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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA CENTRO DE CINCIAS RURAIS PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ZOOTECNIA

ALTERAO DA CARGA DE ECTOPARASITAS E DAS PROPRIEDADES ORGANOLPTICAS DO LEITE DE VACAS DA RAA HOLANDESA SUBMETIDAS A DIFERENTES NVEIS DE ALHO NA ALIMENTAO

DISSERTAO DE MESTRADO

Pricles Boechat Massariol

Santa Maria, RS, Brasil 2008

ALTERAO DA CARGA DE ECTOPARASITAS E DAS PROPRIEDADES ORGANOLPTICAS DO LEITE DE VACAS DA RAA HOLANDESA SUBMETIDAS A DIFERENTES NVEIS DE ALHO NA ALIMENTAO

por

Pricles Boechat Masariol

Dissertao apresentada ao Curso de Mestrado do Programa de Ps-Graduao em Zootecnia, rea de Produo Animal/Bovinocultura de Leite, da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS), como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em Zootecnia.

Orientador: Prof. Dr. Clair Jorge Olivo

Santa Maria, RS, Brasil 2008

Universidade Federal de Santa Maria Centro de Cincias Rurais Programa de Ps-Graduao em Zootecnia

A Comisso Examinadora, abaixo assinada, aprova a Dissertao de Mestrado

ALTERAO DA CARGA DE ECTOPARASITAS E DAS PROPRIEDADES ORGANOLPTICAS DO LEITE DE VACAS DA RAA HOLANDESA SUBMETIDAS A DIFERENTES NVEIS DE ALHO NA ALIMENTAO elaborada por Pricles Boechat Massariol

como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em Zootecnia COMISO EXAMINADORA

Clair Jorge Olivo, Dr. (Presidente/Orientador)

Carlos Octavio Cordovs Cspedes, Dr. (Irfa- Qumica e Biotecnologia Industrial)

Jlio Viegas, Dr. (Universidade Federal de Santa Maria)

Santa Maria, 14 de fevereiro de 2008.

AGRADECIMENTOS

A minha me, irmo e namorada, Maria Emilia, Alojzij e Isa que sempre estiveram comigo durante minha caminhada, assim como meu Padrinho e tia Marlene.

Ao Sr. Jos, Sra. Sofia, Mauricio, Marcelo, Nice e famlia Fornalski, por todos os bons momentos que compartilhamos.

Ao professor Clair Jorge Olivo, exemplo de garra e determinao, que muito me ensinou e esteve ao meu lado durante todas as dificuldades deste trabalho.

Aos professores e professoras: Luiz Alfredo, Lenir Cardoso, Marcos Zanini, Patrcia Freitas, Fernanda Vogel Flores, Neila Richards, Cleber Cassol Pires e Julio Vigas, por todo apoio busca de alternativas mais sustentveis.

A Carlos Alberto Agnolin, Giovana Camillo, Gilmar Roberto Meinerz, Magnos Ziech e Diego Barcelos Galvani por toda ajuda na realizao e interpretao do experimento.

Aos amigos Thiago Nascimento e Diego Barcelos : Parceria Forte!

A toda equipe do Tambo que tornou possvel a experimentao, a Sra. Olirta e a toda turma de mestrado principalmente Jlia, Volnei, Rui, Glucia, Felipe e L.

LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Porcentagem de ectoparasitas em relao contagem prvia aplicao dos produtos nos diferentes grupos constitudos por alho picado e misturado ao concentrado a 100g (Alho100) e 200g vaca-1 dia-1 (Alho200), amitraz a 0,025% (Amitraz) e no controle negativo (Controle). Santa Maria, RS, 2007. ..............................................................21

Tabela 2 - Percentual de eficcia dos tratamentos constitudos por alho picado e misturado ao concentrado a 100g (Alho100) e 200g vaca-1 dia-1 (Alho200) e por amitraz a 0,025% (Amitraz). Santa Maria, RS, 2007. ............................................................................23

Tabela 3 - Comparao de mdias das variveis zootcnicas, anlise sensorial do leite cru e do queijo tipo Minas-Frescal aps a aplicao dos produtos nos diferentes grupos constitudos por alho picado e misturado ao concentrado a 100g (A100) e 200g animal-1 dia-1 (A200) por trs dias, amitraz a 0,025% (Amitraz) e no grupo controle negativo. Santa Maria, RS, 2007...............................................................................................................24

RESUMO Dissertao de Mestrado Programa de Ps-Graduao em Zootecnia Universidade Federal de Santa Maria ALTERAO DA CARGA DE ECTOPARASITAS E DAS PROPRIEDAES ORGANOLPTICAS DO LEITE DE VACAS DA RAA HOLANDESA SUBMETIDAS A DIFERENTES NVEIS DE ALHO NA ALIMENTAO
AUTOR: PRICLES BOECHAT MASSARIOL ORIENTADOR: CLAIR JORGE OLIVO Data e Local da Defesa: Santa Maria, 14 de fevereiro de 2008. Dezesseis vacas de raa Holandesa em lactao foram utilizadas para avaliar o efeito da administrao de alho na alimentao sobre a alterao da carga de carrapato, mosca-doschifres, mosca dos estbulos e mosca domstica. Os tratamentos foram constitudos por alho a 100g (A100) e 200g vaca-1 (A200), por trs dias, o amitraz a 0,025% (Am) e pelo grupo controle negativo. Para avaliao foram contadas as fmeas ingurgitadas de carrapato com comprimento superior a 4 mm e as moscas antes da aplicao e no 1o, 2o, 3o, 4o, 5o, 6o, 7o e 14o dia aps a aplicao de cada tratamento. No 1o, 2o e 3o dia ps-tratamento foram coletadas amostras de leite para avaliao das propriedades organolpticas do leite cru e do queijo Minas-Frescal. A eficcia dos tratamentos foi de: 27,34; 12,31; e 97,05% para (A100), (A200) e (Am), respectivamente. O antiparasitrio comercial (Am) foi o mais eficaz no controle de carrapatos. O alho apresentou baixa eficcia no controle do carrapato e ineficcia no controle das moscas. Nestes tratamentos, no foi detectado odor ou sabor de alho no leite e no queijo.

Palavras-chave: Allium sativum, amitraz, Boophilus microplus, Haematobia irritans, Musca domestica, Stomoxys calcitrans.

