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Rizosfera Glosario biocontrol microorganismos Microorganismos que benefician a la planta husped mediante patognesis planta supresin.

Llevan a cabo el control biolgico mediante el uso de diversos mecanismos, por ejemplo, antibiosis, hiperparasitismo, competencia de nutrientes, y la activacin de la resistencia sistmica inducida en las plantas. Sirve como ejemplo que indica los beneficios del crecimiento vegetal mejorada por bacterias PGPR '"(vase ms adelante), o de las comunidades bacterianas derrotar patgenos de plantas. biorremediacin la degradacin natural de compuestos xenobiticos que contaminan el medio ambiente. En hbitats terrestres, biorremediacin se mejora en la rizosfera de plantas, debido a la mayor disponibilidad de nutrientes en el medio ambiente que el combustible microbiana metabolismo requerido para degradar el contaminante. CMEIAS Center for Sistema de Anlisis de Imgenes Ecologa Microbiana, herramientas avanzadas de software de anlisis de imgenes diseadas para fortalecer los mtodos de microscopa basada en comprensin ecologa microbiana, especialmente la colonizacin microbiana de las races. endfitos microorganismos que viven dentro de las plantas saludables, especialmente abundantes en el interior de las races maduras cultivadas en el suelo.

Varios exudados de bajo peso molecular, rica en carbono, y compuestos productores de energa, por ejemplo, cidos orgnicos, liberados de la raz de la planta en la que rodea entorno en el que se catabolizan por microorganismos.

el crecimiento de la planta-promovedoras rizobacterias (PGPR) Rootcolonizing bacterias que benefician el crecimiento y desarrollo de la planta husped por diversos medios, incluyendo la fijacin de nitrgeno, fosfato de solubilizacin, la produccin de fitohormonas que mejora la raz desarrollo y aumenta la eficiencia de nutrientes adquisicin, control biolgico de patgenos del suelo-raz que infectan, y la induccin de resistencia sistmica enfermedades de las plantas. rizoplano La superficie epidrmica raz que se colonizada por los microorganismos del suelo. rizosfera La regin de suelo inmediatamente influenciada por las races vivas, donde los exudados se depositan para estimular el metabolismo microbiano y la productividad.

Definicin de declaracin El hbitat de la rizosfera incluye vida vegetal races y suelo estrechamente asociado donde depositaron exudados estimulan actividades microbianas que influyen significativamente en la planta salud y enfermedad y por lo tanto son importantes para la agricultura y los ecosistemas terrestres. Este artculo destaca la comprensin actual de la rizosfera y cmo diversas tecnologas de investigacin han mejorado nuestro conocimiento de su ecologa. Descripcin histrica de la rizosfera

En 1904, Lorenz Hiltner acu el trmino rizosfera, que defini como el "compartimento terrestre influenciada por la raz '. Sus investigaciones exhaustivas demostraron que los microorganismos fuertemente pueblan el suelo que rodea las races de las plantas, exudados de las races de las plantas de cultivo soportan diferentes comunidades microbianas y las races de las plantas y sus asociados microflora puede influir significativamente en la actividad y el desarrollo de cada uno. Por ejemplo, algunos de los microbios cuya abundancia y la actividad metablica son estimulado en la rizosfera puede promover significativamente el crecimiento de la planta, mientras que otros huspedes no invitados capitalizar en exudados de la raz por la proliferacin en la rizosfera, donde hacen dao a la planta. Resumen de las principales conclusiones de Hiltner cataliz el comienzo de una era secular de la investigacin microbiolgica rizosfera que disfruta de una abundancia de descubrimientos cientficos bsica y aplicada y continuar en el futuro.

Caractersticas generales de la Rizosfera Suelo a granel

La diferencia principal entre la rizosfera y

La mayora de los suelos raz libres son nutricionalmente oligotrfico y por lo tanto, los microbios all por lo general persisten en una baja en caloras dieta, con la mayor limitacin con respecto a la productividad es la baja disponibilidad de energa-rendimiento nutrientes orgnicos. La rizosfera incluye la raz y el suelo circundante influenciada por las races de plantas que viven (Figura 1). Suelo de la rizosfera contiene significativamente aumento de los suministros de materia orgnica que incluyen facilidad nutriente orgnica utilizable. Este enriquecimiento nutricional en los resultados de la rizosfera en microbiana ms intensa el metabolismo y la productividad de lo que se admite en aparente del suelo, con los cambios que se acompaan en la respiracin, el intercambio de gases, la disponibilidad de nutrientes y la humedad, y uso. Copiar figura 1

Importancia de la rizosfera de crecimiento de las plantas La importancia de la rizosfera es inmenso a la vida terrestre. En efecto, la totalidad de la fsica, qumica, y los factores biolgicos o condiciones de suelo que influyen en la fisiologa del crecimiento de las plantas se expresan a travs de la rizosfera y sus comunidades microbianas asociadas. Por lo tanto, la rizosfera es la 'final del negocio "de relativa suelo a las relaciones suelo-planta. Actividades en el impacto rizosfera de los equilibrios de la inmovilizacin microbiana y la mineralizacin de los nutrientes que influyen profundamente en su bicicleta en el suelo, sobre el crecimiento y el desarrollo, y en la susceptibilidad y la resistencia de las plantas a las enfermedades infecciosas. Estas interacciones se manifiestan como asociaciones beneficiosas, neutras o perjudiciales entre los microorganismos y plantas superiores. Mediciones del efecto de la rizosfera Los primeros estudios sobre la ecologa microbiana de la rizosfera miden el grado de enriquecimiento en lo que respecta a los microorganismos rizosfera de cultivo y las diversas los factores ambientales que influyen en ella. Una relacin de rizosfera de proporcin de-suelo (R: S) se introdujo para definir la magnitud del efecto rizosfera. Esta mtrica se calcula tpicamente como el parmetro (por ejemplo, la densidad o la actividad de los microbios) medido en el suelo de la rizosfera divide por el valor de la misma medicin en las inmediaciones no rizosfera controlar suelo. Por lo tanto, enriquecimientos raz asociados produciran R: Los valores de D> 1, mientras que los parmetros que se ven afectadas o suprimidas por las races tendran R: S valores iguales o inferiores a 1, respectivamente. Tpica R: valores de S en base a culturability microbiana varan entre especies de plantas, horizonte del suelo, y las agrupaciones fisiolgicos microbianos, como se ilustra en la Tabla 1. R: S proporciones son tpicamente ms altos en las muestras horizonte B, ya su suelo no rizosfera contiene muy bajo contenido de materia orgnica capaz de soportar las poblaciones microbianas. High R: S ratios de los protozoos reflejar el aumento de la abundancia de sus presas bacteriana en este entorno, y esta actividad bacteriovory cuentas ms altas para un bucle microbiana significativo que acelera el ciclo de nutrientes minerales en la rizosfera, beneficiando as a la nutricin general de la planta. Un elevado R: S ratio de la funcional gremio denitrifier refleja una mayor abundancia de este entorno de la materia orgnica, menor pO2 debido a la mayor demanda biolgica de oxgeno que acompaa la degradacin de la materia orgnica y el agotamiento de oxgeno por la respiracin aerbica microbiana, y la disponibilidad de NO3 como segunda eleccin del receptor de electrones alternativo usado para apoyar la respiracin anaerobia ATP rendimiento de los microbios. La evidencia de un menor en pO2 situ en la rizosfera es apoyada por mediciones manomtricos de absorcin total de oxgeno en la rizosfera frente nonrhizosphere del suelo que producen los valores de R: S que van de 2 a 5, dependiendo de las especies de plantas. Este aumento de indicador de la respiracin aerbica refleja la influencia combinada de enriquecimientos de nutrientes fcilmente oxidables y la gran comunidad de metablicamente activo, O2 utilizando microorganismos rizosfera.

Diversidad microbiana en la rizosfera Otros estudios iniciales caracterizan la diversidad, la morfologa y agrupaciones nutricionales de abundante taxones cultivables en las comunidades microbianas rizosfera. Estos estudios indicaron que la gran diversidad de bacterias cultivables en la rizosfera fue tpicamente dominado por bacterias gramnegativas, pseudomonas en forma de varilla con nutricional requisitos satisfechos por uno o ms aminocidos o cidos orgnicos. Las poblaciones de estas bacterias de la rizosfera distintivos aumentan rpidamente y son ms competitivos en los aportes de nutrientes orgnicos son altos, pero disminuyen drsticamente cuando se convierten en limitantes. Se clasifican como zymogenous, estrategas R copiotrophic. Por el contrario, la gran diversidad de bacterias cultivables en el suelo nonrhizosphere estn dominados generalmente por bacterias Gram-positivas, Arthrobacter similar formas pleomrficas con necesidades nutricionales satisfechas por factores extrables en materia orgnica del suelo, pero no por azcares simples, aminocidos, o cidos orgnicos. Estas bacterias nonrhizosphere se clasifican como autctonos, los estrategas K oligotrficos que muestran el comportamiento opuesto de la competencia exitosa con baja mortalidad en el ausencia de enriquecimiento de nutrientes, debido a sus capacidades eficientes en la absorcin de nutrientes, la conversin de la materia orgnica del suelo en la biomasa microbiana y sntesis / utilizacin de polmeros de reserva de almacenamiento.

De acuerdo con estos primeros resultados son ms recientes estudios de secuenciacin de genes basados especialmente dirigidas a los gen 16S ARN ribosomal de los procariotas. Estos estudios indican que el grupo?-Proteobacteria (de los cuales pseudomonas son representativos) encarnar, en promedio,? 35% de todos los clones de clulas bacterianas aisladas a partir de muestras de la rizosfera (n = 13 especies de plantas), y su dominio numrico en la rizosfera de algunas especies de plantas se extiende hasta? 65% de todos los clones bacterianos analizados. Los estudios que utilizan anlisis de mutantes de pseudomonas rizobacteriana indican que su alto nivel de competencia en la capacidad de colonizar la rizosfera del tomate implica varios sistemas fisiolgicos, incluyendo la quimiotaxis, la motilidad espasmos pili mediada por lipopolisacrido, la biosntesis de O-antgeno, anabolismo de vitaminas, nucletidos, y cidos orgnicos, autoagregacin celular, diversa absorcin de nutrientes y las vas de utilizacin, y la secrecin de protena. Nutricin y cultivo de microorganismos Estrategias rizosfera tpicos La naturaleza de los microorganismos zymogenous rizosfera tpicos como Pseudomonas tambin se refleja en la proporcin significativamente mayor de la comunidad residente que se pueden cultivar en el laboratorio. Curiosamente, 40-70% de la comunidad rizosfera puede aislarse y cultivarse, mientras que por lo general slo 0,1-1,0% del total comunidad bacteriana en el suelo mayor nonrhizosphere es cultivable. Por lo tanto, esta "anomala de grmenes" plantea un problema ms grave cuando se trata de la cultura

microbiana comunidad en el suelo mayor que en el suelo de la rizosfera, y por lo tanto, este ltimo representa un depsito accesible de microorganismos cultivables con alta filogentico y diversidad metablica. Esta proporcin significativamente mayor de culturability para la comunidad rizosfera probablemente refleja microorganismos que se toman muestras mientras se est en un estado fisiolgico ms activa metablicamente, es decir, cuando los microorganismos tienen tasas de crecimiento ms rpidas y los requisitos menos estrictos de crecimiento nutricionales y fisiolgicos que pueden ser satisfechos por las formulaciones de medios de cultivo y las condiciones de cultivo en el laboratorio. Exudacin raz y Rhizodeposition en la Rizosfera Los estudios realizados por Rovira y sus colegas analizaron exudados de las races de las plantas cultivadas axnicamente (sin microorganismos asociados). Estos estudios identificaron varios molecular bajo compuestos orgnicos de peso incluyendo numerosos azcares, aminocidos, vitaminas, cidos orgnicos, enzimas, nucletidos, y compuestos fenlicos en diversos exudados de la raz. La diversidad y abundancia de los metabolitos vegetales excretados varan entre las diferentes especies y edades de las plantas, y esta informacin ayudaron a solidificar el concepto de que el efecto rizosfera es principalmente una consecuencia de una mayor metablica microbiana / actividad fisiolgica hecho en respuesta a enriquecimiento de nutrientes a travs de exudacin de compuestos ricos en carbono y la energa-rendimiento en el suelo medio ambiente que rodea las races. La alta actividad metablica y la productividad de la comunidad microbiana en la rizosfera se apoya principalmente por los aportes de carbono de las races vivas, que son entregado en ese ambiente en diversas formas, incluidos los compuestos solubles en agua en exudados de las races (vase ms arriba), las clulas de las races muertas de la epidermis, clulas cofia y muclago polmeros que se desprenden para lubricar la punta de la raz durante la penetracin y el crecimiento geotrpico a travs del suelo. Todo el carbono perdido de races de las plantas se denomina 'rhizodeposition', y, adems de las fuentes arriba mencionadas, incluye CO2 respiratorias y otros voltiles orgnicos como el etileno. Mucho esfuerzo se ha dedicado a medir rhizode posiciones e identificar los factores que influyen en su magnitud. Los valores varan ampliamente en los distintos sistemas experimentales, llegar tan alto como 50 % de la produccin primaria neta en algunos ecosistemas. Para los estudios de laboratorio optimizadas , por lo general , el CO2 se proporciona a la antena fotosintticamente activa sistema de la planta , y la cantidad de fotosintatos C - etiquetados liberados de las races se mide . Estos estudios muestran que rhizodeposits de aminocidos y carbohidratos son ms altos cuando las races se cultivan en algn tipo de matriz slida porosa (en lugar de en el cultivo hidropnico), y la proporcin de rhizodeposits C - etiquetados es significativamente mayor (18-25 % vs 4-10 % ) cuando races de las plantas se cultivan en suelo no esterilizado ( con una comunidad microbiana rizosfera ) en lugar de en el suelo esterilizado . Otros estudios muestran que los metabolitos extracelulares de microorganismos rizosfera - competentes como Pseudomonas y Fusarium oxysporum pueden aumentar significativamente la exudacin

