Anda di halaman 1dari 42

ANALISIS DIOSMIN DAN PROTEIN TANAMAN SELEDRI (Apium graveolens L.

) DARI DAERAH CIPANAS DAN CIWIDEY

BINA LISTYARI PUTRI

PROGRAM STUDI BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2006

ABSTRAK BINA LISTYARI PUTRI. Analisis Diosmin dan Protein Tanaman Seledri (Apium graveolens L.) dari Daerah Cipanas dan Ciwidey. Dibimbing oleh DJAROT SASONGKO HAMI SENO dan EDY DJAUHARI PURWAKUSUMAH. Tanaman seledri berkhasiat farmakologis, salah satunya sebagai antiinflamasi dan senyawa yang berperan adalah diosmin. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan kadar diosmin serta pola protein tanaman seledri yang ditanam pada daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam berbeda. Ekstrak diosmin dari tanaman seledri diperoleh dengan cara merefluks dalam larutan DMSO 10% dalam metanol kemudian dilakukan identifikasi dan penentuan kadar menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Ekstraks i protein dari tanaman seledri menggunakan bufer ekstraksi protein dan untuk mengetahui konsentrasi protein total menggunakan metode Lowry. Elektroforesis gel poliakrilamid SDS digunakan untuk mengetahui pola serta bobot molekul protein tanaman seledri. Kadar air, kadar abu, dan rendemen pada kedua daerah, berdasarkan hasil analisis statistik Rancangan Acak Kelompok (RAK) menunjukkan tidak berbeda nyata, sedangkan untuk bobot basah dan konsentrasi protein total menunjukkan hasil yang berbeda nyata. Penamba han masa tanam, yaitu 4, 6, dan 8 minggu, pada tanaman seledri daerah Cipanas menyebabkan peningkatan konsetrasi protein total masing-masing sebesar 3145.82 g/ml, 3133.12 g/ml, dan 4010.77 g/ml, sedangkan pada daerah Ciwidey dengan bertambahnya masa tanam, konsentrasi protein total mengalami penurunan, masing-masing sebesar 2574.75 g/ml, 2111.60 g/ml, dan 2216.14 g/ml. Kadar diosmin memiliki hasil yang sebanding dengan konsentrasi protein total pada kedua daerah. Kadar diosmin tertinggi, berdasarkan analisis KCKT, pada daerah Cipanas dengan masa tanam 8 minggu sebesar 1274.88 ppm dan pada daerah Ciwidey dengan masa tanam 4 minggu sebesar 1098.08 ppm. Hasil SDS PAGE menunjukkan pola protein yang sama pada seluruh sampel dan terdapat dua pita protein dominan dengan bobot molekul sebesar 16.6 dan 17.4 kDa.

ABSTRACT BINA LISTYARI PUTRI. Analysis of Diosmin and Protein in Celery Plant ( Apium graveolens L) from Cipanas and Ciwidey Areas. Under the direction of DJAROT SASONGKO HAMI SENO and EDY DJAUHARI PURWAKUSUMAH The celery plant has a pharmacological function, one of the example as an anti inflammation and compound having the role is Diosmin. This research was to compare the diosmin content and find out the protein pattern in the ce lery plant grown in the areas of Cipanas and Ciwidey in different periods of planting. Cipanas and Ciwidey are ideal sites for the celery growth because the differences in the geographical aspect and growing period may result in the differences in diosmin level and protein pattern in the celery plant. Diosmin was extracted from the celery plant with a reflux technique in the solution of DMSO 10% mixed with methanol, identified and measured for its content by using the Thin Layer Chromatography (TLC) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Protein was extracted from the celery plant by means of buffer method and the Lowry method was used to determine the total concentration of protein. Sodium Dedocyl Sulphat Poly Acrilamide Gel Electrophoresis (SDS PAGE) was used to find out the pattern and weight of protein molecules in the celery plant. The content of water, ash, and rendement in both areas, based on the statistical analysis of clustered random design, showed no significant difference, whereas the wet weight and the total concentration of protein had significantly different results. The increased total concentration of protein in Cipanas and this happened along with the lengthened period of celery growing, 4, 6, an 8 weeks, that accounted respectively 3145.82 g/ml, 3133.12 g/ml, and 4010.77 g/ml whereas in Ciwidey with such extended period of growing, the total concentration of protein were decreased, that accounted respectively 2574.75 g/ml, 2111.60 g/ml, dan 2216.14 g/ml . The level of diosmin was positively correlated with total concentration of protein for two areas. Based on the analysis of HPLC, the highest content of diosmin reached 1274.88 ppm in Cipanas with the growing period of 8 weeks, in Ciwidey it accounted for 1098.08 ppm with the growing period of 4 weeks. The result of SDS PAGE showed a similar pattern of protein in all samples and there were two dominant protein layers with the molecule weights of 16.6 and 17.4 kDa.

ANALISIS DIOSMIN DAN PROTEIN TANAMAN SELEDRI (Apium graveolens L.) DARI DAERAH CIPANAS DAN CIWIDEY

BINA LISTYARI PUTRI

Skripsi Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Program Studi Biokimia

PROGRAM STUDI BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU P ENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2006

Judul Nama NIM

: Analisis Diosmin dan Protein Tanaman Seledri ( Apium graveolens L.) dari Daerah Cipanas dan Ciwidey : Bina Listyari Putri : G 44102017

Disetujui Komisi Pembimbing

Drs. Djarot Sasongko Hami Seno, MS Ketua

Drs. Edy Djauhari PK, M.Si Anggota

Diketahui Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor

Dr. Ir. Yonny Koesmaryono, MS NIP 131473999

Tanggal Lulus :

PRAKATA Segala puja dan puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, Tuhan semesta alam yang telah memberikan nikmat iman dan islam, dan atas hidayah-Nya dalam memberikan kemudahan sehingga kegiatan penelitian ini dapat diselesaikan. Kegiatan penelitian akan dilaksanakan dari bulan Maret sampai Juni 2006 bertempat di Laboraturium Pusat Studi Biofarmaka IPB Taman Kencana dengan judul Analisis Diosmin dan Protein Tanaman Seledri (Apium graveolens L.) dari Daerah Cipanas dan Ciwidey. Ucapan terima kasih terutama penulis u capkan kepada Drs. Djarot Sasongko Hami Seno, MS selaku pembimbing I dan Drs. Edy Djauhari PK, M.Si selaku pembimbing II yang telah banyak memberikan saran. Selain itu, terima kasih juga kepada seluruh staf di laboratorium Biokimia dan laboratorium Pusat Studi Biofarmaka atas kerjasamanya serta Icha, Hilya, Rita, Peni, Ayu, Laura, Agung, Reggy, dan Heru yang selalu memberikan semangat. Terima kasih kepada ayah, ibu, Rakha, Nandi, dan Bayu atas segala doa dan kasih sayangnya. Hasil penelitian ini masih jauh dari kesempurnaan karena keterbatasan pengetahuan serta wawasan yang dimiliki oleh penulis. Namun, semoga penelitian ini berguna bagi penulis serta pihak-pihak yang membutuhkannya demi kemajuan ilmu pengetahuan.

Bogor, Juni 2006 Bina Listyari Putri

RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 6 Mei 1984 dari ayah Ir. Listyanto BK dan ibu Dra. Nanan Sofiana. Penulis merupakan putri pertama dari tiga bersaudara. Tahun 2002 penulis lulus dari SMU Islam Al Azhar Kemang Pratama Bekasi dan pada tahun yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI). Penulis memilih Program Studi Biokimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Selama mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten mata kuliah Kimia Dasar II S1 Perikanan pada tahun 2004/2005 dan Biokimia S1 Biologi pada tahun 2005/2006. Penulis melakukan praktek kerja lapang di Laboraturium Genetika Molekular Hewan Pusat Penelitian Bioteknologi LIPI Cibinong dari bulan Juli sampai September 2005.

DAFTAR ISI

Halaman DAFTAR TABEL ............................................................................................. i DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... i DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... ii PENDAHULUAN ............................................................................................. 1 TINJAUAN PUSTAKA Tanaman Seledri (Apium graveolens L) ............................................................. 1 Budidaya Tanaman Seledri ................................................................................. 2 Khasiat Tanaman Se ledri .................................................................................... 4 Kandungan Kimia Tanaman Seledri ................................................................... 4 Diosmin ............................................................................................................... 4 Analisis Diosmin dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ............................. 5 Pola Protein Tanaman Seledri ............................................................................. 5 Analisis Pola Protein dengan Elekroforesis Gel Poliakrilamid SDS .................. 6 BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat .................................................................................................... 6 Rancangan Percobaan .......................................................................................... 6 Metode ................................................................................................................. 6 HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis Tanah ............ 8 Bobot Basah ..... 8 Kadar air dan Kadar Abu ..................... 9 Konsentrasi Protein Total ....... 9 Kromatografi Lapis Tipis ........ 9 Penentuan Kadar Diosmin ..... 11 Elektroforesis Gel Poliakrilamid SDS ....... 12 SIMPULAN DAN SARAN Simpulan ... 13 Saran .......... 13 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 13 LAMPIRAN ............... 15

DAFTAR TABEL Halaman 1 Konsentrasi protein total dan rendemen ekstrak tanaman seledri daerah Cipanas ............................................................................................ 10 2 Konsentrasi protein total dan rendemen ekstrak tanaman seledri daerah Ciwidey .......................................................................................... 10 3 Hasil rataan KLT ekstrak ta naman seledri .................................................. 11 4 Waktu retensi dan luas area konsentrasi standar diosmin ............................ 11 5 Kadar diosmin tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu ...................................................... 12 DAFTAR GAMBAR Halaman 1 Tanaman Seledri (Apium graveolens L.) ....................................................... 2 2 Struktur Kimia Diosmin ................................................................................ 4 3 Bobot basah tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu ......................................................... 9 4 Kadar air tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa ta nam 4, 6, dan 8 minggu ........................................................ 9 5 Kadar abu tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu ......................................................... 9 6 Kurva Hubungan antara kadar protein dan rendemen ekstrak tanaman seledri daerah Cipanas ................................................................... 10 7 Kurva Hubungan antara kadar protein dan rendemen ekstrak tanaman seledri daerah Ciwidey .................................................................. 10 8 Kurva standar hubungan antara konsentrasi standar diosm in dan luas area ...................................................................... 11 9 Pola SDS-PAGE protein dari tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu ........................................................ 12

DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1 Tahap penelitian .............................. 15 2 Pembuatan buf er ekstraksi protein ...... 15 3 Bahan pereaksi untuk penentuan konsentrasi total protein dengan metode Lowry ........................................ 15 4 Bahan pereaksi untuk SDS PAGE ............................................................. 16 5 Pembuatan gel SDS PAGE . 17 6 Kondisi lingkungan daerah Cipanas dan Ciwidey .. 18 7 Hasil analisis tanah . 18 8 Kriteria penilaian sifat kimia tanah ..... 19 9 Hasil kadar air, kadar abu, dan bobot basah tanaman seledri pada daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu ................... 20 10 Hasil analisis statistik Rancangan Acak Kelompok (RAK) berbagai parameter .................................................................................... 22 11 Kurva standar Bovine Serum Albumin (BSA) untuk masa tanam 4, 6, dan 8 minggu ......................................................... 23 12 Nilai Rf hasil kromatografi lapis tipis ekstrak tanaman seledri ...................24 13 Foto hasil k romatografi lapis tipis ............................................................... 25 14 Rendemen ekstrak tanaman seledri ............................................................. 26 15 Contoh perhitungan konsentrasi diosmin .................................................... 27 16 Hasil kromatogram KCKT standar diosmin ............................................... 28 17 Hasil kromatogram KCKT sampel tanaman seledri ................................... 29 18 Penentuan bobot molekul (BM) protein tanaman seledri ............................ 31