ABSTRACT Dissertation of Mastership Program of Post-Graduation in Zootecnia Universidade Federal de Santa Maria ALTERATION OF THE ECTOPARASITES LOAD AND FLAVOR PROPRIETIES IN THE MILK OF HOLTEIN COWS UNDER INTAKE OF DIFFERENT LEVELS OF GARLIC IN ALIMENTATION
AUTHOR: PRICLES BOECHAT MASSARIOL ADVISER: CLAIR JORGE OLIVO Date and defenses Place: Santa Maria, February 14th of 2007. Sixteen lactating Holstein cows were used to evaluate the effect of suply of garlic in the feed on the alteration of load of tick, horn fly and stably fly and domestic fly. The treatments were garlic at 100g (A100) and 200g cow-1 (A200) for three days, Amitraz at 0.025% (Am) and negative control group. Engorged ticks were evaluated with lengh superior to 4.0 mm and flys before and at 1st, 2nd, 3rd, 4th, 5th, 6th, 7th, and 14thday after treatment. In the 1st, 2nd, 3rd days after treatments, milk samples were taken for flavor evaluation on raw milk and soft cheese Minas-Frescal. The efficacy of treatments were 27.34; 12.31; e 97.05% for (A100), (A200) e (Am), respectively. Commercial ectoparasiticide was more efficacious in the control of ticks. Garlic show low efficacy on control tick and inefficacious in control of flies. In these treatments, no residual garlic flavor or taste was detected on milk and cheese.

Key words: Allium sativum, amitraz, Boophilus microplus, Haematobia irritans, Musca domestica, Stomoxys calcitrans.

SUMRIO

LISTA DE TABELAS............................................................................................................. 04 RESUMO................................................................................................................................ 05 ABSTRACT............................................................................................................................ 06 CAPTULO 1 1.1 Consideraes gerais........................................................................................................ 08

1.2 Estudo Bibliogrfico......................................................................................................... 09 1.2.1 Composio e propriedades qumicas do alho.............................................................. 1.2.2 Atividade biolgica do alho.......................................................................................... 1.2.2.1 Ao antiparasitria do alho....................................................................................... 1.2.3 Propriedades organolpticas do alho............................................................................. 1.3 Referncias Bibliogrficas............................................................................................... CAPTULO 2 ALTERAO DA CARGA DE ECTOPARASITAS E DAS PROPRIEDADES ORGANOLPTICAS DO LEITE DE VACAS DA RAA HOLANDESA SUBMETIDAS A DIFERENTES NVEIS DE ALHO NA ALIMENTAO..................... 15 2.1 Introduo......................................................................................................................... 16 2.2 Material e Mtodos........................................................................................................... 17 2.3 Resultados e Discusso.................................................................................................... 20 09 10 11 12 13

2.4 Concluses........................................................................................................................ 25 2.5 Referncias Bibliogrficas............................................................................................... 26

CAPTULO 1
1.1 Consideraes gerais

O interesse da humanidade por plantas com fins medicinais vem de longa data. Referncias sobre a utilizao de fitoterpicos foram encontradas na Mesopotmia, em inscries feitas em cermica, datadas de 2600 AC (GURIB-FAKIM, 2006). A sociedade moderna continua utilizando produtos naturais com fins teraputicos e sua procura tem sido crescente, respaldada pela confiana das pessoas em medicamentos produzidos com plantas (GURIB-FAKIM, 2006). Esse interesse impulsiona os avanos cientficos, que enfoca o isolamento de substncias e a ao farmacolgica de plantas medicinais, e pode ser constatado pelo aumento do nmero de revistas especializadas e das publicaes nesta rea (FILHO & YUNES, 1998). A importncia destes estudos compreensvel, considerando que, atualmente, mais de 50% dos frmacos utilizados no mundo, so constitudos por produtos naturais e derivados (GURIB-FAKIM, 2006). Ressaltase que as pesquisas so desenvolvidas tanto para obter informaes sobre as plantas j usadas, quanto para identificar novos componentes ativos (FENNEL et al., 2004). Nesse contexto, destaca-se a natureza complexa desses estudos, pois as plantas medicinais possuem uma composio variada de componentes que podem agir individual ou conjuntamente. Uma s planta, por exemplo, pode conter substncias que estimulam a digesto, combatem dores e processos inflamatrios. Seus compostos fenlicos podem ter ao antibacteriana, antifngica, antioxidante, diurtica, antitxica e os alcalides podem melhorar a sensao de bem-estar do indivduo (GURIB-FAKIM, 2006). Dentre os fitoterpicos mais utilizados pelo homem, destacam-se as plantas do gnero Allium, havendo referncias de seu uso cientificamente, em 1858, por Pasteur, que estudou a ao antibitica do alho (BLOCK et al., 1993). Outras aes biolgicas do alho, como a antimictica (ANKRI & MIRELMAN, 1999) e a antiparasitria (ALVARENGA et al., 2004; BATATINHA et al., 2004) tm sido referenciadas. As pesquisas sobre os efeitos do alho em animais domsticos so mais escassas e, por vezes, com resultados contraditrios. Recomendaes baseadas no conhecimento popular para o uso do alho em animais tm sido observadas em diversas regies do planeta. H, no entanto, escassez de comprovao

cientifica da ao antiparasitaria do alho in vivo e de estudos sobre possveis influncias nas caractersticas organolpticas do leite dos animais tratados com esse fitoterpico.

