INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA DE PERNAMBUCO.

DEPARTAMENTO ACADMICO DE SISTEMAS, PROCESSOS E CONTROLES INDUSTRIAIS. COORDENAO DO CURSO TCNICO EM QUMICA INDUSTRIAL. LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA GERAL E APLICDA.

MANIPULAO ASSPTICA

Adely Maria Pereira de Melo- 100% Jos Charles dos Santos- 100% Lucas de Sousa Araujo- 50% Rodrigo Silva de Oliveira- 100% Thamyres Costa de Souza- 100%

Microbiologia Geral e Aplicada

Prof. Dulce Solange da Silva Lins. Prof. Eduardo Alcio Jos de Oliveira.

Recife, 27 de Maro de 2013.

1. Objetivo
Evidenciar e estudar os procedimentos corretos para uma manipulao assptica adequada de microrganismos em diversos meios de cultura e em variadas condies fsicas levando em conta fatores externos que podem ou no influenciar no procedimento referido.

2. Introduo
Atualmente os processos de manipulaes laboratoriais so discutidos com grande importncia no que diz respeito s intervenes de microrganismos nos resultados de uma ou mais amostras; sendo necessrio o uso de tcnicas especficas para evitar uma proliferao indesejada dos seres microscpicos por contaminao. sabido que a contaminao consequente de fatores como o ar, materiais contaminados, grande exposio da amostra com o ambiente aberto, a ausncia de higiene do profissional, o uso de um procedimento de forma incorreta, falta de aparelhos esterilizantes e outros motivos afins. Tambm se percebe que muitas patologias so causadas por seres microscpicos devido a contaminao, interferindo na qualidade de vida da populao; da a importncia de se haver procedimentos que evitem ou diminuam de forma grandiosa, a interferncia desses seres invisveis a olho nu. Tais procedimentos podem ser as aes de: antissepsia, que consiste na reduo de seres microscpicos por meio de substncias como etanol, na concentrao de 70 %, clorexidina, numa concentrao entre 4 % a 10 %, ou raramente, iodados orgnicos; degermao, que consiste em reduzir de forma relativa os microrganismos; esterilizao, que consiste em eliminar todas as formas de microrganismos, os esporulados; para se chegar assepsia, que significa a manuteno do meio sem introduzir ou retirar algum contaminante da amostra analisada. Utilizando-se do procedimento de assepsia ocorre o ato da manipulao assptica que nada mais do que o conjunto de aes que garantam a qualidade da atividade executada. Nesse experimento inicialmente no ser usado o procedimento assptico em uma amostra e posteriormente ser utilizado esse procedimento, havendo ento uma comparao que comprovar a eficcia do mesmo nos laboratrios microbiolgicos, promovendo e estimulando a

manipulao assptica no s dentro de atividades laboratoriais, mas tambm no cotidiano de todos envolvidos.

3. Materiais e equipamentos utilizados

3.1. Anlise microbiana das mos - lcool a 70% m/m - Contador de colnias manual Phoenix CP608 - Duas placas de Petri 90x15 - Estufa Marconi NA032. -Lamparina -Meio de cultura Agar Nutriente 3.2. Anlise microbiana do cabelo - Estufa Marconi NA032. - Contador de colnias manual Phoenix CP608 - Fio de Cabelo - Lamparina - Uma placa de Petri 90x15 - Tesoura esterilizada 3.3. Anlise microbiana do ambiente por sedimentao natural - Contador de colnias manual Phoenix CP608 - Duas placas de Petri - Estufa Marconi NA032 - Estufa Quimis BOD-Q315M. - Lamparina -Meios de cultura Agar Nutriente e Sabouraud

3.4. Anlise microbiana de vidrarias no estreis - Um Becker - Contador de colnias manual Phoenix CP608 - Estufa Marconi NA032 - Um Erlemeyer - Lamparina - Uma pipeta graduada

- Um pipetador automtico - Duas placas de Petri - Meio de cultura Agar nutriente - Soluo estrio - Soluo de descarte

