CONSTRUCCIN DEL SISTEMA

Tubos de ensayo Estndar Suero o plasma Ureasa

B ----------I gota

S 10 uL -----I gota

D -----10 uL I gota

Mezclar por agitacin suave e incubar a 37C por 5 Reactivo 1 Reactivo 2 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL

Mezclar por agitacin suave e incubar a 37C por 5 Agua destilada 5 mL 5 mL 5 mL

Reactivos de trabajo

sistema preparado blanco,

Llevar a bao mara x 5

estndar, problema.

Agregar reactivos y luego leer en fotocolormetro

Absorbancias: Estndar Problema 0,180 0,068

Factor:

Concentracin de rea:

( )

( )

3,33

( )

Mtodo segn Trinder:

Los organismos vivientes excretan el exceso de nitrgeno

que resulta del

metabolismo de aminocidos en una de tres formas. Muchos organismos acuticos simplemente excretan amonio.1 La urea, se sintetiza en el hgado por las enzimas del ciclo de la urea, que es secretada al torrente sanguneo y filtrada en los riones para excretarse en la orina.

La urea, se sintetiza en el hgado por las enzimas del ciclo de la urea, que es secretada al torrente sanguneo y filtrada en los riones para excretarse en la orina. En el ciclo intervienen 5 reacciones, citoplasma.2 Carbamoil fosfato sintasa (CPS) Ornitina transcarbamilasa Arginosuccinato sintasa Arginosuccinasa Arginasa . dos son mitocondriales y tres a nivel del

Es un anlisis que se realiza por separado o en una peticin general de bioqumico en la sangre. Mide la cantidad (concentracin) de urea o nitrgeno ureico presente en la sangre. La urea es el resultado final del metabolismo de las protenas. Se forma en el hgado a partir de la destruccin de las protenas. Durante la digestin las protenas son separadas en aminocidos, estos contiene nitrgeno que se libera como in amonio, y el resto de la molcula se utiliza para generar energa en las clulas y tejidos. El amonio se une a pequeas molculas para producir urea, la cual aparece en la sangre y es eliminada por la orina. Si el rin no funciona bien la urea se acumula en la sangre y se eleva su concentracin. 2 En general es un parmetro que indica la funcin renal, aunque puede estar alterado en enfermedades del hgado o en la deshidratacin. Para realizar este anlisis no se precisa estar en ayunas. Los valores normales en los adultos son entre 0,20g/l y 0,45g/l. En los nios pequeos se aceptan valores de 5 a 18 mg/dl.2 Los valores ms altos de 100 mg/dl se deben a un fallo renal importante. Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en:3 Dietas con exceso de protenas Enfermedades renales Fallo cardiaco Hemorragias gastrointestinales Hipovolemia (quemaduras, deshidratacin) Inanicin Obstrucciones renales (piedras, tumores)

Puede aparecer la urea disminuida en: Dieta pobre en protenas Fallo heptico Embarazo Exceso de hidratacin Malnutricin

La urea difunde en el hgado y se transporta en la sangre a los riones, donde se filtra y se excreta en la orina. Parte de la urea difunde de la sangre al intestino, donde la ureasa bacteriana la hidroliza a CO2 y NH3. Este amonio se excreta de forma parcial en las heces y otra parte se reabsorbe a la sangre. En pacientes con insuficiencia renal, los niveles plasmticos de urea se elevan y esto favorece una mayor tasa de transferencia de urea de la sangre al intestino. La accin intestinal de la ureasa en esta urea llega a ser una fuente relevante de amonio, que contribuye a la hiperamonemia habitual en este tipo de pacientes. 4 La glutamina sintasa convierte al NH3 en glutamina no toxica. La glutaminasa libera NH3 para su uso en la sntesis de urea. NH3, CO2 y el nitrgeno amido del aspartato proporcionan los tomos de la urea. La sntesis de urea heptica tiene lugar en parte en la matriz mitocondrial y en parte en el citosol.3 El amonio obtenido por la desaminacin de los aminocidos a travs de la deshidrogenasa glutmica, es el sustrato de la carbamilfosfato sintetasa, enzima que junto con el CO2 y el ATP, cataliza la formacin de carbamilfosfato, que es el alimentador por excelencia del ciclo de la urea. La reaccin se lleva a cabo en varias etapas y necesita de la N-Acetil glutamato como modulador alostrico positivo.5 La formacin de arginina es un proceso ms complejo que requiere la presencia de aspartato, ATP y Mg+2. El primer paso es la formacin de argino-succinato por la condensacin (en presencia de ATP y Mg+2) de citrulina y aspartato. El argininosuccinato se fragmenta en arginina (lista para ser atacada por arginasa) y fumarato, que entra al ciclo de Krebs y permite la regeneracin de aprtate. Finalmente, la arginasa hidroliza a la arginina en urea y ornitina, la cual queda disponible para penetrar a la mitocondria e iniciar el ciclo aceptando otro carbamilfosfato.3

