Hemostusiu Veterinriu Reginu kiomi Tukuhiru

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hEH08TA8|A VETER|NAR|A

Profa Regina Kiomi Takahira FMVZ - Unesp - Botucatu

O sistema hemosttico consiste de mecanismos que produzem uma resposta
efetiva injria vascular ao mesmo tempo que garante a fluidez do sangue nos vasos e
a perfuso tecidual. Eventos fisiolgicos e bioqumicos envolvendo a dinmica do fluxo
sangneo, componentes do endotlio vascular, fatores de coagulao, plaquetas e os
mecanismos fibrinolticos interagem para minimizar a perda de sangue e promover a
subseqente reparao tecidual. Este enfoque importante pois a hemostasia inclui
no apenas o controle da hemorragia, com a qual mais comumente relacionada, mas
tambm a dissoluo do cogulo (fibrinlise).
Pode-se dividir didaticamente o mecanismo hemosttico em trs fases:
hemostasia primria, hemostasia secundria e fibrinlise, embora seja importante
ressaltar a interrelao existente entre todos os componentes do sistema. A
hemostasia primria o resultado da interao entre as paredes do vaso lesado e as
plaquetas, culminando na formao do plug hemosttico primrio. A vasoconstrio por
meio de arco-reflexo acontece imediatamente aps a leso do vaso, mantendo o
controle da hemorragia nos momentos iniciais (primeiros segundos). Com a exposio
do tecido subendotelial, ocorre a ligao entre as plaquetas e o colgeno tecidual
(agregao plaquetria) intermediada pelo Fator de von Willebrand (FvW). A ligao do
FvW em receptores na membrana da plaqueta provoca alteraes morfolgicas e a
conseqente liberao de substncias vasoativas e agregantes (adrenalina,
noradrenalina, ADP, serotonina, tromboxane A2, entre outras). Estas substncias so
responsveis pela manuteno da vasoconstrio nos prximos minutos e pela
amplificao da adeso e agregao plaquetria. A ligao das plaquetas entre si
(agregao plaquetria) mediada pelo Fibrinognio presente no plasma. A
compactao do agregado (plug hemosttico primrio) se d pela contrao dos
filamentos de actinomiosina existentes no citoplasma da plaqueta.
A eficincia deste processo depende do calibre do vaso lesado, sendo mais
eficiente nos casos capilares. A limitao do processo de adeso plaquetria ocorre
pela liberao de PGI2 (prostaciclina), um potente vasodilatador e antagonista da
agregao plaquetria derivado do cido araquidnico, pelo endotlio ntegro,
restringindo os eventos acima citados ao local da injria.
Produo de plaquetas (Trombopoiese). realizada pelos megacaricitos na
medula ssea, por meio da fragmentao de seu citoplasma.
Eventualmente algumas destas clulas podem entrar na circulao e vir a parar
no pulmo ou no bao, onde h grande rede de capilares, e l continuar a sua
produo at o final de sua vida til. O achado histopatolgico dos megacaricitos
levou alguns pesquisadores a pensar que a produo de plaquetas tambm ocorresse
nesses rgos, entretanto isto ocorre apenas acidentalmente. A vida mdia das
plaquetas varia em torno de 5 a 7 para a maioria das espcies.
Uma disfuno na hemostasia primria leva formao de pequenas leses
hemorrgicas (petquias e equimoses) imediatamente aps o trauma, devido
ineficincia dos componentes da hemostasia primria conterem o extravasamento de
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sangue dos vasos, principalmente nos primeiros minutos. Estas leses so geralmente
mltiplas e difusas.
Em resumo, a leso vascular seguida da vasoconstrio por arco-reflexo,
posteriormente mediada por substncias vasoativas liberadas pelo vaso, leva
diminuio da presso hidrosttica e do fluxo sangneo local. Ocorre a adeso
plaquetria superficie da parede do vaso e alteraes morfolgicas levam liberao
de outros mediadores qumicos pelas plaquetas, estimulando a adeso e agregao
plaquetrias e a formao do tampo hemosttico primrio.
A hemostasia secundria envolve a formao de complexos macromoleculares de
fibrina pela coagulao de protenas na superfcie do plug plaquetrio primrio. O
evento central da coagulao sangnea a converso do fibrinognio em fibrina,
mediada pela trombina. Esta transformao de uma substncia solvel em uma rede
polimrica insolvel ocorre com preciso no local da injria.
Os fatores ou protenas da coagulao participam em reaes altamente
especficas e so designados por nmeros romanos de acordo com a sua descoberta
pelo mundo cientfico, no correspondendo ordem de atuao na seqencia de
reaes da formao do cogulo de fibrina.

