PROPAGACIN DE ARNDANOS

Marcelo Rodrguez Beraud. Ing. Agrnomo. M. Sc., . Escuela de Agronoma, Facultad de Recursos Naturales, Universidad Catlica de Temuco. Rudecindo Ortega 02950. Temuco. Email: marodrig@uct.cl; fono: 45-205536.

INTRODUCCIN La gran cantidad de plantas requerida para establecer un huerto de arndano, junto con cumplir con requisitos de uniformidad varietal y sanitarios han generado una gran demanda por plantas de calidad, la cual se lleva a cabo a travs de viveros especializados. La propagacin vegetativa de arndano se ha realizado preferentemente de dos maneras, el enraizamiento de esquejes de tallo y la micropropagacin. En Chile, durante los comienzos de las plantaciones de arndano se utiliz masivamente el enraizamiento de esquejes donde muchos productores enraizaban el material sobrante de la poda invernal, siendo en la ltima dcada donde la propagacin de plantas a partir de cultivos de tejidos ha tenido gran auge. La principal ventaja que ofrece este tipo de sistema se basa en la obtencin de una gran cantidad de plantas, menor tiempo y libres de agentes patgenos como los virus, hongos y otros. Tambin se le atribuido alargar la vida productiva de la plantas, poseer una mejor estructura y evitar una temprana oracin. PROPAGACIN DE ESQUEJES Para la propagacin de esquejes es necesario realizar las siguientes actividades. Colecta de tallos. Para obtener el material para esquejes se utilizan los tallos o ramillas con madera del ao, lo cual se realiza en dos pocas, durante julio a agosto que corresponde a un esqueje semileoso sin hojas y durante enero a febrero con esqueje de madera suave con hojas. Para esto, se saca el tallo que han crecido durante el ao, las que son almacenadas en sacos, y son llevadas a su tratamiento para obtener esquejes. Preparacin de sustratos de enraizamiento. Se utiliza turba magallnica con perlita, de esta manera se le da al sustrato condiciones qumicas y fsicas adecuadas para la promocin de races adventicias. En las camas calientes de invierno se utiliza la turba mezclada con perlita en proporcin 4:1 (v/v) y en las camas calientes de verano se usa una relacin 2:1, ya que en estas ultimas hay una mayor frecuencia de riego. Una vez nalizado el perodo de enraizamiento los esquejes enraizados se transplantan a bolsas de aproximadamente 20 por 25 cms para su viverizacin. Tratamiento de esquejes. El tratamiento de los esquejes de arndanos consiste en desinfeccin, corte y aplicacin de hormonas enraizantes. Las ramillas se cortan a los 8 cm de longitud, quedando conformada por alrededor de 4 a 5 yemas el corte apical se hace en bisel n de facilitar el escurrimiento de agua en el esqueje y evitar pudriciones. El corte basal se realiza justo bajo una yema. La estaca debe estar ser de madera del ao y vegetativa por lo que se eliminan aquellas porciones de tallo que contengan yemas orales que se ubican en el primer tercio superior de la ramilla colectada durante la poda. Para el caso de esquejes con hojas, se deben eliminar las hojas basales a n de disminuir la transpiracin. Los esquejes se desinfectan sumergindolos en una solucin de Captan de 40 gr por 20 litros de agua.

