La biologa celular es la rama de la biologa que persigue la comprensin de las funciones de la clula, unidad estructural bsica de los seres

vivos. La citologa o biologa celular es la rama de la biologa que estudia las clulas en lo que concierne a su estructura, sus funciones y su importancia en la complejidad de los seres vivos. Citologa viene del griego s cavidad. Con la invencin del microscopio ptico fue posible observar estructuras nunca antes vistas por el hombre, las clulas. Esas estructuras se estudiaron ms detalladamente con el empleo de tcnicas de citoqumica y con la ayuda fundamental del microscopio electrnico. La biologa celular se centra en la comprensin del funcionamiento de los sistemas celulares, de cmo estas clulas se regulan y la comprensin del funcionamiento de sus estructuras. Una disciplina afn es la biologa molecular. Campos de estudio Para alcanzar sus objetivos, los bilogos celulares se ven obligados a estudiar los componentes de la clula a nivel molecular (biologa molecular). AQUI LA IMPORTANCIA!!! Componentes pricipales del estudio celular: La Biologa Molecular es la disciplina cientfica que tiene como objetivo el estudio de los procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular. Dentro del Proyecto Genoma Humano puede encontrarse la siguiente definicin sobre la Biologa Molecular: El estudio de la estructura, funcin y composicin de las molculas biolgicamente importantes 1. Esta rea esta relacionada con otros campos de la Biologa y la Qumica, particularmente Gentica y Bioqumica. La biologa molecular concierne principalmente al entendimiento de las interacciones de los diferentes sistemas de la clula, lo que incluye muchsimas relaciones, entre ellas las del ADN con el ARN, la sntesis de protenas, el metabolismo, y el cmo todas esas interacciones son reguladas para conseguir un afinado funcionamiento de la clula. Juntamente con la Gentica se interesa por la estructura y funcionamiento de los genes y por la regulacin (induccin y represin) de la sntesis intracelular de enzimas (v.) y de otras protenas. Con la Citologa, se ocupa de la estructura de los corpsculos subcelulares (ncleo, nuclolo, mitocondrias, ribosomas, lisosomas, etc.) y sus funciones dentro de la clula. Con la Bioqumica estudia la composicin y cintica de las enzimas, interesndose por los tipos de catlisis enzimtica, activaciones, inhibiciones competitivas o alostricas, etc. Tambin colabora con la Filogentica al estudiar la composicin detallada de determinadas molculas en las distintas especies de seres vivos, aportando valiosos datos para el conocimiento de la evolucin.

Los procesos de reproduccin de los virus, de las bacterias, y de los organismos superiores encierran multitud de incgnitas que trata de ir resolviendo la Biologa molecular. Las mutaciones producidas por agentes fsicos (rayos X, rayos gamma, calor, etc.) o qumicos (sustancias mutgenas) tienen una explicacin tanto ms satisfactoria cuanto mejor se conoce la base molecular de los procesos de alteracin en la estructura y ordenacin de las bases nitrogenadas del ADN.

En el presente trabajo se aborda lo referente a las tcnicas genticas moleculares, tpico que en la actualidad reviste gran importanciadebido tanto al gran avance cientfico como tecnolgico en el mundo, el cual ha permitido avanzar a la ciencia en el diagnstico, prevencin, control y curacin de las enfermedades que desde pocas pasadas han afectado tanto al hombre como a los animales, ocasionndoles incluso la muerte, debido a la carencia de instrumentos y equipo moderno para combatir y erradicar dichas enfermedades. El documento est estructurado de la siguiente manera, primeramente se hace referencia a algunos antecedentes respecto al surgimiento de la biologa molecular, su importancia y contribucin en la medicina y la investigacin en la actualidad, y posteriormente se aborda lo relacionado propiamente a las diferentes tcnicas moleculares que desde la dcada pasada y hasta el momento actual han contribuido a travs de la tipificacin de microorganismos patgenos en la vigilancia y control epidemiolgico de enfermedades que afectan tanto al hombre como a los animales. Su objetivo, consisti en describir la importancia y el uso actual de las tcnicas moleculares en el anlisis y tipificacin de microorganismos patgenos causantes de enfermedades tanto en el hombre como en los animales.