FATORES DE COAGULAO:
FATOR NOME LOCAL DE SNTESE OBSERVAES
Fator I Fibrinognio Hepatcito
Fator II Protrombina Hepatcito Vit. K dependente
Fator III Tromboplastina Tecidual Vrios tipos celulares
Fator IV ons Clcio
Fator V Proacelerina Hepatcito/
Megacaricito

Fator VII Proconvertina Hepatcito Vit. K dependente
Fator VIII Fator anti-hemoflico
(Fator VIII:C)
Hepatcito Fator VIII:C
vWF* Fator de von Willebrand
* No considerado Fator
de Coagulao
Clula Endotelial/
Megacaricito
Carreia o FVIII:C;
atua na hemostasia
primria
Fator IX Fator de Christmas Hepatcito Vit. K dependente
Fator X Fator de Stuart-Prower Hepatcito Vit. K dependente
Fator XI Antecedente da
Tromboplastina plasmtica
Hepatcito
Fator XII Fator de Hageman Hepatcito
Fator XIII Fator Estabilizador da
Fibrina
Hepatcito

A quantidade de clcio necessria para o processo de coagulao muito
pequena, e uma hipocalcemia intensa, a ponto de interferir com este processo levaria o
animal morte por outros motivos, pois o clcio desempenha outras funes vitais em
que so requeridas maiores concentraes (contrao muscular, transmisso do
impulso nervoso, etc). O conhecimento da atuao do clcio na coagulao possibilita
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a obteno de sangue e plasma (com anticoagulantes quelantes de clcio) para a
realizao de diversas provas laboratoriais.
O Fator VI no figura nesta lista porque posteriormente sua descoberta
observou-se que o mesmo correspondia ao fator V ativado.
O FvW uma molcula grande e de alto peso molecular e serve de carreador
para as molculas do FVIII:C. Embora sejam duas protenas distintas e de funes
bastante distantes, o Fator VIII coagulante (FVIII:C, Fator anti-hemoflico) e o Fator de
von Willebrand (FvW, Fator VIII:RAG), so por vezes considerados como um nico
complexo denominado apenas como Fator VIII.
As protenas da coagulao podem ser divididas baseadas em sua capacidade
funcional como substratos, enzimas ou cofatores. Os fatores V, VIII e XIII so cofatores
pois aceleram o mecanismo de coagulao; o fibrinognio o substrato para todas as
outras protenas, pois o estgio final para a formao da fibrina, enquanto todas as
outras so enzimas que existem em sua forma inativa at a ativao por meio de
clivagens ou alteraes conformacionais.
Com base no mecanismo de ativao inicial da coagulao foram identificadas
duas vias: a via intrnseca e a via extrnseca. Qualquer que seja o mecanismo de
ativao, ambas levam a uma via comum e a formao da fibrina.
Embora atualmente se considere que haja apenas uma via na cascata de
coagulao, pois a via extrnseca apresenta maior relevncia in vitro e uma importante
interao com a via intrnseca, o conceito das duas vias ainda utilizada para fins
diagnsticos na interpretao dos exames laboratoriais (TP, TTPA e TT).
A via intrnseca ativada pelo contato do Fator XII com uma superfcie
negativamente carregada, geralmente o colgeno. Substncias como a calicrena,
precalicrena, e cininognio de alto peso molecular (HMWK) propagam a coagulao.
O Fator XIII (fator estabilizador da fibrina) forma ligaes covalentes entre os
monmeros da fibrina, tornando-a insolvel e estabilizada.
Ao final deste processo obtm-se uma malha de polmeros de fibrina sobre o
alicerce formado pelo endotlio lesado e pelo plug plaquetrio.
A deficincia dos fatores de coagulao podem levar formao de leses
hemorrgicas maiores (equimoses e hematomas) e hemorragias em cavidades, pois os
mecanismos de hemostasia primria no so suficientes para reparar as injrias de
vasos de maior calibre, ou as leses mais extensas. O sangramento exacerbado ocorre
geralmente aps uma ou duas horas da leso inicial, quando cessam os efeitos
temporrios exercidos pela vasoconstrio e pela adeso e agregao plaquetria.
Sem a consolidao do plug plaquetrio pela fibrina, o tamponamento dos vasos
ineficiente.