PENDAHULUAN Peningkatan penggunaan obat sintet ik berlangsung dengan cepat, namun seiring bertambahnya waktu terjadi pula peningkatan kesadaran masyarakat terhadap dampak negatif dari penggunaan obat -obatan sintetik. Akibatnya masyarakat kembali memilih tumbuhan obat sebagai alternatif terhadap penyembuhan berbagai penyakit. Selain itu, efek samping yang ditimbulkan juga lebih kecil. Hal tersebut memicu peneliti untuk melakukan penelitian di bidang biofarmaka, yaitu mengenai obat -obatan alami yang berasal dari tumbuhan. Indonesia memiliki keragaman hayati flora dan fauna yang sangat melimpah, sehingga memiliki banyak sekali tumbuhan yang berkhasiat sebagai obat. Menurut Kassahara dan Hemmi (1986), dari 28.000 jenis tumbuhan yang ditemukan di Indonesia, kurang lebih 7.000 jenis diantaranya adalah tumbuhan obat. Salah satu contoh tumbuhan obat adalah seledri ( Apium graveolens L) merupakan tumbuhan suku Umbelliferae yang berbentuk rumput. (Sunarjono, 2003). Pada awalnya seledri dikenal sebagai sayuran untuk campuran salad, sup, dan penambah aroma pada masakan. Namun, berdasarkan hasil analisis secara farmakologis ditemukan bahwa hampir semua bagian dari tumbuhan tersebut memiliki khasiat sebagai obat. Akar seledri berkhasiat sebagai peluruh kencing (diuretik) dan memacu enzim pencernaan (skomakik). Biji dan buahnya berkhasiat sebagai pereda kejang (antispasmodik), menurunkan kadar asam urat darah, antirematik, peluruh kencing (karminatif), perangsang (afrodisiak), dan penenang (sedatif). Sedangkan herba seledri tonik, skomakik, menurunkan tekanan darah (hipotensif), pembersih darah, memperbaiki fungsi hormon yang terganggu, mengeluarkan asam urat yang tinggi (Dalimartha 2000). Tanaman seledri dapat tumbuh dengan baik apabila didukung dengan proses budidaya yang baik pula. Semua kondisi yang menjadi faktor tumbuhnya akan menentukan keberhasilan dalam proses budidaya tersebut. Faktor-faktor tersebut antara lain tanah, iklim, dan gangguan terhadap hama dan penyakit. Selain dari faktor -faktor tersebut, perlu diperhatikan pula cara bercocok tanam yang tepat. Bercocok tanam seledri meliputi pengolahan tanah, pembibitan, penanaman, pemeliharaan, dan pemungutan hasil (Soewito 1989).

Bagian dari tanaman seledri, seperti herba, akar, dan biji memiliki beragam kandungan kimia. Senyawa-senyawa tersebut ada yang terlibat langsung dalam metabolisme, yaitu sebagai metabolit primer, bahkan senyawa metabolit sekunder. Aktivitas bercocok tanam para petani yang berbeda dapat mempengaruhi kadar senyawa-senyawa kimia tersebut. Diosmin merupakan kelompok senyawa flavonoid yang terdapat pada tanaman seledri dan memiliki aktifitas sebagai antiinflamasi (Damon et al 1987, diacu dalam Fitriyeni 2003). Sintesis senyawa flavonoid, seperti diosmin, memerlukan peranan dari suatu protein, yaitu enzim, sehingga perbedaan kadar diosmin pada tanaman seledri akan mempengaruhi konsentrasi total serta pola protein dari tanaman tersebut. Penentuan pola protein dengan menggunakan metode elektroforesis sudah banyak digunakan sebagai metode yang ampuh untuk mengidentifikasi varietas, kultivar, atau klon dari berbagai jenis tanaman (Kuhns dan Fretz 1978). Berdasarkan penelitian sebelumnya bahwa kadar metabolit sekunder pada tanaman seledri yang ditanam pada lingkungan yang berbeda serta lingkungan yang tidak mendukung akan menghasilkan metabolit sekunder dalam jumlah berbeda (Nuhidayah, Syabana, Iswadi 2005). Dari laporan tersebut, penulis ingin mengetahui apakah cara bercocok tanam yang pada dua daerah yang berbeda akan memberikan pengaruh terhadap kadar diosmin dan pola protein yang berbeda pula. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan kadar diosmin serta pola protein tanaman seledri pada dua daerah yang berbeda, yaitu Cipanas dan Ciwidey. Manfaat dari penelitian ini yaitu memberikan informasi kepada masyarakat bahwa sayuran yang biasa digunakan sehari-hari berkhasiat farmakologis. TINJAUAN PUSTAKA Tanaman Seledri (Apium graveolens L.) Seledri (Gambar 1) merupakan tanaman hortikultura yang dapat tumbuh dengan baik pada dataran tinggi, terutama pada daerah yang berhawa sejuk. Seledri berasal dari daerah subtropik Eropa dan Asia, yang ditemukan pada ketinggian di atas 900 m di atas permukaaan laut (Dalimartha 2000). Di Indonesia daerah yang banyak ditanami seledri antara lain Cipanas, Pangalengan, dan Bandungan (Sunarjono 2003). Seledri

merupakan tanaman biennial, tetapi dapat dipanen dalam setahun (annual) untuk diambil bagian vegetatifnya. Siklus hidupnya dapat diselesaikan setahun apabila tanaman tersebut selama masa perkembangannya berada pada temperatur yang rendah. Masa panennya tergantung dari tipe, kultivar, dan permintaan pasar, tetapi bervariasi dari 2-3 bulan (Siemonsma dan Pileuk 1994). Tanaman seledri juga dapat tumbuh pada dataran rendah, tetapi batang yang dihasilkan lebih kecil daripada yang ditanam pada dataran tinggi (Soewito 1989). Seledri merupakan keluarga umbelliferae dan satu keluarga dengan wortel, piterseli, ketumbar, dan mitsuba, serta termasuk genus apium dan spesies Apium graveolens L. (Reginawanti 1999). Berdasarkan bentuk (habitus) pohonnya, tanaman seledri dapat dibagi menjadi tiga golongan, yaitu seledri daun, seledri potong, dan seledri umbi. Seledri daun (A. graveolus L. Var. secalinum Alef.) Merupakan seledri yang banyak ditanam di Indonesia. Tumbuh pada tanah agak kering dan dipanen pada bagian daunnya atau batangnya saja. Cara memanennya dengan langsung mencabutnya. Seledri potong (A. graveolus L. var. sylvestre Alef.) tumbuh pada pasir atau kerikil yang banyak airnya, tetapi tidak menggenang. Dipanen bagian batangnya saja dan dengan cara memotong pada pangkal batangnya. Seledri umbi (A. graveolus L. var. rapaceum Alef.) Batang seledri berumbi sehingga membengkak membentuk umbi. Dipanen bagian daunnya dan dengan cara memetik daunnya saja (Sunarjono 2003) .

(subur), gembur, mengandung garam dan mineral, kandungan bahan organik tinggi, berdrainase baik, tekstur lempung berpasir atau lempung berdebu, serta kisaran pH 5.56.5 (Reginawanti 1999 dan Sunarjono 2003). Seledri memerlukan suhu 9-20 ? C untuk berkecambah dan untuk pertumbuhan selanjutnya diperlukan suhu antara 15-24? C. Curah hujan optimum berkisar 60-100 mm/bulan dan kelembapannya berkisar 8090% (Soewito 1989). Jika tanaman kekurangan natrium akan menjadi kerdil, kekurangan kalsium menyebabkan kuncup seledri menjadi kering, dan apabila kekurangan unsur boron menyebabkan batang dan tangkainya menjadi retak -retak (Sunarjono 2003). Budidaya Tanaman Seledri (Apium graveolens L.) Perhatian yang khusus perlu diberikan terhadap usaha budidaya tanaman seledri, hal ini bertujuan agar produk yang dihasilkannya dapat maksimal. Para petani seledri juga harus dibekali dengan d asar usaha bertanam seledri yang meliputi pengolahan tanah, pembibitan, penanaman, pemeliharaan, dan pemungutan hasil (Sunarjono 2003). Tanah merupakan tempat tumbuh bagi tumbuhan, karena tanah menyediakan unsurunsur hara yang diperlukan bagi tumbuhan maka tanah memiliki peranan yang penting bagi keberhasilan pertumbuhan. Dibutuhkan kondisi tanah tertentu bagi pertumbuhan tanaman seledri, hal ini tergantung pada jenis tanaman seledri yang ditanam. Seledri daun merupakan jenis seledri yang paling bany ak ditanam di Indonesia. Jenis tanaman ini lebih suka tumbuh pada tanah yang agak kering, gembur, dan subur. Lahan tanah sebelum ditanami oleh bibit seledri, harus diolah terlebih dahulu. Kegiatan tersebut antara lain meliputi menggemburkan tanah, membuat bedengan, memupuk, serta meratakan tanah (Soewito1989). Tanaman seledri menyukai tanah yang lembut (tidak keras), sehingga sebelum ditanami tanahnya harus digemburkan terlebih dahulu. Jenis tanaman seledri daun, karena tidak menyukai tanah yang basah, memerlukan bedengan yang berfungsi untuk mencegah agar tanaman tidak sampai tergenang oleh air terutama pada musim hujan. (Soewito 1989). Tanaman seledri dibudidayakan melalui bijinya, dengan cara disemai terlebih dahulu atau ditebar langsung pada lahan tanaman. Pertumbuhan biji tersebut dapat dipercepat

Gambar 1 Tanaman Seledri ( Apium graveolens L.)

Syarat penting tumbuhnya seledri antara lain tanahnya banyak mengandung humus

dengan membungkus biji tersebut menggunakan kain basah selama 24 jam. Penyemaian merupakan tempat untuk menumbuhkan biji seledri hingga menjadi benih dan kemudian ditanam pada lahan. Benih seledri dipindahkan ke lahan kurang lebih mencapai umur satu bulan (berdaun 3-5 helai) (Sunarjono 2003). Biji seledri dapat langsung ditabur pada lahan tanah, selain disemai, teta[i harus dibuat alur terlebih dahulu supaya dapat tumbuh teratur. Penebaran biji secara langsung rentan menimbulkan resiko daripada penyemaian. Resiko tersebut antara lain biji dapat hanyut apabila tersiram air hujan dan biji akan kekeringan apabila ditanam pada musim kemarau sehingga untuk melindungi biji dari resiko tersebut maka harus ditutup dengan jerami atau alang-alang (Soewito 1989). Biji seledri yang tumbuh kemudian memerlukan upaya pemeliharaan sebaiksebaiknya agar diperoleh hasil yang maksimal. Upaya-upaya tersebut meliputi penyiraman, penyulaman, penjarangan, pendangiran, pemupukan, serta pembasmian hama dan penyakit. Penyiraman dilakukan sejak biji disemai atau ditabur sampai tanaman akan dipetik hasilnya karena tanaman seledri yang kekurangan air akan tumbuh kerdil, namun apabila curah hujan tinggi maka penyiraman tidak perlu dilakukan. Penyulaman dilakukan pada tanaman seledri yang berasal dari biji yang disemai dengan cara mencabut tanaman yang mati dan layu untuk diganti dengan bibit yang baru. Pada biji yang langsung ditabur pada lahan tanah tumbuhnya akan rapat sekali, untuk mengurangi banyaknya tanaman yang mati dan layu karena bersaing untuk memperoleh nutrisi maka dilakukan penjarangan. Ruang lahan antara tanaman seledri yang ditanam, baik dengan penyemaian maupun ditabur langsung pada lahan, akan ditumbuhi oleh rumput-rumput liar yang dapat mengganggu keberhasilan produk tanaman seledri. Rumput-rumput liar yang tumbuh harus dibersihkan untuk mengurangi resiko tersebut melalui upaya pemeliharaan, yaitu pendangiran. Selain untuk tujuan tersebut, pendangiran juga berfungsi untuk menggemburkan tanah disekitar tanaman. Tumbuhan juga membutuhkan unsur hara sebagai asupan makanan untuk hidup, tumbuh, dan berkembang. Unsur hara yang terkandung di dalam tanah sehingga tidak mencukupi atau bahkan tidak ada maka kekurangannya dapat diperoleh melalui pupuk (Marsono & Sigit 2004). Menurut Novizan

