Lic.

en Qumica industrial
Bioqumica general
Prctica No. 1
Propiedades de los carbohidratos

Profesor: Dr. David Betancour Ancona Equipo: Castaldi Molina Erika Victoria Pacheco Gmez Candelaria Mayanin Vzquez Prez Laura Sexto semestre
Fecha de entrega Jueves, 9 de febrero de 2013

Bioqumica general Prctica 1 Propiedades de los carbohidratos Objetivo Identificar las diferencias de los carbohidratos, de acuerdo a su estructura. Introduccin Los hidratos de carbono o carbohidratos son compuestos con estructura de polihidroxialdehdo o de polihidroxiacetona; son la fuente ms abundante y barata de alimentos de la naturaleza y por lo tanto los ms consumidos por los seres humanos; los provenientes de las especies del reino vegetal son ms variados abundantes que los del reino animal. Son los principales compuestos qumicos almacenadores de la energa radiante del sol; de hecho, la glucosa sintetizada en las plantas por el proceso de fotosntesis representa la materia prima fundamental para la fabricacin de la gran mayora de ellos: el bixido de carbono reacciona con agua para formar glucosa, con el consecuente desprendimiento de oxigeno: A su vez mediante diversas rutas bioqumicas, este azcar da origen a muchos otros como la sacarosa y la fructosa, o bien a polmeros como la celulosa y el almidn. La mayora de los compuestos orgnicos que se encuentran en las plantas y en los animales son derivados de hidratos de carbono; la misma sntesis de protenas se lleva a cabo con los aminocidos provenientes de la reaccin entre hidratos de carbono y diversas sustancias nitrogenadas. Los azcares simples no se suelen encontrar libres en la naturaleza, sino integrando polisacridos, los que a su vez forman parte de la estructura firme del producto, en cuyo caso no son digeribles, o bien como reserva energtica. Existe un gran nmero de hidratos de carbono; los ms conocidos son la sacarosa, glucosa, el almidn y la celulosa; existen otros que, aunque se encuentran en menor concentracin en los productos que consumimos diariamente, tienen mucha importancia debido a sus propiedades fsicas, qumicas y nutricionales. Entre los carbohidratos analizados en esta prctica se tiene a los monosacridos; estos compuestos son insolubles en etanol y ter; solubles en agua y sus soluciones tienen, en general, un sabor dulce aunque existen algunos que son amargos; comparativamente, la cantidad de monosacridos en estado libre es muy inferior a la que se encuentra combinada integrando los diversos polisacridos. La mayora se han podido cristalizar, pero en ciertos casos este proceso es difcil si no se cuenta con cristales que lo inicien. Los cristales de los azcares, al igual que otros cristales, pueden descomponerse a temperaturas cercanas a su punto de fusin e intervienen en un gran nmero de reacciones. La glucosa es el monosacrido ms abundante; se encuentra en diferentes frutas y hortalizas tales como cebollas, manzanas, fresas, etc. Debido a que es dextrorrotatoria tambin se conoce como dextrosa. La glucosa que comercialmente se emplea en la elaboracin de un gran nmero de alimentos se obtiene de la hidrlisis controlada del almidn. Otro monosacrido es la fructosa que se encuentra principalmente en los jugos de diversas frutas y en las mieles, y se produce en cantidades equimolares con la glucosa cuando se hidroliza la sacarosa. Al igual que la mayora de los monosacridos, es un azcar reductor y dado que es 1

Bioqumica general altamente levorrotatorio se le designa con el nombre de levulosa; forma parte de algunos polisacridos, principalmente de la inulina, que se encuentra en plantas como el maguey. Otro grupo es de los oligosacridos que normalmente se considera como el producto de la condensacin de dos a 10 monosacridos mediante un enlace glucosdico: cuando el nmero de monmeros es mayor, la molcula resultante se llama polisacrido. La sacarosa est integrada por una glucosa cuyo carbono aldehdico se une al cetnico de la fructosa, estableciendo un enlace glucosdico (1,2) que impide que este disacrido sea reductor por carecer de grupos aldehdo o cetona libres. La sacarosa tiene un grado de solubilidad muy alto y es menos higroscpica que la fructosa. Los polisacridos son aquellos polmeros constituidos por ms de 10 monosacridos unidos por distintos enlaces glucosdicos: los de menos de 10 son los oligosacridos como ya se mencion. Como ejemplo tenemos al almidn que ha sido parte de la dieta fundamental de la dieral del hombre desde los tiempos prehistricos, adems de que se le ha dado un gran nmero de usos industriales. Se encuentra en los cereales, tubrculos y en algunas frutas. Qumicamente es una mezcla de dos polisacridos muy similares, la amilosa y la amilopectina. Materiales y reactivos Materiales 20 tubos de ensaye de 16 x 150mm 2 Pipetas graduadas de 2 mL 4 pipetas graduadas de 5 mL 3 pipetas graduadas de 1 mL 1 vaso de ppt de 250 mL 1 gradilla 5 vasos de ppt de 50 mL 1 parrilla de calentamiento 1 papel indicador de pH 1 pinza para tubo de ensaye 1 pipetor de 10 mL 1 varilla de vidrio 2 vidrios de reloj 1 esptula 2 matraces volumtricos de 100mL 1 probeta graduada de 100mL Guantes de asbesto

