Florencia Feldsberg

Trabajo prctico Enzimas Nombre: Florencia Feldsberg Introduccin

Las enzimas son protenas que actan como catalizadores de reacciones qumicas. Son especficas para cada reaccin; cada enzima tiene un sustrato especfico, stos se unen a una regin de la enzima (el sitio activo) donde se catalizan las reacciones qumicas. El sitio activo tiene una forma precisa y tiene diferentes propiedades qumicas. Se lo llama el juego de "llave y cerradura": la llave solo encaja en una sola cerradura, y, en este caso, la enzima encaja en un solo sustrato. En la actividad enzimtica, los reactivos son los sustratos. Sin las enzimas, una reaccin tardara muchsimo ms tiempo, y no podra satisfacer las necesidades de la clula. Por lo tanto, las enzimas son indispensables. Conste que la actividad enzimtica est limitada por ciertos factores: el pH, la concentracin de sustrato y la temperatura. En el pH, el punto ptimo para la catalizacin (ptimo refirindonos a la mayor velocidad) es 7 (en la mayora de las enzimas). Si el pH es menor o mayor que 7, se desnaturaliza, es decir, la enzima pierde su sitio activo y deja de funcionar. La cantidad de sustrato es otra limitacin a la actividad enzimtica. Con poca concentracin de tal, la velocidad de la actividad aumenta cada vez ms. En altas concentraciones de sustrato casi todos los sitios activos estn ocupados, por lo tanto, aument su actividad hasta el punto que no hay ms sitios activos. En este momento es en el que la actividad se hace constante hasta el punto que se desnaturaliza. El ltimo factor limitante relevante es la temperatura: cuando la temperatura es baja (0 grados Celsius, por ejemplo) la enzima se queda quieta, pero puede ser activada. Cuando la temperatura logra aumentar, la actividad enzimtica aumenta de a poco. El punto ptimo de la actividad enzimtica est entre los 37C a 40C. A muy altas temperaturas, la de un volcn por ejemplo, las enzimas son desnaturalizadas y no pueden volver a actuar porque ya perdieron su sitio activo (el calor causa vibraciones que rompen la estructura de las enzimas). En diferentes grupos realizaremos una experiencia de laboratorio para investigar, entender, y profundizar nuestros conceptos en relacin a las enzimas. En mi caso trabajar con la enzima catalasa, que se encuentra en la papa, utilizando distintas herramientas: vaso precipitado, 3 tubos de ensayo, un gotero, agua oxigenada (10, 20 y 50 volmenes) un rallador de papa/zanahoria y un cronmetro. Vamos a analizar cmo y en qu medida vara la catalasa en distintas concentraciones de agua oxigenada. La catalasa

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se va a rallar de una papa; esta ser nuestra enzima y el H202 (agua oxigenada/perxido de hidrgeno) va a ser el sustrato. Vamos a medir la actividad enzimtica por la cantidad de burbujas que hay en el tubo antes, y despus de un tiempo (3 minutos).stas nos van a indicar si hubo actividad alguna. La cantidad de burbujas van a ser medidas en centmetros y con una regla y va a ser comparada la informacin, es decir, vamos a comparar cuantos centmetros de burbujas haba antes de ingresar el agua oxigenada y cuntos pasados los 3 (tres) minutos.

PREGUNTA
Nuestra pregunta fue (mencionada indirectamente anteriormente) que sucede cuando le agregamos agua oxigenada (H2O2) al jugo de una papa exprimida, conteniendo la catalasa.

HIPTESIS
Consideramos que agregando distintos volmenes y gotas de agua oxigenada, vamos a tener mayor cantidad (en este caso centmetros) de burbujas que antes de los tres minutos habiendo pasado, es decir: las burbujas van a aumentar despus de los tres minutos porque ya habra pasado un lapso de tiempo determinado, que permite el aumento de burbujas, es decir, que permite notar la reaccin/actividad enzimtica. Pienso que a medida que aumente el volumen, van a haber ms burbujas, indicando mayor actividad enzimtica. En esta experiencia vamos a tener tres variables: Las variables independiente es el Las variables constantes son la cantidad de solucin donde va a actuar la enzima, la temperatura, la cantidad de jugo de papa, las gotas de agua oxigenada y el tiempo de espera, es decir, tres minutos. La variable dependiente es la cantidad de burbujas que se formen despus de los tres minutos. PROCEDIMIENTO DETALLADO Nos vamos a dividir en grupos. En mi caso, voy a trabajar con la catalasa, enzima que cataliza (o rompe) las molculas de perxido de hidrogeno (H2O2) y forma agua (H2O) y Oxgeno. Su funcin es importantsima (la