HEMOSTASIA TERCIRIA - FIBRINLISE

Concomitantemente formao do tampo hemosttico, iniciam-se os
mecanismos fibrinolticos, que promovem a degradao enzimtica do fibrinognio e da
fibrina e outros fatores de coagulao ativados, permitindo o reparo definitivo da injria
vascular e o controle sobre os eventos trombticos. O equilbrio entre a coagulao e a
fibrinlise so importantes, uma vez que deles dependem a manuteno do sangue
dentro dos vasos e a sua fluidez por dentro dos mesmos.
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Alm doa mecanismos fibrinolticos, os anticoagulantes naturais atuam na
modulao da resposta da cosgulao. O anticoagulante natural mais importante a
antitrombina III, atualmente denominada apenas antitrombina (AT). Ela um
antagonista da trombina e a heparina atua como seu cofator, potencializando em cerca
de 1.000 vezes a sua capacidade de degradao da trombina.
A plasmina o principal mecanismo de fibrinlise, e formada a partir do
plasminognio por meio de substncias liberadas pelo tecido lesado. A plasmina age
sobre a fibrina, gerando os fragmentos denominados Produtos de degradao da
fibrina (PDFs)
Outras substncias importantes na fibrinlise so as protenas C e S, que
promovem a protelise dos fatores V e VII ativados. So vitamina K dependentes.

III - PATOGNESE DOS DEFEITOS DE HEMOSTASIA

A origem dos defeitos de hemostasia pode estar localizada em qualquer uma das
fases, levando tanto a fenmenos hemorrgicos quanto trombticos.
Possveis alteraes Sinais
Hemostasia primria Defeitos vasculares, alteraes
quantitativas ou qualitativas das
plaquetas. Trombocitopenias por
problemas de produo,
consumo excessivo, perda ou
destruio e seqestro.
Petquias e equimoses
Sangramento imediato
e mltiplo.
Hemostasia
secundria
(coagulao)
Deficincia adquirida ou
hereditria na sntese dos
fatores de coagulao,
Sntese defeituosa dos fatores,
Consumo excessivo
Equimoses,
hematomas,
hemartroses
Sangramento tardio e
localizado.
Hemostasia terciria
(fibrinlise)
Estmulos excessivos, liberao
de substncias procoagulantes.
Ativao da coagulao, leso
tecidual e/ou vascular. Consumo
ou perda de anticoagulantes e
fibrinolticos.
Trombose, e outros
estados de
hipercoagulabilidade.
Tromboembolismo
pulmonar, falncia de
rgos.

Defeitos vasculares
Os vasos so responsveis pelo controle imediato da hemorragia, e as alteraes
estruturais pr-existentes ou decorrentes de processos imunomediados (deposio de
imunocomplexos) e/ou inflamatrios, levam a vasculites e a fragilidade capilar,
diminuindo a capacidade de resposta dos mesmos.


Anormalidades quantitativas das plaquetas (trombocitopenias)
So a principal causa de distrbios hemostticos. As principais causas de
trombocitopenia so: deficincia na produo (megacariocitopoiese), vida mdia
reduzida por destruio (processos imunomediados) ou consumo (coagulao
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intravascular disseminada), ou seqestro em bao. O bao armazenar cerca de 30%
das plaquetas circulantes, e em condies de esplenomegalia, o seqestro pode
chegar a 90% das plaquetas, podendo ocorrer uma trombocitopenia transitria.