Enraizamiento de esquejes de madera semidura en perlita

Enraizamiento de esquejes sobre camas calientes en sustrato de turba y perlita La aplicacin de hormonas enraizantes facilitan la emisin de races, para ello se utilizan el cido indol actico (AIA), naftalen actico (ANA) o indol butrico (AIB) en concentraciones de 1000 a 4000 ppm. Estas hormonas pueden ser adicionadas en polvo o como soluciones hidroalcohlicas. Las formulaciones en polvo es la que ms se utiliza en los productos comerciales, no obstante un viverista puede preparar sus propias hormonas a la concentracin que el desee. Si queremos preparar 1 litro de una solucin de AIB a 4000 ppm a partir de etanol 96 y AIB 99 % de pureza, debemos en un frasco agregar 520 cc de alcohol 4 g de AIB y 480 cc de agua. La solucin debe ser guardada en fro en ausencia de luz ya que estas hormonas son fotolbiles, en especial AIA. Por ultimo, los esquejes son colocados en camas calientes que contienen la turba mezclada con perlita. La plantacin se realiza con un marco de 3x3 cm. Las estacas se entierran 4 cm de profundidad y se sella la parte superior del corte pintando con una pintura fungicida. Todo el proceso de enraizamiento de esquejes se realiza en camas calientes en el interior de un invernadero. Las camas son normalmente de 2 metros de ancho por 10 a 25 metros de largo, con un sistema de calefaccin en base a radiadores que se encuentran insertos en cemento. La temperatura de las camas calientes vara en un rango de entre 18C y 23C. La temperatura del invernadero se baja cuando llega a los 25C, abriendo las ventanas laterales o aplicando riego. El invernadero de propagacin utilizado es en general de estructura metlica y cubierta de polietileno tiene una dimensin de 8 metros de ancho por 15 a 30 metros de largo, debe poseer aspersores con el sistema de riego fog, El calor que generan los radiadores tanto al invernadero como a las camas calientes pueden ser aportado por una caldera que utiliza lea como combustible, otras alternativas, aunque ms costosas son el uso de gas o electricidad.

Los esquejes de invierno permanecen en camas calientes de julio hasta diciembre y los de verano de enero hasta julio. En los esquejes de invierno se riega dependiendo de la humedad que se encuentra dentro de las camas del invernadero pero este variar dependiendo de las temperaturas que hayan acaecido, por lo cual estos riegos pueden variar de un riego cada 3 das hasta 1 riego a la semana. En tanto que, para las estacas de verano, se utilizar una mayor frecuencia debido a las altas temperaturas, la cual puede llegar a cada media hora durante el da con 10 segundos de riego. VIVERIZACIN Preparacin de suelo y transplante a bolsas. El suelo a utilizar para el llenado de bolsas debe ser un compost de tierra de hoja, arena y accula de pino, para obtener condiciones de acidez, drenaje y porosidad. Las plntulas provenientes del invernadero de propagacin se pasan a bolsas de polietileno de 20 x 25 cm. con un grosor 0,7 micrones, con 8 oricios de perforacin. Al efectuar el trasplante se debe tener el sustrato hmedo, para evitar que se afecten las races por desecacin, la tierra que se aplica alrededor de la planta se debe apretar ligeramente. Acondicionamiento en sombreadero. Con el n de proteger a las plantas cultivadas en bolsa, reducir la evapotranspiracin, las altas temperaturas y la intensidad luminosa del verano es necesario el uso de un sombreadero. Para ello se utiliza polines de pino impregnado de 3 dispuestos cada 2,5 metros de distancia cubriendo el techo y los laterales con malla raschell de 50%. El riego en el sombreadero se realizar por aspersin. En el sombreadero las plantas en bolsas permanecen hasta su venta.

Acondicionamiento de plantas en bolsas en sombreadero. Manejo de vivero Manejo tosanitario. Para la prevencin y control de plagas y enfermedades, se aconseja alternar los productos comerciales a n de evitar resistencia Para hongos se aplican fungicidas en forma peridica, a partir de mayo y hasta diciembre se aplica alternadamente cada producto una vez por semana. En enero y febrero debido a la mayor temperatura y humedad se llegan a aplicar hasta 3 veces por semana. Para el control de babosas y caracoles se utilizar toximol. Una secuencia de fungicidas utilizados y sus dosis se detallan a continuacin: Captan 40 gr/20 litros de agua. Benomilo 20 gr/ 20 litros de agua. Teldor 12 gr/ 20litros de agua. Bravo 20 gr/ 20 litros de agua. Oxicup 60 gr/20 litros de agua. Para el caso de los insecticidas, estos se aplican en forma preventiva, las aplicaciones posteriores sern segn necesidad. Gusation 20 cc/ 20 litros de agua. Sevin 30 cc/20 litros de agua. Lorsban 20 gr/ 20 litros de agua.