4. Mtodos
4.1. Anlise microbiana das Mos Inicialmente foi realizada a higienizao e posteriormente a assepsia das mos com lcool a 70% m/m, exceto o voluntrio. Aps realizarmos a assepsia da bancada, comeamos o devido procedimento: O voluntrio atritou os dedos na placa de Petri que possua meio de cultura propicio para proliferao de colnias de microrganismo. Feito isso o voluntario realizou a higienizao e assepsia das mos e o processo foi repetido. Logo aps as placas de Petri foram devidamente tampadas, identificadas e colocadas na estufa por 48 horas a 35C com igual a 0,5C para um possvel desenvolvimento das colnias. 4.2. Anlise microbiana do cabelo

Utilizando uma tesoura esterilizada foi coletada a amostra de um fio de cabelo de um voluntrio, prximo chama a Placa de Petri foi posicionada e o fio de cabelo coletado foi aplicado no meio de cultura. Logo aps a placa de Petri foi devidamente tampada, identificadas e colocadas na estuda por 48 horas a 35C com igual 0,5C para um possvel desenvolvimento das colnias. 4.3. Anlise microbiana do ambiente por sedimentao natural

Duas placas de Petri, uma contendo meio de cultura propicio para bolores e outra para leveduras, foram expostas ao ambiente durante 15 minutos. Logo aps, a placa de Petri referente aos bolores foi devidamente tampada, identificada e colocada na estufa por 48 horas a 35C com igual a 0,5C, j a placa de Petri referente s leveduras foi para a estufa por sete dias a 25C com igual a 1C para um possvel desenvolvimento das colnias. 4.4. Anlise microbiana de vidrarias no estreis

Escolhida uma vidraria no estril executamos o processo comeando pela lavagem do material com a soluo estril de onde, com o auxilio de uma pipeta e um pipetador retiramos uma alquota de 1ml, e ao abrigo da chama a

transferimos para a placa de Petri onde adicionamos o meio de cultura e aguardamos sua solidificao. Aps o procedimento as placas de Petri foram devidamente tampadas, identificadas e colocadas na estufa por 48 horas a 35C com igual a 0,5C.

5. Resultados:
Na anlise das mos, passada s 48h, as amostras foram retiradas da estufa e colocados no refrigerador para desacelerar o crescimento, passado um tempo as placas foram recolhidas para a contagem no contador de colnias manual onde se verificou os dados: na placa antes da esterilizao das mos: 6,4 x 10 UFC/placa e na placa depois da esterilizao das mos: 8 x 10 UFC/placa. Foi tambm observado variao nas estruturas e colorao das colnias. Na verificao da analise microbiana do cabelo encontramos crescimento positivo. No procedimento da analise do ambiente por sedimentao natural, passado as 48h a placa de bolores foi retirada e avaliou-se a presena de 24 UFC/placa, j a placa de leveduras foi retirada da estufa passado os 7 dias e nela foram encontradas 14 UFC/placa. Na verificao de material no estril as placas foram retiradas da estufa aps as 48h e nelas foram encontradas 3 UFC/ml no erlemeyer e 17 UFC/ml no Becker.

6. Concluso
Com a concluso das anlises foi possvel visualizar e entender que fatores externos, como microrganismos presentes em superfcies e no ar e/ou uma m assepsia, influenciam diretamente nos resultados de qualquer anlise microbiolgica.

7. Referncias
MORIYA, Takachi; MDENA, Jose Luiz Pimenta; Assepsia e antissepsia: tcnicas de esterilizao; Medicina, Ribeiro Preto, So Paulo, 2008; Disponvel em: http://www.fmrp.usp.br/revista/2008/VOL41N3/SIMP_3Assepsia_e_antissepsia.pdf em 02 de Abril de 2013.

PELCZAR, Michael; KRING, Noel R.; CHAN, E.C.S. Microbiologia: conceitos e aplicaes. Vol. 01. 2 ed. So Paulo, SP, Makron Books, 1996, 524 p