Antecedentes
La biologa molecular es una disciplina relativamente joven, originada en los aos 30s y los 40s, e institucionalizada en los aos 50s y los 60s. El perodo clsico de sta comenz en 1953 con el descubrimiento de la doble hlice del ADN por James Watson y Francis Crick. La relacin cientfica de Watson y Crick unific varios acercamientos disciplinarios: Watson, estudiante de Luria y el grupo fago, reconocieron la necesidad de utilizar la cristalografa para aclarar la estructura del ADN, por lo que hicieron un uso amplio de datosa partir del trabajo de cristalografa con rayos X en ADN realizado por Maurice Wilkins y Rosalind Franklin en el Kings College, de Londres (Darden y Tabery, 2005). Con la estructura del ADN a disposicin, la biologa molecular cambi su enfoque por lo que la estructura de la doble hlice ayud a la elucidacin de los mecanismos de replicacin y funcin gentica, las claves para entender el papel de los genes en la herencia. Esta investigacin subsecuente fue guiada por la nocin de que el gen era una molcula informativa. La secuencia linear de las bases de los cidos nucleicos a lo largo de una hebra de ADN proporcion la informacin codificada para dirigir el orden linear de aminocidos en las protenas (Darden y Tabery, 2005).

Posterior a los anteriormente expuesto, el cdigo gentico vino a ser caracterizado como la relacin entre un sistema de tres bases en el ADN ("un codon") y uno de veinte aminocidos, los bloques de construccin de las protenas. Las tentativas para desentraar el cdigo gentico incluyeron esfuerzos tericos fallados, as como la competencia entre los genetistas y los bioqumicos. Una brecha importante surgi en 1961 cuando los bioqumicos Marshall Nirenberg y J. Heinrich Matthaei, en los Institutos Nacionales de Salud de los Estados Unidos, descubrieron que una secuencia nica de las bases de los cidos nucleicos se poda leer para producir un producto nico del aminocido (Darden y Tabery, 2005). En la actualidad, la aplicacin de la biologa molecularal estudio de la gentica humana ha dado lugar a un crecimiento sin precedente en nuestro entendimiento del mecanismo bsico de la enfermedad y las bases del nuevo campo clnico de la medicina molecular, ya que las bases genticas de un gran nmero de enfermedades se estn identificando, lo cual tendr un impacto importante para el diagnstico, pronstico, y manejo confidencial de pacientes. Por lo que, un gran desafo para los servicios de patologa en esta nueva era es apoyar la medicina molecularpara asegurarse de innovaciones tcnicas y nuevos desarrollos que pueden ser realizados como un servicio rutinario de una manera oportuna, eficiente, rentable, en beneficio de un mayor nmero de pacientes (Boxer, 2000).

Se ofrecen elementos conceptuales sobre algunos de los mtodos de biologa molecularde ms amplio uso en biomedicina. Las principales aplicaciones de estas tcnicas son en el diagnstico de enfermedades hereditarias, infecciosas y neoplsicas as como en estudios de regulacin de la expresin gnica y en la terapia con protenas recombinantes. El Proyecto del Genoma Humano tom como base para su ejecucin muchas de estas tcnicas, al tiempo que ha permitido el desarrollo de nuevas metodologas y el perfeccionamiento de las ya existentes. Con la aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en medicina, se ha abierto tambin la posibilidad de llevar a cabo la terapia gnica en humanos. Palabras clave: cido desoxirribonucleico (ADN), enzimas de restriccin, reaccin en cadena de la polimerasa, hibridacin, secuenciacin del ADN, genoma, terapia gnica