de carbono a partir de races de las plantas . Implicaciones importantes de estos estudios rhizodeposition son que las plantas liberan cantidades significativas de fotosintatos nuevo uso a travs de sus races sin asimilar en la biomasa vegetal , y que los microorganismos rizosfera pueden aumentar significativamente - incluso el doble - la cantidad de carbono fijado perdido de plantas asociadas por la exudacin radicular. Estos resultados tienen implicaciones profundas que llevan a una pregunta provocativa : Quin est a cargo : la planta o sus microbios asociados ? Esta pregunta retrica gener un animado debate cientfico cuando son criados en una reciente congreso internacional sobre la rizosfera , con representacin aproximadamente igual de delegados de la conferencia que defienden el microbio o el componente de la planta como principal fuerza motriz para la asociacin. Varios mtodos han sido utilizados para localizar los lugares de inters de la exudacin de nutrientes en las races . Estos incluyen la tincin con ninhidrina de impresiones de papel de filtro de las races que crecen para localizar sitios concentradas de exudacin de aminocidos , quimiotropismo localizada de amino cido que requiere auxtrofos de Neurospora crassa hongos en las races , y la localizacin de la ingeniera gentica lacZ o cepas Lux reportero de rizobacterias inocul en las plantas. Los cuatro mtodos revelaron que los principales sitios de exudacin radicular son justo por encima del meristema en la regin de la elongacin de la raz y en los lugares de emergencia de las races laterales circundante. El volumen y la escala espacial de la rizosfera El volumen de la rizosfera que se extiende desde el cilindro de la raz en el suelo circundante es una funcin dinmica de la tasa de rhizodeposition planta, la difusin de nutrientes dentro de la matriz del suelo, y la extensin de la captacin y utilizacin de los rhizodeposits por la comunidad rizosfera. La distancia radial de la rizosfera se ha examinado mediante la medicin del gradiente de concentracin de rhizodeposits de carbono y la densidad de las unidades formadoras de colonias bacterianas y las clulas individuales en el suelo de la muestra a varias distancias de la superficie de la raz. Estos estudios indican que el efecto rizosfera es tpicamente ms intenso en la superficie de la raz (llamado el rizoplano) y se extiende unos pocos milmetros a poco ms de un centmetro a cabo en el suelo. Los factores que influyen en esta escala espacial incluyen la especie y la etapa de crecimiento de la planta, su arquitectura de las races y la densidad, la intensidad luminosa y la duracin del fotoperiodo, la textura, la profundidad, la fertilidad, y el estado de humedad del suelo, y los tipos, la abundancia, y las actividades de los microbios, slo para nombrar unos pocos. La Figura 2 ilustra cmo la arquitectura de raz influye en el volumen de diferentes rizosfera de plantas, y es mucho ms grande para los sistemas de races que son fibrosa y altamente ramificado en comparacin con los sistemas de cultivo y no fibrosa. Copiar figura 2 Rizosfera de las plantas vecinas pueden ocupar un volumen significativo e incluso se superponen cuando sus densidades raz son lo suficientemente altos. Por ejemplo, el 3040% de la parte superior 10 cm de un suelo horizonte se encuentra a 1 mm de la raz de

trigo en su etapa en el desarrollo de la masa. Teniendo en cuenta la alta densidad de csped de csped, todo el suelo a profundidades de sus races ms largas es rizosfera. Microscopa directa de la colonizacin microbiana de las races Los primeros estudios de microscopa Starkey, Krasilnikov , Rovira , Bowen y Foster realizaron estudios pioneros que utilizaron microscopa directa para examinar el efecto rizosfera directamente . Una forma inteligente para examinar el efecto rizosfera in situ utiliz una modificacin de contacto deslizante de la tcnica de deslizamiento sepult Rossi- Cholodny (Figura 3 ) . Adems, las races cultivadas en el suelo eran manchado directamente y examinados por microscopa de campo claro o procesados para la transmisin y microscopa electrnica de barrido para examinar los microorganismos rizoplano. Estos estudios verifican los mtodos de cultivo anteriores que mostraron la mayor abundancia de microbios en el suelo alrededor de las races, su crecimiento en microcolonias, detalles ultraestructurales del tejido suelo de la rizosfera y descripciones preliminares de las distribuciones microbianos en la rizoplano . Otras conclusiones importantes hechas por los principios de estudios de microscopa fueron la demostracin directa de una capa de muclago en la superficie de la raz, que a veces incorpora microorganismos dentro de ella, las bacterias rodeadas de abundantes cpsulas fibrilares cuya periferia est cubierto de partculas de sobres de arcilla , la diversidad morfolgica de la comunidad rizoplano , aument la colonizacin bacteriana en los surcos entre las clulas epidrmicas adyacentes donde exudacin es previsible elevadas, los sitios locales de paredes epidrmicas erosionadas que permiten la penetracin microbiana , y la evidencia directa de control biolgico a travs del mecanismo de hiperparasitismo , es decir, los microorganismos beneficiosos atacando directamente y matar a otros patgenos microbianos de las plantas . El examen de las secciones transversales de las races cultivadas en el campo plantas mostraron que su corteza de la raz , naturalmente, apoya grandes comunidades de microorganismos sin la planta que expresa los sntomas de respuestas de la enfermedad . Esta comunidad benigna asociada de microorganismos fue llamado inicialmente el ' endorrizsfera ' , pero ms tarde los organismos fueron llamados ' endfitos "o" colonos raz internos . La Figura 4 es una micrografa de fluorescencia de color de la comunidad microbiana dentro de suelo de la rizosfera rodea una raz de plntulas trbol blanco. Esta imagen obtenida mediante microscopa de epifluorescencia convencional es informativo Copiar figura 3 y 4 en que muestra la distribucin agrupada de las morfolgicamente diversas bacterias unicelulares y filamentosas en estrecha asociacin con partculas, materia orgnica autofluorescente de color marrn rojizo, pero sufre porque una parte importante de los objetos de primer plano son fuera del plano de foco. Los avances en los estudios rizosfera uso de tecnologas modernas Las tecnologas modernas ofrecen una visin ms profunda en la comprensin de las estructuras de la comunidad microbiana y sus interacciones en la rizosfera de las plantas.

Mejoras mediante CLSM El avance ms significativo en el uso de microscopa de fluorescencia para examinar los microbios raz-asociados era el desarrollo de la microscopa confocal de barrido lser (CLSM). El sistema de imagen confocal tiene un diseo ptico que utiliza aberturas pequeas perforaciones en la fuente de luz lser y la deteccin de la imagen del objeto, eliminando as la luz dispersa y fuera de foco que interfiere con la formacin de la imagen del objeto. Esta capacidad de utilizar solamente seales desde el plano centrado elimina una limitacin importante de la microscopio de fluorescencia convencional al examinar tejido de la planta, las partculas del suelo, y los restos orgnicos que emite una cantidad significativa de objetable autofluorescencia de fondo y / o absorbe el colorante fluorescente en s. Debido a que la luz del exterior del plano de enfoque no se incluye cuando se forma la imagen, el 2-D (x, y) la imagen se convierte en una seccin delgada optodigital precisa con un espesor que puede acercarse a la resolucin de 0,2 mm terica del microscopio de luz. Adems, mediante la digitalizacin de una serie secuencial de imgenes 2-D mientras se enfoca a travs de la muestra en la tercera dimensin (z) (llamada serie Z '), una pila plana de todo incluido o de una imagen reconstruida en 3-D puede ser producido, girar, y analiz cuantitativamente. Dazzo y sus colegas informaron por primera vez el uso exitoso de CLSM para visualizar el rizoplano microbiana manchada comunidad con el fluorescente colorante cido nucleico-tincin, naranja de acridina. Los ejemplos se ilustran en la Figura 5 (a) y (b). Mediante el uso de este enfoque, se puede mapear la distribucin de la comunidad microbiana rizoplano colonizada en las races de plntulas crecidas en el suelo. La Figura 6 muestra un resultado tpico, ilustrando que la distribucin espacial de los microorganismos en el rizoplano es discontinua, siendo casi completamente desprovisto de los microbios en la punta de la raz crece en el suelo, clulas individuales justo por encima de la punta de la raz, algunos de los cuales eventualmente se transforman en microcolonias ms arriba en la raz. En general, el rizoplano de las races en crecimiento activo est normalmente cubierto slo hasta 20% de los microbios. En algunos casos, las clulas microbianas individuales encuentran el medio ambiente rizoplano a ser favorable para el crecimiento, lo que resulta en localizada biofilms microcolonia con tiempos de generacin in situ de poblacin de tan slo 2-3 h Copiar figura 5 y 6 Un estudio de caso: Rhizobium colonizacin de las races del arroz Rhizobium es la conocida fijacin de nitrgeno raz ndulo bacterias simbiontes de plantas leguminosas (ver "Rhizobia '). Estudios recientes han demostrado que este microorganismo del suelo Tambin desarrolla natural, ntimo, y en ocasiones beneficiosas asociaciones endfitos con diversos cultivos de cereales como el arroz, el trigo. Este nicho ecolgico alternativo de Rhizobium

pueden ser explotados en la agricultura sostenible en la forma de biofertilizantes eficientes que se inoculan en la planta husped a la siembra de cereales y puede promover significativamente su el crecimiento, reduciendo de ese modo su necesidad de aplicaciones de fertilizantes qumicos para lograr el mximo rendimiento de grano. Las figuras 7 y 8 ilustran aspectos de la colonizacin y la infeccin de las races del arroz endoftico por Rhizobium utilizando CLSM y microscopa electrnica de barrido, respectivamente. Estos muestran la colonizacin del rizoplano especialmente rodea emergencia de las races laterales y en las uniones entre las clulas epidrmicas, agrietarse entrada en espacios vacos creados por la aparicin de las races laterales y fisuras entre las clulas epidrmicas, la colonizacin de las clulas corticales muertos dentro de la raz, y la erosin del pozo localizado mediada por Rhizobium celulasas clula determinada. Hartmann y sus colegas demostraron el valor de CLSM combinado con microscopia de inmunofluorescencia (MFI) usando anticuerpos marcados fluorescentes como sondas moleculares especficas para examinar la colonizacin de un microorganismo especfico (Azospirillum sp.) En el rizoplano trigo. En ese estudio, se utiliz un sistema de doble lser para producir la autofluorescencia verde del fondo de la raz sobre la que las clulas inmunofluorescentes Azospirillum rojos distintivos podran ser vistos fcilmente. La capacidad de seccionamiento ptico no invasivo del microscopio confocal tambin se utiliz para localizar las clulas Azospirillum dentro de la capa mucigel raz. Copiar figuras 7 y 8 El uso de CMEIAS Software de Anlisis de Imgenes para analizar la colonizacin del Rhizoplanes por microbios en Situ Anlisis digital de imgenes asistida por ordenador puede mejorar significativamente el anlisis cuantitativo de la colonizacin microbiana de las races, al permitir una para extraer, almacenar, recuperar, y transmitir electrnicamente la informacin numrica sobre caractersticas de las imgenes seleccionadas y pertinente. Estudio morfolgico detallado de las clulas bacterianas puede proporcionar informacin til informacin sobre la diversidad, la abundancia microbiana, y 2-D distribucin espacial de los miembros de la comunidad microbiana. Un sistema asistido por ordenador ha sido desarrollado por el Centro de Ecologa Microbiana de la Universidad del Estado de Michigan para ayudar en tales evaluaciones. Centro de Sistema de Anlisis de Imgenes microbiana (CMEIAS) es una herramienta de anlisis semiautomatizado que utiliza procesamiento digital de imgenes y tcnicas de reconocimiento de patrones en relacin con la microscopa de reunir tamao y las mediciones de forma de imgenes digitales de los microorganismos y clasificarlas en su morfotipo apropiada, permitiendo independiente del cultivo anlisis cuantitativo de la diversidad y distribucin de las comunidades microbianas complejas morfolgica. Adems, estudios cuantitativos de la biogeografa microbiana se facilitan en gran medida el uso de CMEIAS microscopa asistida por ordenador, sobre todo para definir la adecuada in situ escala espacial de la deteccin de qurum, superposicin de nicho y la competencia, y la colonizacin biofilm microcolonia a escalas espaciales directamente relacionados con las clulas bacterianas individuales.