(2002), pupuk didefinisikan sebagai material yang ditambahkan ke dalam tanah atau tajuk tanaman dengan tujuan untuk melengkapi unsur hara. Tanaman seledri, secara aplikasinya, menggunakan jenis pupuk organik dan anorganik. Pupuk organik yang digunakan adalah pupuk kandang dan kompos, sedangkan pupuk anorganik yang digunakan antara lain urea, SP-36, KCl, ZA, NPK (Novizan 2002 dan Marsono & Sigit 2004). Kegagalan dalam bercocok t anam seledri disebabkan karena adanya serangan hama atau penyakit. Hama yang menyerang tanaman ini biasanya sejenis ulat daun (Agrotis ypsilon Hufn.), kutu-kutu daun ( Aphis spp.), tungau/mites ( Tetranychus spp.), dan cacing nematoda. Penyakit yang biasa menyerang tanaman seledri adalah cacar coklat kuning (Cercospora apii), cacar hitam ( Septoria apii), virus aster yellow, dan nematoda akar (Belonalaimus gracilis, Heterodera schactii, Bacillus gracilis ) (Reginawanti 1999). Kegiatan terakhir yang dilakukan dalam usaha bercocok tanam adalah pemetikan hasil. Tanaman seledri dapat dipanen pada saat 2-3 bulan dari saat penyebaran biji. Cara pemetikan hasil dilakukan tergantung dari jenis seledri yang ditanam. Pemetikan hasil dengan cara mencabut tanamannya dilakukan pada jenis seledri daun. Jenis seledri batang, dilakukan dengan memotong pangkal batangnya, sedangkan jenis seledri umbi dengan cara memetik daun-daunnya saja (Soewito 1989 dan Sunarjono 2003). Hasil tanaman seledri yang maksimal dihasilkan tidak hanya memperhatikan cara budidaya saja, tetapi juga harus memenuhi kebutuhan nutrisi yang cukup bagi proses pertumbuhan. Tumbuhan memerlukan elemen-elemen nutrisi yang esensial untuk dapat melengkapi pertumbuhan vegetatif, untuk fungsi spesifik biokimia, dan pembentukan metabolit yang esensial. Elemen-elemen esensial yang didasarkan pada jumlah kebutuhan tanaman dibagi dalam tiga kelas, yaitu Unsur hara primer (mayor) terdiri atas N, P, dan K, diperlukan dalam jumlah yang relatif besar dan diberikan ke tanah secara beraturan melalui pemupukan. Unsur hara sekunder memiliki jumlah yang relatif banyak terdapat di dalam tanah dan tanaman, seperti Ca, Mg, dan S, sedangkan unsur hara mikro memiliki jumlah yang sedikit, baik di dalam tanah maupun tanaman, seperti Fe, B, Mn, Zn, Cu, dan Mo (Agustina 2004). Penyerapan unsur hara yang dilakukan oleh akar dipengaruhi oleh beberapa faktor,

yaitu suplai dari fase padat, pH tanah, dan suplai air (Blair 1979). Perbedaan lokasi budidaya tanaman seledri menyebabkan cara budidaya, kondisi tanah, ketinggian tempat, suhu, dan curah hujan yang berbeda sehingga kandungan senyawa yang dikandungnya juga berbeda, termasuk senyawa metabolit sekunder. Khasiat Tanaman Seledri Hampir semua bagian dari tanaman seledri memiliki khasiat sebagai obat. Menurut Dalimartha (2000), akar seledri berkhasiat stomakik dan diuretik, sedangkan buah dan bijinya berkhasiat sebagai antispasmodik, menurunkan kadar asam urat darah, antirematik, diuretik, karminatif, afrosidisiak, dan sedatif. Herba seledri yang memiliki rasa manis, berbau aromatik, sedikit pedas, dan sifatnya sejuk, berkhasiat sebagai tonik, stomakik, hipotensif, penghenti pendarahan (hemostatis), diuretik, peluruh haid, karminatif, mengeluarkan asam urat darah yang tinggi, pembersih darah, memperbaiki fungsi hormon yang terganggu. Nasution (1995) telah melakukan uji farmakologis antiinflamasi tanaman seledri terhadap tikus dan menyatakan bahwa tanaman seledri juga dapat digunakan sebagai antiinflamsi. Hal senada juga dibuktikan oleh Syabana (2005), Nuhidayah (2005), dan Martaningtyas (2005) yang menyatakan bahwa seledri berkhasiat sebagai antiinflamasi dan senyawa yang berperan sebagai antiinflamasi adalah diosmin. Kandungan Senyawa Kimia Tanaman Seledri Kandungan herba seledri tiap 100 g berisi 93 ml air, 0.9 g protein, 0.1 g lemak, 4 g karbohidrat, 0.9 g serat, 1.7 g abu, 130 IU vitamin A, 0.08 mg vitamin B1, 0.12 mg vitamin B2, 0,6 mg niacin, 15 mg vitamin C, 50 mg Ca, 40 mg P, 1 mg Fe, 151 mg Na, 85 g Mg, dan 400 mg K. Nilai energinya adalah 113 kJ/100 g (Dalimartha 2000). Seledri juga mengandung glukosida apiin, flavonoid, saponin, tanin, apigenin, minyak atsiri, kolin, lipase, asparaginase, tirosin, glutamin, serta diosmin (Siesonsma 1994, Syabana 2005, Nurhidayah 2005, dan Martaningtyas 2005). Berdasarkan penelitian Martaningtyas (2005), seledri kering menghasilkan kadar diosmin sebesar 54.50 % atau 5711.64 ppm, sedangkan menurut Nurhidayah (2005), tanaman seledri pada umur 10 minggu dengan penambahan NaCl 4000 ppm menghasilkan kadar diosmin sebesar 2.12. 10-3 % atau 423.38 ppm.

Diosmin Tanaman menghasilkan metabolit yang berasal dari proses metabolisme primer dan metabolisme sekunder selama pertumbuhan. Hasil metabolisme primer adalah senyawa kimia yang digunakan untuk pertumbuhan seperti karbohidrat, protein, lemak, sitokrom dan klorofil. Senyawa-senyawa tersebut berada dalam jumlah besar pada tanaman. Senyawa kimia yang termasuk metabolit sekunder antara lain kelompok senyawa alkaloid, terpenoid, dan flavonoid. Metabolit tersebut tidak digunakan bagi pertumbuhan tanaman, misalnya flavonoid, tetapi berperan sebagai pertahanan terhadap mikroorganisme patogen dan juga terhadap herbivora maupun omnivora, selain itu sebagai pelindung dari efek sinar ultraviolet yang merusak (Heldt 1997 dan Salisbury & Ross 1995). Peranannya tersebut menyebabkan metabolit sekunder banyak dihasilkan di tanaman saat kondisi lingkungan pertumbuhannya tidak optimal atau pada saat ada ancaman yang mengancam pertumbuhannya. Diosmin termasuk kelompok senyawa flavonoid dan secara kimia didefinisikan sebagai senyawa 5,7,3 -trihidroksi4metoksiflavon-7-rutinosida (El-shafae & ElDomiaty 2001). Lonchampt et al (1989 dalam Fitriyeni 2003) membuktikan bahwa tablet Daflon (S-5682 ) yang mengandung 90% diosmin memiliki aktifitas antiinflamasi pada konsentrasi 2.10-8 mol/L dan 2.10-4 mol/L. Hasil ini membuktikan bahwa tablet tersebut memiliki aktivitas farmakologis terhadap hipermeabilitas membran, selain itu juga memiliki aktivitas antiinflamasi dan antideomatus. Hal senada juga dibuktikan melalui penelitian Damon et al (1987 dalam Fitriyeni 2003) bahwa tablet Daflon 500 mg memiliki aktivitas antiinflamasi pada granula tikus melalui penghambatan sintesis prostaglandin E2 (78,5%), prostaglandin F2 alfa (45,2%), dan tromboksan B2 (59%).

Gambar 2 Struktur Kimia Diosmin

Analisis Diosmin dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Ekstraksi diosmin dilakukan dengan cara refluks menggunakan pelarut 10% DMSO dalam metanol, hal ini berdasarkan penelitian yang telah dilakukan sebelumnya oleh ElShafae dan El-Domiaty (2001) serta Fitriyeni (2003). Dimetil Sulfoksida (DMSO) merupakan pelarut yang bersifat polar (www.chemicalland21.com), sehingga diharapkan hanya senyawa yang bersifat polar yang terekstrak dalam pelarut. Salah satunya adalah flavonoid (Harborne 1987) dan diosmin merupakan salah satu senyawa flavonoid. (Martaningtyas 2005). DMSO juga merupakan pelarut yang biasa digunakan dalam ekstraksi terapetik (obat-obatan alam) sejak tahun 1963 (Jacob 2000). Kromatografi Cair Kinerja Tinggi digunakan untuk mikroanalisis kuantitatif dan memiliki kepekaan yang tinggi terhadap analisis komponen flavonoid dalam campuran. Hal ini disebabkan kolom terbuat dari bahan kemasan dengan partikel berukuran kecil sehingga untuk mendapatkan laju alir yang memadai digunakan tekanan yang tinggi, sehingga metode ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi dan mengetahui kadar diosmin secara kuantitatif. Namun sebagai analisis pendahuluan dilakukan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) yaitu untuk mengidentifikasi secara kualitatif apakah pada ekstrak seledri mengandung diosmin atau tidak. KLT bertujuan membandingkan hasil sampel ekstrak seledri dengan standar diosmin dan pengukurannya berdasarkan perbandingan nilai Rf (Gritter et al 1991). (Hamilton dan Swel 1982). Analisis KCKT pada penelitian ini menggunakan metode fase terbalik, yaitu fase gerak yang digunakan bersifat polar (metanol) dan fase stasioner bersifat non polar. Keunggulan metode ini antara lain pengoperasian yang mudah, mempunyai efisiensi tinggi, stabilitas kolom, dan kemampuan untuk menganalisis secara simultan dengan spektrum yang luas (Krstulovic & Brown 1982). Protein Tanaman Seledri Tumbuhan mengandung ribuan protein yang beraneka ragam dengan berbagai macam fungsi. Fungsi protein pada tumbuhan antara lain katalisator, struktural, transpor, dan penyimpanan. Protein terdiri dari satu atau lebih rantai polipeptida yang masing-masing terdiri atas ratusan asam amino. Komposisi dan bobot molekul protein tergantung pada

jenis dan jumlah subunit asam amino (Salisbury dan Ross 1995). Penelitian yang dilakukan oleh Noiraud, Maurousset, dan Lemoine (2001), menunjukkan bahwa floem pada tanaman seledri memiliki gen yang mengekspresikan transporter manitol, AgMaT1, dengan bobot molekul 56 kDa, selain itu penelitian yang dilakukan oleh Dinant et al (2003) menunjukkan bahwa floem pada tanaman seledri juga terdapat dua jenis gen yang mengekspresikan protein floem 2 (PP2), yaitu AgPP2-1 dan AgPP2-1 dengan masingmasing bobot molekul 19.8 dan 19.7 kDa. Analisis Pola Protein dengan Elektroforesis Gel Poliakrilamid SDS (SDS PAGE) Biosintesis senyawa metabolit sekunder, dalam hal ini diosmin yang termasuk ke dalam flavonoid, melibatkan protein, yaitu enzim, dan suatu prekursor melalui serangkaian jalur reaksi yang dikontrol secara ketat terutama untuk enzim kuncinya. Untuk mengetahui enzim yang dapat mensintesis senyawa diosmin, terlebih dahulu harus diketahui bobot molekul dari protein yang terdapat pada sampel ekstrak seledri, sehingga analisis pola protein merupakan langkah awa l yang perlu dilakukan. Kedua daerah yang dianalisis kemungkinan memiliki kandungan senyawa diosmin yang berbeda, sehingga pola protein yang diperoleh kemungkinan juga akan berbeda. Salah satu teknis yang digunakan untuk melihat pola protein dan menentukan bobot molekulnya menggunakan SDS PAGE. Prinsip dari elektroforesis adalah pergerakan suatu molekul bermuatan di dalam medan listrik (Stryer 1995). Pada elektroforesis gel poliakrilamid pergerakan protein, merupakan respon terhadap medan listrik, terjadi melalui pori di dalam matriks gel yang ukuran porinya dipengaruhi oleh konsentrasi akrilamid. Elektoforesis, sesuai dengan prinsip tersebut, dapat digunakan untuk memisahkan campuran kompleks protein, memeriksa komposisi subunit, mengetahui keseragaman pada sampel protein, serta untuk memurnikan protein yang akan dianalisis. Laju pergerakan protein ditentukan oleh kombinasi antara ukuran pori gel dan muatan, ukuran, serta bentuk protein (Coligan et al 1995). Perubahan arus listrik yang terjadi akibat perbedaan suhu yang kecil akan mempengaruhi proses pemisahan molekul pada saat elektroforesis, maka dari itu pemisahan secara elektroforesis hampir selalu dilakukan dalam gel karena gel dapat