Hoy prcticamente no existen dudas de que la Biologa Molecular con sus mtodos, unido a los conocimientos derivados del Proyecto del Genoma Humano afectar el curso de la ciencia y la medicina a lo largo del siglo 21. La fisiopatologa de ms y ms enfermedades ser comprendida hasta el nivel molecular, se desarrollarn nuevas drogas dirigidas contra las causas subyacentes de las enfermedades, las pruebas genticas antes de prescribir una droga asegurarn que cada individuoreciba aquellos medicamentos que traten sus malestares efectivamente sin efectos colaterales, aumentar nuestro conocimiento sobre cuestiones bsicas de Biologa, los cientficos entendern mejor los componentes esenciales de la vida y cmo funcionan las clulas y organismos; sin embargo, el reto fundamental estar en mantener un balance saludable que evite los daos potenciales derivados de estos avances, y permita preservarlos slo para darle un uso adecuado.

4. Control de la transcripcin

La tcnica de absorcin de Nothern se puede emplear para detectar la presencia de molculas de ARNm, procedentes de genes determinados, en extractos de tejido intacto. Estos estudios se complementan con la hibridacin in situ, que detecta el ARNm en clulas individuales, y de esta forma se conoce su distribucin en el tejido. La conclusin es que, en la mayora de los casos, el ARNm codificador de una protena especfica, est presente slo en los tejidos y en las clulas donde se expresa la protena. De forma similar, los precursores inmaduros de molculas de ARN que contengan an intrones, no son detectados en los tejidos si no estn presentes el ARNm o las protenas. En consecuencia, en la mayora de los casos, la produccin de protenas diferentes en los distintos tejidos est regulada por los genes que se han transcrito en cada tejido, lo cual determina a su vez la eliminacin de intrones y la traduccin de protenas. Esto se demuestra midiendo la proporcin de transcripcin de un gen especfico en diferentes tejidos, donde la protena puede estar presente o ausente. La sntesis de protenas distintas en los tejidos es vital para la comprensin de las diferencias funcionales de los mismos y est controlada por la transcripcin. Adems, la transcripcin est regulada por factores de transcripcin, los cuales se unen a secuencias especficas del ADN (las regiones reguladoras) y activan este proceso. Puede ser que cada tejido tenga los factores especficos que activan la transcripcin de genes concretos, pero tambin es posible que estn presentes, de forma inactiva, en todas las clulas. En ese caso se activaran por seales especficas, como una modificacin posterior a su sntesis, por ejemplo por adicin de residuos fosfato (fosforilacin). Esto activar la transcripcin de los genes que respondan a la seal. 5. Secuenciacin del ADN

Al igual que se estudia la expresin y la estructura de los genes se puede conocer, mediante el sistema de secuenciacin de ADN, su orden lineal de bases. El mtodo ms utilizado fue ideado por Frederick Sanger en 1977. Gracias a esta tcnica se puede conocer, utilizando el cdigo gentico, la secuencia lineal de las cuatro bases, AGCT y por consiguiente, la secuencia de aminocidos de la protena correspondiente. Esta metodologa ha permitido al Proyecto Genoma Humano obtener el orden o secuencia de las bases nitrogenadas en el ADN humano. Es ms sencillo secuenciar el ADN que hacerlo en la protena correspondiente, por lo tanto en la actualidad, la secuencia de aminocidos se determina de forma indirecta a partir del gen correspondiente. La utilidad de este mtodo se pone de manifiesto con el estudio de enfermedades genticas. Se secuencia un gen involucrado en una enfermedad, en individuos sanos y en individuos enfermos y al comparar ambas secuencias se descubre la alteracin de la protena que provoca la enfermedad. La variacin de tan slo una base puede provocar la sustitucin de un aminocido por otro, e incluso puede daar un segmento del ADN, alterando as la porcin correspondiente de protena.