Para ilustrar las aplicaciones de CMEIAS para estudios de biogeografa autoecolgicos de organismos especficos colonizados en las superficies radiculares, anlisis digital de imgenes se realiz en las clulas fluorescentes con anticuerpos marcados de Rhizobium leguminosarum bv. trifolii en el rizoplano trbol blanco se muestra en la Figura 9. En aproximadamente 2 s de tiempo de clculo, CMEIAS extrajeron varios parmetros de medicin de cada clula bacteriana individual, inmunofluorescencia, e informaron los datos resumidos en la Tabla 2 que define su abundancia y el patrn de distribucin espacial en la superficie de la raz. De particular inters biogeografa autoecolgicos son los datos de anlisis de imgenes obtenidas por CMEIAS necesarios para llevar a cabo la trama menos basada en la distancia y el cuadrante basado en anlisis de patrones de puntos espaciales y anlisis geoestadstico de las interacciones espaciales entre las bacterias. Estos atributos definen los patrones espaciales de distribucin de los ndices de dispersin y modelos matemticos que predicen el comportamiento de la colonizacin bacteriana in situ. El ndice de aleatoriedad espacial, calculado a partir del rea de la imagen, las desviaciones promedio y estndar de la primera y segunda vecino ms cercano distancias (Tabla 2), proporciona datos cuantitativos indican que las bacterias en la Figura 9 muestran un patrn de clster de distribucin espacial (valores <1,0). Esta indicacin de espaciamiento agrupado de los organismos en la superficie de la raz se confirma cuantitativamente por otros cinco ndices de distribucin espacial parcela basados (varianza / proporcin media, Morista de dis- ndice de dispersin, K binomial negativa, ndice de hacinamiento promedio de Lloyd, y el ndice de agregacin de Lloyd, Tabla 2) calculada a partir de los datos CMEIAS. Esta agrupada o patrn espacial agregado es consistente con el comportamiento de las bacterias que permanecen in situ, mientras que crece activamente en las biopelculas microcolonias en la superficie de la raz. Esto ocurre con frecuencia en los cruces de fisuras entre las clulas epidrmicas adyacentes justo por debajo y dentro de la regin de la raz del cabello donde exudacin raz localizada se prev que sea alta. Esta estrategia de colonizacin se indic, adems, por el multimodal (en lugar de lo normal) de distribucin de las primera y segunda distancias ms cercanas vecino (Figura 10 (a)), y por la abundancia de clster de distancias de separacin cortos en el diagrama de dispersin 2-D de la primera frente segunda distancia del vecino ms cercano (Figura 10 (b)). Copiar figura 9 y 10 La deteccin in situ de las poblaciones de bacterias especficas, genticamente marcado dentro de Microbial Comunidades Varias tcnicas de tincin pueden ser utilizados con el microscopio para detectar y medir la colonizacin microbiana de la rizosfera y / o rizoplano. Por ejemplo, la inmunofluorescencia se puede utilizar para realizar un seguimiento cepas inoculantes especficos de bacterias en el medio ambiente si los organismos pueden ser cultivados y anticuerpos especficos reactivos con ellos estn disponibles (por ejemplo, Figura 9). Sin embargo, los factores inhibidores qumicos en el suelo y

la absorcin no especfica de la mancha por la raz puede interferir con la IFMapproach. Las tcnicas alternativas utilizando la ingeniera gentica se han desarrollado para evitar estos problemas. Se insertan marcadores genticos que codifican protenas fluorescentes en su genoma, que cuando se produce puede ser excitado por la luz de longitudes de onda especficas para hacer que la clula autofluoresce. Marcadores genticos utilizados comnmente codifican para una protena fluorescente verde (GFP) y protena fluorescente roja (RFP). Tales tcnicas se han aplicado para estudiar la distribucin de las poblaciones de bacterias colonizadas en las races (Figura 11 (a)). Mediante el uso de diferentes marcadores y la ptica de fluorescencia especficos, se puede realizar un seguimiento colonizacin de las races por diferentes poblaciones bacterianas en el mismo entorno (Figura 11 (b)). Surgen dos problemas principales en la aplicacin de este enfoque marcador gentico autofluorescente para estudiar la colonizacin bacteriana in situ. Uno de ellos es si la carga metablica de la biosntesis de aadido para producir constitutivamente la protena autofluorescente influye en el comportamiento de la colonizacin de la cepa recombinante en formas que difieren de su cepa parental de tipo salvaje. La otra es si el marcador gentico se mantiene de forma estable dentro de la clula bacteriana recombinante durante su crecimiento de la poblacin en el medio ambiente. Tales marcadores se introdujeron originalmente en el organismo utilizando construcciones de plsmido (secuencias del genoma extracromosmicos) para asegurar rpidas adaptaciones en su entorno. Pero en este caso, el antibitico cuya resistencia es conferida por el plsmido debe estar presente en el medio ambiente con el fin de crear la presin selectiva necesaria para mantener el plsmido dentro de la bacteria y su replicacin en las generaciones venideras. Dicha presin de seleccin puede perturbar gravemente el medio ambiente rizosfera y otros miembros de su microbiana asociada comunidad in vivo, y por lo tanto hoy en da estos marcadores genticos autofluorescent se insertan de forma estable en el cromosoma bacteriano para asegurar la transferencia a cada subsiguiente generacin sin la necesidad de una presin selectiva. Si tal marcador est conectado a un gen especfico de inters, que se puede utilizar para mostrar la actividad de la expresin gnica como una construccin indicadora tal como se describe a continuacin en este artculo. Copiar figura 11 Un estudio de caso combinando el uso de marcadores genticos en autofluorescentes Periodista Cepas y CMEIAS anlisis de imagen Muchas bacterias activas biocontrol modulan la colonizacin y ocupacin de nichos ecolgicos en ambientes naturales como la rizosfera mediante un sistema cellto de clulas especficas de comunicacin. Este sistema se basa en la elaboracin de diversas de bajo peso molecular, las molculas de seal extracelulares que permiten a las bacterias perciben microbios vecinos, mientras que la colonizacin de superficies. Las molculas de la seal son generalmente oligopptidos para las bacterias Gram-positivas y lactonas N-acylhomoserine (AHL) para los

Las bacterias Gram-negativas. El sistema para las bacterias Gram-negativas se entiende mejor porque los agentes de biocontrol ms microbianos y patgenos de plantas estn representados en este grupo. Por encima de las concentraciones umbral, AHL activan la expresin de ciertos genes para ocupar sus nichos ecolgicos, por ejemplo, el desarrollo del biofilm, la produccin de factores de virulencia o antibiticos, y la persistencia y la viabilidad en colonizados superficies de acogida. AHL-mediada por la diafona tambin puede ser eficaz a travs de fronteras especies dentro de las comunidades microbianas e incluso entre procariotas y eucariotas. Dado que las caractersticas bacterianas activados por AHLs puede ser beneficioso o perjudicial para los anfitriones, la identificacin de los atributos que rigen la comunicacin de clula a clula es muy importante y tiene gran aplicacin prctica en el diseo e implementacin de estrategias de antimicrobianos sintticos que expresamente dirigidos biopelculas microbianas, interacciones planta-microorganismo, y los ambientes acuticos. En general se cree que se necesitan altas densidades de poblacin bacteriana que supere el nivel de umbral de AHL concentraciones requeridas para activar los genes y sus funciones fisiolgicas. Por lo tanto, este tipo especfico de comunicacin microbiana se ha convertido en conoce como 'la deteccin de qurum funciona principalmente como sensores de alta densidad de poblacin, optimizando as la expresin de las funciones que resulten ms beneficiosas cuando se realiza simultneamente por densas poblaciones. Esta opinin predominante se basa normalmente en la medicin de la expresin de genes en las poblaciones en suspensin lquida agitada o cuando se cultiva en grandes biofilms sobre sustratos artificiales (por ejemplo, solidificado medios culturales o de plstico). Sin embargo, a pesar de su gran atractivo, este paradigma de deteccin de qurum ha sido recientemente cuestionado ya que los mtodos utilizados para su deteccin requiere altas poblaciones, ni la necesidad de una accin de grupo, ni las condiciones selectivas necesarias para su evolucin ha sido demostrada. Por otra parte, muchos aspectos de la fisiologa microbiana difieren para las clulas colonizadas en las superficies, ya que bajo esta condicin, las molculas de sealizacin pueden dispersar mucho ms rpido y ms lejos que la propia poblacin adjunto. Por ejemplo, los patrones espaciales de dispersin y crecimiento activo dentro de los dominios discontinuos son los principales determinantes ecolgicos que rigen la colonizacin microbiana en las superficies de acogida, especialmente las plantas, y durante las primeras etapas de desarrollo de la biopelcula. Una teora podra predecir que las bacterias individuales se beneficiarn considerablemente si su sistema sensorial podra responder de manera eficiente a concentraciones pequeas, locales de la molcula de seal ya que ello comunicar informacin sobre las actividades de la competencia y / o cooperativas por unos vecinos antes de que lleguen las altas densidades de poblacin en el inmediata microambiente de la clula.

Tecnologas recientemente desarrolladas utilizando fluorescentes construcciones reportero cepa, microscopa confocal, anlisis digital de imgenes asistida por ordenador

y geoestadsticas modelo para experimentos resolucin unicelulares se han utilizado para medir los requisitos de la poblacin local de la clula a clula de AHL mediada en escala espacial situ y la comunicacin durante la colonizacin bacteriana de las races. Estos estudios recientes han demostrado que esta forma de comunicacin de la clula se puede lograr por bacteriana individuo las clulas que estn separados unos de otros y de altas densidades de poblacin por distancias de largo alcance (Figuras 12 (a) - (c)). Rizobacterias fueron capaces de llevar a cabo por clulas tocell la comunicacin de las races con un qurum mnimo de dos clulas (sin requisitos para poblaciones de alta densidad celular) y una vocacin en la separacin in situ ' distancia "de hasta 78 mm (equivalente a dos personas hablando el uno al otro mientras est de pie? 130 m de distancia). Tambin, las bacterias individuales en grupos pequeos (2-3 clulas) comunicados uno con el otro, incluso cuando se separa de poblaciones densas por largas distancias. Por lo tanto, durante la colonizacin de races de la planta, una bacteria individual es capaz de producir suficiente Molculas de seal AHL para comunicarse con otro vecino sola clula bacteriana incluso cuando esas dos clulas se separan aparte por largas distancias. Modelado geoestadstico de las densidades espaciales locales predecir que en la comunicacin mediada por AHL-situ de clula a clula se rige ms por la proximidad espacial de las clulas dentro de los gradientes de AHL que por un requisito de qurum de alta densidad de poblacin. Estos resultados desafan la visin convencional de un requisito de qurum de grupo muy compacta, de alta celular densidades de este tipo de comunicacin bacteriana. Estos nuevos resultados, cuantitativos indican que la comunicacin de clula a clula bacteriana AHL mediated es ms comn y efectiva en la naturaleza que hasta ahora prevista y que se rige ms por la proximidad espacial in situ de las clulas dentro de gradientes de concentracin de AHL que por un requisito grupo de qurum de alta poblacin densidad. En pocas palabras, la bacteria puede producir, el sentido y responder a los gradientes AHL hechas por el prjimo persona (s) durante la colonizacin de la superficie de la raz, aunque cuando estn separadas por largas distancias o de alta densidad de poblacin. Dado que estas interacciones celulares pueden beneficiarse clulas individuales (por ejemplo, la deteccin de sus competidores o colaboradores), que sera evolutivamente seleccionados, lo que explica por qu son ms extendida en el mundo microbiano. Copiar figura 12 El uso de ARN ribosomal Tcnicas de huellas dactilares basada en genes

cnicas de huellas dactilares basadas en cidos nucleicos basado en gen ribosomal identificacin de secuencias o los mtodos de deteccin permiten seguir los cambios de la comunidad microbiana en ambientes de forma rpida y sin depender de culturability. La combinacin de regiones conservadoras y variables en el anlisis de la secuencia del gen ribosomal revela similitudes en los organismos taxonmicamente relacionados, y las similitudes y diferencias en la estructura de la comunidad microbiana. Hoy en da, se ha convertido en un mtodo popular para estudiar la poblacin microbiana y la ecologa de la comunidad. Matices de este enfoque han hecho que sea ms sensible y especfica, la

mejora de la deteccin de bacterias menos dominantes, y recientemente, la extensin de su uso para incluir microorganismos eucariotas dentro de la misma muestra de la comunidad. Sin embargo, ya que estas tcnicas ms a menudo abordar slo secuencias parciales de genes, cuestiones de su exactitud en comparacin con los anlisis de secuencias completas del genoma, tales como el mtodo de Sanger o el recientemente descrito 4-5-4 anlisis de la secuencia se elevan. En general, el gen 16S ARNr anlisis para los procariotas y el correspondiente anlisis de gen del ARNr 18S de eucariotas han revelado taxonmica importante y relaciones ambientales de organismos en la rizosfera. Por ejemplo, estudios recientes han documentado la diversidad de la porcin de la comunidad rizosfera que es unculturable y la fuerte la presin de impacto ambiental juega en la formacin de las estructuras de la comunidad microbiana. Muchos especialistas microbianos que ocupan nichos ecolgicos similares o idnticos muestran el acercamiento a esta comunidad que a otros miembros de sus rdenes taxonmicos. Estos resultados plantean la cuestin de la medida en que la nomenclatura taxonmica y filogenia en el origen y evolucin de la vida microbiana puede ayudar a explicar sus funciones ecolgicas reales in situ.