1.2 Estudo bibliogrfico

1.2.1 Composio e propriedades qumicas do alho

O alho (Allium sativum L.) pertence famlia Liliaceae (GURIB-FAKIM, 2006) e originrio do sudeste da Sibria cuja distribuio pela Europa ocorreu, provavelmente, atravs das cruzadas. O gnero Allium compreende mais de 600 espcies (BLOCK et al.,1993). A parte normalmente usada na alimentao e para fins medicinais o bulbo maduro formado por 6 a 15 bulbilhos, que contm protenas, cidos graxos, carboidratos, vitaminas A, B1, B2, C e adenosina (REUTER 1990; LAWSON, 1993 apud KOROLKOVAS & BURCKHALTER, 1982). Anlises efetuadas com resduos do beneficiamento do alho demonstraram (com base na matria seca) teores de protena bruta, fibra em detergente neutro, fibra em detergente acido de 25,02; 21,4; 20%, respectivamente. Para fibra bruta, extrato etreo, cinzas, clcio e fsforo, os valores mdios foram de 13,00; 0,88; 8,50; 0,93 e 0,44%, respectivamente (ALVARENGA et al., 2004). No alho, o teor de aliina varia de 0,76 0,40% com base na matria natural (BLOCK et al., 1993). A formao da alicina ocorre quando o substrato aliina entra em contato com a enzima alinase. Esta enzima liberada dos vacolos aps situaes de dano tecidual na planta (por invaso de microorganismos, mastigao, triturao ou corte dos bulbilhos), formando compostos citotxicos e odorferos como a alicina, que devido a sua caracterstica qumica de alta instabilidade, se decompe rapidamente em outras molculas como o sulfito de dialila, dissulfito de dialila, trisssulfito de dialila, ditiinas e ajoeno (AMAGASE et al., 2001). Outras substncias no sulfuradas so obtidas do alho, como a garlicina, obtida sob a forma slida, de cor amarelada e praticamente insolvel em gua (distinguindo-se da alicina que liquida e contm enxofre), apresentando tambm atividade biolgica (MCDOWELL 1974; HE et al., 2003 apud ALVARENGA et al., 2004). Entretanto, de acordo com o tipo de processamento do alho, pode ocorrer seleo dos constituintes em diferentes quantidades. Por exemplo, HOSHINO et al., (2001), quantificou no alho cru desidratado 23,3; 11,3 mg/g e 162 g/g de aliina, alicina e S-allylcysteina enquanto no alho fervido continha somente 6,6; menos de 0,2 mg/g e 67 g/g, respectivamente.

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Considerando-se a possibilidade e facilidade da utilizao do alho (bulbo) para nutrio e sade animais, deve-se observar a variabilidade de seus componentes devido s condies de produo e gentica e de processamento das plantas.

1.2.2 Atividade biolgica do alho

A ao antibacteriana do alho foi investigada em 1858 por Pasteur (BLOCK et al., 1993). Vrios preparados tm mostrado um amplo espectro contra bactrias Gram-negativas e Gram-positivas incluindo os gneros Escherichia, Staphylococcus, Streptococcus, Kleibsiela e Proteus (ANKRI & MIRELMAN, 1999). O alho tambm possui efeito antimictico. Extratos de alho concentrado combateram fungos do gnero Cryptococcus e acredita-se que a ao da alicina contra os microorganismos seja atravs da alterao da funo de determinadas enzimas (ANKRI & MIRELMAN, 1999). A combinao de alicina, probiticos e frutoligossacardeos pode ser uma alternativa vivel na substituio de alguns antibiticos, sem reduzir o desempenho animal (DONOVAN et al., 2002). SHASHIKANT et al., (1985), administrando extrato de alho contendo 8 M de alicina em ratos observaram reduo de 50 a 60% da microflora intestinal aps 4 h da administrao ressaltando que as bactrias aerbias so mais susceptveis ao extrato do que as anaerbias. Embora vrios estudos comprovem a eficcia da alicina in vitro, AMAGASE et al. (2001), questionam a ao da alicina in vivo devido alta instabilidade qumica desta molcula. Assim, como a alicina se transforma rapidamente, outras molculas poderiam estar envolvidas nos efeitos atribudos ao alho. Em diversas pesquisas foram observadas as aes biolgicas dos outros componentes do alho. URBINA et al., (1993) contriburam, a partir de experimentos com o Tripanossoma cruzi, para a elucidao da forma como o ajoeno (uma molcula derivada da alicina) capaz de impedir a multiplicao deste parasita, a partir de alteraes fosfolipdicas na clula. Outros efeitos favorveis so estudados mundialmente e atribudos ingesto de alho, como a diminuio de riscos de doenas cardacas, estimulao do sistema imunolgico, desintoxicao, e aumento da resistncia ao estresse (AMAGASE et al., 2001). Contudo, efeitos indesejveis e adversos so apontados aps ingesto de alho em diferentes espcies animais. KASUGA et al., (2001) sugeriram que produtos diferentes a base de alho possuem propriedades farmacolgicas distintas, aps comparar os efeitos do suco de

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alho cru, de alho aquecido, p de alho desidratado e extrato de alho envelhecido em experimentao com animais. Em vrias pesquisas os efeitos adversos tambm variaram conforme o tipo de preparao e extrao, reforando essa suposio. Um estudo conduzido com ces, por exemplo, revelou danos s mucosas estomacais, aps colocao direta de alho no estmago, tais como eroses aps contato com alho cru em p e apenas vermelhido aps colocao do alho fervido em p (HOSHINO et al., 2001). Em ratos, o suco de alho in natura (0,5 ml) causou danos severos mucosa epitelial, sendo possvel observao de lceras e sangramentos 24h aps a ingesto (AMAGASE et al., 2001). Existem relatos de que pessoas alrgicas ao alho podem desenvolver dermatites aps contato ou ingesto de alho. (KOROLKOVAS & BURCKHALTER, 1982).

1.2.2.1 Ao antiparasitria do alho

Muitos povos da antiguidade atribuam funes antiparasitrias ao alho e, mais recentemente, Albert Schweizer prescrevia alho in natura triturado para o tratamento de pessoas com desinteria ou parasitose intestinal (ANKRI & MIRELMAN, 1999). Atualmente muitas pesquisas tm sido realizadas com variadas preparaes de alho, espcies animais e parasitas. A ao da alicina tem sido comprovada in vitro em parasitas comuns do intestino de seres humanos como Entamoeba histolytica e Giardia lamblia (ANKRI & MIRELMAN, 1999). Em estudo conduzido com frangos de corte no qual usou-se suco de alho fresco a 10% no concentrado, por trs dias consecutivos, foi verificada baixa ao anti-helmntica, sendo de 6,7% a eliminao fecal de Heterakis gallinarum para o alho e 24,7% para o medicamento padro a base de mebendasol (FERNANDES et al., 2004). Tambm em caprinos, usando-se 1g de suco de alho/kg de peso vivo no decorrer de oito dias, constatou-se que houve controle parcial de nematides gastrointestinais (BATATINHA et al., 2004). Pesquisas realizadas com bovinos leiteiros no decorrer de 98 dias, ALVARENGA et al. (2004), utilizando resduo do beneficiamento do alho na alimentao dos animais, em quantidades de 0, 3, 6 e 9g/animal/dia, alm do controle positivo, constitudo por carrapaticida comercial, demonstraram que somente o tratamento de maior quantidade de alho por animal/dia (9g/animal/dia) foi similar ao produto qumico entre os 56 e 70 dias de experimentao. J em estudos efetuados na Embrapa Gado de Corte, visando avaliar a eficcia do alho em p adicionado ao sal mineral, razo de 2%, concluram que as populaes de carrapato e da mosca-dos-chifres no diminuram em aproximadamente quatro