Anormalidades qualitativas das plaquetas
As alteraes qualitativas, menos freqentes que as quantitativas, so
normalmente decorrentes de alteraes morfolgicas e funcionais adquiridas por
processos imunomediados (drogas, Ehrlichia sp, transfuses incompatveis, etc).
Dentre as alteraes funcionais congnitas, citam-se a deficincia de estoque ou
produo de substncias plaquetrias (Ca
++
, fator de von Willebrand, ADP, etc),
conhecida como sndrome da plaqueta cinzenta devido falta de granulao tpica,
correspondentes aos grnulos de estocagem destas substncias na microscopia tica.
As deficincias de receptores de membrana (glicoprotenas) so rarssimas. A
deficincia do receptor GP Ib/IX, onde ocorre a ligao ao FvW denominada
sndrome de Bernard-Soulier, e a deficincia do GP IIb/IIIa, onde liga-se o fibrinognio
conhecida como trombastenia de Glanzmann.
A administrao de anti-inflamatrios no esterides inibidores da cicloxigenase
inibem a adeso e a agregao plaquetria por bloquearem a sntese de tromboxane
A
2
(TXA
2
) plaquetria a partir do cido araquidnico. O TXA
2
um potente agente
vasoconstrictor e estimulante da adeso plaquetria. A sntese de prostaciclina (PGI
2
);
antagonista do TXA
2
e potente vasodilatador; pelo endotlio ntegro no muito
prejudicada devido reversibilidade deste bloqueio, uma vez que a clula endotelial
nucleada e capaz de produzir mais cicloxigenase. Estes medicamentos so utilizados
em doses muito baixas como terapia antitrombtica.

Defeitos nos fatores de coagulao
As alteraes decorrentes de falha nos mecanismos de hemostasia secundria
podem advir de falha absoluta ou parcial na sntese dos fatores de coagulao. Estas
podem ser congnitas como na Hemofilia A ou hemofilia clssica (deficincia de fator
VIII) e Hemofilia B (def. de fator IX) ou adquiridas. A deficincia do FvW leva doena
de von Willebrand, entretanto os sinais sero de primeira fase, pois este o nico fator
de coagulao que atua na hemostasia primria (adeso plaquetria).
A insuficincia heptica, a intoxicao por dicumarnicos (antagonistas da vitamina
K), o consumo excessivo dos fatores de coagulao (CID) e a presena de inibidores
na circulao (heparina, etc) so as principais causas de deficincia adquirida dos
fatores de coagulao.
Alguns fatores de coagulao (II, VII, IX e X) chamados vitamina K-dependentes,
so sintetizados em uma forma afuncional (acarboxiladas), e sofrem uma reao de
carboxilao em que a vitamina K participa como cofator, produzindo centros de ligao
para o clcio, necessrios para a sua funo normal. Durante esta reao a vitamina K
convertida num metablito inativo (Vitamina K - epxido). A enzima epxido-
redutase responsvel pela reciclagem deste metablito, convertendo-o para a forma
ativa, razo pela qual a necessidade diria de ingesto de vitamina K pequena. A
ingesto de anticoagulantes rodenticidas leva inibio desta enzima, e rpida
depleco dos estoques de vitamina K do organismo.

Coagulopatias de consumo
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A Coagulao Intravascular Disseminada (CID) um estado patolgico
secundrio encontrado em uma grande variedade de doenas e sob vrias condies
patolgicas. A CID um dos achados mais alarmantes numa doena, pois
normalmente indica um mau prognstico. O mecanismo bsico desta sndrome a
ativao intravascular da coagulao sangnea, concomitantemente com a ativao
do sistema fibrinoltico como resultado da exposio do sangue a superfcies estranhas
ou da entrada de material tromboplstico na circulao.
A formao subseqente de trombina leva a amplificao do processo com a
estimulao da agregao plaquetria e formao de fibrina, resultando em trombose
de capilares, arterolas e vnulas e infarto em diversos rgos.
A ativao do sistema fibrinoltico resulta na dissoluo do fibrinognio e fibrina e
na liberao dos produtos de degradao da fibrina (PDFs) no sangue. Por esta razo
a CID tambm pode estar associada a tendncias hemorrgicas que podem ser
severas.
Para definir esta condio paradoxal, em que um excesso de coagulao d
origem a uma ditese hemorrgica, o termo coagulopatia de consumo tambm usado
como sinnimo para a CID, que interfere nos trs nveis do processo hemosttico.