Tecnologa Array - Arrays gen funcional Las nanotecnologas han creado microchips recubiertos de polmero que albergan miles de puntos de genes. Estas matrices de genes funcionales proporcionan ahora ms rpido y ms eficienteextraccin de informacin sobre la estructura de la comunidad, incluyendo posibles funciones microbianas del hbitat rizosfera. Estos conjuntos consisten en placas de vidrio con numerosos manchas de genes, cada uno contienen 30 - a 50-mer secuencias de nucletidos unidos a una superficie de vidrio recubierto de polmero. Cada punto de gen puede unirse especficamente (hibridar) las correspondientes secuencias de genes complementarios de ADN microbiano extrado de la comunidad microbiana. El ADN comunidad se marca con un marcador de fluorescencia y puesta en contacto (hibridado) con la superficie de la matriz a ciertas temperaturas, por lo que la unin de ADN especfica a las secuencias complementarias en los puntos de genes. Despus lavado para eliminar el ADN fluorescente no hibridada, manchas de genes que contienen el ADN hibridado se detecta tras la excitacin de fluorescencia. Funcionales arrays de genes revelan la diversidad de las diferentes vas metablicas conocidas potencialmente utilizadas por las comunidades de la rizosfera. Sin embargo, la utilizacin del ideal enfoque de usar comunidad ARN mensajero como la muestra marcada con fluorescencia debe esperar nuevas tecnologas que superen las limitaciones actuales de inestabilidad y por lo tanto, reduce la accesibilidad en la rizosfera. Un estudio de caso utilizando matrices y genes funcionales Anlisis de la secuencia ribosomal Los efectos de los cambios climticos globales estn influyendo en nuestra vida diaria en una escala cada vez mayor . Sin embargo, muchos cambios en la biosfera pasan desapercibidos. La comunidad de la rizosfera de microbios contiene indicadores

potencialmente tiles de los cambios ambientales , ya que son sensibles a los cambios en exudaciones races de las plantas , que pueden ser perturbados por los cambios ambientales que afectan a metabolismo de la planta antes de las variaciones en los patrones de crecimiento se disciernen . Una combinacin de tcnicas basadas en el ADN ribosmico y funcionales de genes arrays se est utilizando actualmente para hacer frente a este medio ambiente pregunta importante. Los estudios en colaboracin en un proyecto denominado Jasper Ridge Global Climate Change Experiment ( JRGCE ) por cientficos de la Universidad Estatal de Michigan y la Universidad de Stanford estn examinando los efectos del cambio climtico global en las plantas de pastizales y su comunidad rizosfera microbiana en un hbitat natural gestionado cerca de Stanford , California . En el sitio experimental , los cambios climticos globales han simulado durante 10 aos mediante la adicin de nitrgeno combinado y dixido de carbono . Estudios de anlisis de comunidad utilizando el 16S tcnica de huella digital basada en ARN ribosomal conocido como el polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccin terminales ( T-RFLP ) de ensayo revelaron fuertes cambios en ciertas poblaciones microbianas en la rizosfera de la planta de pastizales tratada en comparacin con los controles no tratados . Estos cambios demogrficos resultantes de las perturbaciones ambientales fueron pasto cultivarand tratamiento - dependiente, y revel fuertes conexiones entre la comunidad microbiana rizosfera bajo tierra y los efectos sobre el suelo de la planta husped . Arrays de genes funcionales caracterizan adems el potencial de la diversidad funcional en la comunidad microbiana rizosfera . Los resultados mostraron una fuerte influencia de las especies de plantas especficos y la capacidad de las comunidades microbianas para adaptarse en la rizosfera . Estos estudios demuestran el fuerte impacto que los cambios climticos globales pueden ejercer sobre la diversidad de las comunidades microbianas mediante rizosfera de plantas, que a su vez refleja las condiciones fisiolgicas de las plantas. El uso de istopos estables en el estudio de los procesos de biorremediacin

Otra tcnica moderna para caracterizar la actividad de la comunidad microbiana es la tecnologa de istopos estables (SIP). Esto permite identificar y rastrear los microorganismos que estn utilizando activamente ciertos compuestos especializados en el medio ambiente de inters. Este mtodo utiliza un sustrato marcado, que contiene istopos estables pesados (por ejemplo, C13, N15, S34) albergar un neutrn adicional en su estructura atmica. Las comunidades microbianas pueden metabolizar este sustrato marcado cualitativamente (no necesariamente cuantitativamente) de la misma manera como sustratos no marcados, incluyendo de este modo los tomos marcados pesados en su ADN, ARN, o otra metablica productos, que despus se separan fsicamente del polmero no marcado correspondiente por ultracentrifugacin en gradiente de densidad. Esta tcnica permite estudiar grupos bacterianos especficos seleccionados por el sustrato se pueden utilizar in situ. Con este enfoque, se puede introducir C, 13 Cetiquetados compuestos xenobiticos en la rizosfera e identificar organismos en la comunidad microbiana que son potencialmente importante en la degradacin de ellos, en

funcin de su utilizacin del sustrato marcado. Esta es una herramienta importante que actualmente se utiliza para identificar los organismos que participan en la biorremediacin de los contaminantes ambientales. En hbitats terrestres, biorremediacin se ha mejorado en la rizosfera, debido a la mayor disponibilidad de nutrientes que alimentan el metabolismo de las comunidades microbianas responsables de esta actividad. Esta herramienta SIP ofrece la oportunidad de explorar ms a fondo las conexiones de las comunidades microbianas involucrados y es probable que revelar muchos ms detalles acerca de la rizosfera en el futuro. Efectos de la comunidad microbiana rizosfrica sobre Plantas Como se mencion anteriormente, la comunidad microbiana rizosfera puede formar fuertes simbiosis con las plantas. Los resultados influyen cada socio de muchas maneras. Algunos principios de la ecologa basado en los ecosistemas eucariotas tambin se aplican a estructuras de la comunidad microbiana. Las interacciones ecolgicas entre microorganismos rizosfera y superior plantas incluyen commensalisms (uno beneficios asociados), mutualismo (ambos socios se benefician), amensalisms (una pareja impide el xito del otro sin estar afectada positiva o negativamente por la presencia de la otra), y las consecuencias patgenas (uno beneficios asociados por daar a la otra). En esta seccin se presenta brevemente ejemplos sobre los efectos positivos y negativos de tales interacciones. Efectos negativos de microbios en las plantas (efectos patgenos) La investigacin de Hiltner en el que se vincul la rizosfera como un factor importante que afecta el crecimiento de las plantas y la salud centrado en las causas de las enfermedades de las plantas. tanto procariota y colonizadores rizosfera eucariotas pueden ser perjudiciales para su planta husped. Algunos microorganismos competir con xito con las plantas de los nutrientes en el suelo, inmovilizando de este modo y la limitacin de su disponibilidad y provoca una inhibicin del crecimiento de las plantas. Otros patgenos son necrtrofos que matan a las plantas hospederas y luego proliferan mientras degradantes ellos (por ejemplo, Erwinia carotovora degrada la estructura de la pared celular vegetal para entrar en races de zanahoria y causa una podredumbre de raz la enfermedad). Algunos hongos son los principales microorganismos patgenos eucariotas de plantas. Por ejemplo, el hongo Pythium spp. provoca una raz devastadora enfermedad de la pudricin de importancia agrcola significativo. Este patgeno invade las races de las plntulas (en particular) de muchas especies de plantas, eventualmente matando a las plantas hospedantes mediante el cierre de sus sistemas de transporte de nutrientes y agua para su propio uso. Estos patgenos de las plantas causan enormes daos econmicos a las producciones agrcolas cada ao, por lo que son de especial inters en la investigacin de la rizosfera. La comprensin de los mecanismos y caractersticas de los transmitidos por el suelo, las

races infectan patgenos de las plantas es una tarea importante en la planta asociada a la investigacin para la prevencin de enfermedades y aumentar la productividad agrcola. Efectos positivos de microbios en las plantas No todos los organismos que interactan con las plantas son perjudiciales. De hecho, muchas asociaciones microbianas pueden beneficiar a las plantas, atrayendo con ello un inters especial en diversos campos de la ecologa microbiana, especialmente en los aspectos de la sostenibilidad de la agricultura cuando se trata de una planta de cultivo importante. Los grupos de bacterias que benefician el crecimiento de la planta, mientras que la colonizacin de las races se llaman promotora del crecimiento vegetal rizobacterias (PGPR). Los mecanismos de promocin de crecimiento de las plantas utilizado por las PGPR son numerosas, y pueden ser directa o indirecta. Un ejemplo comn es la capacidad de los microorganismos para abastecer la planta con nutrientes que son de otro modo limitantes o no est disponible. Los ejemplos incluyen bacterias fijadoras de nitrgeno (llamados diaztrofos) que reducen de gas dinitrgeno en amonaco y proporcionan esta forma de nitrgeno fijado para complementar la nutricin nitrogenada de la planta. La simbiosis entre los rizobios ndulo de la raz y las legumbres es el ejemplo clsico que utiliza este mecanismo directamente a promover el crecimiento de plantas leguminosas. Otro ejemplo de esta categora beneficio directo es la micorriza hongos , cuyas hifas externa se extienden desde la raz micorrcica a cabo en el suelo en el que el acceso de manera eficiente los nutrientes , especialmente de fsforo , en las zonas que son normalmente empobrecido en estos nutrientes , y transportarlos a las races de las plantas . Ejemplos de la categora de beneficios indirectos que implica una mayor adquisicin de nutrientes incluyen PGPR como Azospirillum y Rhizobium que elaboran los reguladores de crecimiento fitohormonas , que estimulan la elongacin y ramificacin de crecimiento de las races (ver " Un estudio de caso : Rhizobium colonizacin de las races del arroz ' ) . Esta arquitectura de las races mejorado promueve la capacidad de la planta para explotar las reservas de nutrientes en el suelo de manera ms eficiente . Otros ejemplos que utilizan mecanismos indirectos en esta categora incluyen los microorganismos que solubilizan complejos de suelo de fosfatos y de hierro inorgnicos y orgnicos que son de otra manera insoluble y por lo tanto no disponible para la planta . La otra categora principal que mejora la salud de plantas est mediada por el control biolgico microbiano contra las enfermedades de las plantas. Un beneficio directo de esta categora se incluyen la estimulacin de las respuestas de defensa de las plantas por bacterias activas de control biolgico que inducen respuestas de resistencia a enfermedades sistmicas en las plantas, lo que les permite derrotar a los ataques de patgenos de plantas con xito. Esto se puede lograr por colonizacin de la raz agresiva por las PGPR , superando en nmero a los nichos para patgenos de las plantas . Otra interaccin microorganismo planta directa fue revelado en estudios que utilizan Serratia liquefaciens y plantas de tomate . En esa asociacin , las bacterias inducen una reaccin de resistencia a la enfermedad sistmica en la planta por un proceso que implica su capacidad de secretar molculas de la seal de comunicacin de clula a clula bacteriana . En este caso , la

resistencia sistmica inducida conduce a ' inmunizacin ' de la planta que lo protege contra la enfermedad del tizn temprano. Otras interacciones microbio - planta son mecanismos de control biolgico directos , que actan directamente sobre el propio patgeno en lugar de en la planta husped . Los ejemplos incluyen hiperparasitismo mediante el cual el PGPR ataca agresivamente y mata al patgeno , reduciendo de este modo su potencial inculo , la produccin de siderforos que restringen la disponibilidad y absorcin de Fe para el patgeno , y la produccin de los antibiticos antimicrobianos que inhiben el crecimiento de la fisiologa del patgeno . Palabras de Clausura La rizosfera de plantas alberga una gran reservorio de microorganismos cultivables que pueden ser explotados en beneficio de la humanidad. Muchos microbios rizosfera benefician la produccin de cultivos, la reduccin de la dependencia de los fertilizantes qumicos para lograr altos rendimientos productivos. Otros protegen a las plantas de los estragos de los agentes patgenos y las enfermedades que causan. La utilizacin de estos ejemplos positivos es plenamente coherente con la agricultura sostenible, donde el objetivo primordial es el de utilizar los procesos naturales que promueven la produccin del cultivo sin daar irreparablemente la base de recursos naturales, donde la cosecha se puede cultivar. Entre los muchos descubrimientos recientes en la investigacin de la rizosfera es el hallazgo ominoso que cierto potencial microorganismos patgenos humanos son tambin habitantes de xito de este ambiente del suelo vegetal enriquecida con nutrientes, lo que plantea la ecologa potencial para la salud pblica riesgos para las personas (productores y consumidores) que los encuentren. Una idea interesante para la exploracin futura es si la rizosfera tambin apoya poblaciones de HHPR proteccin humana (healthpromoting humana rizobacterias). Prevemos que hace.