Los cientficos han conseguido secuenciar el genoma de varios organismos, como la bacteria Escherichia coli, la levadura Saccharomyces cerevisiae, y el nematodo Caenorhabditis elegans. En el ao 2000 se descifr la secuencia del genoma de la mosca del vinagre (Drosophila melanogaster) y el de la bacteria Vibrio cholerae, responsable del clera. En diciembre de ese mismo ao se dio a conocer la secuencia completa del genoma de la planta Arabidopsis thaliana. En mayo de 2002, cientficos del Consorcio para la Secuenciacin del Genoma del ratn completaron el mapa gentico de ese animal. Ese mismo ao, se secuenciaron tambin el genoma del arroz, concretamente de dos variedades de este cereal, as como del protozoo Plasmodium falciparum y del mosquito Anopheles gambiae, causantes de la mayora de los casos de malaria. Pero, sin lugar a dudas, el acontecimiento ms importante dentro de estos estudios de secuenciacin, fue el desciframiento completo del genoma humano, en abril de 2003, dos aos antes de lo que inicialmente se haba previsto. 3. ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS

La funcin biolgica de una protena est determinada por la secuencia de aminocidos que la componen y por la configuracin espacial (estructura plegada en el espacio). En la dcada de 1960, John Kendrew, propuso el modelo de estructura espacial de la mioglobina, a partir de la protena purificada y mediante cristalografa de rayos X. A continuacin, Max Peratz lo hizo con una molcula ms compleja, la hemoglobina. La hemoglobina est compuesta por cuatro subunidades tipo mioglobina. Para conocer el orden de aminocidos de una protena se secuencia ADN, sin embargo, el anlisis estructural de la misma se realiza sintetizando protena a partir de un gen clnico (gen idntico, que se inserta por ejemplo, en el genoma de una bacteria). De este modo se obtiene protena en gran cantidad. Adems se pueden introducir cambios especficos en el ADN genmico, mediante una mutacin localizada, para que la bacteria sintetice una protena alterada. Los estudios de protenas alteradas, han logrado demostrar la relacin de la secuencia de aminocidos con la estructura y funcin de la protena resultante. 4. DE LA INVESTIGACIN A LA APLICACIN TERAPUTICA

La produccin de grandes cantidades de protena se realiza mediante la expresin del ADN correspondiente en grandes cantidades. Este mtodo se utiliza con fines teraputicos, en individuos que sufren alguna enfermedad causada por la ausencia de protenas especficas. La labor de purificacin de tales protenas se realiza a partir de animales o de cadveres humanos. ste ha sido el planteamiento empleado para producir insulina en el tratamiento de la diabetes y de hormona del crecimiento en el enanismo. En la actualidad, los intentos han estado encaminados a prescindir de la fase de produccin de protenas y a tratar a los individuos con enfermedades genticas aportando los genes funcionales, de modo que la protena necesaria la sintetice el individuo afectado. La terapia gnica aplicada desde la infancia ofrece a los afectados la esperanza de un futuro mejor.

5. PERSPECTIVAS DE FUTURO

La biologa molecular ha avanzado mucho en los cuarenta aos siguientes al descubrimiento de la estructura del ADN. Estos progresos ofrecen la posibilidad real de conseguir un tratamiento eficaz de las enfermedades humanas. Para ello es necesaria la comprensin de fenmenos tan complejos como el desarrollo embrionario o el funcionamiento del organismo adulto. Aunque quedan muchos retos por superar, la biologa molecular ha alcanzado una gran importancia en nuestros das, tanto es as, que hace 20 aos no hubiera merecido un artculo en una enciclopedia general. Microsoft Encarta 2008. 1993-2007 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. La Biologa Molecular es una disciplinacon personalidad propia, sus conceptos y tecnologas han contribuido notablemente al desarrollo de todas las restantes ramas de la biologa moderna. Sin embargo, la Nutricin ha sido algo lenta en la incorporacin de las posibilidades que brinda la Biologa Molecular, esto puede en parte explicarse