mengurangi perubahan arus listrik yang terjadi sehingga pemisa han menjadi lebih efektif. Selain itu, gel juga bertindak sebagai saringan yang dapat meningkatkan daya pisah (Stryer 1995). Gel terbentuk melalui pencampuran larutan akrilamid dengan amonium persulfat dan TEMED (N, N, N, N-tetrametil etilendiamin), sehingga mengakibatkan monomer akrilamid mengalami polimerisasi. Penambahan senyawa N,Nmetilen bisakrilamid dalam proses polimerisasi membentuk penyilangan antar rantai panjang sehingga akan membentuk gel dengan tingkat porositas yang ditentukan oleh panjang rantai dan derajat penyilangan antar rantai (Muladno 2002). Sodium Dedosil Sulfat (SDS) merupakan deterjen anionik yang dapat bereaksi dengan bagian hidrofobik protein sehingga membentuk kompleks bermuatan negatif, akibatnya pada daerah yang bermuatan listrik protein akan bergerak ke muatan positif (Styer 1995 dan Waterborg dan Matthews 1984). Tahapan kerja elektroforesis gel poliakrilamid SDS secara singkat adalah (1) Preparasi sampel menggunakan zat warna, (2) Persiapan stacking dan running gel (3) Memasukkan sampel ke dalam sumur gel, (4) Running SDS PAGE, (5) Visualisasi menggunakan coomasie blue, (6) Pencucian (Mamajis molecular kicthen 2000). BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah DMSO, standar diosmin, N-butanol, asam asetat, akrilamid, N, N-bismetilen akrilamid, Tris-HCl 0.1 M, EDTA 1mM, merkaptoetanol 5mM, akuades, Tris base, 10% w/v amonium persulfat, TEMED, glisin, SDS, gliserol, 0.05% bromfenol biru, metanol (MeOH), asam asetat glasial, coomasie biru R 250, Na2CO 3, CuSO 4 1.5%, HCl pekat, pereaksi Folin Ciocalteus, 2.5 M sukrosa, PVP, 2 mg/ml Bovine Serum Albumin, nitrogen cair, aseton, daun seledri yang berasal dari daerah Cipanas dan Ciwidey dan berumur 4, 6, dan 8 minggu. Alat-alat yang digunakan ialah KCKT, lempeng silika gel GF254, lampu UV, spektrofotometer, pH meter, autoklaf, pengaduk magnet, oven, alat -alat elektroforesis, erlenmeyer, labu takar, autopipet, neraca analitik, pipet tetes, sentrifus, serta alat-alat gelas lainnya.

Metode Uji Pendahuluan Penetuan Kadar Air Botol timbang dicuci lalu dikeringkan dalam oven pada suhu 105? C selama 30 menit kemudian didinginkan dalam eksikator dan ditimbang. Sebanyak 2 gram sampel ditimbang dan dimasukkan ke dalam botol timbang dan dikeringkan dalam oven pada suhu 105?C sampai diperoleh bobot tetap (Martaningtyas 2005). Setelah didinginkan dalam eksikator ditimbang dengan neraca analitik, pekerjaan tersebut diulang tiga kali. Persamaan untuk menghitung kadar air : Kadar air = (a-b)/a x 100% a : Bobot bahan sebelum dikeringkan b : Bobot setelah dikeringkan Penentuan Kadar Abu Cawan porselin dicuci kemudian dikeringkan dalam tanur pada suhu 600 ?C selama 30 menit lalu didinginkan dalam ekstikator dan ditimbang. Sampel sebanyak 2 gram ditimbang lalu dimasukkan ke dalam cawan dan dipanaskan dalam tanur pada suhu 600?C sampai sampel menjadi abu ( 60 menit). Setelah itu didinginkan dalam eksikator dan ditimbang dengan analitik, pekerjaan tersebut diulang sebanyak tiga kali. Persamaan untuk menghitung kadar abu : Kadar abu = a/b x 100% a : Bobot abu sampel b : Bobot sampel Analisis Tanah Sampel tanah yang diambil sebanyak 10 gram dari daerah Cipanas dan Ciwidey kemdian analisis dilakukan di laboraturium tanah Fakultas Pertanian IPB Darmaga. Analisis ini betujuan untuk mengetahui kandungan hara makro (C, N, P, K), hara mikro (Ca, Mg, Na), dan pH tanah secara kuantitatif. Penentuan Bobot Basah Seluruh bagian tanaman seledri (daun, batang, dan akar) segar ditimbang menggunakan neraca kasar. Ekstraksi Protein dari Tanaman Seledri Metode ekstraksi protein yang digunakan menurut Kuhns dan Fertz (1978) adalah sebanyak 6 gram daun seledri yang telah dicuci bersih dan diberi nitrogen cair, kemudian digerus dengan mortar. Setelah

digerus, daun tersebut dihomogenkan dalam 20 ml bufer ekstraksi (lampiran 2), lalu disentrifugasi pada kecepatan 12.000 rpm selama 15 menit. Supernatan dipisahkan sebagai contoh yang akan dianalisis. Penentuan Konsentrasi Protein Total Hasil Ekstraksi dengan Metode Lowry Pembuatan Larutan Standar Campuran larutan standar terdiri atas Bovine Serum Albumin (BSA) dengan konsentrasi 0, 20, 40, 60, 80, dan 100, kemudian ditambahkan dengan akuades dan pereaksi C yang dikocok serta didiamkan selama 10 menit, kemudian ditambahkan pereaksi D. Campuran tersebut dikocok dan didiamkan selama 30 menit, lalu diukur absorbansinya dengan panjang gelombang 742 nm. Selanjutnya, dibuat kurva standar hubungan antara absorban dan konsentrasi protein. Bahan -bahan pereaksi untuk metode Lowry dapat dilihat pada lampiran 3 (Watterborg & Matthews 1984). Pengukuran Konsentrasi Protein Sebanyak 1 ml sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ke dalam masing-masing tabung dimasukkan pereaksi C sebanyak 5 ml, lalu dikocok dan didiamkan selama 10 menit. Selanjutnya, pereaksi D ditambahkan sebanyak 0,5 ml pada masingmasing tabung, lalu dikocok dan didiamkan selama 30 menit. Absorbansi dengan panjang gelombang 742 nm dan konsentrasi protein diukur berdasarkan kurva standar (Watterborg & Matthews 1984). Analisis Diosmin Tanaman Seledri Ekstraksi Diosmin dari Tanaman Seledri Metode ini menggunakan metode El-Shafae dan El-Domiaty (2001). Sebanyak 10 g seledri segar direfluks dengan 50 ml DMSO 10% dalam metanol selama 30 menit dan dilakukan 3x. Kemudian ekstrak disaring, dikumpulkan, dipekatkan dengan rotavapor, dihitung besar rendemen, dan ditepatkan volumenya menjadi 100 ml dengan metanol. Larutan ini digunakan dalam preparasi larutan standar diosmin yang akan diinjeksikan ke dalam kolom KCKT. Sistem KCKT yang digunakan adalah sistem fase terbalik, dengan fase mobil bersifat polar dan fase stasioner bersifat nonpolar. Fase mobil yang digunakan adalah metanol (MeOH) 50% sedangkan fase stationer yang digunakan adalah kolom LiChrosorb RP-18 (Fitriyeni 2003).

Rendemen = Bobot sampel setelah perlakuan x 100 % Bobot sampel sebelum perlakuan

Preparasi Larutan Stok Standar Larutan stok standar diosmin dibuat dengan menimbang sebanyak 0.025 g standar diosmin kemudian dilarutkan di dalam DMSO 10% hingga volume 50 ml. Konsentrasi larutan stok standar yang diperoleh adalah 500 ppm (Fitriyeni 2003). Preparasi Larutan Standar Larutan standar dibuat dengan mengencerkan larutan stok standar sehingga diperoleh konsentrasi untuk kurva standar 10, 25, 50, 75, dan 100 ppm. Pelarut yang digunakan untuk pengenceran adalah MeOH 50% (Fitriyeni 2003) Preparasi Sampel Ekstrak sampel yang telah dipekatkan dengan rotavapor ditera menjadi 100 ml dengan metanol, kemudian diambil 1 ml dan diencerkan dengan MeOH sehingga mencapai volume 10 ml (Fitriyeni 2003).

Identifikasi Diosmin dengan KLT Ekstrak sampel ditotolkan pada lempeng silika gel GF245 sebagai fase diam dan sebagai fase gerak digunakan fase at as dari N -butanol : asam asetat : akuades (4 : 5 : 1)

Pengukuran Kadar Diosmin dengan KCKT Sebanyak 10 l larutan standar atau sampel diinjeksikan ke dalam kolom KCKT dengan fase stationer kolom LiChrosorb RP-18 dan dielusi dengan menggunakan fase mobil yaitu metanol 50%. Deteksi dilakukan menggunakan detektor UV pada panjang gelombang 345 nm (Fitriyeni 2003). Perhitungan Konsentrasi Diosmin Konsentrasi diosmin pada sampel dihitung menggunakan kurva standar yang menunjukkan hubungan antara konsentrasi standar diosmin dan luas area. Analisis Pola Protein dengan SDS PAGE Elektroforesis protein dilakukan berdasarkan metode Laemmli (dalam Coligan et al 1995). Gel poliakrilamid dicetak di antara dua buah lempengan kaca. Larutan gel

pisah 10% (lampiran 5) yang telah disiapkan dimasukkan ke dalam cetakan gel dengan menggunakan mikro pipet sampai batas tertentu, kemudian ditambahkan dengan akuades sampai penuh agar permukaan gel rata. Setelah gel mengering, akuades dibuang dan sisa air pada cetakan gel diserap dengan kertas saring. Kemudian larutan gel tumpuk (lampiran 5) yang telah dibuat dimasukkan ke dalam cetakan dan dipermukaan gel dipasang sisir berlubang lalu didiamkan sampai mengeras. Setelah gel mengeras, cetakan gel dipindahkan ke perangkat elektroforesis. Preparasi sampel dilakukan dengan memasukkan sampel yang telah disiapkan ke dalam tabung kemudian ditambahkan bufer sampel dengan perbandingan 1 :1 dan dipanaskan pada suhu 100? C selama 5 menit. Sampel dimasukkan ke dalam sumur yang telah dicetak pada gel poliakrilamid sebanyak 15 l, kemudian alat elektroforesis diberi tegangan 200 volt sampai pewarna mencapai ujung gel. Visualisasi gel menggunakan coomasie biru dilakukan setelah gel dilepaskan dari cetakan, kemudian direndam di dalam larutan pewarna coomasie biru selama semalam dan digoyangkan dengan alat penggoyang. Selanjutnya, gel dicuci sebanyak dua kali dengan menggunakan larutan dekolorisasi masing-masing selama 15 menit. Setelah pita terlihat, gel dicuci dengan akuades. Identifikasi dan analisis Pola SDS PAGE membandingkan antara pita protein yang telah dipisahkan sebelumnya dengan protein standar. Bobot molekul dari masing-masing protein ditentukan dengan cara menghitung nilai Rf dari masing-masing pita protein yang nampak, kemudian dibuat kurva standar hubungan antara log BM dengan Rf dari protein standar sehingga nilai BM protein dapat dihitung. Rf = jarak pergerakan pita protein dari tempat awal (cm) jarak pergerakan pewarna protein standar dari tempat awal (cm) Analisis Statistik Percobaan disusun dengan menggunakan Rancangan Acak Kelompok dua faktor. Faktor yang pertama (A) merupakan daerah budidaya yang terdiri atas dua taraf, yaitu A0 = daerah Cipanas A1 = daerah Ciwidey Faktor yang kedua (B) merupakan masa tanam yang terdiri atas tiga taraf, yaitu B0 = 4 minggu B1 = 6 minggu