Control de malezas. Para mantener al cultivo libre de malezas durante la viverizacin se recurre usualmente a controles qumicos de pre siembra con herbicidas suelo activos. Todos los controles restantes se efectan en forma manual a travs del arranque de malezas una vez por semana. Control de lagomorfos y roedores. Para el control de liebres, conejos y roedores, se contempla el cierre perimetral de toda la zona de produccin con malla hexagonal. Para el control de roedores se mantendr un programa de desratizacin. Fertilizacin. Para la fertilizacin foliar de plantas en bolsas, se pueden utilizar: Speedfol 200 cc/ 20 litros de agua. Fertiactyl 150 cc/ 20 litros de agua. Las aplicaciones de estos productos se realizan junto con alguno de los fungicidas, y comienzan a partir de septiembre hasta mayo, con una aplicacin semanal. Riego. El tipo de riego utilizado tanto dentro de los sombreaderos es por aspersin. La frecuencia de riego depender de las necesidades. PROPAGACIN IN VITRO En trminos generales, la micropropagacin, es una forma especial de propagacin vegetativa, caracterizada por manejar condiciones de esterilidad, que posee diversas ventajas tales como, menor tiempo de propagacin, exclusin de patgenos y potencial para conservacin a largo plazo, respecto a los mtodos convencionales. Se ha demostrado que las plantas de arndano derivadas de cultivo de tejido tienen un hbito de crecimiento ms tupido, con mayor brotacin lateral, mayor desarrollo de corona, mayor cantidad de yemas orales por planta, lo que signica mayor cantidad de frutos y se traduce en mayores producciones, otra ventaja que presenta la micropropagacin es la calidad sanitaria, as como su utilizacin en variedades que son difciles de enraizar. Preparacin de Medios de Cultivo. Para la preparacin de los medios de cultivo se utilizan materiales como pipetas, matraces, vasos precipitados, pinzas, bistur y placas. Par el caso de equipos, se requiere de autoclave, destilador, refrigerador, pH metro, balanza analtica, agitador magntico, cmara de ujo laminar y cmara de incubacin. Para la preparacin de medios se utilizan medios basales en polvo que vienen preparados y mezclados de acuerdo al medio de cultivo que se trate o existe la alternativa ms barata de preparar soluciones madres concentradas de distintos componentes, agrupados de forma que no produzcan fenmenos de precipitacin. Se prepararn soluciones de macronutrientes, micronutrientes, hierro con un agente quelante y vitaminas, as como soluciones concentradas especcas para los dems reguladores de crecimiento. Las soluciones concentradas se mantienen en refrigerador en frascos color ambar. Una vez obtenido el volumen de medio deseado se procede a ajustar su pH al valor prejado de 5,0 a 5,2 mediante la adicin de NaOH 0.1N y/o HCl 0.1-1 N. Posteriormente se aade al medio un agente solidicante, 0.5 a 0.7% de agar, y se funde por calentamiento breve en microondas e inmediatamente se dosican en frascos de vidrio de 200 ml, con 30 a 40 cc de medio por frasco los que se tapan con papel aluminio y sellados con paralm u otro lm plstico. Finalmente se procede a esterilizar los medios y sus frascos en autoclave a 121C durante 20 minutos. El medio de cultivo ms utilizado es el MS suplementado con 4 a 5 mg L-1 de isopenteniladenina (2iP), 30 g L-1 de sacarosa. Respecto al agente gelicante, este puede tener efectos en el desarrollo de los explantes, es as como en investigaciones llevadas a cabo en la UCT, se pudo determinar que para Brigitta, la mayor cantidad de brotes estuvo asociada a bajas dosis de gelicante y fuerza gel (5g/l con agar FG600), en comparacin con agares de mayor fuerza gel y gelrite. La densidad de explantes para frascos de 200 ml puede variar de 10 a 25 plantas. Siembra y multiplicacin de explantes. Para la siembra y repiques in vitro se utiliza una cmara de ujo laminar horizontal, donde se procede a sembrar los nudos con dos yemas que son depositadas sobre los medios nutritivos.