Acidentes ofdicos
Os venenos ofdicos agem sobre o mecanismo hemosttico por meio de suas
aes coagulante, proteoltica e vasculotxica, interferindo em todas as fases da
hemostasia. O veneno das serpentes dos gneros Bothrops possui ao coagulante
"tipo trombina", transformando o fibrinognio em fibrina. A capacidade da maioria dos
venenos botrpicos de ativar o fator X e a protrombina da cascata de coagulao,
resultam num consumo de fibrinognio com incoagulabilidade sangnea. A ao
vasculotxica sistmica do veneno das serpentes do gnero Bothrops causada por
fatores hemorrgicos denominados hemorraginas, que agem destruindo inicialmente a
membrana basal do endotlio lesado, causando posteriormente a ruptura de vasos
capilares. Foi isolada por meio de fracionamento cromatogrfico do veneno de B.
jararaca, uma frao denominada botrocetin que possui atividade agregante plaquetria
in vitro, mostrando que h tambm interferncia com a hemostasia primria.
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IV - AVALIAO CLNICO - LABORATORIAL DOS DISTRBIOS HEMOSTTICOS


Antes de realizar qualquer exame laboratrial na tentativa de estabelecer um
diagnstico preciso da origem do sangramento, faz-se necessria a diferenciao entre
um distrbio hemosttico propriamente dito de uma hemorragia por causas diversas,
como um corpo estranho provocando epistaxe, diarria sanguinolenta por parvovirose,
sangramento aps corte profundo,etc.
Deve-se sempre avaliar a quantidade e durao da hemorragia em relao ao
grau de injria. Desta maneira, suspeita-se de um distrbio nos mecanismos
hemostticos quando h, por exemplo, sangramento exacerbado e/ou prolongado aps
puno venosa, extrao dentria, caudectomia e outras formas de cirurgia.


HISTRIA

Alguns dados so importantes no que se refere ao histrico do paciente.
O tempo de sangramento aps o trauma pode denunciar a localizao do
distrbio hemosttico. Assim, um sangramento exacerbado que se d logo aps o
trauma, est mais comumente associado a uma alterao de hemostasia primria, e
um sangramento que ocorre aps um perodo inicial de estancamento est mais
associado a uma alterao da hemostasia secundria.
A idade do paciente no incio dos sinais e a existncia de sintomas semelhantes
em familiares pode levar a pensar em alguma doena hereditria, como as hemofilias
ou trombastenias. O sexo dos animais acometidos tambm pode indicar se uma
doena ligada ao sexo ou no. O processo de aprimoramento racial entre os animais
propicia o acasalamento entre familiares, aumentando a possibilidade de anomalias
hereditrias em ces de raa.
Verificar se h histria de exposio a drogas ou agentes txicos ao fgado,
medula ssea ou plaquetas, possibilidade de intoxicao por rodenticidas, uso de anti-
inflamatrios inibidores do cido araquidnico, ou de terapia com anticoagulantes
(heparina). Informar-se a respeito de transfuses sangneas incompatveis.


EXAME FSICO

Avaliar o animal a procura de sinais como hepatomegalia, anemia, ictercia ou
hipertermia, que podem indicar doenas intercorrentes que levam o animal
sintomatologia de sangramento. Doenas mieloproliferativas; imunomediadas; que
levam insuficincia heptica; uremia ou que so potencialmente desencadeadoras
de uma coagulao intravascular disseminada (CID), como as septicemias, viroses, e
neoplasias, so pontos importantes a serem procurados.
Observar a presena de ectoparasitas. Os carrapatos so responsveis pela
transmisso da Ehrlichia canis, que por causar hipoplasia medular com pancitopenia,
uma das causas mais comuns de diteses hemorrgicas em ces.

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Os tipos de leses hemorrgicas e a sua localizao tambm so importantes no
diagnstico clnico.

LESO LOCALIZAO POSSVEIS CAUSAS
Petquias
(<0,5 cm)
Extremidades e zonas de alta presso
(geralmente mltiplas)
Alteraes vasculares e/ou
plaquetrias (hemostasia
primria)
Equimoses Pele, mucosas gengival, genital, ou
conjuntival
Anormalidade na
hemostasia primria ou
secundria
Hemorragias
intra-cavitrias
ou em tecidos
Abdomen (hemoperitnio)
Trax (hemotrax)
Articulaes (hemartroses)
Msculo, olhos (retina, esclera e ris)
Alteraes dos fatores de
coagulao
Outras formas
de sangramento
Hematria, melena, epistaxis Indicam hemorragia de
membranas mucosa ou
epiteliais


EXAMES LABORATORIAIS

A - SELEO DOS TESTES

A histria e o exame clnico so importantes na seleo dos testes
laboratoriais, realizados com base na suspeita clnica da localizao do defeito da
hemostasia.