B 2 = 8 minggu Masing-masing masa tanam dilakukan pengulangan sebanyak tiga kali. Model umum dari rancangan tersebut adalah (Mattjik & Sumertajaya 2002): Yi j k = + a i + j + (a)ij + eijk i = 1,2 ; j = 1,2,3 ; k = 1,2,3 dengan : Yijk : pengaruh diosmin pada lokasi taraf ke-i dalam waktu ke-j dan ulangan ke-k : rataan umum a i : pengaruh tambahan yang timbul pada kadar diosmin akibat lokasi ke-k j : pengaruh tambahan yang timbul pada kadar diosmin akibat waktu ke-j (a)ij : interaksi antara faktor lokasi taraf ke dan waktu ke-j

HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis Tanah Analisis tanah menunjukkan bahwa pH tanah yang berasal dari Cipanas dan Ciwidey sebesar 5.11. dan 4.92. Kondisi tersebut kurang optimum bagi pertumbuhan seledri karena pH tanah yang optimum sebesar 5.56.5 (Reginawanti 1999 dan Sunarjono 2003). Walaupun dapat tumbuh pada kondisi tanah Cipanas dan Ciwidey, tetapi kualitas dan kuantitas tanaman yang dihasilkan tidak maksimum. Hasil yang maksimum dapat diperoleh melalui usaha lebih, seperti pemupukan unsur hara (N, P, K) serta pengapuran. Usaha ini bertujuan untuk melengkapi unsur hara dalam jumlah rendah. Berdasarkan klasifikasi dari Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (lampiran 8), kadar C organik pada tanah yang berasal dari Cipanas adalah tinggi, sedangkan kadar N total, K, dan Na sedang. Kadar Ca dan Mg rendah. Pada tanah yang berasal dari Ciwidey, kadar C organik sedang, sedangkan kadar N, Ca, Mg, K, dan Na rendah. Kadar P dan kejenuhan basa (KB) pada kedua jenis tanah sangat rendah (Lampiran 7). Bobot Basah Hasil analisis statistik bobot basah menunjukkan bahw a tanaman seledri pada kedua daerah budidaya dan perbedaan masa tanam menunjukkan hasil yang berbeda nyata dengan nilai p= 0.0001. Tanaman seledri yang ditanam pada daerah Ciwidey menghasilkan bobot basah lebih tinggi daripada daerah Cipanas. Bobot basah tanaman seledri daerah Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu berturut -turut adalah 56.52, 134.44,

kadar air (%)

dan 265.39 gram, sedangkan pada daerah Cipanas berturut-turut sebesar 50.25, 97.64, 168.56 gram (Gambar 3). Penambahan masa tanam pada kedua daerah meningkatkan bobot basah tanaman seledri. Penelitian yang dilakukan oleh Hermawan (2005), menunjukkan bahwa perlakuan dengan pemberian pupuk nitrogen berpengaruh nyata terhadap bobot basah tanaman seledri. Nitrogen dibutuhkan dalam jumlah relatif besar pada setiap tahap pertumbuhan tanaman, terutama pertumbuhan vegetatif (perbanyakan melalui pembentukan tunas baru), sehingga pemberian kadar pupuk yang berbeda pada kedua daerah akan mempengaruhi biomassa tanaman seledri yang dihasilkan. Kebutuhan terhadap nutrisi, terutama nitrogen, pada tanaman seledri dapat dipenuhi melalui pemberian pupuk NPK dan urea. Kedua jenis pupuk tersebut umum digunakan para petani pada budidaya tanaman seledri. Petani di daerah Ciwidey memberikan pupuk urea dan NPK masing-masing sebanyak 8 kg/400 m2, sedangkan petani di daerah Cipanas hanya memberikan pupuk urea sebanyak 5 kg/400 m2. Suplai nitrogen yang cukup ditunjukkan melalui aktivitas fotosintesis yang tinggi, pertumbuhan vegetatif yang baik, dan warna daun yang hijau tua (Tisdale et al 1985).

tanaman seledri dengan masa tanam 6 minggu yaitu daerah Cipanas, sebesar 85.31 %. Apabila dihubungkan dengan bobot basah, tanaman seledri daerah Ciwidey memiliki bobot basah yang lebih tinggi daripada daerah Cipanas, sehingga mungkin bagian terbesar dari bobot basah tanaman seledri daerah Ciwidey adalah air. Tanaman seledri yang ditanam pada daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 miggu memiliki kadar air di atas 80 %. Penentuan kadar air bertujuan untuk mengetahui ketahanan terhadap penyimpanan suatu bahan, karena adanya kandungan air dalam suatu bahan merupakan tempat tumbuhnya bakteri dan organisme pengurai lainnya (Martaningtyas 2005). Hasil analisis statistik kadar abu menunjukkan hasil tidak berbeda nyata dengan nilai p= 0.3415. Hasil kadar abu pada daerah Ciwidey lebih tinggi daripada daerah Cipanas (Gambar 5), nilainya berturut-turut 1.87 %, 1.55 %, dan 1.65 % menunjukkan bahwa tanaman seledri yang ditanam pada daerah Ciwidey memiliki kandungan mineral yang lebih tinggi daripada daerah Cipanas.
85,5 85 84,5 84 83,5 4 minggu 6 minggu masa tanam 8 minggu Seledri Cipanas Seledri Ciwidey

300 Bobot basah (gram) 250 200 150 100 50 0 4 6 Masa tanam (minggu) 8 Seledri Cipanas Seledri Ciwidey

Gambar 4 Kadar air tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu
2

Kadar Abu (%)

Gambar 3 Bobot basah tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu Kadar Air dan Kadar Abu Budidaya tanaman seledri pada daerah Cipanas dan Ciwidey dengan menggunakan perlakuan masa tanam (4, 6, dan 8 minggu), berdasarkan analisis statistik kadar air, menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata dengan p= 0.7120. Tanaman seledri yang ditanam pada daerah Ciwidey dengan masa tanam 4 dan 8 minggu menunjukkan kadar air yang lebih tinggi daripada daerah Cipanas (Gambar 4), yaitu sebesar 84.38 % dan 84.83 %, sedangkan kadar air paling tinggi pada

1,5 1 0,5 0 4 minggu 6 minggu Masa Tanam 8 minggu Seledri Cipanas Seledri Ciwidey

Gambar 5 Kadar abu tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu Konsentrasi Protein Total Hasil analisis statistik konsentrasi protein total pada kedua daerah budidaya menunjukkan hasil yang berbeda nyata dengan p= 0.0001. Hasil uji lanjut Duncan

menunjukkan bahwa tanaman seledri dengan masa tanam 6 dan 8 minggu menunjukkan hasil kadar protein yang berbeda nyata. Kadar protein tertinggi diperoleh pada tanaman seledri yang ditanam pada daerah Cipanas dengan masa tanam 8 minggu, sebesar 4010.77 g/ml, sedangkan kadar protein terkecil pada tanaman seledri daerah Ciwidey dengan masa tanam 6 minggu, yaitu sebesar 2111.60 g/ ml (Tabel 1 dan Tabel 2). Nilai rendemen yang dihasilkan pada kedua daerah budidaya dengan perbedaan masa tanam, berdasarkan hasil analisis statistik rendemen, menunjukkan hasil yang berbeda nyata sedangkan untuk perbedaan daerah tanam tidak berbeda nyata dengan nilai p= 0.0426. Hasil uji lanjut Duncan menyatakan bahwa rendemen yang dihasilkan pada masa tanam 4 minggu berbeda nyata dengan rendemen pada masa tanam 6 dan 8 minggu. Tanaman seledri pada daerah Cipanas nilai rendemennya meningkat seiring dengan bertambahnya masa tanamnya, yaitu pada saat berumur 4, 6, dan 8 minggu berturut-turut besar rendemen yang dihasilkan adalah 1.92 %, 4.09 %, dan 11.70 %, sedangkan untuk daerah Ciwidey nilai rendemen yang paling tinggi diperoleh pada saat umur 4 minggu sebesar 7.33 %. Distribusi nitrogen dari daun, terutama daun tua, ke biji atau buah lewat floem merupakan hal yang khas pada tumbuhan herba. Hal tersebut penting untuk menyalurkan nitrogen ke organ pengguna terkuat sehingga mencegah terjadi kekurangan nitrogen di organ tumbuhan. Konsentrasi protein total tanaman seledri daerah Cipanas meningkat seiring dengan penambahan masa tanam, sedangkan tanaman seledri daerah Ciwidey mengalami penurunan konsentrasi protein total. Distribusi nitrogen antar organ di tumbuhan kemungkinan yang menyebabkan perbedaan tersebut, hal tersebut dipengaruhi oleh faktor lingkungan budidaya, seperti pH tanah, suhu, ketinggian tempat, jenis tanah, dan asupan nutrisi yang diberikan. Jumlah konsentrasi protein total sebanding dengan jumlah rendemen ekstrak tanaman seledri. Tabel 1 Konsentrasi protein total dan rendemen ekstrak tanaman seledri daerah Cipanas Masa Konsentrasi tanam Protein Total Rendemen (minggu) (ug/ml) (%) 4 3145.82 1.92 6 3133.12 4.09 8 4010.77 11.70

Tabel 2 Konsentrasi protein total dan rendemen ekstrak tanaman seledri daerah Ciwidey Masa Konsentrasi tanam Protein Total Rendemen (minggu) (ug/ml) (%) 4 2574.75 7.33 6 2111.60 3.98 8 2216.14 6.76
4500 Konsentrasi Protein Total (ug/ml) 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 4 6 Masa Tanam (minggu) 8 14 12 Rendemen (%) Rendemen (%) 10 8 6 4 2 0

Gambar 6 Kurva Hubungan antara konsentrasi protein total dan rendemen ekstrak tanaman seledri daerah Cipanas. Konsentrasi protein ( ) dan rendemen ( ?)
3000 Konsentrasi Protein Total (ug/ml) 2500 2000 1500 1000 500 0 4 6 Masa Tanam (minggu) 8 8 7 6 5 4 3 2 1 0

Gambar 7 Kurva Hubungan antara konsentrasi protein total dan rendemen ekstrak tanaman seledri daerah Ciwidey. Konsentrasi protein ( ) dan rendemen ( ?) Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Ekstrak-ekstrak tanaman seledri yang diperoleh kemudian dilakukan analisis dengan menggunakan KLT, sehingga dapat ditentukan adanya kandungan diosmin dalam ekstrak tersebut. Hasil yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 3 dan Lampiran 13. Nilai Rf KLT ekstrak tanaman seledri dari kedua daerah dan dengan ketiga perlakuan masa tanam antara 0.72 sampai 0.79. Standar Diosmin memiliki nilai Rf sebesar 0.73 dan profil KLT yang dilihat dengan mata secara langsung menghasilkan warna kuning sedangkan apabila dilihat dengan sinar UV