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meses de experimentao, enquanto a contagem de ovos por grama de fezes de parasitas gastrintestinais bovinos reduziu 47,3% (BIANCHIN et al., 1999). Posteriormente, BIANCHIN & CATTO, (2004) utilizaram doses de alho desidratado, aproximadamente 20 e 12 vezes mais elevadas em dois grupos de seis bezerras da raa Nelore com infeces mistas naturais de nematdeos gastrintestinais que foram tratadas durante 74 dias, com 20 e 10g/animal/dia de alho desidratado (o equivalente a 166 e 100mg/kg de peso vivo/dia) adicionado rao, verificando reduo mdia nos tratamentos com alho em relao ao grupo controle, de 23,62 e 50,02%, respectivamente. Considerando que uma quantidade maior de alho desidratado no resultou em melhor controle dos helmintos, talvez uma outra forma de preparao, contendo alho, pudesse diminuir ainda mais estes parasitas j que KASUGA et al., (2001) sugeriram que diferentes preparados base de alho possuem distintas propriedades farmacolgicas. Contudo, dependendo da forma de preparao, pode-se inadvertidamente anular o efeito antiparasitrio do alho. A interferncia da temperatura nas propriedades medicinais do alho, por exemplo, sugerida por SUTTON & HAIK, (1999) como causa de insucesso no controle dos parasitas em experimento utilizando alho fervido administrado em burros parasitados por nematides.

1.2.3 Propriedades organolpticas do alho

O alho utilizado como alimento ou com fins medicinais, pode transferir propriedades organolpticas peculiares, notadamente o sabor e o odor. Ressalta-se que o mesmo processo de degradao que ocorre no ambiente natural (como mecanismo de defesa) ou quando o bulbo cortado ou esmagado, formando alicina, especialmente, verifica-se tambm no organismo, motivo pelo qual o ar expirado apresenta odor caracterstico aps a ingesto do alho (KOROLKOVAS & BURCKHALTER, 1982). A presena do alho ou cebola em reas de pastejo tambm se constitui em problema srio devido a forte e rpida transferncia de odor ao leite. O odor e o sabor so detectados minutos aps o consumo de alimentos (GLAZIER, 1960). Normalmente, os efeitos organolpticos residuais dos alimentos no leite cru de bovinos so detectados mais intensamente entre uma e duas horas aps o consumo da dieta. Como preveno, recomenda-se a administrao dos alimentos entre quatro e cinco horas da ordenha (GLAZIER, 1960), minimizando-se, assim, a contaminao do leite com odor e sabor caractersticos dos produtos ofertados.

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1.3 Referncias bibliogrficas ALVARENGA, L.C.; PAIVA, P.C.A.; BANYS, V.L.; COLLAO-SAENZ, E.A.; MELLO, A.; RABELO, G.; REZENDE, C. A. P. Alterao da carga de carrapatos de bovinos sob a ingesto de diferentes nveis do resduo do beneficiamento do alho. Cincia Agrotcnica, v.28, n.4, p.906-912, 2004. AMAGASE, H.; PETESCH, B.; MATSUURA, H.; KASUGA, S.; ITAKURA, A. Intake of Garlic and Its Bioactive Components. The Journal of Nutrition, n.131, Supl.1, p.955S-962S, 2001. ANKRI, S.; MIRELMAN, D. Antimicrobial properties of allicin from garlic. Microbes and Infection, v.1, n.2, p.125-129, 1999. BATATINHA, M.J.M; BOTURA, M.B.; SANTOS, M.M.; SILVA, A.; ALMEIDA, M.G.A. R.; SANTANA, A.F.; BITTENCOURT, T.C.B.S.C.; ALMEIDA, M.A.O. Efeitos do suco de alho (Allium sativum L.) sobre nematdeos gastrintestinais de caprinos. Cincia Rural, v.34, n.4, p. 1265-1266, 2004. BIANCHIN, I.; GOMES, A.; FEIJ, G.L.D.; VAZ, E.C. Eficincia do p de alho (Allium sativum L.) no controle dos parasitas de bovinos. Campo Grande: Embrapa Gado de Corte, 1999. 31p. (Boletim tcnico, 8). BIANCHIN, I.; CATTO, J.B. Alho desidratado (Allium sativum L.) no controle de nematdeos gastrintestinais em bovinos naturalmente infectados. Cincia Rural, v.34, n.4, p. 126-1270, 2004. BLOCK, E.; NAGANATHAN, S.; PUTMAN, D.; ZHAO, S.H. Organosulfur chemistry of garlic and onion: Recent results. Pure & Applied Chemistry, v.65, n.4, p.625-632, 1993. DONOVAN, D.; FRANKLIN, C.C.L.; CHASE, A.R. Growth and Health of Holstein Calves Fed Milk Replacers Supplemented with Antibiotics or Enteroguard. Journal of Dairy Science v.85, p.947-950, 2002. FENNELL, C.W.; LINDSEY, K.L.; MCGAWB, L.J.; SPARG, S.G.; STAFFORD, G.I; ELGORASHI, E.E.; GRACE, O.M; VANSTADEN, J. Assessing African medicinal plants for efficacy and safety: pharmacological screening and toxicology- Review. Journal of Ethnopharmacology, v.1, n.94, p.205217, 2004. FERNANDES, R.M.; RODRIGUEZ, M.L.A.; BORBA, H.R.; FERNANDES, M.Z.L. Ausncia da atividade anti helmntica de plantas em frangos de corte naturalmente infectados com Heterakis gallinarum. Cincia Rural, v.34, n.5, p.1629-1632, 2004.