Influencia de potenciales agentes de biocontrol introducidos en el crecimiento de plntulas de maz y estructura de la comunidad bacteriana en la rizosfera abstracto Se evaluaron dos especies de Pseudomonas cromosmicamente etiquetados con GFP, que haba demostrado actividad antagonista contra el patgeno de tomate Ralstonia solanacearum en un estudio previo, por su impacto en la rizosfera del maz. Caractersticas de la planta de crecimiento, el nmero de bacterias hetertrofas indgenas, los cambios en la estructura de la comunidad bacteriana de acuerdo con el concepto de estrategia r / K, y los cambios en los perfiles de MIDIFAME de fracciones bacterianas cultivables y las comunidades microbianas totales rizosfera se determinaron en relacin con las semillas y el tratamiento del suelo con las pseudomonas exgenos. La rizosfera del maz result ser un hbitat adecuado para la presentacin P. chlororaphis IDV1 y P. putida RA2, que mostr una buena supervivencia despus de la introduccin. Sin embargo, ambos inoculantes mostraron un pequeo efecto de crecimiento-reduccin

hacia el maz, lo que podra haber sido causado por las altas densidades de inoculantes utilizados (esto es la competencia por nutrientes y la accin de los metabolitos producidos) y / o cambios en la estructura de la comunidad microbiana (tanto fraccin bacteriana cultivable y la microflora total). Probablemente, una alteracin del equilibrio entre las poblaciones indgenas rizosfera del maz ocurri. Por lo tanto, las bacterias cultivables, as como la microflora total en la rizosfera, cambian en respuesta a las pseudomonas introducidas, y su desarrollo fue dependiente de la etapa de crecimiento de la planta. Los anlisis FAME demostraron que estas comunidades microbianas compuestas diferentes poblaciones, y fueron separados de acuerdo, en primer lugar, el mtodo utilizado (directo contra el cultivo-based), en segundo lugar, el muestreo de tiempo, y, por ltimo, el nivel de inoculacin. 1 . Introduccin La amplia aplicacin de productos agroqumicos para intensificar el cultivo de cosechas es conocido por afectar gravemente a los suelos herbceos ( Tate , 1995 ) . Una alternativa es la reduccin en el uso de estos productos qumicos, por el desarrollo de preparaciones a base de agentes microbianos , tales como promotoras del crecimiento vegetal rizobacterias ( Whipps , 1997 ) . El uso eficaz de estos rizobacterias requiere que sean ecolgicamente adaptados a la ubicacin en la que se liberan. Sin embargo , el conocimiento de su ecologa , su comportamiento de la colonizacin y la interaccin con la planta son an poco conocidos ya menudo especulativo. Adems , aunque los beneficios de la promocin de crecimiento de la planta por el uso de biopreparados se han demostrado en varias revisiones (de Fago y quilla , 1995 ; Glick , 1995 ; Emmert y Handelsman , 1999 ) , la eficacia de estos agentes a menudo carece de consistencia en la campo . Esto contina para retrasar la comercializacin de estos agentes a gran escala ( Whipps , 1997 ) . Los diferentes factores abiticos y biticos se sabe que afectan la supervivencia de rizobacterias introducido en el suelo y la rizosfera ( Van Veen et al . , 1997 ) . Este ltimo hbitat , que se suministra con fuentes de nutrientes por la raz de la planta lanzado en la forma de exudados ( Grayston et al. , 1996 ) , puede considerarse como un "punto caliente" para la colonizacin microbiana y la actividad ( Srensen , 1997 ) . La colonizacin exitosa de este entorno por inoculantes microbianos depende de su competencia rizosfera ( Weller , 1988 ) , whichappearstobea requisito previo para la actividad de control biolgico eficaz . En consecuencia , el crecimiento de la planta husped es promovida por la accin directa de metabolitos inoculante y / o la inhibicin del desarrollo de patgenos de plantas ( De Fago y quilla , 1995 ; Naseby y Lynch , 1998a ; Bevivino et al , 1998 , 2000 ; . Beyler et al , 1999 ; . Ma et al , 2001 .) . El patgeno de la planta no es el nico agente microbiano un inoculante tiene que tratar en la rizosfera . La microflora indgena a menudo representa un comunidad altamente competitiva , con diversas especies , que pueden afectar a las propiedades de supervivencia y el control biolgico del inoculante rizobacteriana (Van Veen et al. , 1997 ) . Por otra parte , bacterization de semillas, plantas de semillero o el suelo puede conducir a cambios en la estructura de la comunidad microbiana indgena , lo cual es importante con respecto a la seguridad de la introduccin de bacterias en el medio ambiente . Recientemente, la

actividad antagonista de dos especies potenciales de control de Pseudomonas , cromosmicamente etiquetados con el gen GFP, contra el fitopatgeno Ralstonia solanacearum se estudi en tomate ( Van Overbeek et al . , 2002 ) . La rizosfera de plantas de tomate que pareca ser un nicho favorable tanto para el patgeno y los dos agentes de biocontrol potenciales , y los antagonistas tenda a obstaculizar el desarrollo y la invasin de plantas por el patgeno , aunque no completamente .

El maz es un cultivo importante , con una superficie cada vez mayor de los cultivos en las regiones de clima templado , debido a la creciente demanda de alimentos y la alimentacin del ganado . hay creciente inters en la introduccin de la planta especfica growthpromoting rizobacterias en la rizosfera del maz . Algunos de estos rizobacterias se seleccionaron para la inoculacin de maz una vez se han presentado sus crecimiento de las plantas y promover el potencial de supresin de la enfermedad ( Nacamulli et al , 1997 ; . Chiarini et al , 1998 ; . . Bevivino et al , 1998 , 2000 ) . Sin embargo , la eficacia de los inoculantes rizobacteriana tambin depende de la microflora indgena. Desafortunadamente , los estudios sobre este problema se han reportado slo escasamente ( Mahaffee y Kloepper , 1997 ; Nacamulli et al , 1997 ; . Naseby y Lynch , 1998a , b ; Kozdro'j , 1999 ; . Gagliardi et al , 2001 ; Ciccillo et al . , 2002 ) . De entre estos estudios , slo Ciccillo et al . ( 2002 ) notaron una alteracin del equilibrio microbiano en rizosferas tratados como una causa potencial de crecimiento de las plantas disminuye. Este estudio tuvo como objetivo poner a prueba la hiptesis de cambio de equilibrio de la comunidad, para explicar las respuestas de las plantas a la introduccin de rizobacterias exgena. Para evitar un efecto del mtodo de aplicacin ( Ciccillo et al . , 2002 ) , las semillas de maz se recubrieron con cepas inoculantes y se incorporan en el suelo que , adems, tambin se inocularon . Dos especies de Pseudomonas cromosmicamente etiquetado con el gen GFP , que haba demostrado su potencial de control biolgico contra R. solanacearum fueron seleccionados para evaluar la forma en que colonizaron y sobrevivido en la rizosfera del maz. La razn fue que el maz se podra utilizar como un cultivo de seguimiento de la patata , en las que estos agentes podran ser utilizados para contrarrestar la cepa brownrot , R. solanacearum . El concepto de estrategia r / K , y la composicin de cidos grasos de clulas enteras , se usaron como las bases para el anlisis de la microflora indgena ( De Leij et al , 1993 ; . . Cavigelli et al , 1995 ) . Adems del potencial implicacin para el cultivo de maz , la introduccin de las pseudomonas etiquetados en la rizosfera del maz tambin permite evaluar la seguridad ecolgica de este tratamiento el uso del maz como planta modelo . 4 . Discusin Para utilizar correctamente las cepas bacterianas como inoculantes que entran en los sistemas suelo-planta , las relaciones entre los inoculantes y plantas deben ser beneficiosa. Varios autores han presentado datos sobre rodaje y pesos de la raz que apoyan esta visin ( Chiarini et al , 1997 ; . Naseby y Lynch , 1998a , 2001 ; Bevivino et al , 2000 ; . . Ma et al , 2001 ) . En este estudio , ambas pseudomonas utilizadas para la inoculacin de las semillas de maz no promover el crecimiento de las plantas , pero , por

el contrario , parecan para inducir la disminucin de rodaje y pesos de la raz . Esto es interesante , especialmente a la luz del hecho de que , en particular, P. chlororaphis IDV1 y , en menor medida , P. putida RA2 han demostrado potencial de proteccin de las plantas la actividad en el tomate ( Van Overbeek et al . , 2002 ) . Cuando se introdujo a otros sistemas planta-suelo , pseudomonas no podan aumentar el crecimiento del maz . Por el contrario, se introducen en grandes cantidades a las semillas y el suelo , y sobrevivir en niveles relativamente altos en la rizosfera , estas cepas compitieron con el maz para los nutrientes ( Srensen , 1997 ) . Adems, el desarrollo de la microflora indgena a expensas de los restos de los inoculantes podra contribuir a esta competicin ( Naseby y Lynch , 1998b ) . Esta competencia podra conferir estrs a las plantas , lo que puede causar la disminucin de la disparar a / root ( S / R ) relaciones , sobre la base del peso fresco y seco de las plantas inoculadas en el da 35 . La relacin S / R se ha utilizado ampliamente como indicador del estrs de la planta , ya que informa sobre un cambio en la fisiologa de las plantas : cuanto menor sea la relacin , el ms destacado la planta ( Clark y Reinhard , 1991 ; Burd et al , 1998 ; . Naseby y Lynch , 1998b ; Holgun y Glick , 2001 ) . Crecimiento de las plantas puede ser reducido por el efecto de la bacteriana inoculantes cuando este ltimo se incorporan directamente al suelo . Este efecto de la aplicacin bacteriana inform recientemente por Ciccillo et al . ( 2002 ) podra explicar los resultados de nuestro estudio , en el que se introdujeron las dos cepas IDV1 y RA2 , en altos niveles en el suelo , adems del recubrimiento de las semillas de maz . La respuesta del maz a la introduccin de pseudomonas est relacionada con la supervivencia exitosa de las cepas en el rizosfera . La supervivencia de los inoculantes en hbitats del suelo ha sido descrita por el modelo de Gompertz ( Vandepitte et al . , 1995 ) , en el que introdujo cepas disminuyen las densidades de poblacin para el nivel de registro 4 o iniciar 3 ufc / g de suelo seco , y luego se mantienen estables en este nivel ( Dejonghe et al . , 2001 ) . Scher et al . ( 1994 ) se define como colonizadores de las races del maz aquellas bacterias que alcanzan nmeros de registro de 3,7 ufc / g de raz o superior. Cuando inoculantes establecer niveles ms altos y estables , la colonizacin exitosa de las races y rizsfera de los inoculantes se pueden sugerir . Aunque las pseudomonas en este estudio se han aislado originalmente a partir de agua que rodea las races de la planta agridulce ( Solanum dulcamara L. ) R. solanacearum - infestado , as como de suelos contaminados , tambin encontraron un hbitat favorable en la rizosfera del maz . El maz es conocido como una planta de produccin de exudados ricos en diferentes azcares , aminocidos e hidratos de carbono , que son fcilmente disponibles a diferentes microorganismos y puede estimular su crecimiento ( Kraffczyk et al , 1984 ; . Kozdro ' j y van Elsas , 2000 ; Baudoin et al . , 2001 ) . Estos nutrientes aparentemente apoyaron el crecimiento de las pseudomonas introducidas en un nivel similar a la que se encuentra en la rizosfera del tomate en los que originalmente se han aplicado ( Van Overbeek et al . , 2002 ) . Los cambios en el nmero de microorganismos cultivables indgenas , en su caso , son slo una descripcin aproximada de los efectos de inoculantes en la microflora rizosfera . Anlisis de los posibles cambios en la estructura de la comunidad de la microflora autctona que refleje mejor tanto efectos beneficiosos o perjudiciales de colonizacin de la rizosfera de inoculantes bacterianos sobre el crecimiento de las plantas . Dependiendo de la disponibilidad de nutrientes , la presencia