254 dan 365 nm akan menghasilkan spot berwarna coklat, maka spot dangan Rf 0.73 dan warna yang sama diduga adalah diosmin. Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Martaningtyas (2005), Nurhidayah (2005), dan Syabana (2005) menunjukkan Rf standar diosmin sebesar 0.57, 0.64, dan 0.62 dan berdasarkan Martaningtyas (2005) warna standar diosmin yang dihasilkan di bawah sinar UV adalah coklat. Semua hasil KLT, ekstrak tanaman seledri memiliki empat buah spot (Lampiran 13). Banyaknya spot menunjukkan adanya senyawa atau golongan lain yang ikut terekstrak. Tabel 3 Hasil rataan KLT ekstrak tanaman seledri Rf tanaman Perlakuan seledri Cipanas 4 minggu 0.72 Ciwidey 4 minggu 0.74 Cipanas 6 minggu 0.73 Ciwidey 6 minggu 0.74 Cipanas 8 minggu 0.79 Ciwidey 8 minggu 0.79 Nilai Rf standar diosmin : 0.73

Penentuan Kadar Diosmin Konsentrasi larutan standar diosmin yang digunakan sebesar 10, 25, 50, 75, dan 100 ppm. Waktu retensi dan luas area konsentrasi standar disajikan pada Tabel 3 T abel 4 Waktu retensi dan luas area konsentrasi standar diosmin konsentrasi larutan Waktu standar diosmin retensi Luas (ppm) (menit) Area 10 2.45 20931 25 2.42 45394 50 2.38 75922 75 2.36 96880 100 2.31 157439
180000 160000 140000 Luas Area 120000 100000 80000 60000 40000 20000 0 0 20 40 60 80 100 120 Konsentrasi Standar Diosmin (ppm) y = 5862.19 + 1412.52 x R = 0.9840

Gambar 8 Kurva standar hubungan antara konsentrasi standar diosmin dan luas area

Lima dari enam sampel yang dianalisis memiliki waktu retensi yang sama dengan standar diosmin. Tabel 4 menunjukkan hasil KCKT dan konsentrasi diosmin ekstrak tanaman seledri dengan perlakuan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu. Tanaman seledri yang ditanam pada daerah Cipanas dengan umur 4, 6, dan 8 minggu memiliki waktu retensi sebesar 2.4 menit, dengan luas area berturut -turut sebesar 185942, 153734, dan 71762. Selain itu, tanaman seledri pada daerah Ciwidey yang memiliki waktu retensi yang sesuai dengan standar diosmin yaitu dengan masa tanam 4 dan 6 minggu, yaitu berada pada 2.4 menit, sedangkan tanaman seledri dengan masa tanam 8 minggu memiliki waktu retensi yang tidak sesuai dengan standar diosmin, yaitu 2.880 menit. Berdasarkan persamaan garis yang diperoleh dari kurva standar pada gambar 8, konsentrasi diosmin sampel dapat diketahui. Pada daerah Cipanas, semakin bertambah masa tanam tanaman seledri maka konsentrasi diosmin akan meningkat (Tabel 4). Nilai konsentrasi pada masa tanam 4, 6, dan 8 minggu berturut-turut adalah 466.55 ppm atau 0.47 %, 1046.87 ppm atau 1.05 %, dan 1274.88 ppm atau 1.28 %. Penurunan konsentrasi diosmin terjadi dengan bertambahnya masa tanam tanaman seledri pada daerah Ciwidey, besarnya nilai konsentrasi diosmin pada 4 dan 6 minggu berturut -turut 1098.08 ppm atau 1.10 % dan 46.78 ppm atau 0.05 %, sedangkan pada masa tanam 8 minggu, konsentrasi diosmin tidak dapat terdeteksi. Hasil dari penentuan konsentrasi diosmin memiliki korelasi yang positif terhadap hasil rendemen. Penambahan masa tanam pada tanaman seledri daerah Cipanas menunjukkan peningkatan hasil konsentrasi diosmin dan hasil rendemen, sedangkan tanaman seledri daerah Ciw idey, penambahan masa tanam menurunkan hasil konsentrasi diosmin dan hasil rendemen. Salah satu peran dari senyawa flavonoid sebagai pertahanan terhadap mikroorganisme patogen dan juga terhadap herbivora maupun omnivora (Heldt 1997). Pada masa tanam 6 dan 8 minggu, tanaman seledri daerah Cipanas diserang oleh hama dan jenis hama yang menyerang adalah kutu daun, sehingga menyebabkan daun menjadi bintik-bintik serta berlubang dan warna menjadi pucat. Sedangkan tanaman seledri pada daerah Ciwidey dengan ketiga masa tanam yang berbeda tidak diserang oleh hama, sehingga tanamannya terlihat lebih segar dan hijau. Kondisi lingkungan yang mengalami cekaman

inilah menyebabkan tanaman seledri pada daerah Cipanas menghasilkan senyawa diosmin lebih banyak untuk p ertahanan dirinya. Respon metabolit sekunder dihasilkan ketika kondisi lingkungan tanaman mengalami cekaman (Nurhidayah 2005). Tabel 4 Kadar diosmin tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu Masa Waktu Kandungan tanam Retensi Luas diosmin (minggu) (menit) Area (ppm) Cipanas 4 2.47 71762 466.55 6 2.42 153734 1046.87 8 2.43 185942 1274.88 Ciwidey 4 2.41 6 2.43 8 2.88 *tt : tidak terdete ksi

2, dan 3; no 4-6 : Ciwidey 4 minggu ulangan 1, 2, dan 3; no 7-10: Cipanas 6 minggu ulangan 1, 2, dan 3; no 11-13: Ciwidey 6 minggu ulangan 1, 2, dan 3; no 14-16: Cipanas 8 minggu ulangan 1, 2, dan 3; no 1719: Ciwidey 8 minggu ulangan 1, 2, dan 3. SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Tanah pada daerah Cipanas dan Ciwidey memiliki pH sebesar 5.11 dan 4.92, sehingga tanah keduanya tergolong masam. Bobot basah tanaman seledri daerah Cipanas (68.14 gram) berbeda nyata dan lebih rendah daripada daerah Ciwi dey (189.46 gram). Kadar air dan kadar abu tanaman seledri daerah Cipanas rata-rata sebesar 84.61 % dan 1.23 %, sedangkan pada daerah Ciwidey sebesar 84.44 % dan 1.59 %. Kadar air dan kadar abu kedua daerah tidak menunjukkan perbedaan secara nyata. Kadar protein pada daerah Cipanas berbeda nyata dengan daerah Ciwidey. Kadar protein daerah Cipanas secara umum mengalami peningkatan pada 4, 6, dan 8 minggu yaitu sebesar 3145.83, 3133.12, dan 4010.77 g/ml, sedangkan pada daerah Ciwidey secara umum mengalami penurunan yaitu sebesar 2574.75, 2111.60, dan 2216.14 g/ml. Hasil tersebut sebanding dengan hasil rendemen yang diperoleh dari ekstrak tanaman seledri. Hasil KLT menunjukkan bahwa sampel yang dianalisis memiliki Rf yang mendekati dengan nilai Rf pada standar diosmin. Tanaman seledri daerah Cipanas mengalami peningkatan kadar diosmin pada umur 4, 6, dan 8 minggu sebesar 466.55, 1046.55, dan 1274.55 ppm, sedangkan tanaman seledri daerah Ciwidey mengalami penurunan kadar diosmin yaitu sebesar 1098.08, 46.78 ppm dan pada umur 8 minggu tidak terdeteksi. Nilai rendemen ekstrak tanaman seledri pada daerah Cipanas dan Ciwidey menunjukkan hasil yang berkorelasi positif terhadap nilai konsentrasi protein total dan kadar diosmin. Hasil SDS-PAGE menunjukkan adanya dua buah pita protein yang dominan dengan bobot molekul 16.6 dan 17.4 kDa. Saran Perlu dilakukan analisis diosmin dan protein pada bagian lain dari tanaman seledri, seperti batang dan akar. Proses ekstraksi diosmin dan protein pada tanaman seledri perlu dilakukan penelitian

160968 12470 63374

1098.08 46.78 *tt

Elektroforesis Gel Poliakrolamid SDS Hasil elektroforesis tanaman seledri pada daerah Cipanas dan Ciwidey dengan ketiga masa tanam yang berbeda menunjukkan adanya dua buah pita protein yang dominan masing-masing dengan bobot molekul 16.6 dan 17.4 kDa. Gambar 7 memperlihatkan pola protein tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu. Kedua pita protein dengan umur 8 minggu memiliki intensitas ketebalan pita protein lebih tebal daripada umur yang lain. Namun ketebalan pita pada masing-masing umur yang lain tidak menunjukkan perbedaan ketebalan.

Gambar 9 Pola SDS -PAGE protein dari tanaman seledri daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu. No 1-3: Cipanas 4 minggu ulangan 1,

lanjutan sehingga menemukan pelarut yang dapat memberikan ekstrak yang murni.

DAFTAR PUSTAKA Agustina L. 2004. Dasar Nutrisi Tanaman . Jakarta: Asdi Mahasatya Blair GJ. 1979. Plant Nutrition. England : University of New England Budiani A. 1989. Ekstraksi protein dan isoenzim esterase dari daun kopi. Jurnal Menara Perkebunan. 57(4) : 94 -98 Coligan et al . 1995. Current Protocol in Protein Science. Volume ke-1. USA : John Wiley and Sons Dalimartha S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat Jilid ke -2. Jakarta : Trubus Agriwidya El-Shafae AM, El-Domiaty M. 2001. Improve LC method for the determination of diosmin and/or hesperidin in plant extract and pharmaceutical formulations. Pharm. And Biomed. Anal. 26: 539-545 Fitriyeni S. 2003 Pemisahan flavonoid dari daun wunggu (Graptophylum pictum L. Griff). [skripsi] Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor Gritter R, Bobbot JM, Schwarting AE. 1991. Pengantar Kromatografi Ed. Ke-2. Padmawinata, penerjemah. Bandung: Penerbit ITB. Hamilton RJ, Swel PA. 1982. Introduction to High Performance Liquid Chromatography. London: Chapman and Hall Heldt HW. 1997. Plant Biochemistry & Molecular Biology. New York : Oxford University Press Hermawan E. 2005. Pengaruh pemupukan nitrogen dan fosfor terhadap pertumbuhan dan produksi herba seledri. [skripsi]. Bogor : Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor Kassahara S, Hemmi S. 1986. Medical Herb Index in Indonesia. Ed. ke-2. Jakarta : PT Eisai Indonesia, dalam Makiyyah 2003

Kuhns EJ, Fretz TA. 1978. Distinguishing rose cultivar by pPolyacrilamid gel electrophoresis, extaction and storage of protein and active enzymes from rose leaves. Amer. Soc. Hort. Sci. 103 (4): 503-508 Krstulovic MA, PR Brown. 1982. Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. NewYork :John Wiley & Son Malik CP, Singh MB. 1980. Plant Enzymology and Histo Enzymology. New Delhi: Kalyani Publisher Mamajis Molecular Kitchen. 2000. Western blot and SDS PAGE. http://lsvl.la.asu.edu/resources/mamajis/in dex.html [17 Agustus 2005] Marsono, Sigit P. 2004. Pupuk Akar Jenis dan Aplikasinya. Jakarta : Penebar Swadaya Mattjik AA, Sumertajaya IM. 2002. Perancangan Percobaan.Jilid ke-1. Ed ke-2. Bogor: IPB Press Muladno. 2002. Seputar Teknologi Rekayasa Genetika Bogor: Pustaka Wirausaha Muda Novizan. 2002. Petunjuk Pemupukan yang Efektif. Jakarta : Agro Media Pustaka, dalam : Ana Syabana 2005 Nurhidayah A. 2005. Pengaruh salinitas dan masa panen terhadap kandungan diosmin pada tanaman seledri. [skripsi]. Bogor : Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor Reginawanti. 1999. Seledri ( Apium graveolens L). http://www.kpel.or.id/TTGP/komoditi/SE LEDRI1.htm [25 Februari 2006] Robyt JF, White BJ. 1987. Biochemical Techniques Theory and Practice. USA : Waveland Press. Salisbury FB, Ross CW. 1995. Fisiologi Tumbuhan. Diah RL dan Sumaryono, penerjemah. Bandung: Penerbit ITB. Terjemahan dari: Plant Physiolog y