La sntesis de citrulina requiere una activacin previa de carbono y de nitrgeno como carbamoil fosfato (CP). El paso de activacin requiere 2 equivalentes de ATP y de la enzima carbamoil fosfato sintetasa-I (CPS-I) de la matriz mitocondrial. Hay dos CP sintetasas: una enzima mitocondrial, CPS-I, que forma el CP destinado para la inclusin en el ciclo de la urea, y una sintetasa citoslica CP (CPS-II), que est envuelta en la biosntesis del nucletido de pirimidina. La CPS-I es regulada positivamente por el efector alostrico N-acetil-glutamato, mientras que la enzima citoslica es independiente del acetilglutamato.5 Dada la toxicidad y la necesidad de manejar concentraciones cambiantes de NH4+, el ciclo de la urea muestra una gran capacidad de ajuste pudiendo, de acuerdo con la dieta, formarse y eliminarse, cada 24 horas en condiciones normales, de 5 a 50 gramos de urea.2 El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos de urea al da algo ms en personas que comen dieta rica en protenas, menos en personas con dieta pobre en protenas.1 Toda esta urea debe eliminarse por orina; de lo contrario se acumular en lquidos corporales. Su concentracin normal promedio en el plasma es de 0.26 mg/dl, pero se han observado en estados anormales raros valores de hasta 8 mg/dl; y pacientes con insuficiencia renal muchas veces tienen valores tan altos como 2 mg/dl.2 Los dos factores principales que establecen el ritmo de excrecin de urea son: 1) la concentracin de urea en el plasma, y 2) la intensidad de filtracin glomerular. Estos factores aumentan la concentracin de urea principalmente porque la carga de urea que penetra en tbulos proximales es igual al producto de la concentracin plasmtica de urea por la intensidad de filtracin glomerular.5

En la presente prctica se pretende determinar la concentracin de rea en sangre, para lo cual se extrajo una muestra de sangre de un individuo del sexo masculino (vena humoral) y se llev a centrifugar dicha muestra. Luego se prepar un sistema de tres tubos, al primero, que fue el blanco solo se le agrego 10 uL de reactivo de trabajo, al segundo que constitua el estndar se le administro la solucin patrn y el reactivo de trabajo, 10 uL respectivamente. Por ultimo al tercer tubo solo se le agrego solamente 10 uL de muestra (suero sanguneo) y 0,5 mL de reactivo 1 y 2 a cada tubo. Este sistema fue encubado en bao mara a 37C por 5 min y procedimos a leer sus respectivas absorbancias en el espectrofotmetro para luego encontrar el factor de calibracin y posteriormente la concentracin de rea en sangre.

1. Se determin urea en sangre. 2. El resultado de urea fue de 0,23 g/L, lo cual estn dentro del rango antes mencionado.

1. MATHEWSC K. (2002). Bioqumica (3ed). Ed PEARSON EDUCACIN. Espaa. pp: 138, 142 144. 2. CHAMPE P. (2007). Bioqumica (3 ed). Ed Mc. Graw Hill. Mxico. pp: 200, 501 502. 3. PACHECO D. (2004). Bioqumica Mdica (2 ed). Ed LIMUSA. Mxico. pp: 167 169, 172, 174. 4. CAMPBELL M. (2004). Bioqumica (4 ed). Ed THOMSON. Mxico. pp: 232

5. MURRAY R. (2009). HARPER Bioqumica Ilustrada (28 ed). Ed Mc. Graw Hill. Espaa. pp: 283 285