de sustancias qumicas estresantes y el hbitat est lleno de gente o poca gente , la comunidad bacteriana cultivable en la rizosfera puede comprender diferentes proporciones de r- o K- estrategas ( De Leij y col , 1993 , 1995 ; . Kozdro ' j y van Elsas , 2000 ) . En este estudio , las bacterias autctonas de la rizosfera del maz fueron dominados por estrategas K , independientemente de bacterization semilla. Adems , el tratamiento de semillas con las pseudomonas desplazado transitoriamente la estructura de la comunidad a la dominacin de clases bacterianas especficas de crecimiento lento en comparacin con el control sin tratar . Otros estudios tambin mostraron que los estrategas r , siendo sensibles a las perturbaciones ambientales , reduccin de la densidad de poblacin , lo que resulta en el cambio de estructura de la comunidad hacia la dominacin del Estrategas K cuando las races jvenes fueron colonizados por Pseudomonas introducidas ( Nacamulli et al, 1997 ; . Naseby y Lynch , 1998b ) . Perturbaciones a corto plazo en la proporcin de R y K- estrategas dentro de las bacterias indgenas en el rizosfera del maz inoculado tambin se indica por los ndices de diversidad , especialmente el ndice de CD , que se referan mejor el concepto r / K que los ndices de PE , como originalmente se declar ( Sarathchandra et al . , 1997 ) .

El anlisis adicional de las perturbaciones en el nivel de estructura de la comunidad se realiz mediante MIDI - FAME perfiles de la comunidad microbiana total rizosfera y la cultivable fraccin de las bacterias indgenas . La fraccin de bacterias cultivables fue representado por la alta biomasa de bacterias gram- positivos ( por ejemplo, Bacillus , Arthrobacter ) , como se indica por el contenido de FAME ramificada ( especialmente iso / anteiso 15:00 / 17:00 ) . Al mismo tiempo , este grupo de bacterias fue perturbada por la introduccin de pseudomonas , que era visto en la etapa de crecimiento posterior de maz . Que esto no fue causada por la planta , se ha indicado por el predominio de este grupo en la comunidad bacteriana de maz sin tratar . Comunidades de bacterias cultivables en el suelo son a menudo dominadas por especies Gram-positivas ( Ibekwe y Kennedy , 1998 ; Kozdro j y van Elsas , 2001 ) . cidos grasos impares son marcadores del grupo Cytophaga / Flavobacterium ( Olsson y Persson , 1999 ) , del que la contribucin a la composicin de las bacterias cultivables de la rizosfera del maz podra no ser excluido en este estudio . Sin embargo , desde otro marcador del grupo Cytophaga / Flavobacterium , 16:01 V5C ( Olsson et al . , 1997 ) , se encontr slo en la concentracin traza en la rizosfera sin tratar , este grupo presumiblemente representa una poblacin menos abundante que Las bacterias Gram - positivas . Races jvenes de maz pueden apoyar el desarrollo de actinomicetos , como se indica por los cidos grasos ( 10ME Zelles , 1999 ) , pero este efecto fue transitorio y confinados en el maz sin tratar . En contraste, la elevada contenido de nmero par , ciclopropano y 18:01 V9C / cidos grasos v12t/v7t indican el dominio de las bacterias Gram - negativas , especialmente Pseudomonas spp , dentro de las comunidades cultivables de maz tratada ( Haack et al , 1994 ; . . Olsson y Persson , 1999 ) . Por lo tanto , estrategas K encontrados por el mtodo de la placa pueden ser representantes de gramnegativos . Observaciones similares fueron reportados por Yao et al. ( 2000 ) quienes encontraron cepas de crecimiento lento en placas de TSA que pertenecen en su mayora a especies Gram -

negativas. Una contribucin directa de P. chlororaphis IDV1 y P. putida RA2 para el cambio en la composicin de la comunidad no puede excluirse , ya que estas cepas sobrevivieron a una densidad relativamente alta despus de la liberacin . Adems , el cambio de la comunidad dominada por Gram - positiva en la rizosfera del maz sin inocular a las poblaciones ms Gram-negativas en la rizosfera de plantas inoculadas podra ser indicativo de un cambio progresivo de oligotrfica a ms condiciones copiotrophic ( Yao et al . , 2000 ) , lo que podra ser debido a el efecto del tratamiento ( por ejemplo, nutrientes liberados de las clulas muertas de inoculantes ) . En contraste con Gagliardi et al . ( 2001 ) que no pudieron encontrar diferencias significativas entre las comunidades de raz de trigo no inoculados y se inocularon , y cidos grasos que consideran tpicas para los organismos inoculados , FAMEs firma para Pseudomonas spp . (por ejemplo 2OH 10:00 , 12:00 , 12:00 2OH , 12:00 3OH , cy17 : 0 y 18:01 v7c/v9t/v12t ) slo se encuentran en las comunidades bacterianas cultivables del maz inoculado en este estudio .

Claramente de la diferente informacin sobre la microflora rizosfera se obtuvo con el anlisis directo de los cidos grasos . El anlisis nos permiti mirar las comunidades microbianas totales de la rizosfera del maz sin inocular contra inoculado. En general , se encontraron grupos similares de los microbios , como se indica por las proporciones de los principales clases de FAME . Sin embargo , el anlisis de conglomerados permiti encontrar diferencias entre FAMEs particular de acuerdo con el tratamiento , as como la etapa de crecimiento del maz. Esto indicara la existencia de diferentes especies en las comunidades respectivas , sin embargo , no es posible discernir ellos por anlisis directo ( Zelles , 1999 ) . En segundo lugar, los organismos Gram -positivas y , en cierta medida , la Cytophaga / Flavobacterium grupo , abundante entre bacterias cultivables , en realidad mostr baja biomasa dentro de la microflora total de rizosfera , como se indica por las concentraciones ms bajas de FAMEs marcador (es decir, cidos de nmero impar ) . El anlisis directo tambin revel la presencia de otros Gram -positivos , es decir, actinomicetos , no slo en la rizosfera no tratados , sino tambin en la rizosfera de maz tratada , sin embargo, sus proporciones eran tambin pequea . Olsson y Persson ( 1999 ) informaron que la frecuencia de cepas de bacterias Gram-positivas disminuy en las proximidades de races de cebada , sin embargo , la Cytophaga / Flavobacterium grupo mostr una proporcin ms alta cerca de las races . En tercer lugar , el dominio de las bacterias Gram - negativas ( especficamente Pseudomonas spp . ) , Como se indica por el marcador FAME (es decir, de nmero y ciclopropano ) , era caracterstico de las comunidades microbianas de la rizosfera del maz. El aumento de las proporciones de marcadores Gram-negativas tambin se encontraron en la rizosfera de Agrostis stolonifera (Steer y Harris , 2000 ) , la alfalfa ( Miethling et al . , 2000 ) y arroz ( Bai et al . , 2000 ) . En cuarto lugar, el anlisis directo por FAME permitidos para detectar relativamente alta biomasa ( similar o incluso superior a la de las bacterias Gram positivas ) de microeukaryotes en todas las muestras de la rizosfera , como se indica por el contenido de 18:02 v6 , 9c para los hongos y peso molecular ms alto / cidos grasos poliinsaturados de protozoos ( Zelles , 1999 ) . Teniendo en cuenta este ltimo marcador ,

significativa no se encontraron diferencias entre las plantas tratadas y no tratadas en este estudio . En contraste , la nica diferencia entre los tratamientos inoculados y no inoculados de trigo con pseudomonas inform por Gagliardi et al . ( 2001 ) se bas en este marcador . Sin embargo , estos marcadores de microbianos eucariotas no son totalmente especfica , ya que tambin se producen en Moraxella ( por ejemplo, 18:03 V6C , V6C 20:04 , 18:02 v6 , 9c ) , Staphylococcus epidermidis y Bacillus alcalophilus ( 20:02 v6 , 9c ) , Enterococcus solitarius , E. avium, Streptococcus agalactiae y Arcanobacterium haemolyticum ( 20:04 V6C ) ( MIDITSBA40 biblioteca) . Por ltimo , el alcohol de N 16:00 encontrado en altos contenidos en los perfiles de FAME de todas las comunidades microbianas rizosfera , as como un alto contenido de FAME ciclopropano , tambin se encuentra en el suelo en un estudio anterior ( Kozdro ' J , 2000 ) . Una bsqueda en la biblioteca de MIDI - TSBA40 revel que cantidades relativamente grandes ( 3,5 -5,8 % ) de 16:00 N alcohol estn presentes en los perfiles de FAME de especies de Moraxella , que pertenecen a la b- proteobacterias . Ritchie et al . ( 2000 ) sugirieron esto, despus de la secuenciacin del fragmento de PCR de heterogeneidad longitud de 354 pb ( LH - PCR ) de 16S ADNr que fue altamente correlacionado con la presencia de alcohol de N 16:00 . En conclusin , la rizosfera del maz se muestra para representar un hbitat adecuado para introducido P. chlororaphis IDV1 y P. putida RA2 , que mostr una buena rizosfera competencia a altos nmeros de inculo . Ambos inoculantes mostraron un efecto de retardo del crecimiento ( estrs) hacia la pequea de maz. Este efecto fue causado probablemente por el impacto de las altas densidades de las cepas potenciales de control biolgico , lo que podra afectar a la planta husped por la produccin de , por ejemplo, metabolitos secundarios como siderforos y / o antibiticos ( Naseby y Lynch , 1998 ; Siddiqui y Shaukat , 2003 ) y competencia por los nutrientes . Sin embargo , los cambios en las estructuras de la comunidad microbiana de la rizosfera tambin podran haber afectado el crecimiento de las plantas . Los anlisis FAME mostraron que las bacterias cultivables , as como la microflora total de rizosfera , comprenden significativamente diferentes poblaciones , un hecho tambin en otros estudios ( Cavigelli et al , 1995 ; . Ibekwe y Kennedy , 1998 ) . Adems , estas comunidades microbianas cambiaron no slo en respuesta a las pseudomonas introducidas , pero su desarrollo tambin fue dependiente de la etapa de crecimiento de la planta . Por consiguiente, diferentes estructuras de la comunidad microbiana se pueden obtener con la rizosfera , dependiendo de la comunidad o total de los anlisis fraccin cultivables , el tiempo de muestreo , y , el tratamiento ( o control de la inoculacin ) . Este estudio indica que la evaluacin de las estructuras de la comunidad microbiana , tanto por las planchas y los anlisis citoqumico puede representar un enfoque adecuado para estudiar el impacto de los inoculantes bacterianos en plantas . Qu especies de la microflora indgena se seleccionan durante la competicin con inoculantes ? Cules de ellas son beneficiosas o perjudiciales para el husped de la planta ? Cmo ampliar las propiedades de control biolgico en plantas especficas de cepas bacterianas especficas a otros , sin relacin, los cultivos ? Estas cuestiones son dignas de consideracin al disear nuevos estudios y ensayos con inoculantes microbianos introducidos en el suelo.