Siemonsma JS, Pileuk K. 1994. Plant Resource of South Asia 8 Vegetables. Bogor: Prosea Foundation Soewito. 1989. Bercocok Tanam Seledri. Jakarta : Titik Terang Stryer L. 1995. Biokimia . Sadikin et al , penerjemah; Soebianto S, editor. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Biochemistry Sunarjono. 2003. Bertanam 30 Jenis Sayur . Jakarta : Penebar Swadaya Turan M, Sezen Y. 2003. Effect of salt stress on plant nutrition uptake. Experimental Botany Journal. 54 (392) : 2553-2562 Waterborg JH, Matthews HR. 1984. The lowry method for protein quantitation. Di dalam : Walker JM, editor. Methods in Molecular Biology Volume I. New Jersey : Humana Press

Lampiran 1 Tahap penelitian


Sampel Seledri dari daerah Cipanas dan Ciwidey berumur 4, 6, 8 minggu

Bagian daun

Uji Pendahuluan

Analisis diosmin

Analisis protein

Analisis Bobot Kadar Tanah basah air

Kadar Identifikasi Identifikasi abu diosmin dan pengukuran dengan KLT diosmin dengan KCKT

Pengukuran konsentrasi dengan metode Lowry

Analisis pola protein dengan SDS PAGE

Lampiran 2 Pembuatan bufer ekstraksi protein (Robyt & White 1987)


Bufer ekstraksi protein pada daun : ? 0.1 M Tris HCl, pH 8.0 ? 0.25 M Sukrosa ? PVP (0.75 g/ 50 ml)

Lampiran 3 Bahan pereaksi untuk penentuan konsentrasi tota l protein dengan Metode Lowry (Watterborg & Matthews 1984 )
Bahan pereaksi yang digunakan antara lain : Pereaksi A Na 2CO 3 sebanyak 2 gram ditimbang dan ditambahkan dengan 0.4 gram NaOH kemudian dilarutkan ke dalam akuades sebanyak 100 ml. Pereaksi B Sebanyak 0.05 gram CuSO 4 dan 0.1 gram Na-tartrat dilarutkan ke dalam 10 ml akuades. Pereaksi C Pereaksi A dan pereaksi B dicampur dengan perbandingan 50 : 1 Pereaksi D Folin Ciocalteus dicampurkan dengan akuades dengan perbandingan 1 : 1

Lampiran 4 Bahan pereaksi untuk SDS PAGE (berdasarkan metode Laemmli 1970 dalam Coligan et al 1995)
30% akrilamid/0.8% bisakrilamid Sebanyak 30 g ram akrilamid ditambahkan dengan 0.8 gram N,N-metilenbisakrilamid ditimbang, kemudian dilarutkan dengan akuades sampai volume 100 ml. Setelah itu, larutan tersebut disaring dengan menggunakan kertas saring dan disimpan pada suhu 4? C dalam kondisi gelap. Larutan ini dapat disimpan sampai 30 hari. 4x Tris -Cl/SDS, pH 6.8 Sebanyak 6.05 gram Tris dilarutkan ke dalam 40 ml akuades dan dipekatkan dengan HCl sampai pH 6.8, kemudian ditera dengan akuades sampai volume 100 ml. Larutan tersebut disaring degan kertas saring, lalu ditambahkan 0.4 gram SDS. Larutan disimpan pada suhu 4? C dan tahan sampai 30 hari. 4x Tris -Cl/SDS, pH 8.8 Sebanyak 91 gram Tris dilarutkan ke dalam 300 ml akuades dan dipekatkan dengan HCl sampai pH 8.8, kemudian ditera dengan akuades sampai volume 500 ml. Larutan tersebut disaring degan kertas saring, lalu ditambahkan 2 gram SDS. Larutan disimpan pada suhu 4?C dan tahan sampai 30 hari. Sampel Buffer Sebanyak 0.3 gram Tris, 2 ml -merkaptoetanol, 0.92 gram SDS, 4 gram gliserol, 2 ml bromfenol biru (0.1% w/v) dilarutkan dalam 10 ml akuades. Setelah itu diukur pH sampai 6.8 menggunakan HCl, kemudian ditera denagan akuades sampai volume 20 ml. Larutan ini disimpan pada suhu 4?C dan tahan sampai 30 hari. Buffer Elektroforesis Sebanyak 6 gram Tris, 28.8 gram glisin, dan 2 gram SDS dilarutkan dengan akuades sampai volume 400 ml. Larutan Pewarna Larutan pewarna dibuat ketika akan digunakan. Pertama, sebanyak 0.25 gram coomasie biru R250 dimasukkan ke dalam 125 ml metanol kemudian ditambah dengan 25 ml asam asetat glasial dan 100 ml akuades. Larutan Dekolorisasi Sebanyak 100 ml metanol, 100 ml asam asetat glasial, dan 800 ml akuades dicampurkan sampai merata

Lampiran 5 Pembuatan gel SDS PAGE (Metode Laemmli 1970 dalam Coligan et al 1995)
Komposisi gel pisah 10% Bahan Pereaksi 30% akrilamid/ 0.8% bisakrilamid 4x Tris-Cl/SDS, pH 8.8 akuades 10% (w/v) Amonium Persulfat TEMED Volume (ml) 10 7.5 12.5 0.1 0.02

Semua bahan pereaksi, kecuali amonium persulfat dan TEMED dicampurkan ke dalam erlenmeyer dan divakumkan selama 5 menit. Kemudian amonium persulfat dan TEMED dimasukkan dan digoyang-goyang sampai campuran merata. Campuran tersebut langsung digunakan dengan memasukkannya ke dalam cetakan gel sampai batas tertentu dan jangan sampai terbentuk gelembung udara. Setelah itu, ditambahkan akuades pada permukaan gel dan tunggu sampai gel mengering. Apabila gel sudah mengering akuades dibuang dan sisa akuades diserap dengan kertas saring. Larutan 10% Amonium Persulfat dibuat langsung ketika akan digunakan. Komposisi gel tumpuk Bahan Pereaksi 30% akrilamid/ 0.8% bisakrilamid 4x Tris-Cl/SDS, pH 6.8 akuades 10% (w/v) Amonium Persulfat TEMED Volume (ml) 1.30 2.50 6.10 0.05 0.001

Semua bahan pereaksi, kecuali amonium persulfat dan TEMED, dicampurkan ke dalam erlenmeyer dan divakumkan selama 5 menit. Kemudian amonium persulfat dan TEMED dimasukkan dan digoyang-goyang sampai campuran merata. Campuran tersebut langsung digunakan dengan memasukkannya ke dalam cetakan gel sampai batas maksimal dan jangan sampai terbentuk gelembung udara. Setelah itu, dimasukkan sisir supaya membentuk sumur sebagai tempat sampel dan tunggu sampai gel mengering. Apabila gel sudah mengering, sisir dilepaskan perlahan-lahan. Preparasi sampel dilakukan dengan mencampurkan sampel dan sampel buffer dengan perbandingan 1:1. Campuran tersebut didenaturasi pada suhu 100 ? C selama 5 menit. Sebanyak 15 l sampel diinjeksikan ke dalam sumur, kemudian dielektroforesis dengan tegangan 200 volt selama 40 menit. Setelah itu, gel diwarnai dengan larutan pewarna.

Lampiran 6 Kondisi lingkungan daerah Cipanas dan Ciwidey (Balai penelitian Agroklimat Bogor)
Ciwidey 06?30 107?30 1100 Andosol > 9 (curah hujan > 200 mm/bln) < 2 (curah hujan < 100 mm/bln) Cipanas 06?45 107?01 1100 Andosol 7-9 (curah hujan >200 mm/bln) < 2 (curah hujan <100 mm/bln)

Garis lintang Garis bujur Ketinggian tempat (m) Jenis tanah Bulan basah (bulan) Bulan kering (bulan)

Lampiran 7 Hasil analisis tanah


Parameter pH KCl C-Organik (%) N total (%) P Bray -Olsen (mg/kg) Ca (me/100 g) Mg (me/100 g) K (me/100 g) Na (me/100 g) KTK (me/100 g) KB (%) Al (me/100 g) H (me/ 100 g) Tekstur : Pasir (%) Debu (%) Liat (%) HCl 25% (ppm) Keterangan : *ttd : tidak terdeteksi *me : mili ekuivalen 31.36 29.85 34.07 252.5 28.27 35.08 31.34 216.2 Cipanas 5.11 4.05 3.51 0.25 Ciwidey 4.92 4.21 2.53 0.19

7.34 1.42 0.78 0.38 0.41 29.04 15.4 0.2 0.21

6.05 1.17 0.48 0.25 0.29 24.52 16.6 ttd 0.18

Lampiran 8 Kriteria penilaian sifat kimia tanah (Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat)
Hara makro Sifat Tanah C-Organik (%) N Total (%) P2O5 HCl 25% (mg/100g) P2O5 Olsen (ppm) K2O HCl 25% (mg/100g) K (me/100g) Hara mikro KTK (me/100g) Na (me/100g) Mg (me/100g) Ca (me/100g) Kejenuhan Basa (KB)% Kejenuhan Al% pH Sangat Masam < 4.5 Sangat Rendah < 1.00 < 0.01 < 10 < 10 < 10 < 0.1 <5 < 0.1 < 0,4 <2 < 20 < 10 Rendah 1.00 2.00 0.01 0.20 10 20 10-25 10 20 0.1 0.2 5 - 16 0.1 0.3 0.4 1.0 2 5 20 35 10 - 20 Sedang 2.01 3.00 0.21 0.50 21 - 40 26 - 45 21 - 40 0.3 0.5 17 - 24 0.3 0.5 1.1 2.0 6 - 10 36 - 50 21 - 30 Tinggi 3.03 5.00 0.51 0.75 41 - 60 46 - 60 46 - 60 0.6 1.0 25 - 40 0.6 1.0 2.1 8.0 11 - 20 51 - 70 31 - 60 Agak Alkalis 7.6 8.5 Sangat Tinggi > 5.00 > 0.75 > 60 > 60 > 60 > 1.0 > 40 > 1.0 > 8.0 > 20 > 70 > 60

Masam 4.5 5.5

Agak Masam 5.6 6.5

Netral 6.6 7.5

Alkalis > 8.5

Keterangan : *KTK : Koefisien Tukar Kation

Lampiran 9 Hasil kadar air, kadar abu, dan bobot basah tanaman seledri pada Daerah Cipanas dan Ciwidey dengan masa tanam 4, 6, dan 8 minggu
Tanaman seledri daerah Cipanas dengan masa tanam 4 minggu Bobot Bobot Bobot cawan + Kadar sampel cawan sampel air Ulangan (gram) (gram) (gram) (%) 1 1.0630 22.9823 23.1445 84.70 2 1.0173 16.7362 16.8925 84.54 3 1.1209 19.5103 19.6974 83.22 Rataan 84.15 Tanaman seledri daerah Cipanas dengan masa tanam 6 minggu Bobot Bobot Bobot cawan sampel cawan + sampel Ulangan (gram) (gram) (gram) 1 2 19.5442 19.8449 2 2 16.7359 17.0307 3 2 18.6622 18.9336 Rataan Kadar abu (%) 0.68 0.65 0.43 0.59 Bobot Basah (gram) 56.00 43.57 51.18 50.25

Kadar air (%) 85.00 84.50 86.43 85.31

Kadar abu (%) 1.58 0.84 1.28 1.23

Bobot basah (gram) 106.80 97.55 88.57 97.64

Tanaman seledri daerah Cipanas dengan masa tanam 8 minggu Bobot Bobot Bobot cawan + Kadar sampel cawan sampel air Ulangan (gram) (gram) (gram) (%) 1 2 16.7399 17.067 83.96 2 2 21.9733 22.2734 84.99 3 2 15.5449 19.8612 84.12 Rataan 84.36 Tanaman seledri daerah Ciwidey dengan masa tanam 4 minggu Bobot Bobot Bobot cawan + Kadar Sampel Cawan Sampel Air Ulangan (gram) (gram) (gram) (%) 1 1.1649 18.6648 18.8492 84.17 2 1.1126 21.9734 22.1580 83.41 3 1.0209 19.5415 19.6890 85.55 Rataan 84.38 Tanaman seledri daerah Ciwidey dengan masa tanam 6 minggu Bobot Bobot Bobot cawan + sampel cawan sampel Ulangan (gram) (gram) (gram) 1 2 19.504 19.8023 2 2 22.9789 23.2714 3 2 21.9711 22.3318 Rataan