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de la catalasa) porque rompe el perxido de hidrgeno, que causa lesiones hacia la clula. Vamos a buscar las herramientas. Primero, vamos a rallar la papa con un rallador de cocina que generalmente se utiliza para la ralladura de zanahoria, pero que puede tener otros usos (como rallar papa). Vamos a utilizar un colador para Con un rallador, vamos a rallar la papa y colar el jugo en un vaso precipitado. Pensamos obtener alrededor de 25cm en el vaso precipitado ya que vamos a colocar 1.8cm del jugo en cada tubo de ensayo. Cuando ya tengamos el lquido (jugo contenedor de catalasa) de la papa rallada en un vaso precipitado, vamos a agregar 5 gotas de agua oxigenada a cada tubo de ensayo. Nuestro experimento va a constar en 3 repeticiones por concentracin, es decir:

CONCENTRACIONES 5 gotas-H2O2 10 volmenes iniciando con 1.8cm de lquido 5 gotas de H2O2 de 20 5 gotas de H2O2 de volmenes iniciando con 50 volmenes 1.8cm de lquido iniciando con 1.8cm de lquido Repeticin 1 Repeticin 2 Repeticin 3 Repeticin 1 Repeticin 2 Repeticin 3

Repeticin 1 Repeticin 2 repeticiones Repeticin 3

En la primera tanda, vamos a llenar de manera equitativa tres tubos de ensayo (tres repeticiones de la misma concentracin) con el lquido que rallamos de la papa, 1.8cm. Tambin medimos la cantidad de burbujas que haba antes de poner 5 gotas de agua oxigenada de 10 volmenes.

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1.8 CM de jugo de la papa

En la segunda tanda, vamos a llenar, tambin con 1.8cm de jugo de papa, a tres tubos de ensayo. En esta segunda tanda, agregamos 5 gotas de 20 volmenes de agua oxigenada y esperamos tres minutos. En la tercera tanda llenamos otra vez ms tres tubos de ensayo con 1.8cm de jugo de papa, y le agregamos 5 gotas de H2O2 de 50 volmenes. Para resumir voy a tener tres soluciones: Solucin A: 1.8cm de jugo de papa+ 5 gotas de H2O2 de 10 volmenes Solucin B: 1.8cm de jugo de papa+ 5 gotas de H2O2 de020 volmenes Solucin C: 1.8cm de jugo de papa+ 5 gotas de H2O2 de 50 volmenes Para evitar errores, vamos a repetir cada tanda dos veces, es decir: se hicieron los primeros 9 (nueve) tubos (que lo que variaba era el volumen del agua oxigenada [10,20 y 50]), y despus se hizo devuelta otros 9 tubos. Con esta repeticin se evitan errores, y, al tener mayor cantidad de resultados, vamos a poder ver con mayor exactitud los resultados, reuniendo los que estn ms cerca.

Obtencin y procesamiento de datos

Pasados los tres minutos de la primera solucin (Solucin A). Estos fueron los resultados de las seis repeticiones:

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Repeticin

Centmetros antes de los 3 minutos 1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm

Centmetros despus de los 3 minutos 2.2 2.5 2.4 2.4 2.5 2.5

1 2 3 4 5 6

Diferencia entre antes y despus de los 3min. 0.4 0.7 0.6 0.6 0.7 0.7

AUMENT/Dis minuy

Diferencia porcentual

Diferencia promedio

AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT

122% 138% 133% 133% 138% 138%

0.7cm es el Promedio de la diferencia

En la primera tanda (los seis primeros), hubo una diferencia de 0.7cm (aproximada) entre antes de los 3 y despus de los tres minutos. Hubo un aumento de un 133% aproximadamente. Esto quiere decir que hubo actividad enzimtica, indicada por el aumento de burbujas, y por lo tanto, el aumento de la solucin.
3

5 gotas H2O2 10 volmenes

2.5

2 Centmetros antes de los 3 minutos Centmetros despus de los 3 minutos 1

1.5

0.5

0 1 2 3 4 5 6

Segunda solucin (solucin B): agregar 5 gotas de H2O2 de 20 volmenes en 1.8cm de Estos fueron los resultados:

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Repeticin

Centmetros Centmetros antes de los 3 despus de minutos los 3 minutos 1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm
6,5 5 5,6 2,3 2,4 2,6

Diferencia entre antes y despus de los 3min.

