Manipulao de protenas, DNA e RNA

Weber Cheli Batista - FIMCA - Biomedicina

Isolamento, clonagem e seqenciamento de DNA

At meados da dcada de 1970 o DNA era a molcula celular mais difcil de analisar bioquimicamente. Enormemente longa e quimicamente monotona, o cordo de nucleotdios que forma o material gentico de um organismo podia ser examinado somente de forma indireta.

Pela seqncia de uma protena, ou pela de um RNA.

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Hoje a situao foi mudada. A molcula mais difcil de se analisar tornou-se a mais fcil. Tambm possvel isolar uma regio especfica de um genoma e produzir virtualmente milhares de cpias dessa regio especfica.

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O projeto Genoma Humano produziu grande desenvolvimento em termos de tcnicas, equipamentos e softwares.

Geravam seqncias de DNA na razo de 1000 nucleotdios/segundo

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Esses avanos tcnicos em engenharia gentica - habilidade de manipular o DNA com preciso em um tubo de teste ou em um organismo - tem causado um grande impacto em todos os aspectos da biologia celular.

Pela facilidade do estudo das clulas e suas macromolculas ainda em suas vias provisrias.

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Esses estudos tem levado a descobrir novas classes inteiras de genes e protenas. Enquanto revelam que que muitas protenas so altamente conservadas na evoluo do que se suspeitava. Elas so promotoras de novas ferramentas para determinadas funes de protenas e de domnios individuais dentro das protenas.

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Atravs da disponibilizao de grandes quantidades de protenas, elas se mostram eficientes na produo de: hormnios e Vacinas.

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Finalmente, permitindo que as regies reguladoras de genes fossem conhecidas, Elas forneceram aos bilogos uma ferramenta importante para desenrolar a rede complexa de regulao, atravs da qual a expresso do gene eucaritico controlado

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A tecnologia do DNA recombinante compreende um mistura de tcnicas, algumas novas e algumas j utilizadas em outros lugares tais como na microbiologia.

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1) Clivagem do DNA em stios especficos pelas nucleases de restrio, que facilita o isolamento e manipulao individual de genes.

2) Clonagem do DNA atravs do uso de vetores de clonagem ou de PCR, por meio de que um simples molcula de DNA pode ser copiada para gerar muitos milhes de cpias idnticas.

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3) Hibridizao de cido nuclico, que torna

possvel encontrar uma seqncia de DNA ou RNA com grande preciso e sensibilidade com base na habilidade da ligao de uma seqncia de complementar de cidos nuclicos.

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4) O rpido seqenciamento de todos os nucleotdeos em um fragmento de DNA purificado, que faz possvel identificar genes e assim deduzir a seqncia de aminocidos de uma protena por ele codificada. \

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Monitoramento simultneo do nvel de expresso

de cada gene em uma clula, usando a tcnica de acido nuclico Microarray que permite dezenas de milhares de reaes de hibrizaes serem feitas simultaneamente.