Kadar abu (%) 1.60 1.51 1.56 1.56

Bobot basah (gram) 187.35 154.35 163.97 168.56

Kadar abu (%) 0.98 0.68 3.95 1.87

Bobot basah (gram) 67.79 53.63 48.15 56.52

Kadar Air (%) 85.08 85.38 81.96 84.14

Kadar abu (%) 1.35 1.72 1.57 1.55

Bobot Basah (gram) 175.43 139.31 88.57 134.44

Lampiran 9 (Lanjutan)
Tanaman seledri daerah Ciwidey dengan masa tanam 8 minggu Bobot Bobot Bobot cawan + Kadar sampel cawan sampel air Ulangan (gram) (gram) (gram) (%) 1 2 18.6600 18.9618 84.49 2 2 22.9966 23.2897 85.34 3 2 19.4985 19.8055 84.65 Rataan 84.83 Kadar abu (%) 1.90 1.32 1.72 1.65 Bobot basah (gram) 302.64 279.59 213.93 265.39

Lampiran 10 Hasil analisis statistik Rancangan Acak Kelompok (RAK) berbagai parameter
Kadar Air Sumber Keragaman Kelompok Daerah Waktu Daerah*Waktu Galat Total Kadar Abu Sumber Keragaman Kelompok Daerah Waktu Daerah*Waktu Galat Total Rendemen Sumber Keragaman Kelompok Daerah Waktu Daerah*Waktu Galat Total Kadar Protein Sumber Keragaman Kelompok Daerah Waktu Daerah*Waktu Galat Total Bobot Basah Sumber Keragaman Kelompok Daerah Waktu Daerah*Waktu Galat Total db 2 1 2 2 10 17 JK 12.840 0.6050 12.110 11.526 60.652 103.179 KT 0.6420 0.6050 0.6055 0.5763 0.6065 F hit 1.06 1.00 1.00 0.95 P 0.3828** 0.3415** 0.4024** 0.4190** db 2 1 2 2 10 17 JK 0.2817 0.2112 0.6697 0.1747 14.6396 17.9771 KT 0.1409 0.2112 0.3349 0.0874 1.4640 F hit 0.10 0.14 0.91 0.06 P 0.9091** 0.7120** 0.4328** 0.9424**

db 2 1 2 2 10 17

JK 23.9730 0.0617 96.9789 80.4317 110.2550 311.7003

KT 11.9865 0.0617 48.4894 40.2158 11.0255

F hit 1.09 0.01 4.40 3.65

P 0.3739** 0.9418** 0.0426* 0.0646**

db 2 1 2 2 10 17

JK 76545.1099 5736618.3734 723760.4722 1148860.4808 1001794.6860 9376459.1224

KT 382712.5550 5736618.3734 361880.2361 574430.2404 100179.4686

F hit 3.82 57.26 3.61 5.73

P 0.0585** 0.0001* 0.0660** 0.0219*

db 2 1 2 2 10 17

JK 4812.3233 9470.0909 72559.5315 4159.9020 8348.1106 99349.9585

KT 2406.1617 9470.0909 36279.7658 2079.9510 834.8110

F hit 2.88 11.34 43.46 2.49

P 0.1027** 0.0071* 0.0001* 0.1324**

Keterangan : Alpha : 0.05 * : Berbeda nyata ** : Tidak berbeda nyata

Lampira n 11 Kurva standar Bovine Serum Albumin (BSA)


4 minggu
Konsentrasi standar BSA (g/ml) 0 20 40 60 80 100
Kurva Standar BSA

Absorban 0.073 0.161 0.226 0.290 0.314 0.388


Absorban 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 20 40 60 80 100 120 Konsentrasi standar BSA (ug/ml) y = 0.0921 + 2,991.10 x R = 0,9898

6 minggu Konsentrasi standar BSA (g/ml) 0 20 40 60 80 100 8 minggu Konsentrasi standar BSA (g/ml) 0 20 40 60 80 100

Kurva Standar BSA

Absorban
Absorban

0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 20 40 60 80 100 120 Konsentrasi Standar BSA (ug/ml) y = 0,0779 + 3,459.10 x R = 0,9937

0.058 0.161 0.220 0.302 0.354 0.410

Kurva Standar BSA

Absorban 0.046
Absorban

0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 -0,1 0 1 2 3 y = 0.0878 + 5.2614.10 x R = 0.9890

0.212 0.340 0.409 0.505 0.593

Konsentrasi Standar BSA (ug/ml)

Keterangan : * Larutan standar BSA yang digunakan 0-100 g/ml * ? 742 nm

Lampiran 12 Nilai Rf hasil Kromatografi Lapis Tipis ekstrak tanaman seledri


Perlakuan Cipanas 4 minggu Ulangan 1 2 3 Rf tanaman seledri 0.72 0.69 0.75 0.72 0.76 0.73 0.79 0.74 0.73 0.73 0.74 0.73 0.65 0.76 0.81 0.74 0.80 0.79 0.79 0.79 0.80 0.80 0.78 0.79

Rataan Ciwidey 4 minggu 1 2 3

Rataan Cipanas 6 minggu 1 2 3

Rataan Ciwidey 6 minggu 1 2 3

Rataan Cipanas 8 minggu 1 2 3

Rataan Ciwidey 8 minggu 1 2 3

Rataan Keterangan : * Foto hasil kromatografi pada lampiran 13

Lampiran 13 Foto hasil Kromatografi Lapis Tipis


8 minggu 6 minggu 4 minggu

1 2 3 4 5 6

4 5 6

Keterangan : * S : standar; 1 : Cipanas ulangan 1; 2 : Cipanas ulangan 2; 3 : Cipanas ulangan 3; 4 : Ciwidey ulangan 1; 5 : Ciwidey ulangan 2; 6 : Ciwidey ulangan 3 * Hasil perhitungan Rf pada lampiran 12

Lampiran 14 Rendemen ekstrak tanaman seledri


Lokasi tanam Cipanas Masa tanam (minggu) 4 Ulangan ke1 2 3 Rataan 1 2 3 Rataan 1 2 3 Rataan 1 2 3 Rataan 1 2 3 Rataan 1 2 3 Rataan Rendemen (%) 1.17 0.41 4.20 1.93 2.01 6.56 9.51 5.91 7.33 1.92 3.30 5.66 3.31 4.09 1.36 3.80 3.90 4.24 3.98 0.23 14.12 3.86 17.11 11.70 6.95 4.98 5.03 10.26 6.76 3.03

Ciwidey

Lampiran 15 Contoh perhitungan konsentrasi diosmin


180000 160000 140000 Luas Area 120000 100000 80000 60000 40000 20000 0 0 20 40 60 80 100 120 Konsentrasi Standar Diosmin (ppm) y = 5862.19 + 1412.52 x R = 0.9840

Kurva standar diosmin Persamaan kurva standar diosmin: y = 5852.19+1412.52 x x = 185942-5852.19 = 127.49 1412.52

Konsentrasi diosmin [Diosmin] dalam ekstrak = 127.49 ppm x 10 ml = 1274.90 ppm 1 ml Bobot diosmin = 1274.90 m g x 100 ml x 1L = 127.49 mg ml 1000 ml Kadar diosmin (% b/b) = Bobot d iosmin x 100% Bobot sampel = 127.49 mg x 1 g x 100% = 1.28% 10 g 1000 mg Keterangan : x = konsentrasi diosmin dalam sampel y = luas area kromatogram 10 = faktor pengenceran 1

Lampiran 16 Hasil kromatogram KCKT standar diosmin


10 ppm
UV-VIS

Retention Time
0.4 0.4

5.673

Volts

0.0

6.990

0.0

-0.2 0

2.447

-0.2 5 10 15 20
Minutes

25

30

35

40

25 ppm
UV-VIS

1.0

Retention Time

1.0

Volts

0.720

0.5

0.5

1.207 1.340

1.897

3.000

4.163

4.640

0.0

2.420

7.167

0.0

5
Minutes

10

50 ppm
2
UV-VIS

Retention Time

Volts

0.727

1.210

2.993

0 0 1 2

2.397

5.647

9.273

3.833

0 3 4 5
Minutes

10

75 ppm
UV-VIS

Retention Time
2 2

Volts

0.727

1.103 1.217

2.943

1.800 1.880

3.747

4.943

7.447

0 0 1 2

2.363

9.067

0 3 4 5
Minutes

10

Volts

Volts

Volts

Volts

0.2

0.727 0.970 1.207 1.557 1.827 2.757 3.040

0.2

Volts
Volts

Volts

Volts

10

100 ppm

10

15

10

0
0

5 0

0.0

Cipanas 8 minggu

Cipanas 6 minggu

Cipanas 4 minggu

Lampiran 16 (Lanjutan)

0.790
1

0.780
0.797
1

1.127 1.760
2.5
UV-VIS

0.717

UV-VIS

Retention Time

UV-VIS

UV-VIS

Retention Time

Retention Time

Retention Time

1.113
1.127

1.533 1.750 3.893


5.0
2

2.187 2.467 2.843 3.063


2

1.097 1.213 1.457 1.570 1.863 2.307 2.877


3

2.123 4.893 5.050 5.583

2.427
3

1.917 2.137 2.420 2.813 3.110


7.5

2.733 2.933
3.600 3.713
4

3.653 3.737
4.157
10.0

3.650
4

4
5

6.773 7.010 7.307 7.420 7.650 7.797 8.250 8.777 9.060 9.290 9.383

Minutes

Minutes

Minutes

5 12.5

4.653 4.767 4.867 5.043

Lampiran 17 Hasil kromatogram KCKT sampel tanaman seledri

Minutes

5.403
5.777
6

6.633 6.717
15.0
7

6.637 6.790 6.910 7.027 7.160 7.257


7.133

7.547
8

17.5

7.947
8.643
9

8.567 8.637 8.800


9.070

20.0

9
10 0 5

8.957 9.020

10 10 15

10

10

10

Volts

Volts

Volts

Volts

Volts

Volts
Volts

10

0 0

0
0

0.203 0.437 0.780

0.810
1

0.793 1.130 1.653 1.820


2

Ciwidey 8 minggu

Ciwidey 6 minggu

Ciwidey 4 minggu

UV-VIS

UV-VIS

UV-VIS

Retention Time

Retention Time

Retention Time

Lampiran 17 (Lanjutan)

1.127 1.560 1.730

1.137 1.393

2.123

2.130 2.410
3

2.880
3

1.930 2.190 2.433 2.647 2.930

2.910 3.130 3.583


4

3.520 3.740
4

4.057 4.167 4.433 4.650 4.777 4.873


5

3.283 3.483 3.653 3.940 4.153 4.363 4.777 5.053


Minutes

Minutes

Minutes

5.403

5.807
6

5.733

6.277 6.573 6.777


7

6.783
7

6.460 6.717
7

7.147

8 9 10 0
Volts

8.143

8.030 8.510
9

9 10

10

10

Volts

Volts

Lampiran 18 Penentuan bobot molekul (BM) protein tanaman seledri

Rf pita protein (cm) 0.015 0.038 0.068 0.350 0.640 0.840 0.860

Log BM Penanda Protein 1.82 1.65 1.56 1.46 1.38 1.30 1.15

Kurva Standar antara Rf dan Log BM Penanda Protein 2 1,5 Log BM 1 0,5 0 0 0,2 0,4 Rf (cm) 0,6 0,8 1 y = 1.6955 - 0.5533 x R = - 0.9303