por el grado de fragmentacin o especializacin que presenta la nutricin en nutrientes no solo en el crecimiento, desarrollo y mantenimiento de los tejidos, sino tambin en nuevas dimensiones como son su relacin con la expresin gnica, efectividad de la respuesta inmune, la prevencin del dao celular y su interaccin con enfermedades crnicas e infecciosas.1,2 En cuanto a la evaluacin de la relacin entre nutrientes y expresin gnica, se ha demostrado que tanto los macronutrientes -carbohidratos, cidos grasos, protenas y/o aminocidos- como micronutrientes metales y vitaminas- participan coordinadamente con factores endocrinos en la regulacin de la expresin gnica en respuesta a cambios nutricionales.14 La interrelacin entre nutricin y expresin gnica se expresa en 2 sentidos: la influencia que los nutrientes ejercen sobre la expresin gnica y la sntesis de protenas, y la influencia de la expresin gnica sobre los requerimientos nutricionales. Pueden resumirse en 3 los aspectos fundamentales que deben ser abordados para comprender esta interaccin: Cules genes son regulados por factores nutricionales. Cmo la dieta y los nutrientes en particular ejercen la regulacin de la expresin de estos genes. Cmo est involucrada la expresin de los genes en el metabolismo y el aprovechamiento de los nutrientes. La expresin gnica es un proceso muy complejo mediante el cual se logra la sntesis de una cadena polipeptdica a partir de la informacin hereditaria contenida en el gen correspondiente, lo que constituye el llamado dogma central de la gentica -perfeccionado en las ltimas dcadas con los conocimientos aportados por la Biologa Molecular.

1.INTRODUCCIN

Biologa molecular, ciencia que se ocupa del estudio de la bases moleculares de la vida; es decir, relaciona las estructuras de las biomolculas con las funciones especficas que desempean en la clula y en el organismo. 2. LA ESTRUCTURA DEL ADN

James Watson y Francis Crick James Watson y Francis Crick La molcula de ADN (cido desoxirribonucleico) es el modelo gentico de cada clula y, en ltima instancia, lo que determina todos los aspectos de un ser vivo. La molcula de ADN fue descubierta en 1951 por James Watson, Francis Crick y Maurice Wilkins empleando la tcnica de difraccin de los rayos X. En 1953, Watson (izquierda) y Francis Crick (derecha) describieron la estructura en doble hlice de la molcula de ADN como una especie de escalera de caracol con muchos escalones. En 1962 ambos recibieron el Premio Nobel de Medicina por su trabajo. Enciclopedia Encarta Photo Researchers, Inc. Tamao completo La presentacin del modelo estructural del cido desoxirribonucleico (ADN) por Francis Harry Compton Crick y James Dewey Watson en 1953, fue el verdadero inicio de la biologa molecular. La importancia de este hecho se debe, por un lado a que es la molcula que transmite la informacin hereditaria de generacin en generacin (vase Gentica), y por otro a que la propia estructura muestra cmo lo logra. El ADN es una molcula de doble hlice, compuesta por dos hebras complementarias unidas entre s por enlaces entre las bases: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T). La A de una hebra se aparea siempre con la T de la hebra complementaria, y del mismo modo, la G con la C. Durante la replicacin o duplicacin, las dos hebras simples se separan y cada una de ellas forma una nueva hebra complementaria, incorporando bases, la A se unir a la T de la hebra molde, la G lo har con la C y as sucesivamente. De esta manera se obtiene otra molcula de ADN, idntica a la original y por tanto, el material

gentico se ha duplicado. Este material incluye toda la informacin necesaria para el control de las funciones vitales de las clulas y del organismo. Durante la divisin celular, las dos clulas hijas reciben igual dotacin gentica; de este mismo modo se reparte el material hereditario a la descendencia, cuando se reproduce un organismo. 1. A partir del ADN se produce ARN y a partir del ARN se producen protenas