B - COLHEITA E ACONDICIONAMENTO DAS AMOSTRAS

A puno venosa deve ser sempre cuidadosa, procurando evitar um garrote
prolongado e/ou sucessivas punes, que levam contaminao da amostra com
substncias teciduais (tromboplastina), estimulando a coagulao e a agregao
plaquetrias.
Anticoagulantes:
- citrato de sdio a 3,2% ou 3,8%
9 partes de sangue para 1 de anticoagulante
para a avaliao dos fatores de coagulao (coagulograma)
- EDTA a 10%
0,1 ml para cada 5 ml de sangue
o anticoagulante de escolha para a contagem de plaquetas
- Heparina
Seu uso no indicado pois inibe a trombina, interferindo com a coagulao
O material deve ser sempre colhido em seringas e recipientes plsticos
(policarbonato) ou tubos siliconizados, pois o contato com o vidro ativa a via intrnseca
da coagulao.
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Utilizar sangue recm colhido. Os fatores de coagulao tm vida mdia curta e
as plaquetas tendem a formar agregados e/ou a aderir superfcie do frasco.
A temperatura do laboratrio interfere nas provas laboratoriais por alterar a
forma das plaquetas e acelerar (calor) ou retardar (frio) o processo de coagulao. Por
esta razo algumas das provas devem ser realizadas em laboratrios climatizados.
Devido grande quantidade de fatores interferentes e aos diferentes valores de
referncia existentes nos diversos laboratrios, indicada a colheita e processamento
concomitante de amostra de um animal controle sadio.


C - TESTES LABORATORIAIS


HEMOSTASIA PRIMRIA

CONTAGEM DE PLAQUETAS:
A contagem realizada em cmara de Neubauer, utilizando como diluente uma
soluo de oxalato de amnio a 1% (lquido de Brecher).
Preencher a pipeta de Thoma para glbulos vermelhos com sangue
homogeneizado at a marca 1
Limpar a extremidade com gase
Completar com o diluente at a marca 101 (diluio 1:100)
Agitar, desprezar as primeiras gotas e preencher ambos os lados da cmara de
Neubauer por capilaridade
Contar as plaquetas de cinco quadrados mdios centrais de ambos os lados,
preferencialmente em microscpio com contraste de fase
Multiplicar o resultado por 2500 (resultado em plaquetas/L)
A trombocitopenia no tem relao direta com o grau de sangramento, e pode
estar relacionada a:
Diminuio da produo (Depresso da M.O. por drogas, viroses ou radiao,
Doenas mieloproliferativas, etc)
Aumento da destruio / consumo / seqestro
A trombocitose ( n
o
de plaquetas) geralmente est associada a anemia
regenerativa, a neoplasias, infeces, processos inflamatrios (trombocitose reativa);
ps-esplenectomia, ou numa condio mais rara de leucemia megacarioctica.
AVALIAO DO ESFREGAO SANGNEO CORADO
A avaliao do esfregao sanguneo corado permite uma avaliao aproximada
(normal, aumentada ou diminuda) da quantidade de plaquetas presente na amostra e
traz informaes a respeito da morfologia das plaquetas, como a presena de macro ou
microplaquetas. A avaliao do esfregao serve tambm para conferir a contagem
obtida nas contagens manuais ou eletrnicas e deve ser feita por um profissional
experiente e em microscpio aferido para garantir a acurcia da estimativa.



EXAME DE MEDULA SSEA
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O mielograma avalia quantitativa e qualitativamente a megacariocitopoese,
diferenciando os processos de consumo ou destruio perifrica de plaquetas dos
defeitos de produo, como por exemplo, nas doenas mieloproliferativas.

TEMPO DE SANGRAMENTO
Avalia a integridade vascular e a funo plaquetria.
Dobrar o lbio superior do co e prender com o auxlio de uma fita de gaze em
rolo. Secar a mucosa do lbio e realizar pequeno corte na pele (padronizar o
comprimento e profundidade do corte cerca de 2mm de profundidade e 2 a 3 de
largura) na altura do dente canino.
Remover o sangue com papel de filtro de 30 em 30 segundos sem tocar a pele
Valores normais - 1 - 5 minutos.
O tempo de sangria encontra-se prolongado em vasculites, aumento da
fragilidade capilar, trombocitopenias, trombocitopatias, na Doena de Von Willebrand,
etc.