Como fuente de explantes se utilizan segmentos nodales de plantas in vitro desarrolladas en el laboratorio o material de campo si se quiere establecer el cultivo. Para el caso de incorporar nuevo material de campo, una propuesta de protocolo de desinfeccin del material vegetal se da a continuacin: Lavado del material vegetal con agua corriente, para retirar restos de tierra u otras partculas. Eliminacin de las partes muertas e infectadas de la planta. Introduccin de la porcin de planta en una solucin de fungicida que contenga Mancozeb y Benomil por 30 minutos. Sumergir la planta en una solucin de hipoclorito de sodio (1%) con Tween 20, durante 20 minutos. Sumergir el material vegetal con alcohol diluido al 80% durante 5 segundos. Enjuagar el material vegetal con agua estril para eliminar la solucin de alcohol. El enjuague debe realizarse tres veces sucesivas por 2 minutos cada vez. Una vez estril el material vegetal se procede a la siembra en el medio de cultivo, en la cmara de ujo laminar. Al nalizar la siembra, los frascos son sellados con papel aluminio y llevados a incubacin en una cmara de crecimiento o de cultivo.

Siembra in vitro de arndanos en cmara de ujo laminar y planta enraizada in vitro.

Incubacin in vitro. La incubacin de los explantes provenientes del repique o del establecimiento de plantas de cultivo in vitro se realiza en una sala con acceso restringido, la cmara de cultivo mantendr una temperatura de 21C, iluminacin de 3000 lux y un fotoperodo de 16 horas luz y 8 horas de oscuridad. Para el control de la temperatura se utilizar un sistema de aire acondicionado controlado por termostato. La cmara de cultivo dispondr de una serie de unidades productoras de luz situadas de forma tal que iluminaran toda la supercie til de la cmara. Las unidades productoras de luz sern tubos uorescentes de luz da y estarn situadas verticalmente, la batera de uorescentes se ubicaran en los laterales de la cmara de cultivo. Las reactancias necesarias para el funcionamiento de los uorescentes se situaran en el exterior de la cmara, para evitar que el calor generado por estas diculte el control de la temperatura. El perodo de incubacin para arndanos vara entre 30 a 45 das.

Cmara de incubacin. Produccin de arndano in vitro. Enraizamiento y aclimatacin de plantas in vitro. Para el caso del arndano, es posible realizar el enraizamiento ex vitro y la aclimatacin al mismo tiempo con el consiguiente ahorro de recursos. Una vez que las plantas provenientes de cultivo in vitro alcanzan una altura de 4 cm de longitud, lo cual se consigue entre 30 a 45 das, se sacan del frasco de vidrio y se les extrae los restos de agar con agua tibia, luego se cortan trozos de tallos individuales de aproximadamente 3 cm de largo y se aplica en la base del tallo un enraizante comercial o solucin hidroalcoholica (30%) con 1000 ppm de AIB, los microesquejes se colocan en speedling de 406 cavidades con turba desinfectada. Al respecto no es conveniente enraizar la planta in vitro completa ya que el callo que se forma en la base diculta la emisin de races y por otra parte se obtienen menos plantas. A continuacin los speedlings son llevados a un invernadero para el enraizamiento ex vitro de los brotes micropropagados, las camas calientes deben estar al interior de un invernadero y estas a su vez pueden contar con un tnel individual para mejorar el manejo de la temperatura y humedad. La temperatura de fondo debe estar en un rango de los 20C a los 24C y la humedad ambiental debe ser superior al 80% la cual es aportada por un sistema de nebulizadores controlados con un programador. Las plantas derivadas del cultivo in vitro pasan por un perodo de adaptacin a las condiciones de terreno. Estas condiciones estn dadas por un invernadero especialmente acondicionado para estos nes. El invernadero tipo tnel de estructuras de metal cubierto con polietileno de alta resistencia y malla ruschell 50%, dotado de un sistema de riego automatizado de microaspersin. La ventilacin es a travs de ventanas laterales que se suben con un sistema de poleas.

Lavado de plantas in vitro y aplicacin de enraizantes en polvo a tallos micropropagados.

Enraizamiento de tallos ex vitro y aclimatacin de plantas micropropagadas

Aclimatacin de plantas de arndanos micropropagadas en speedling bajo invernadero

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