Sntesis de protenas Sntesis de protenas Una de las tareas ms importantes de la clula es la sntesis de protenas, molculas que intervienen en la mayora de las funciones celulares. El material hereditario conocido como cido desoxirribonucleico (ADN), que se encuentra en el ncleo de la clula, contiene la informacin necesaria para dirigir la fabricacin de protenas. Enciclopedia Encarta Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Tamao completo La copia precisa de la informacin gentica contenida en el ADN nos lleva a la cuestin de cmo esta informacin modela las actividades de la clula. El siguiente paso necesario para la comprensin de este proceso fue el conocimiento de la transcripcin, mecanismo mediante el cual, el ADN forma la molcula de cido ribonucleico (ARN) correspondiente, formada por una sola cadena. Tal como ocurre en la replicacin del ADN, la informacin gentica se transcribe de forma fiel mediante la adicin de bases complementarias. Despus, el ARN mensajero (ARNm) se traslada a los orgnulos celulares llamados ribosomas, donde se lleva a cabo la traduccin de protenas. El cdigo gentico gobierna la traduccin, que se basa en la correspondencia que existe entre 3 bases o triplete de la secuencia del ARN y un aminocido especfico de la secuencia proteica. El triplete ACC provoca la adicin de treonina en la secuencia proteica que se est formando, CCC la de prolina y as sucesivamente. Por lo tanto la informacin contenida en la secuencia lineal de bases del ADN codifica la sntesis de una secuencia lineal de aminocidos de una protena. De tal manera, que un cambio en las bases del ADN conlleva un cambio en la protena correspondiente. Por ejemplo, un cambio de la base A por C en el triplete ACC producira la adicin de prolina en lugar de treonina. Las protenas son muy especficas, es decir, tienen funciones biolgicas

muy concretas, con lo cual un cambio que afecte a la funcin que realizan, provocara una alteracin estructural o fisiolgica en el organismo. Estas diferencias en la informacin gentica del ADN, son las responsables de las diferencias heredadas entre individuos, tales como el color de ojos o las enfermedades genticas como la hemofilia. A partir del ADN se sintetiza ARN y a partir del ARN se sintetizan protenas, ste es el llamado dogma central de la biologa molecular. Microsoft Encarta 2008. 1993-2007 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Citologa, rama de la biologa que estudia la estructura y funcin de las clulas como unidades individuales, complementando as a la histologa (que estudia a las clulas como componente de los tejidos). La citologa abarca el estudio de la estructura y actividad de las diferentes partes de la clula y membrana celular, el mecanismo de divisin celular, el desarrollo de las clulas sexuales, la fecundacin y la formacin del embrin, las alteraciones de las clulas, como las que ocurren en el cncer, la inmunidad celular y los problemas relacionados con la herencia. Hasta hace poco tiempo, la citologa se limitaba a la observacin microscpica de clulas muertas teidas, intentando correlacionar dichas observaciones con los fenmenos fisiolgicos ya conocidos. Las tcnicas ms recientes permiten hoy el estudio y observacin de las clulas vivas. Con el microscopio de contraste de fase se pueden observar las clulas vivas en funcionamiento gracias al uso de contrastes. Las tcnicas de microdiseccin, microinyeccin y microqumica, permiten obtener material del interior de las clulas (protoplasma) para su estudio y anlisis, utilizando tubos de media micra de dimetro. La citologa tiene gran valor en la medicina actual, ya que ayuda a diagnosticar enfermedades mediante el anlisis de las clulas extradas de diversos fluidos corporales. La determinacin del nmero y proporcin de los diferentes tipos de clulas de la sangre (recuento celular), facilita el diagnstico de infecciones agudas y otros procesos. La variacin en el tamao y forma de las clulas rojas de la sangre puede indicar la presencia de anemia de clulas falciformes (en la que los eritrocitos tienen forma de media luna), de anemia perniciosa (eritrocitos aumentados de tamao), o de anemia por falta de hierro (eritrocitos de pequeo tamao). La citologa tambin permite distinguir los diferentes tipos de meningitis gracias al estudio de las clulas presentes en el lquido cefalorraqudeo. La tcnica de puncin aspiratoria con aguja fina (PAAF), es de gran importancia en el diagnstico de ciertos tipos de cncer, ya que permite tomar clulas para su estudio de manera sencilla. Microsoft Encarta 2008. 1993-2007 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.