AGREGAO PLAQUETRIA
A funo plaquetria pode ser avaliada por meio de provas de agregao, onde
um agonista adicionado a uma suspenso de plaquetas (plasma rico em plaquetas -
PRP), estimulando-as e promovendo sua agregao.
Essa agregao diminui a turbidez do plasma rico em plaquetas, alterando a
transmisso de luz por essa suspenso, que mensurada pelo agregmetro de
plaquetas.
Os agonistas mais importantes so o ADP, o colgeno, a adrenalina e a
ristocetina e avaliam a capacidade de resposta e a reserva de substncias nos
grnulos citoplasmticos das plaquetas.
O sangue citratado centrifugado a baixas rotaes (500rpm 30g) por 10
minutos para a obteno do plasma rico em plaquetas (PRP). Aps a remoo do
sobrenadante, que corresponde ao PRP, o restante novamente centrifugado a altas
rotaes (2.000rpm 360g) por 10 minutos para a obteno do plasma pobre em
plaquetas (PPP).
A concentrao do PRP padronizada para uma contagem de 100.000 a 300.000
plaquetas/L, procedendo-se diluio com PPP quando necessrio. A agregao
plaquetria realizada mediante a adio de 50 L do agonista, previamente
reconstitudo, em 400L de PRP.
A resposta das plaquetas frente ao agonista mensurada por turbidimetria em um
agregmetro de plaquetas e expresso em porcentagem de agregao em relao a um
branco, em que o PPP corresponde a 100% de agregao.

RETRAO DE COGULO
A retrao do cogulo avalia de forma pouco sensvel a funo plaquetria. Deve
ser realizada em animais com uma contagem normal de plaquetas.
Colher 5 mL de sangue total sem anticoagulante colocar em um tubo de vidro
graduado de 10 mL
Espere o sangue coagular totalmente
Coloque em banho-maria a 37C por 1 hora
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Mensure o volume de soro formado aps a retrao do cogulo
Compare o volume de soro como uma porcentagem em relao ao sangue total
(exemplo 1,8mL de soro de 5 mL de sangue = 36%)
Como o volume de soro depende do hematcrito do animal, corrigir o valor, que
deve ser de cerca de 90% do volume de plasma.


HEMOSTASIA SECUNDRIA


TEMPO DE COAGULAO
Prova de triagem para a avaliao dos fatores de coagulao

Mtodo do tubo capilar:
Preencher alguns capilares de microhematcrito com sangue sem
anticoagulante
Quebrar o capilar a cada 30 segundos e verificar a formao de um fio de
fibrina (incio da coagulao)
Contar o tempo a partir do surgimento do sangue no mbolo da seringa
Prolongado na deficincia dos fatores da via intrnseca ou comum.

Mtodo de Lee-White:
um mtodo mais preciso, pois se padroniza a temperatura da reao e o
dimetro do tubo para a realizao do teste.
Colher cerca de 3 ml de sangue em seringa plstica
Cronometrar o tempo assim que o sangue aparecer na seringa
Colocar 1 ml de sangue em 3 tubos de vidro (10 x 75 mm)
Incubar em banho-maria a 37
0
C
Aps 2 minutos girar levemente o tubo n
o
1
Gir-lo a intervalos de 1 minuto
Quando o tubo n
o
1 coagular, realizar o mesmo procedimento com o segundo e
depois com o terceiro tubo
Tempo de coagulao: surgimento do sangue na seringa at a coagulao no
terceiro tubo


TEMPO DE COAGULAO ATIVADO - TCA
um teste que avalia a via intrnseca da cascata da coagulao e um teste de
triagem mais sensvel que o TC, pois a presena de um ativador da coagulao (terra
diatomcea) encurta o tempo de coagulao.
pr-aquecer o tubo de TCA (tubo comercial) em banho-maria a 37C
colher cuidadosamente 2 mL de sangue em seringa plstica
adicionar o sangue ao tubo e disparar o cronmetro
homogeneizar o tubo por inverso cinco vezes
incubar o tubo no banho-maria por um minuto
inverter o tubo a cada 5 segundos para observar a coagulao
parar o cronmetro ao primeiro sinal de coagulao
Hemostusiu Veterinriu Reginu kiomi Tukuhiru

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Valor de referncia de cerca de 60 a 90 segundos. O teste tambm pode ser
realizado por meio de equipamento automatizado especfico para o teste/tubo.