Procesos microbianos y la composicin de la comunidad en la rizosfera de haya europea e Influencia de la planta C exudados. abstracto Races de las plantas tienen una gran influencia C y la disponibilidad de N en la rizosfera a travs rhizodeposition y la absorcin de nutrientes. Este estudio tuvo como objetivo investigar el efecto de la disponibilidad de recursos en los procesos microbianos y la estructura de la comunidad en la rizosfera. Se analizaron C y la disponibilidad de N, as como los procesos microbianos y composicin de la comunidad microbiana en el suelo de la rizosfera de haya europea y lo comparamos con el mayor del suelo. Adicionalmente, se realiz un experimento de anillado con el fin de interrumpir la exudacin raz en el suelo. Por este enfoque novedoso hemos sido capaces de demostrar que la disponibilidad mejorada de recursos afectado positivamente la mineralizacin de N y la actividad de las enzimas hidrolticas en la rizosfera, pero las tasas de nitrificacin afectadas negativamente y las actividades de enzimas oxidativas, que estn implicadas en la degradacin de la materia orgnica del suelo. Ambos efectos rizosfera sobre la mineralizacin de N y la actividad de las enzimas oxidativas desaparecieron en el tratamiento anillado. Estructura de la comunidad microbiana de la rizosfera, evaluada por anlisis de cidos grasos de fosfolpidos, slo difiere ligeramente del suelo mayor, pero se alter significativamente por el tratamiento anillado, indicando los efectos adicionales del tratamiento rodea ms all de la reduccin de la exudacin de las races. Las diferencias en la actividad de las enzimas oxidativas y las tasas de nitrificacin entre suelo de la rizosfera y la mayor parte del suelo, sin embargo, sugieren diferencias considerables en la composicin de la comunidad microbiana (funcional).

1. introduccin Durante mucho tiempo se ha reconocido que las races de plantas ejercen una gran influencia sobre el medio ambiente del suelo y su microflora y que estas interacciones, a su vez tienen un impacto considerable en el crecimiento de la planta (Lambers et al, 2009;.. Pinton et al, 2007). El trmino 'rizosfera' ha sido acuado para describir el suelo adyacente a e influenciado por races de las plantas, una zona de alta actividad microbiana, por lo general se distinguen claramente del suelo mayor con respecto a la disponibilidad de nutrientes, el agua y el oxgeno, en el pH y el potencial redox (Hinsinger et al., 2009). La principal razn para la alta abundancia de microorganismos en las proximidades de las races de plantas es rhizodeposition, lo que puede explicar tanto

como 25% de bajo el suelo asignado C (o 10% de la red fija C) (Jones et al, 2009;. Uren, 2007; Whipps, 1990) y comprende la raz exudados soluble en agua tales como azcares, aminocidos, cidos orgnicos y hormonas, como as como muclago, enzimas, desprenden clulas de la raz y C asignados a radiculares asociadas simbiontes (por ejemplo, las micorrizas) (Dennis et al, 2010;. Grayston et al, 1997;. Uren, 2007). Debido a la alta relacin C / N de rhizodeposits y debido a plantar la absorcin de nutrientes, el medio ambiente rizosfera se caracteriza por un exceso de C y fcilmente disponibles como resultado una fuerte limitacin de nutrientes (Kuzyakov, 2002). Se han observado efectos positivos y negativos de las races de plantas en el crecimiento microbiano y los procesos de descomposicin microbiana, que es probablemente debido a las diferencias de N del suelo y la disponibilidad de C, as como las diferencias en los tipos de suelos investigados o tierra horizontes (Kuzyakov, 2002). Aunque la competencia por el agua y N puede incluso dar lugar a reduccin de la actividad microbiana en la proximidad de las races (Wang y Bakken, 1997), de origen vegetal lbil C fuentes menudo estimulan el crecimiento microbiano y se metabolizan rpidamente (Butler et al., 2004). Varios estudios han demostrado que la activacin microbiana por la planta de C exudados y la limitacin de N en la rizosfera puede causar una mayor descomposicin microbiana de la MOS (Bird et al, en prensa;. Bottner et al, 1999;. Cheng y Coleman, 1990), presumiblemente debido a los microbios utilizar la energa y C suministrado por compuestos fcilmente asimilables para sintetizar enzimas para hidrolizar, a su vez, ms complejo SOM para adquirir N adicional (Blagodatskaya y Kuzyakov, 2008; Kuzyakov, 2002). Tal descomposicin mejorada de compuestos recalcitrantes despus de la adicin de fcilmente asimilable compuestos o polmeros regulares (por ejemplo, celulosa) se ha denominado "Priming rizosfera" (Blagodatskaya y Kuzyakov, 2008; Fontaine et al, 2003;. Kuzyakov, 2010). En algunos estudios, sin embargo, el aumento observado en la mineralizacin del C despus de la adicin de compuestos lbiles C fue ms bien atribuirse a una mayor microbiana tasas de rotacin y composicin de los depsitos de C microbianas que a mejorada despolimerizacin de SOM (de Nobili et al, 2001.; Weintraub et al., 2007). Se sabe ampliamente que la rizosfera es una zona de alta rotacin y la actividad microbiana, y varios estudios investigaron la influencia de races de las plantas en procesos microbianos especficos, tales como las actividades enzimticas extracelulares (Kaiser et al, 2010b;. Weintraubet al., 2007), la mineralizacin de N (Norton y Firestone, 1996), la nitrificacin y desnitrificacin (Priha et al., 1999a, 1999b). Las diferencias en la estructura de la comunidad microbiana entre rizosfera y la mayor parte del suelo ya han sido analizados por medio de perfiles de cidos grasos de fosfolpidos (Butler et al, 2003;. Paterson et al, 2007;. Steer y Harris, 2000), o por tcnicas moleculares (y Marilley Aragno, 1999), pero pocos estudios se han reportado hasta el momento que enlazan estructura de la comunidad microbiana de los procesos microbianos. El objetivo del presente estudio fue explorar cmo los procesos de la rizosfera y la composicin de la comunidad microbiana se ven afectados por la disponibilidad de recursos. Nuestra hiptesis era que la raz de exudados facilitar el establecimiento de una

comunidad microbiana distinta en la rizosfera, y de que una interrupcin de la planta de C exudationwould causan la comunidad rizosfera para ser ms similar a la comunidad mayor parte del suelo. Adems, la hiptesis de que las diferencias en la disponibilidad de recursos entre rizosfera y el suelo mayor dara lugar a diferentes procesos microbianos, ya sea como un efecto de las comunidades microbianas distintas o como un efecto de cebado directo en procesos de descomposicin microbiana por exudados de la raz. Con el fin de modificar experimentalmente la disponibilidad de recursos redujimos C exudacin de plantas por rbol anillado, un mtodo que se ha aplicado con xito para interrumpir subterrnea asignacin de carbono en los rboles (Hgberg et al, 2001;.. Kaiser et al, 2010b). La combinacin de un anlisis exhaustivo de los procesos microbianos, la composicin de la comunidad, y C y N disponibilidad en la rizosfera por un lado, y un enfoque experimental para reducir la influencia de plantas en la comunidad microbiana del suelo en el otro lado, es novedosa y permite a diseccionar el efecto de la disponibilidad de recursos y la composicin de la comunidad en los procesos microbianos. 4. discusin A pesar del porcentaje relativamente pequeo que ocupa la rizosfera del volumen total del suelo, los procesos de la rizosfera pueden ser ms importantes que los procesos del suelo a granel para el funcionamiento del suelo y pueden desempear un papel vital en el ciclo de nutrientes del ecosistema (Badalucco y Nannipieri, 2007). En este estudio se investigaron los procesos microbianos en la rizosfera de haya europea. Esperbamos que las diferencias en la disponibilidad de recursos entre rizosfera y el suelo mayor dara lugar a procesos microbianos distintos y estructura de la comunidad, y que estas diferencias se reduciran en una interrupcin de la asignacin de carbono bajo tierra. El suelo de la rizosfera se caracteriz por marcadamente superior C y la disponibilidad de N en comparacin con aparente del suelo. Anillado redujo significativamente las concentraciones de COD en la rizosfera (Fig. 1a). Tambin se encontraron concentraciones Disminucin de COD en anterior anillado experimentos en suelos granel (Kaiser et al, 2010b;.. Weintraub et al, 2007). Aunque las concentraciones de DOC en la rizosfera se redujeron en parcelas anilladas, todava eran mayores que las concentraciones en la mayor parte del suelo, tal vez debido al hecho de que el DOC tambin puede originarse a partir de la degradacin de la MOS (Ekberg et al, 2007;. Kalbitz et al., 2000). Debe tenerse en cuenta, sin embargo, que nuestros datos no nos permiten distinguir entre una mayor produccin y disminucin de la captacin de DOC o DON, por ejemplo, las races de plantas o microbios. El aumento significativo en la concentracin de DON en la mayor parte del suelo de las parcelas estranguladoras corresponde a un aumento de las actividades de peptidasa, lo que indica que las actividades de las enzimas potenciales medidos se pueden vincular a la concentracin de los productos enzimticos. Las concentraciones de NH4 se han mejorado significativamente en la rizosfera, mientras que no se encontraron diferencias para el NO, que es ms probable debido a la alta movilidad de NO3 en el suelo (fig. 1c y d). El marcado aumento en las concentraciones de N inorgnico por el tratamiento anillado, que ya ha sido observado en un experimento

anterior (Kaiser et al., 2010b) es, probablemente, un efecto de la reduccin de la planta y micorrizas absorcin de N, ya que la absorcin de nutrientes es una energa que requiere reservas de proceso y la raz de C se han agotado por el tratamiento anillado (datos no mostrados). La alta disponibilidad de recursos en la rizosfera se refleja en el modelo de procesos microbianos: tipos N mineralization se incrementaron fuertemente en la rizosfera (Fig. 2a), como ya se inform en los suelos de la rizosfera de rboles (Norton y Firestone, 1996). El hecho de que la marcada diferencia en las tasas de mineralizacin de N entre rizosfera del suelo y la mayor parte del suelo de las parcelas de control desaparecido en el tratamiento anillado, claramente puntos a la activacin microbiana por la oferta de lbil C ("cebado rizosfera") como se sugiri previamente (Blagodatskaya y Kuzyakov, 2008; de Nobili et al, 2001;. Weintraub et al ., 2007). Las tasas de nitrificacin, por el contrario, tienden a ser menor en la rizosfera (fig. 2b). Esto podra interpretarse como un efecto de la competencia entre nitrificantes y races de las plantas para NH4. Sin embargo, ya que las tasas de nitrificacin se midieron en los suelos incubados despus de la separacin de las races de las plantas, tambin es posible que las bajas tasas de nitrificacin sean el resultado del predominio de bacterias hetertrofas rpido crecimiento en la rizosfera. En cuanto a las actividades de enzimas extracelulares, se encontr que las actividades de fosfatasa y peptidasa, ambos procesos filogenticamente amplias, se mejora, en general en la rizosfera (Fig. 3a y b). Actividades de las fosfatasas mejoradas pero ningn cambio en las actividades de peptidasa despus de la adicin de compuestos orgnicos de bajo peso molecular por un tipo de raz artificial se ha informado anteriormente (Renella et al., 2007). Fosfatasas y peptidasas producidas por hongos micorrcicos probablemente contribuyen a la enzima mejorada actividades en la rizosfera, pero el patrn de estas actividades enzimticas tambin refleja la abundancia general de bacterias (por ejemplo, el aumento en la mayor parte del suelo del tratamiento anillado). En contraste, la actividad de las enzimas oxidativas involucrados en la degradacin de la lignina y la materia orgnica del suelo (fenoloxidasa y peroxidasa) fueron menores en la rizosfera que en la mayor parte del suelo (Fig. 3c y d). Esto puede explicarse por el hecho de que las enzimas oxidativas se cree que se produce por el aumento de K-estrategas lentos, principalmente saprotrophic hongos y algunos grupos especializados de bacterias (Bue et al., 2009), que tienen una situacin de desventaja competitiva frente a hongos micorrcicos y bacterias copiotrophic rpido crecimiento con fuentes de C de origen vegetal fcilmente asimilables. La reduccin en posibles actividades de las enzimas oxidativas en la rizosfera en comparacin a la mayor parte del suelo no se observ en las parcelas estranguladoras. Nuestros resultados por lo tanto, no sugieren un aumento de la descomposicin de humificada SOM por exudados de plantas ("priming"), como ha sido reportado por otros (Bottner et al, 1999;. Ekberg et al, 2007;. Kuzyakov, 2002). Sin embargo, aunque exudados de plantas han conducido a reduccin de las actividades de oxidativo enzimas, tambin se han acelerado las actividades de proteoltica enzimas en nuestro estudio, y por lo tanto pueden haber mejorado la degradacin de SOM fresco.