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FILHO, V.C.; YUNES, R.A. Estratgias para a obteno de compostos farmacologicamente ativos a partir de plantas medicinais. Conceitos sobre modificao estrutural para otimizao da atividade. Qumica Nova, v.21, n.1, p.99-105, 1998. GLAZIER, Z.R. Milk flavor improvements. Connecticut: University of Connecticut, Agricultural Extension, 1960. 10p. (Boletim tcnico, 10). GURIB-FAKIM, A. Medicinal plants: Traditions of yesterday and drugs of tomorrowReview. Molecular Aspects of Medicine, v.1, n.27, p.1-93, 2006. HOSHINO, T.; KASHIMOTO, N.; KASUGA, S. Effects of Garlic Preparations on the Gastrointestinal Mucosa. The Journal of Nutrition, v.131, Supl.1, p.1109S-1113S, 2001. KASUGA, S.; UDA, N.; KYO, E.; USHIJIMA, M.; MORIHARA, N.; ITAKURA, Y. Pharmacologic Activities of Aged Garlic Extract in Comparison with Other Garlic Preparations. The Journal of nutrition. v.131, Supl.1, 1080S1084S, 2001. KOROLKOVAS, A.; BURCKHALTER, J.H.; Qumica Farmacutica. So Paulo: Guanabara Dois, 1982. 784 p. KYO, E.; UDA, N.; KASUGA, S.; ITAKURA,Y. Immunomodulatory Effects of Aged Garlic Extract. The journal of nutrition v.131, Supl.1, p.1075S1079S, 2001. SHASHIKANT, K.N.; BASSAPA, S.C.; MURTH, V. Allicin concentration in the guts of rats and its influence in microflora 1985. Capturado em 5 de ago. 2007. Online. Disponivel na Internet http://www.alliforce.com/clinical/Allicin%20Antimicrobial.pdf. SUTTON, G.A.; HAIK, R. Efficacy of garlic as an anthelmintic in donkeys. Israel Veterinary Association, v.54, n.1, p.1-7, 1999. URBINA, J.A.; MARCHAN, E.; LAZARDI, K.; VISBAL, G.; APITZ-CASTRO, R.; GIL, F.; AGUIRRE, T.; PIRAS, M.M.; PIRAS, R. Inhibition of phosphatidylcholine biosynthesis and cell proliferation in Trypanosoma cruzi by ajoene, an antiplatelet compound isolated from garlic. Instituto Venezoelano de Investigaciones Cientificas, v.45, n.12, p.2381-7, 1993.

CAPTULO 2 ALTERAO DA CARGA DE ECTOPARASITAS E DAS PROPRIEDADES ORGANOLPTICAS DO LEITE DE VACAS DA RAA HOLANDESA SUBMETIDAS A DIFERENTES NVEIS DE ALHO NA ALIMENTAO

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2.1 Introduo

O parasitismo um dos fatores que causa diminuio da eficincia produtiva dos animais (BIANCHIN et al., 1999), implicando em grandes perdas econmicas. Os prejuzos causados por parasitas externos em rebanhos bovinos no Brasil, superam a cifra de dois bilhes de dlares ao ano, atribudos ao carrapato e as demais parasitoses, especialmente mosca-dos-chifres, berne, miases e mosca dos estbulos (GRISI et al., 2002). Para o controle convencional de parasitas, tanto de animais quanto de plantas, normalmente so utilizados substancias txicas, responsveis por taxas considerveis de intoxicaes e bitos da populao humana, especialmente de trabalhadores rurais (FARIA et al., 2007). Somado a esta problemtica, tem-se ainda a contaminao por produtos antiparasitrios no leite e na carne disponveis para alimentao humana, alm da contaminao ambiental direta (MOLENTO et al., 2004). Agregam-se ainda problemas com o desenvolvimento da resistncia aos produtos qumicos utilizados (FURLONG, 2004), especialmente em rebanhos de bovinos leiteiros (OLIVEIRA & AZEVEDO, 2002). A indstria, por sua vez, tem hesitado em investir na pesquisa de novos produtos qumicos, considerando os custos envolvidos que so maiores em relao aos sintticos em dcadas passadas (JONSSON, 2006). Neste contexto, em diferentes regies do mundo, tm-se buscado alternativas visando diminuir o uso de substncias txicas, havendo destaque para os produtos fitoterpicos. Sua utilizao pode reduzir os impactos ambientais e econmicos causados pelo uso de produtos sintticos convencionais, ressaltando-se que o desenvolvimento da resistncia de artrpodes aos fitoterpicos (compostos por associaes de vrios princpios ativos) um processo lento (ROEL, 2002). Agrega-se ainda a expanso da agricultura orgnica, implicando necessariamente, em se ter alternativas mais eficientes no controle de parasitas, considerando-se que esta estratgia de produo no permite o uso de pesticidas. Tambm o uso de fitoterpicos em sistemas agrcolas convencionais poderia fazer parte da estratgia de controle das parasitoses, j que VIEIRA & CAVALCANTE, (1999) ressaltam que a rotao adequada de grupos de antiparasitrios pode estender a vida til dos produtos qumicos. Os agricultores de maneira geral tm facilidade de acesso e de obteno dos fitoterpicos, alm destes, normalmente, no deixarem resduos na alimentao e apresentarem baixo custo de produo (ROEL, 2002). No entanto, alm de existirem poucas pesquisas sobre o uso de fitoterpicos no controle de parasitas de bovinos, as diferenas,

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quanto s caractersticas de ambiente e forma de cultivo, colheita e conservao dos produtos, podem implicar na oscilao dos resultados (HEIMERDINGER et al., 2006). Dentre os fitoterpicos, destaca-se o alho, que alm do uso generalizado como condimento, so atribudas a ele qualidades teraputicas. O alho rico em substncias organossulfuradas e dentre estas destacam-se a alicina (ANKRI & MIRELMAN, 1999) e o ajoeno (URBINA et al., 1993), principais responsveis pelos efeitos antiparasitrios. Devido a sua composio qumica, no entanto, as plantas e subprodutos do gnero Allium podem transferir substncias tpicas do sabor do alho para o leite, interferindo nas propriedades organolpticas dos produtos lcteos (GLAZIER, 1960). Seu uso como ectoparasiticida, embora indicado pelo conhecimento popular, cientificamente, tem sido pouco estudado. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do alho administrado alimentao, no controle de ectoparasitas de bovinos e nas caractersticas organolpticas do leite e do queijo.