Reactivos Solucin de glucosa al 1% Solucin de fructosa al 1% Solucin de sacarosa al 1% Solucin de almidn al 1% cido sulfrico cido clorhdrico Reactivo de Molisch Reactivo de barfoed Reactivo de Seliwanoff Lugol

Procedimiento Prueba de Molish: Determinacin de carbohidratos 1. En un tubo de ensaye se vierten 2 mL de solucin problema. 2. Se agregan 0.5mL de reactivo Molisch

Bioqumica general 3. Se aaden 2 mL de cido sulfrico, agregndolo cuidadosamente de tal manera que pueda formarse una capa debajo de la solucin acuosa 4. La presencia de carbohidratos quedara indicada por la aparicin de un anillo color violeta. Prueba de Barfoed: Determinacin de monosacridos (glucosa) 1. En un tubo de ensayo se vierten 5 mL de la solucin problema 2. Se aaden 5 mL del reactivo de Barfoed 3. Se introduce el tubo de ensaye en un bao de agua hirviendo durante 4 minutos 4. La aparicin de un precipitado de color rojo indicara la presencia de monosacridos Prueba de Seliwanoff: Determinacin de fructosa 1. Se coloca 1 mL de la solucin problema en un tubo de ensaye 2. Se aaden 5 mL del reactivo de seliwanoff 3. Se calienta la mezcla en un bao de agua hirviendo durante 10 min 4. Un color rojo cereza determinara la presencia de fructosa Prueba de lugol: Determinacin de almidn 1. Se acidifica la solucin problema (2mL) con HCl, comprobar con el papel indicador 2. Se vierten 5 gotas de lugol en un tubo de ensaye que contiene la solucin problema acidificada 3. La formacin de un color azul intenso indicar la presencia de almidn.

Resultados Prueba de Molish Despues de aadir el reactivo de Molish seguido de la adicin del cido sulfrico, se pudo observar el cambi de coloracin del rojo al violeta. Esta prueba dio un resultado positivo para las cuatro soluciones analizadas demostrando la presencia de carbohidratos.

Bioqumica general Prueba de Barfoed Se pudo observar un precipitado de color rojo en las dos ltimas soluciones como se puede observar ms claramente en la segunda imagen. Las soluciones que presentaron el precipitado fueron las soluciones de Fructosa y Glucosa dado que esta prueba determina la presencia de monosacridos como la Glucosa.

Prueba de Seliwanoff La presencia de un color rojo cereza se present en dos de las soluciones despus de calentarlas, esto indic la presencia de fructosa por lo que las soluciones que tuvieron el cambio de color fueron las soluciones de fructosa y la sacarosa.

Bioqumica general Prueba de Lugol El color azl se present al adicionar el reactivo Lugol nicamente en la solucin muestra de Almidn, las dems soluciones no mostraron cambio alguno.

Discusiones 1. Prueba de Molish: Determinacin de carbohidratos Este ensayo permite detectar la presencia de hidratos de carbono en una muestra; se basa en la accin hidrolizante y deshidratante que ejerce el cido sulfrico sobre estos compuestos. Como se sabe, los cidos concentrados originan una deshidratacin de los azcares para rendir furfurales, que son derivados aldehdicos del furano. Los furfurales se condensan con los fenoles para dar productos coloreados caractersticos, empleados frecuentemente en el anlisis colorimtrico1. Por lo tanto en esta prueba se obtuvo coloracin en los cuatro tubos de ensaye que contenan las soluciones problema, como se puede observar en la figura 1 de la seccin de resultados, debido a que las cuatro se trataban de carbohidratos. Prueba de Barfoed: Determinacin de monosacridos (glucosa)