TP - Tempo de Protrombina
Avalia a via extrnseca e a comum, pela adio de um fator tecidual, estimulando
a coagulao pela via extrnseca.
Plasma colhido em citrato de sdio
Adio de tromboplastina tecidual (fator extrnseco) e recalcificao da amostra
Cronometrar at a formao do cogulo de fibrina (ou utilizar o coagulmetro)
O valor normal depende da atividade dos reagentes e do laboratrio empregado,
porm o tempo de coagulao que seria de minutos passa a ser de alguns segundos,
pela adio do fator tecidual.


TTPA - Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada
Avalia a via intrnseca e comum, pela adio de um fator de ativao por contato.
Plasma colhido em citrato de sdio Adio de caolin (ativa fator XII) ou
cefalina (substituto do fator plaquetrio) Recalcificar a amostra e cronometrar at a
formao do cogulo (ou utilizar o coagulmetro)


TT - Tempo de trombina
Avalia basicamente o tempo para formao da fibrina a partir do fibrinognio, que
o passo mais importante da via comum.
Plasma colhido em citrato de sdio Adio de trombina e recalcificao
da amostra Cronometrar at a formao do cogulo de fibrina (ou utilizar o
coagulmetro).
Encontra-se aumentado em hipofibrinogenemias (< 100 mg/dl), na funo
deficiente do fibrinognio (desfibrinogenemia) e na presena de inibidores da induo
de formao do cogulo pela trombina (heparina).
Obs.: na intoxicao por antagonistas da vitamina K, devido a curta vida mdia do
Fator VII, o TP pode apresentar-se inicialmente prolongado enquanto o TTPA est
normal.

Fibrinognio
O fibrinognio pode ser mensurado por duas tcnicas.
Mtodo do refratmetro: (no adequado para os testes de hemostasia)
Preencher dois capilares de microhematcrito com sangue com anticoagulante
EDTA a 10%
Ved-los e centrifug-los a 5000 rpm por cerca de 3-5 minutos
Quebrar o primeiro capilar e ler a protena plasmtica total (PPT) no
refratmetro
Levar o segundo capilar ao banho-naria a 56
o
C por 3 minutos, onde ocorrer a
coagulao do fibrinognio (o plasma fica turvo)
Centrifugar novamente para a precipitao do fibrinognio
Ler a protena plasmtica restante (PPT - fibrinognio)
Hemostusiu Veterinriu Reginu kiomi Tukuhiru

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Calcular a diferena entre a primeira e a segunda leitura (fibrinognio)
Mtodo colorimtrico:
Utilizao de testes colorimtricos comerciais ou pelo TT (tempo de trombina)


FIBRINLISE


PDFs - Produtos de Degradao da Fibrina
A amostra deve ser colhida com antifibrinoltico para evitar a degradao da
fibrina in vitro e formao de mais PDFs. Existem kits comerciais que avaliam semi-
quantitativamente os PDFs por meio de reao de aglutinao em ltex.
Os PDFs encontram-se aumentados em condies de estmulo da fibrinlise ou
na CID.

Dmeros-D
Especfico para as condies de trombose e/ou CID, pois no aumentam em
estados de fibrinogenlise.


LITERATURA RECOMENDADA:

COLMAN R.W. et al - Hemostasis and Thrombosis: Basic Principles and Clinical
Practice. Lippincott Willians & Wilkins, 4ed., 2001.1578p.
FELDMAN, B.F. - Hemostasis - Veterinary Clinics of North America. Small Animal
Practice, Vol. 18, n.1, 1988.
WEISS, D.J., WARDROP, K.J. Schalm, s Veterinary Hematology . 6ed
Philadelphia, Lea & Febiger, 2011. 1.232p.
THRALL, M.A. Veterinary Hematology and Clinical Chemistry. Philadelphia:
Lippincott Willians & Wilkins, 2004. 518p.
STOCKHAM, S.L., SCOTT, M.A. Fundamentos de Patologia Clnica Veterinria.
Ed. Guanabara Koogan, 2.ed., 2011. 744p.
WILLARD, M.D., TVEDTEN, H. & TURNWALD, G.H. Small Animal Clinical
Diagnosis by Laboratory Methods. 4.ed. Philadelphia, W. B. Saunders, 2004.
432p.