2.2 Material e Mtodos

O experimento foi realizado no Laboratrio de Bovinocultura de Leite (Departamento de Zootecnia, UFSM), de dezembro de 2006 a janeiro de 2007. Foram constitudos quatro grupos, com quatro animais cada um. Dois grupos receberam alho, sendo um com 100g e outro com 200g vaca-1 dia-1, por trs dias consecutivos. Nos demais, um grupo foi tratado com amitraz a 0,025% (controle positivo) e outro foi constitudo pelos animais testemunha que nada receberam (controle negativo). Como unidades experimentais foram usadas 16 vacas da raa Holandesa (preto e branco). Os animais possuam cerca de 520kg de peso vivo e produo de leite entre 17 e 18kg de leite por dia, sendo manejadas em conjunto e naturalmente infestadas por carrapatos. As vacas foram submetidas diariamente a duas ordenhas e, entre elas, manejadas em reas constitudas por pastagens tropicais, recebendo como complemento alimentar 3kg de concentrado dia-1, contendo de 18% de protena bruta, aproximadamente. Como parmetro de controle do carrapato considerou-se os nstares com tamanho superior a 4 mm de comprimento. Os animais deveriam apresentar no mnimo 10 teleginas (Boophilus microplus) no lado direito do corpo como critrio para participar do experimento. Tambm foram contadas as mosca-dos-chifres (Haematobia irritans), mosca domstica e mosca dos estbulos (Musca Domestica e Stomoxys calcitrans). A contagem da mosca domstica e da mosca dos estbulos foi realizada em conjunto e em todo o corpo, portanto

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sem distino do nmero de indivduos de cada espcie. Os animais sorteados para o grupo controle positivo foram banhados individualmente com quatro litros da soluo, usando-se um pulverizador costal. Nos tratamentos constitudos por alho, os bulbilhos destinados a cada animal foram grosseiramente cortados, agregando-se 50g de acar mascavo, diludo em gua aquecida, e misturados ao concentrado, fornecido aps a ordenha da tarde. Essa forma de administrao e as quantidades foram baseadas nos estudos conduzidos por BIANCHIN et al. (1999), ALVARENGA et al. (2004) e por testes pr-experimentais efetuados com animais do rebanho do Laboratrio de Bovinocultura de Leite (DZ-UFSM). Dentre as formas de administrao testadas optou-se pelo uso do produto in natura, sendo grosseiramente desintegrado (trs a quatro partes por bulbilho), favorecendo a ingesto do produto com o concentrado. Diferentemente das pesquisas conduzidas com alho que fornecem pequenas quantidades por tempo prolongado, optou-se por usar quantidades elevadas em curto perodo, visando observar efeitos (dessa forma de administrao) sobre os ectoparasitas e, especialmente, sobre as propriedades organolpticas do leite. Aps a aplicao dos tratamentos, foram efetuadas contagens dirias dos ectoparasitas em cada vaca, at o 7o e no 14 dia. Os nmeros foram transformados em valores percentuais da contagem de cada animal, considerando o dia prvio ao inicio dos tratamentos como 100%, e estes foram transformados em mdias para os quatro grupos (controle negativo e tratamentos) e em logaritmo na base 10. Para a anlise das caractersticas sensoriais do leite, as amostras do 2, 3 e 4 dias, aps a aplicao dos tratamentos, foram avaliadas no laboratrio pertencente ao Departamento de Cincia e Tecnologia dos Alimentos (UFSM). Para o produto qumico respeitou-se o perodo de carncia indicado pelo fabricante, usando-se as amostras do 3 e 4 dias. Para anlise da cor, utilizou-se o teste de escala hednica no estruturado de 9 cm entre as ncoras, atribuindo-se posteriormente valores relativos entre muito claro (estranho), normal (bom) e muito forte. Assim, por exemplo, aps degustar uma amostra de queijo, caso o avaliador a considere com sabor indiferente, realizar uma marcao de caneta no meio do trao entre as palavras Desgostei muito a gostei muito. Esta marcao se aproximaria tanto mais de uma das extremidades quanto tivesse desgostado ou gostado do sabor. Para a avaliao do odor utilizou-se a escala hednica de mesmo tamanho, com valores entre muito fraco, bom e muito forte (estranho) (DUTCOSKY, 1996). As avaliaes foram feitas por cinco provadores experientes. Para anlise sensorial do queijo (tipo Minas-Frescal), quanto a cor, aroma, sabor e textura, tambm se utilizou de escalas hednicas de 9cm entre ncoras variando do desgostei

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muito at gostei muito. Para o atributo sabor residual, as ncoras utilizadas foram muitssimo fraco, normal, e muitssimo forte. Para a aparncia global foram atribudas notas de 1 (ruim) a 9 (muito bom) (LAWLESS & HEYMANN, 1998). As anlises do queijo foram feitas por doze provadores. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado com quatro tratamentos e quatro repeties (vacas). Os dados foram submetidos anlise de varincia, ao nvel de 5% de significncia. Para a comparao de mdias usou-se o teste de Duncan. As anlises estatsticas foram conduzidas com auxlio do programa estatstico SAS verso 6.12 (1997). O modelo estatstico referente a anlise das variveis estudadas foi representado por: Yijk = + Ti + Rj (Ti) + Pk + (TP)ik + ijK, Nele, Yijk representa as variveis dependentes; a mdia de todas as observaes; Ti corresponde ao efeito dos tratamentos; Rj(Ti) o efeito da j-sima repetio dentro do isimo tratamento (erro a); Pk o efeito do K-simo perodo; (TP)ik representa a interao entre os tratamentos e perodos; ijK corresponde ao erro experimental residual (erro b). Adicionalmente, utilizou-se, para o clculo da porcentagem de eficcia diria, para cada grupo de animais tratados, a seguinte frmula: % de Eficcia= (1-(AxB)/(CxD))x100 Nela, A a mdia da contagem de teleginas de um grupo tratado em um determinado dia do experimento aps a administrao dos produtos; B a mdia da contagem de teleginas do grupo controle no dia prvio ao inicio da administrao dos produtos; C a mdia da contagem das teleginas do grupo tratado no dia prvio ao inicio da administrao e D refere-se mdia da contagem do grupo controle no dia determinado.