En la prueba de Barfoed el ion cprico del reactivo se encuentra en una disolucin dbilmente cida y la velocidad de la reaccin de la reduccin en caliente da lugar a iones cuprosos que precipitan en forma de xido cuproso. En estas condiciones cidas los disacridos reaccionan ms lentamente que los monosacridos, lo que permite diferenciarlos, por tanto, cuando se realiz esta prueba se observ la formacin de un precipitado de color rojo en el fondo del tubo de ensaye que contena la solucin de glucosa y de sacarosa, (figura 2), esta ltima debido a que est formada por dos monosacridos que son la glucosa y fructosa, sin embargo, la formacin del precipitado fue ms lenta ya que reaccionan ms lentamente con el acetato cprico, debido
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Identificacin y cuantificacin de azcares: http://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/5.pdf. Consultado el 01/02/13

Bioqumica general probablemente al tamao molecular, aunque tambin pueden estar implicados otros factores tales como una interaccin ms compleja con los dos anillos monosacridos. 2 2. Prueba de Seliwanoff: Determinacin de fructosa Se utiliza el cido clorhdrico en la reaccin de deshidratacin y el resorcinol en la reaccin de condensacin del derivado del furfural. Esta es una prueba cualitativa para las cetohexosas y aldohexosas. El dihidroximetilfurfural se forma rpidamente a partir de cetohexosas y ms lentamente a partir de aldohexosas. El tratamiento prolongado de ms de 15min de duracin, provoca la isomerizacin de la glucosa en fructosa, por lo que tambin la glucosa puede dar la prueba positiva. La sacarosa da una prueba positiva debido a la hidrolisis de su enlace glicosidico, cuyos productos son la D-glucosa y la D-fructosa. Las reacciones involucradas en la reaccin de Seliwanoff son:

Reacciones de Seliwanoff3 En esta prueba se obtuvo la coloracin roja en el tubo de ensaye que contuvo a la fructosa y el tubo de la sacarosa, ya que como se mencion anteriormente la sacarosa est formada por Dglucosa y D- fructosa estos resultados se pueden observar en la figura 3. En el caso de la glucosa el resultado fue negativo debido al tiempo que indic la prctica que fue de 10 min, el cual no es suficiente para que ocurriera la isomerizacin de la glucosa.

Doria Serrano Mara, Experimentos de qumica en microescala para nivel medio superior , Universidad Iberoamericana, 1 edicin, Mxico D.F. 2009 Pg. 269 3 Quesada Mora Silvia, Manual de experimentos para laboratorio de bioqumica, Ed. EUNED, 1 edicin, San Jos, Costa Rica, 2007, Pg. 92

Bioqumica general 3. Prueba de lugol: Determinacin de almidn Esta prueba sirve para la identificacin de almidn en una muestra, toma una coloracin azul intenso debido a la formacin del complejo ioduro de almidn4, est prueba dio positiva en el tubo de ensaye que contena al almidn como se puede observar en la figura 4.

Conclusin Se logr diferenciar las caractersticas estructurales de los distintos carbohidratos analizados, mediante el estudio de cuatro pruebas especficas en las que las respuestas positivas o negativas en cada una de las soluciones dependan de las caractersticas conformacionales de cada carbohidrato, observando as cambios de coloracin en el caso de ser positivo o ningn cambio en el caso de ser negativo. Las pruebas de Molisch, Barfoed, Seliwanoff y Lugol son de ayuda en algunos procesos industriales para la identificacin de algn carbohidrato en una muestra problema. Bibliografa Salvador Badui Dergal, Qumica de los alimentos, ed. Alhambra mexicana, 1 edicin, 5 reimpresin, 1997, Mxico, D.F., pgs. 45, 47-48,62, 89 y 94 Identificacin y cuantificacin de azcares: http://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/5.pdf. Consultado el 01/02/13 a las 5:30 p.m. Doria Serrano Mara, Experimentos de qumica en microescala para nivel medio superior, Universidad Iberoamericana, 1 edicin, 2009 Mxico D.F. Pg. 269 Quesada Mora Silvia, Manual de experimentos para laboratorio de bioqumica, Ed. EUNED, 1 edicin, San Jos, 2007, Costa Rica, Pg. 92 Mtodos cualitativos para la identificacin de carbohidratos: http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENTO%204% 20IDENT%20CARB%2006-05.pdf, consultado el 01/02/13 a las 6:00 p.m.

Mtodos cualitativos para la identificacin de carbohidratos: http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENTO%204%20IDENT%20CAR B%2006-05.pdf, consultado el 01/02/13