morfologice i fiziologice ale acesteia. Efectul citopatic Termenul de efect citopatic este utilizat n virusologie cu dou semnificaii semantice: - n sens larg, efectul citopatic este orice modificare morfologic a unei celule datorit prezenei unui virus - ntr-un sens mai ngust care vizeaz n mod concret practica cultivrii virusurilor n culturi celulare, prin efect citopatic se nelege dezorganizarea i modificarea morfologic pe care o sufer celulele dintr-o cultur, consecutiv multiplicrii virusului. Efectul citopatic este cel mai uor de observat n cazul cultivrii virusurilor prin tehnica Dulbecco a monostratului (monolayer). In cazul relaiei virus-celul cu efect citopatic se constat de obicei pierderea continuitii monostratului, tendina celulelor de a devia de la forma lor normal spre forme sferice, tergerea treptat n mase amorfe. In unele cazuri, efectul citopatic este caracteristic pentru un virus ntr-o cultur cu un anumit tip de celule i poate constitui un criteriu pentru identificarea virusului respectiv. Potenarea efectului citopatic const n apariia mai rapid i mai accentuat a efectului citopatic n cazul unor asociaii virale. De exemplu, virusul pseudopestei aviare produce un efect citopatic n 5-6 zile, virusul pestei porcine nu produce efect citopatic. Dac o cultur celular cu virusul pestei porcine se suprainfecteaz cu virusul pseudopestei aviare, efectul citopatic apare mult mai rapid. Efectul litic Este o form particular a efectului citopatic caracterizat prin liza celulelor. Zonele de liz produse de virusurile zoopatogene n monostraturile de celule animale, ct i cele produse de bacteriofagi n culturi bacteriene pe medii solide poart numele de plaje. Ele sunt date de un virus cu efect litic, plajele sunt foarte dese, se ntreptrund rezultnd o liz confluent. La virusurile animale productoare de plaje n monostraturi i la bacteriofagi se pot face aprecieri cantitative asupra numrului de virioni dintr-un material ce conine virus pe baza determinrii unitilor formatoare de plaje notate prescurtat PFU (plaque forming units). Intructva, analog cu numrtoarea coloniilor bacteriene, determinarea cantitativ a virionilor pe baza numrului de PFU se bazeaz pe premiza c o plaj este generat de prezena iniial a unui singur virion. Fuziunea celular Unele paramyxovirusuri produc n culturile celulare n care se cultiv sinciii rezultate din fuzionarea celulelor care conin virusul. Fuziunea poate avea loc ntre celule de acelai fel i n unele cazuri i ntre celule din esuturi cu origini diferite (heterocarioni). Astfel, n urma cultivrii virusului parainfluenei s-a putut determina apariia unor sinciii hibride rezultate din fuzionarea de celule umane cu celule de oarece.

14

Fuziunea celular poate fi provocat i cu virusuri iradiate (ex. virusul Sendai). Mecanismul fuziunii pare a se realiza sub aciunea concomitent a neuraminidazei aceluiai virion fixat la nivelul zonei de contact ntre cele dou alturate crendu-se astfel o punte celular ntre ele. Fuziunea celular sub aciunea virusurilor este utili experimentelor de biologie celular oferind posibilitatea unor studii de hibridare intracelular n cele mai diverse combinaii. Hemaglutinarea i hemadsorbia Unele virusuri, mai ales cele nvelite de pericapsid, au capacitatea de a aglutina globulele roii ale diferitelor specii animale. Acest fenomen a fost observat prima oar de Hirst (1940) i i poart numele. Aciunea hemaglutinant este condiionat de prezena pe suprafaa virionului a unor protuberane cu aspect de spiculi sau antene numite hemaglutinante. Hemaglutinarea este consecina adsorbiei virionilor pe suprafaa hematiilor sau a eritrocitelor la nivelul creia se produc modificri de natur electrostatic. Proprietile hemaglutinante constituie un criteriu de evideniere a virusurilor. Hemaglutinarea nu este un fenoimen specific, neexistend deosebiri nici de aspect al reaciei i nici de mecanism ntre diferitele virusuri hemaglutinante. Reacia poate fi utilizat n schimb pentru determinarea cantitativ a concentraiei de virioni dintr-un material prin executarea ei n diluii seriate n tuburi sau plci cu godeuri. Concentraia de virus se deduce dup diluia maxim la care are loc hemaglutinarea. Hemaglutinarea poate fi utilizat ca reacie indicatoare n cadrul unei reacii serologice cu grad nalt de specificitate i anume inhibarea hemaglutinrii. Aceasta se bazeaz pe pierderea capacitii hemaglutinante a virusului dup neutralizarea acestuia cu anticorpi specific. Anticorpii fixai pe virioni mpiedic adsorbia acestora pe suprafaa globulelor roii. Hemadsorbia este o variant a hemaglutinrii aplicat n cazul cultivrii virusurilor n monostraturi celulare. Ea se bazeaz pe aglutinarea i adsorbia hematiilor sau eritrocitelor pe suprafaa celulelor din monostrat n care s-a multiplicat virusul. Efectul incluziogen In celulele n care se multiplic virusul, apar frecvent structuri corpusculare de dimensiuni variabile ntre 1-30 microni diametru cu afiniti tinstoriale n majoritatea cazurilor, oxifilie numite incluzii virale. Ca leziune microscopic, incluziile au fost descrise cu mult nainte de descoperirea virusurilor. Ele poart numele diferiilor autori care le-au observat i descris pentru prima oar. De exemplu, incluziile Babe Negri n turbare, Bollinger n variola aviar, Guarnieri n infeciile cu virusul vaccinal. Mult mai trziu s-a stabilit relaia constant ntre prezena acestor leziuni celulare microscopice i infecia viral. Sediul incluziilor este n general n citopalsm, n cazul virusurilor ARN i n nucleu n cazul virusurilor ADN. Poxvirusurile constituie o excepie, n sensul localizrii n citoplasm a incluziilor Bollinger. Incluziile la diferite virusuri pot avea o natur i un mecanism de formare diferit: - la adenovirusuri, incluziile sunt constituite din material viral n diferite faze ale procesului de biosintez sau morfogenez - la reovirusuri sunt modificri la nivelul unor organite celulare provocate de multiplicarea viurusului - la herpesvirusuri ele reprezint locul unde a fost sintetizat materialul viral nlocuit ulterior cu o substan oxifil Incluziile virale pot fi puse n eviden n amprente sau seciuni histiologice prin diferite metode, dintre care cele mai importante sunt:

15

colorarea prin metode speciale (Sellers pentru amprente, Mann, Lentz pentru seciuni) - imunofluorescena cu seruri specifice fa de virusul respectiv, marcate cu substane fluorocrome - autoradiograma cu izotopi radioactivi Punerea n eviden a incluziilor reprezint o metod frecvent utilizat n practica diagnosticului ntr-un numr mare de viroze. Specificitatea lor pentru un anumit virus este detrminat de prezen lor n esutul pentru care virusul manifest histotropism i de poziia lor n celul, citoplasm sau nucleu. La noi n ar, la nivelul laboratoarelor veterinare judeene evidenierea incluziilor Babe Negri n neuronii piramidali din cormul lui Ammon constituie o metod curent pentru diagnosticul turbrii. Producerea de aberaii cromozomiale Diferite virusuri din grupurile paramyxo, adeno, papova sunt capabile s produc n celulele n care se multiplic aberaii cromozomiale. Acestea pot fi: fragmentri de cromozomi ajungnd la pulverizri, translocri (mutarea unor segmente de ADN de pe un cromozom pe altul) i fuzionri de cromozomi. Consecinele cele mai grave ale acestor efecte ale virusurilor se manifest la femelele gestante, cu umri pentru viitorii produi. Asemenea situaii fac ca ntreruperea sarcinii s fie permis la femei care n cursul graviditii au suferit de unele viroze. Efectul transformant (oncogen) Din aproximativ 600 virusuri identificate pn n prezent la animale, la aproximativ (150) s-a demonstrat un potenial oncogen. Tranformarea tumoral este caracteristic pentru unele virusuri la specia natural receptiv n condiiile infeciei naturale. Prezena tumorilor este, n astfel de cazuri, i principala manifestare anatomoclinic din virozele respective. Aa este cazul leucozelor aviare, a leucozei taurinelor, al sarcomului lui Rous la psri. O alt categorie de virusuri nu produc transformarea tumoral la speciile natural receptive, ci numai n condiiile experimentale pe animale de laborator; aa este cazul virusului SV 40 (Simlan vacuolizant 40) care, n condiii naturale se gsete n stare latent n rinichiul de maimu unde nu produce nici o infecie aparent, dar inoculat la hamster are prorpieti oncogene. Efectul oncolitic Unele virusuri, consecutiv multiplicrii lor n celulele tumorale sunt capabile s opreasc evoluia sau chiar s provoace regresul i liza tumorii. Efectul oncolitic s-ar explica prin necesitatea pentru biosinteza viral a unor compui celulari, indispensabili n acelai timp i pentru dezvoltarea celulelor tumorale. Degradarea celulelor tumorale le face accesibile fagocitozei, ceea ce creaz premizele ramolismentului tumorii. Utilizarea virusurilor oncolitice n terapia anticanceroas nu s-a putut realiza datorit faptului c aceste virusuri, pe lng efectul lor antitumoral, au i aciune nociv pentru sistemul nervos.

16

PRIONII Prionii sunt ageni patogeni care genereaz un grup de boli neurovegetative printr-un mecanism complet nou. Bolile prionice se pot caracteriza ca dereglri genetice, sporadice sau infecioase cauzate de dereglri ale proteinei prionice (PrP). (de la acronomul i anagrama din limba englez Proteinaceous infectious particle). Primul este o particul infecioas proteic care rezist la tratamente draconice (formol, sterilizare clasic, iradiaii). Americanul Stanley Prusiner (premiant Nobel n medicin, 1997) a descoperit n 1997 acest germene neconvenional care provoac encefalopatii spongiforme transmisibile (EST), boli cunoscute la oaie nc din 1732 (scrapie) i la om din 1920 (boala Creutzfeld Jacob). Encefalopatiile spongiforme transmisibile (EST) sunt boli ale omului i ale mamiferelor caracterizate prin: - perioada de incubaie lung, de ordinul anilor - simptomatologie exclusiv nervoas i evoluie clinic lent ce dureaz sptmni, cel mai adesea luni, uneori ani, ntotdeauna cu sfrit letal - transmisibilitatea pe cale parenteral sau digestiv la aceeai specie sau la alte specii, atunci cnd se folosete ca material infectant esutul nervos, uneori i alte esuturi recoltate din cazuri de boal - absena oricrui rspuns imun fa de agentul transmisibil, dei gazd i pstreaz nealterat competena imunologic fa de alte antigene - leziuni degenerative ale encefaului, reprezentate prin vacuolizri ale pericarionilor i ale neuropilului, necrobioz neuronal, proliferri gliale (astrocitoza) i uneori formarea de plci amiloide, frecvena i localizarea acestor modificri variaz n mare msur n funcie de specia i rasa animalului gazd i de tulpina agentului transmisibil.

17