Resultados similares tambin se han reportado recientemente para las enzimas hidrolticas celulticas y otros (Kaiser et al., 2010b). Los altos niveles de N inorgnico en las parcelas estranguladoras aparentemente no hicieron afectar a la produccin de las enzimas oxidativas, contrariamente a los resultados de un estudio sobre los efectos de la alta NO3 disponibilidad de las enzimas oxidativas actividades en los suelos forestales (Waldrop y Zak, 2006), que inform disminucin de la produccin de fenoloxidasas por hongos de podredumbre blanca, pero aumento de la produccin por las bacterias o ascomicetos. La fuerte correlacin negativa de la actividad de las enzimas oxidativas a la abundancia de PLFAs hongos parece sorprendente a primera vista (Cuadro 2), pero est causado probablemente por el hecho de que se producen estos biomarcadores en tanto hongos micorrcicos y saprotrophic Si bien nuestros resultados revelaron efectos rizosfera claras sobre los procesos microbianos , composicin de la comunidad microbiana de la rizosfera difera ligeramente del suelo mayor en los controles ( ANOSIM R 0,083 , p = 0,19 ) . El tratamiento rodea , sin embargo , caus una estructura de la comunidad marcadamente alterado en el nivel de resolucin de PLFAs ( fig. 4 ) . Slo los efectos rizosfera pequeos sobre la composicin de la comunidad microbiana en suelos minerales que ya se ha informado de la hierba y los rboles rizosferas (Butler et al, 2003 ; . . Priha et al, 1999b ) . No se observaron diferencias significativas en la abundancia de grampositivas y bacterias Gram - negativas , a pesar de la abundancia relativa de las bacterias Gram negativas en la rizosfera tendan a ser ligeramente superior a la abundancia relativa de las bacterias Gram - positivas , mientras que en el suelo mayor que lo contrario era el caso ( datos no mostrados ) . Esto es consistente con la sugerencia de que las bacterias Gram negativas son ms frecuentes en la rizosfera , de preferencia creciente en planta lbil C , mientras que las bacterias Gram-positivas pueden ser dominante en la mayor parte del suelo ( Bird et al , en prensa ; . . Paterson et al , 2007 ; Treonis et al , 2004 ) . . La disminucin marcada en la abundancia de las bacterias Gram - positivas en suelos de la rizosfera de las parcelas anillado , que es el principal responsable de la fuerte cambio en la composicin de la comunidad , por lo tanto, es difcil de explicar (Fig. 5c ) . Dado que la reduccin en el suministro de C lbil es poco probable que sea la causa, otros efectos del tratamiento sobre las condiciones de anillado rizosfricas , tales como alteraciones en el suministro de oxgeno , pH y redox potencial como consecuencia de la reduccin de respiracin de las races o la absorcin de nutrientes por las plantas puede ser posibles explicaciones . Los datos sobre la biomasa de races finas (Kaiser et al. , 2010b ) no apuntan a un aumento de la mortalidad raz o dao de la membrana de las clulas radiculares cuatro meses despus de anillado , por lo que estos factores pueden ser ignorados . El aumento en la abundancia de PLFAs totales en la mayor parte del suelo del tratamiento anillado (Fig. 5a ) , que tambin es apoyada por mediciones de biomasa microbiana por el mtodo de cloroformo - fumigacin - extraccin ( datos no mostrados ) , pueden ser un efecto de la mejora del suministro de N inorgnico . Sin embargo , esto es probable que slo un efecto transitorio , ya que los resultados anteriores ( Kaiser et al . , 2010b ) mostr una reduccin de la biomasa microbiana por el tratamiento de anillamiento en la mayor parte de las estaciones.

Se encontr una reduccin del 28% de los hongos biomarcador 18:02 (w) 6,9 en la rizosfera de anillado como se esperaba (Fig. 5b), pero no hemos encontrado una reduccin de este biomarcador en la mayor parte del suelo como se describe en otro estudios de anillado (Hgberg et al., 2007), tal vez debido a una aumento de los hongos saprotrophic o debido a aspectos estacionales. La abundancia de este biomarcador hongos tambin no fue significativamente mayor en la rizosfera en comparacin con la mayor parte del suelo. Biomasa microbiana total estimado por PLFAs totales no fue significativamente mayor en la rizosfera (Fig. 5a), aunque los suelos rizosfera se consideran generalmente para ser enriquecido en biomasa microbiana en comparacin con el suelo mayor (Cheng y Coleman, 1990; Norton y Firestone, 1991). Los resultados de otro estudio, sin embargo, tambin mostraron una mayor biomasa microbiana C slo en rizosferas de abeto, pero no de pino y de abedul (Priha et al., 1999a). Nuestros datos pueden apuntar a una mayor actividad microbiana (estado de activacin) en la rizosfera a una biomasa similares, tal vez debido a una alta disponibilidad de de carbono y nutrientes fcilmente asimilables.

Mediante el uso de un nuevo enfoque, es decir, combinando el anlisis de la disponibilidad de recursos, los procesos microbianos y la estructura de la comunidad en la rizosfera del suelo con un experimento que rodea rbol, hemos sido capaces de demostrar que las tasas de mineralizacin de N y actividades enzimticas hidrolticas se han mejorado en la rizosfera por exudados de las races , probablemente, un efecto de la activacin microbiana por el aumento de la disponibilidad de recursos, mientras que las actividades de las enzimas oxidativas (implicada en la degradacin de la materia orgnica humificada del suelo y lignina) se redujeron. Por lo tanto, no hemos encontrado indicios de una inyeccin positiva efecto de los exudados de la raz sobre la degradacin de recalcitrante SOM en este estudio, sino ms bien el efecto contrario. Las diferencias en la actividad de las enzimas oxidativas y las tasas de nitrificacin entre suelo de la rizosfera y la mayor parte del suelo sugieren diferencias considerables en la composicin de la comunidad microbiana funcional, aunque las comunidades suelo de la rizosfera y difieren slo ligeramente mayor en el nivel de resolucin que hemos utilizado aqu (PLFAs). La reduccin de las exudaciones de raz por el anillado, por otra parte, condujo a fuertes cambios de la comunidad microbiana en la rizosfera.

Hongos dominantes en la rizosfera de plantas de t establecidos y su interaccin con las bacterias dominantes bajo condiciones in situ abstracto No se encontraron especies de Penicillium y Trichoderma a dominar la rizosfera de plantas de t establecidos en un estudio detallado llevado a cabo de diversas localidades de t que crecen en la India. Penicillium erythromellis, P. janthinellum, P. raistrickii, Trichoderma pseudokoningii y T. koningii resultaron estar estrechamente asociada a las

races de t. Si bien se observ fluctuacin estacional en el caso de Penicillium spp., La poblacin de Trichoderma spp. mostraron una menor variacin durante el ao. Ambos especies fueron sensibles a las bajas temperaturas. En general, se encontr que los hongos asociados con la rizosfera t a preferir un intervalo de temperaturas mesfilas (15 C a 35 C). Las especies dominantes de Penicillium y Trichoderma tambin exhibieron tolerancia a temperaturas ms bajas, es decir, de 5 a 10 C en placas de agar. La mayora de los hongos fueron capaces de crecer en una amplia gama de pH (de 4 a 12). La reduccin del pH del suelo en la rizosfera de plantas de t se correlacion positivamente con la edad de la selva y puede haber afectado el desarrollo de una determinada comunidad microbiana en la rizsfera.

Las poblaciones de las especies Penicillium y Trichoderma se correlaciona inversamente con la poblacin de dos bacterias de la rizosfera ms dominantes, Bacillus subtilis y B. mycoides. Se ha demostrado que dos especies de Bacillus que tiene actividad antagonista contra estos dos hongos bajo condiciones in vitro. El presente estudio demuestra la existencia de un antagonismo similar bajo condiciones in situ en la rizosfera de plantas de t establecidos. Key words: Penicillium Trichoderma Bacillus tea rhizosphere Indian Himalaya La rizosfera de plantas de t mayores y bien establecido exhibe varios rasgos caractersticos, (1) efecto rizosfera negativo, (2) una mayor actividad antagonista, (3) la reduccin del pH del suelo, y (4) el dominio de Bacillus spp. (Pandey y Palni 1996, 1997; Pandey et al. 1997). Mientras que el efecto rizosfera negativo fue ms pronunciado en el caso de las bacterias, los hongos fueron menos afectada y actinomicetos mostraron valores intermedios en trminos de la R: relacin S (Pandey y Palni 1996). En vista de la naturaleza de largo duracin de t, se espera que las comunidades microbianas en una tea rizosfera establecido que especficas como resultado de la competencia y las interacciones entre los diferentes contina comunidades microbianas presentes en la rizosfera. Las especies de Bacillus son conocidos por dominar la rizosfera de plantas de t establecidos (Pandey y Palni 1997), sino que tambin mostraron un fuerte antagonismo in vitro el comportamiento frente a una gama de hongos, incluyendo especies de Penicillium y Trichoderma, tambin aisladas de la rizosfera de plantas de t establecidos (Pandey et. al, 1997). Se han hecho esfuerzos para aislar e identificar los hongos asociados dominantes de las races de t de diferentes zonas de cultivo de t en la regin del Himalaya indio. Segn datos mensuales de ms de un ao, las correlaciones se han desarrollado entre las bacterias dominantes y hongos en la rizosfera de plantas de t establecidos para evaluar su interaccin, en condiciones in situ. Discusin Los resultados obtenidos de los anlisis de muestras de varios sitios son indicativos del desarrollo de una comunidad fngica especfica en la rizosfera de plantas de t establecidos. Dominancia de especies de Penicillium y Trichoderma parece ser el resultado de las interacciones entre los distintos factores, la planta, las comunidades

microbianas y los parmetros ambientales. La dominancia de ciertas especies y la supresin de otras especies, es probable que sea crtico en el caso de las plantas vivas largos, en los que los socios microbianos pueden pasar a travs de varias sucesiones. Adems, los lugares para este estudio estaban en la regin del Himalaya experimentar subtropicales de clima templado, esencialmente monznico en la naturaleza y que incluye algunos sitios que experimentan nevadas ocasionales. En un estudio reciente, llevado a cabo en los arbustos de t recin plantados en Bhimtal, se ha reportado la ocurrencia de 23 hongos, incluyendo slo una especie de Penicillium y ninguno de Trichoderma En general, las bacterias, actinomicetos y hongos poblaciones se ven favorecidas por el pH neutro, alcalino y cido, respectivamente (Alexander 1961). Races Tea muestran una tendencia para hacer que el suelo cido con la edad (Pandey y Palni 1997). Mientras que la reduccin del pH del suelo podra ser una de las razones posibles para la inhibicin de bacterias y actinomicetos poblaciones, esto tambin podra ser uno de los factores que favorecen el desarrollo de una poblacin de hongos relativamente ms grande alrededor de las races de t. Las correlaciones significativas se obtuvieron al comparar las poblaciones de bacterias y hongos dominantes registradas durante el estudio doce meses realizado en Banuri Tea Garden Experimental, Palampur. Las poblaciones bacterianas y fngicas dominantes fueron encontrados a ser inversamente correlacionados entre s (estadsticamente significativa). Esto parece ser el resultado de la intensa competencia entre las especies dominantes microbianas antagnicas, Bacillus, Penicillium, Trichoderma y Streptomyces (Pandey y Palni 1997, 1999). En un estudio anterior de un nmero de especies de Bacillus, aislada de la rizosfera de plantas de t establecidas resultaron ser fuertemente antagonista contra una gama de hongos (Pandey et. al, 1997). En el estudio citado, un nmero de rizosfera hongos, incluyendo especies de Penicillium y Trichoderma, se ensayaron frente a nueve especies de Bacillus, incluyendo B. subtilis y B. mycoides. Todas las cepas bacterianas y por hongos se obtuvieron originalmente de la rizosfera de plantas de t establecidos. Mientras que estos resultados se basaron en ensayos in vitro, la relacin inversa entre las poblaciones bacterianas y fngicas dominantes se han encontrado en el presente estudio parece apuntar hacia la existencia de un antagonismo similar bajo condiciones in situ. Importancia de Trichoderma sp. como un agente de biocontrol para controlar enfermedades de las races en los jardines de t ha sido descrito por Chandra Mouli (1999). Predominio de la Penicillium spp. ha informado en un estudio llevado a cabo a lo largo de un gradiente altitudinal en el norte de Inglaterra (altura entre 350 y 880 m; Widden 1987). La mayora de los aislados fngicos asociados con la rizosfera t mostraron una amplia gama de la temperatura y la tolerancia de pH. Estas propiedades pueden ser importantes para proporcionar el mejor "Adaptacin" y la supervivencia en la rizosfera. La mayora de los estudios relacionados con la rizosfera se han llevado a cabo en plantas de vida cortos (Starkey 1958; Rouatt y Katznelson 1961; Katznelson 1965; Rovira 1965, Curl y Truelove 1986; Rovira 1991). La rizosfera microbiologa de plantas vivas largos slo raramente ha sido estudiado. La actividad microbiana en la rizsfera t parece ser muy intenso y de carcter dinmico. La rizosfera t ha sido identificada como un sitio excelente para el aislamiento de agentes de control biolgico (Pandey et al 1997.); Aislamientos seleccionados ya han demostrado su valor como inoculantes eficientes para el

endurecimiento de cultivo de tejidos plantearon las plantas de t, as como para la promocin del crecimiento (Pandey et . otros, 2000).