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2.3 Resultados e Discusso

Os valores da anlise laboratorial do alho utilizado no experimento, quanto aos teores de matria seca e protena bruta, foram de 33,2 e 19,16%, respectivamente. Anlises qumicas do alho feitas por ALVARENGA et al. (2004) revelaram valores similares ao produto usado no presente trabalho quanto a protena bruta, entre 19,97 e 20 %. Os valores da anlise qumica do alho utilizado no experimento, com base em 100% da matria seca, para protena bruta, fibra bruta; extrato etreo e cinzas foram de 19,16; 7,23; 0,66 e 4,94, respectivamente. Os resultados referentes ao efeito do alho no controle de ectoparasitas encontram-se na Tabela 1. Para o controle de carrapatos, observou-se que houve diferena significativa (P<0,05) entre os tratamentos, tanto entre os dias de avaliao quanto entre as mdias. No grupo de animais do controle negativo, verificou-se um aumento da infestao, principalmente do 7 ao 14 dia j que at o 7 dia os animais apresentavam em mdia 21 teleginas aproximadamente, e no 14 dia havia 34 teleginas. Este aumento no ocorreu nos animais que receberam tratamento com alho ou amitraz. Para o grupo de animais que receberam o tratamento (A200), as vacas apresentavam em mdia 30 teleginas, at o 14 dia. J para o tratamento (A100), ocorreu diminuio da contagem de 35 para 26 teleginas, at o 7 dia, mantendo este nmero uma semana depois. Por ltimo, no grupo de animais que recebeu o amitraz, foram contadas duas teleginas, no primeiro dia, posteriormente por alguns dias no se encontrou teleginas e entre o 7 e o 14 dia, houve aumento do nmero de teleginas contadas. Como observaram HEIMERDINGER et al. (2006), esta reduo e aumento sucessivo se devem possivelmente a menor ao do amitraz nas formas inferiores do carrapato.

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Tabela 1 - Porcentagem de ectoparasitas em relao contagem prvia aplicao dos produtos nos diferentes grupos constitudos por alho picado e misturado ao concentrado a 100g (Alho100) e 200g vaca-1 dia-1 (Alho200), amitraz a 0,025% (Amitraz) e no controle negativo (Controle). Santa Maria, RS, 2007. Grupos 1 92,5 a 88,7a 16,8b 2 98,4a 95,1a 6,7b 107,5a 15,63 3 110,6a 102,7a 0,5b 197,4a 19,68 97,1 a 98,7
a

Dias ps-tratamento 4 110,5a 70,4a 0,0b 158,6a 15,34 5 94,5a 53,6a 0,0b 170,3a 15,60 6 93,5a 90,5a 0,8b 347,1a 37,55 7 112,3a 84,9a 0,0b 129,6a 13,66 14 123,2ab 109,2ab 22,2b 238,1a 21,68

Mdias

Carrapatos (%) Alho100 Alho200 Amitraz 100,5b 90,9b 5,9c 186,2a 21,32

Controle 140,8a CV (%) 21,74

Mosca-dos-chifres (%) Alho100 Alho200 Amitraz Controle CV (%) 47,2 85,4 92,4 99,1 34,52 169,4 95,3 119,0 85,2 45,65 42,4b 213,1a 31,9b 88,2ab 19,9 189,8 65,3 97,2 95,5 31,74 79,3 81,8 89,2 130,7 31,28 18,7b 98,4ab 88,4a 75,7ab 20,2 158,1 79,8 71,6 120,7 28,18 282,8 96,5 133,6 227,3 25,84 132,3 110,8 102,2 73,1 16,57 144,53 89,25 91,21 115,72 30,44 50,9c 123,2a 63,7bc 87,8ab 23,4

24,2 b 94,0 a 24,41

Mosca-dos-estbulos (+) mosca domstica (%) Alho100 Alho200 Amitraz Controle CV (%) 78,6 161,5 68,5 116,6 16,80 42,4 83,1 43,1 59,5 60,7 38,2 91,0 55,0 118,6 17,2 54,1 85,3 40,8 67,8 12,9 27,6 87,8 129,8 57,5 20,2 121,0 165,2 52,6 118,7 13,8

Mdias com letras distintas, na coluna, indicam diferena significativa (P<0,05) pelo teste de Duncan; CV = Coeficiente de variao.

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Para os tratamentos constitudos por diferentes nveis de alho, no houve diferena significativa (P> 0,05) entre eles nos dias de avaliao entre as mdias (Tabela 1). A anlise estatstica realizada revela o efeito (P<0,05) intermedirio do fitoterpico administrado aos animais, situando os percentuais de contagem de teleginas dos animais que receberam alho, entre os tratamentos constitudos pelo produto qumico e o controle negativo. A percentagem de eficcia confirma este resultado, j que os tratamentos com alho foram mais eficazes que o grupo controle, e menos eficazes que o amitraz. Estudos conduzidos com alho no controle do carrapato, alm de escassos, demonstram resultados conflitantes. BIANCHIN et al. (1999), avaliando o uso de alho em p a 2% no sal mineral para bovinos mestios (8mg kg-1 de peso vivo dia-1), no observaram efeito do produto no controle de carrapatos. J no trabalho conduzido por ALVARENGA et al. (2004), com resduo de beneficiamento de alho (bulbos imprprios para o consumo in natura) em bovinos leiteiros mestios, usando nveis de 0, 3, 6, e 9g animal -1dia-1, comparado com um produto comercial (doramectin), aplicado mensalmente, houve reduo da carga de carrapatos, com similaridade de controle at o 56o dia para os nveis com 3 e 6g e alm do 70o dia para o nvel de 9g em relao ao ectoparasiticida comercial. ALVARENGA et al. (2004), ressaltam a falta de estudos sobre o efeito dos componentes do alho em ectoparasitas. Em pesquisa efetuada com extrato de alho envelhecido, verificou-se que houve um forte aumento na atuao de clulas e componentes imunolgicos (interleucina 2, interleucina 12 e fator de necrose tumoral alfa) de ratos (KYO et al., 2001). Esses efeitos poderiam melhorar a ao do sistema imunolgico dos bovinos. A ao do sistema imune pode interferir na fixao das larvas de carrapato, dificultando a adeso e impedindo o desenvolvimento delas na pele (ANDREOTTI, 2004). Os resultados obtidos na presente pesquisa, referentes eficcia dos produtos (Tabela 2) confirmam a ao do alho sobre carrapatos, embora no se encaixem em recomendaes que consideram um produto efetivo no controle desse parasita, superior a 90%, havendo assim, necessidade da realizao de novos estudos na tentativa de encontrar a dose e dosagem de alho que aps ser administrado aos bovinos possibilite controlar o parasita e no cause efeitos indesejveis nos bovinos, j que em ces aps administrao de alho cru em p ocorreram eroses nas mucosas estomacais (HOSHINO et al., 2001).