4,7 3,2 3,8 0,5 0,6 0,8

Aument/disminuy Diferencia Diferencia porcentual promedio

1 2 3 4 5 6

AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT

261% 177% 211% 27% 33% 44%

Diferencia Promedio de 2.27cm

En esta segunda tanda, ocurri lo mismo que en la tanda anterior: hubo actividad enzimtica suficiente para notar un cambio. La diferencia porcentual (diferencia entre

5 gotas de H2O2-20 volmenes

8 7 6 CENTMETROS 5 4 3 2 1 0 1 2 3 4 REPETICIONES 5 6 Medida inicial del liquido de papa Medida final del liquido mas la espuma

inicial y final) es de 125%. Esto quiere decir que la solucin aument un 125% (conste que lo que se quiere medir en esta experiencia es la actividad enzimtica y no calcular cunto aument). No obstante, las ltimas tres repeticiones, resultaron en un aumento porcentual menor que las primeras tres repeticiones .

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En la ltima tanda, llenamos 3 tubos de ensayos con 1.8cm de jugo y agregamos 5 gotas de H2O2 de 50 volmenes (solucin C). Esto lo repetimos dos veces al igual que los anteriores, de modo tal que tuvimos 6 intentos/repeticiones. stos fueron los resultados:

Repeticin

Centmetros antes de los 3 minutos

Centmetros despus de los 3 minutos 3.5cm 3.7cm 3.5cm 2.3cm 4.5cm 8.5cm

1 2 3 4 5 6

1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm 1.8cm

Diferencia entre antes y despus de los 3min. 1.7 1.9 1.7 0.5 2.7 6.7

Aument/disminuy

Aumento Diferencia porcentual promedio

AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT AUMENT

194% 205% 194% 127% 250% 472%

El promedio de la diferencia Es de 2.5cm

En esta ltima tanda, todas las repeticiones aumentaron su cantidad de espuma/solucin. La solucin sera el H2O2 y el jugo de la papa colada y rallada previamente. La diferencia Porcentual es de 201%, es decir, con H2O2 de 50 volmenes la cantidad de espuma (actividad enzimtica) aument un 201%.

5 gotas de H2O2 de 50 volmenes

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 1 2 3 4 5 6 Centmetros antes de los 3 minutos Centmetros despus de los 3 minutos

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Conclusin y evaluacin
Para responder nuestra pregunta de qu sucede cuando le agregamos agua oxigenada (H2O2) al jugo de una papa exprimida, conteniendo la catalasa, elaboramos una hiptesis. Consider que agregando distintos volmenes y gotas de agua oxigenada, iba a tener mayor cantidad (en esta experiencia centmetros) de burbujas que antes de los tres minutos habiendo pasado, es decir: las burbujas van a aumentar despus de los tres minutos porque ya habra pasado un lapso de tiempo determinado, que permite el aumento de burbujas, es decir, que permite notar la reaccin/actividad enzimtica. Tambin predije que a medida que aumente el volumen, van a haber ms burbujas, indicando mayor actividad enzimtica. La hiptesis planteada previa al experimento fue sin duda correcta. En las tablas 1, 2 y 3 todas las repeticiones resultaron como esperadas, es decir, pas de tener 1,8 centmetros de solucin, a tener mayor. Tambin predije que cuando le agregamos agua oxigenada a una sustancia que contiene catalasa (una enzima), iba a haber actividad enzimtica, la catalasa iba a actuar en el agua oxigenada (por el juego de llave y cerradura). Tambin predije que mientras mayor volumen sea el agua oxigenada, mayor iba a ser la actividad enzimtica, afectando la diferencia inicial y final directamente. Esto tambin fue incorrecto porque si fuere correcto, la menor diferencia sera la de 10 volmenes, la segunda sera la de 20 volmenes y la mayor diferencia sera la que tiene 5 gotas de un H2O2 de 50 volmenes. Esto no es correcto ya que la diferencia porcentual del H2O2 de 20 volmenes, es menor que la diferencia de 10 volmenes. Si esta hiptesis fuere correcta, los porcentajes deberan estar en el orden 125%; 133% y 201% mientras que el orden real es 133%, 125% y 201%. Limitaciones y mejoras La mayor limitacion fue que no pudimos extender el tiempo de la actuacin enzimtica porque el jugo se oxidaba muy rpido. Debido a razones de no poder alterar el funcionamiento natural de la solucin, no existe mejora o solucin a esta limitacin.

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