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Tabela 2 - Percentual de eficcia dos tratamentos constitudos por alho picado e misturado ao concentrado a 100g (Alho100) e 200g vaca-1 dia-1 (Alho200) e por amitraz a 0,025% (Amitraz). Santa Maria, RS, 2007. Grupo 1 2 3 4 Dias 5 6 7 14 Mdias

Eficcia em Porcentagem - Carrapatos (%) A100 A200 Amitraz


2,83 13,21 90,17 12,10 13,02 93,86 22,24 18,18 99,06 29,37 -7,72 100,00 53,77 18,59 100,00 40,84 39,44 99,22 17,82 -20,45 100,00 39,76 24,22 94,13 27,34 12,31 97,05

Com relao ao controle de moscas, a eficcia foi negativa para todos os produtos testados. Observa-se, que para a mosca-dos-chifres, os valores mdios de infestao foram prximos ao valor mdio de pr-tratamento, de 25 moscas vaca-1. Alm da ineficcia dos produtos, verificou-se que houve grande variabilidade dos dados. Este resultado era esperado, considerando-se que o nvel de infestao da mosca-dos-chifres influenciado por fatores como colorao da pelagem e susceptibilidade individual. A combinao destes e de outros fatores faz com que cada animal apresente maior ou menor infestao por esses dpteros (BIANCHIN & ALVES, 2002). Tambm BIANCHIN et al. (1999), avaliando o uso do alho em p no sal mineralizado no verificaram efeito no controle da mosca-dos-chifres. MARTINS et al. (2002) alertaram para o problema da expanso da resistncia da H. irritans aos produtos qumicos e relataram que a eficcia da doramectina injetvel, em estudo feito em Eldorado do Sul, RS, foi inferior a 50 % no primeiro dia aps o tratamento, e nos dias 4, 7, 10, 14, 21, 28 e 35 ps-tratamento variou de 50,7 a 84,4 %, enquanto na Argentina (Rafaela, Santa F) a eficcia foi de 97,3 % no primeiro dia e de 63,3 a 95,9 nos outros dias observados. Para a mosca-dos-estbulos e para a mosca domstica, o grupo de animais que recebeu o tratamento com 100g de alho vaca-1dia-1 apresentou a menor porcentagem de moscas, sendo semelhante (P>0,05%) ao grupo de animais que recebeu amitraz. Contudo, o grupo de animais que recebeu 200g de alho vaca-1dia-1, foi semelhante ao grupo de animais do controle negativo (CN). Portanto, devido a esta disparidade dos resultados dos tratamentos com alho, acredita-se que as diferenas encontradas (P<0,05%) nos valores mdios para mosca-dos-

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estbulos e para a mosca domstica so atribudas, possivelmente, s variaes individuais dos animais. Quanto anlise sensorial do leite, no foram detectadas diferenas nas caractersticas avaliadas de cor e sabor (Tabela 3). Para o queijo, os atributos avaliados apresentaram diferenas (P<0,05) entre as variveis, provavelmente atribudas variabilidade entre animais e ao consumo de silagem, que em algum grau interfere nas caractersticas organolpticas do leite. Tabela 3 - Comparao de mdias das variveis zootcnicas, anlise sensorial do leite cru e do queijo tipo Minas-Frescal aps a aplicao dos produtos nos diferentes grupos constitudos por alho picado e misturado ao concentrado a 100g (A100) e 200g animal-1 dia-1 (A200) por trs dias, amitraz a 0,025% (Amitraz) e no grupo controle negativo. SantaMaria, RS, 2007. Grupos A100 A200 Amitraz Controle CV (%) Grupos A100 A200 Am CN CV (%) Grupos A100 A200 Am CN CV (%) Aparncia 7,37 bc 7,93a 7,72ab 7, 17c 11,22 leite (Kg vaca-1 dia-1 ) 15,20 14,55 11,90 17,8 35,5 Cor 4,45 4,62 4,53 4,53 8,09 Anlise sensorial do queijo1 Aroma 5,59c 7,53b 8,35a 5,90c 20,21 Cor 8,32a 8,28a 8,56a 7,68b 13,14 Sabor 4,82d 7,03b 7,84a 6,21c 21,63 Sabor residual 4,83a 4,45ab 3,20c 3,95b 32,31 Textura 6,09b 7,72a 7,51a 5,90b 22,55 Anlise das variveis zootcnicas Peso Idade (Kg vaca-1 ) (anos) 498,50ab 6,00 548,75ab 5,00 b 451,75 4,25 592,25a 7,50 11,79 36,51 Anlise sensorial do leite cru1 Estgio de lactao (meses) 5,50 7,75 6,25 6,50 41,54 Odor 4,58b 4,93ab 4,83ab 5,18a 16,48

Mdias com letras distintas, na coluna, indicam diferena significativa (P<0,05) pelo teste de Duncan. 1 Dados mdios referentes s analises dos observadores efetuadas no 1, 2 e 3 dias aps a aplicao dos tratamentos. CV= coeficiente de variao.

O coeficiente de variao da varivel sabor residual, maior que o coeficiente das demais variveis, deve-se, provavelmente, ao carter relativo de sua avaliao (DUTCOSKY, 1996). Ressalta-se que, tanto no leite, quanto no queijo, no foram detectadas caractersticas

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de odor e sabor assemelhados aos do alho, em contraposio grande quantidade ingerida pelos animais em pouco tempo. Acredita-se que estes resultados so devidos ao manejo alimentar utilizado, no qual o alho foi fornecido aps a ordenha. Considerando-se o intervalo mnimo entre ordenhas de 10h, houve a metabolizao dos leos volteis, caractersticos ao sabor e odor do alho. Este odor, segundo GLAZIER, (1960) poderia ser sentido no ar expirado ou no leite entre uma e duas horas aps o consumo de alho das vacas.

2.4 Concluses

Os tratamentos constitudos por diferentes nveis de alho apresentam baixa porcentagem de eficcia no controle do carrapato. O amitraz foi efetivo no controle do carrapato. Tanto os fitoterpicos quanto o produto qumico no apresentaram efeito no controle da mosca-dos-chifres, da mosca dos estbulos e da mosca domstica. Os produtos utilizados no influenciaram nas propriedades organolpticas do leite e do queijo tipo Minas- Frescal.

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2.5 Referncias Bibliogrficas

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