Biotecnologia2010 Vol-14 No 3

Ao 2010 Volmen 14 Nmero BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 143No.
3 ISSN 0188-4786
MESA DIRECTIVA Dr. Alfredo Martnez Jimnez Presidente Dr. Gerardo Saucedo Castaeda Vice-Presidente Dr. Octavio Loera Corral Secretario Dr. Mauricio Trujillo Roldn Tesorero Dra. Romina Rodrguez Sanoja Subsecretaria Dr. Carlos Regalado Gonzlez Vocal Profesional M. en B. Mara Teresa Torres Mancera Vocal Estudiante
Dr. Sergio Snchez Esquivel Editor en Jefe Instituto de Investigaciones Biomdicas, UNAM Dr. Luis Bernardo Flores Cotera CINVESTAV Dr. Fernando Luis Garca Carreo CIBNOR Dr. Mariano Gutirrez Rojas UAM-I Dra. Romina Rodrguez Sanoja Instituto de Investigaciones Biomdicas, UNAM Dra. Sara Sols Pereira Instituto Tecnolgico de Mrida Dra. Elizabeth Langley McCarron Instituto Nacional de Cancerologa DISEO GRAFICO E IMAGEN
COORDINADOR EDITORIAL M. en C. Ofelia Edith Carren Rodrguez FORMACION EDITORIAL M. en C. Ofelia Edith Carren Rodrguez
Lic. Nayeli Quinto (SODIO NET) ADSCRIPCIONES Y PUBLICIDAD M. en C. Ofelia Edith Carren Rodrguez Tel: (55) 5849 5859 Email: smbiotec@yahoo.com.mx
COMIT EDITORIAL
ISSN 0188-4786, revista cuatrimestral publicada por la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera, A.C. incluida en PERIDICA, ndice de Revista Latinoamericanas en Ciencias (CICHUNAM). Certificado de Licitud de Ttulo en trmite y Certificado de Licitud de Contenido en trmite. Reserva de derechos de Ttulo04-1999-082516265000-101. Los Conceptos que en ella aparecen son responsabilidad exclusiva de los autores. Se prohbe la reproduccin total o parcial de su contenido sin previa autorizacin por escrito del Comit editorial. Toda correspondencia deber enviarse a Km. 23.5 Carretera Federal Mxico-Cuernavaca, Av. Cipreses s/n, Col. San Andrs Totoltepec, C.P. 14400, Del. Tlalpan, Mxico, D.F. Tiraje 500 ejemplares.
BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 3
Editorial Las Futuras Refineras Estn Basadas en Procesos Biotecnolgicos Dr. Alfredo Martnez Jimnez 4 Instrucciones para autores 6
ARTCULOS Remocin de Cromo (VI) en Solucin Acuosa por la Biomasa de la Cscara de Tamarindo (Tamarindus indica)
Ismael Acosta, Viviana Lpez, Elida Coronado, Juan F. Crdenas y Vctor M. Martnez
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Una Vista Integral de la Sntesis de Astaxantina en Phaffia rhodozyma Cipriano Chvez-Cabrera, Zoila R. Flores-Bustamante, Luis B. Flores-Cotera 24
EDITORIAL
Las Futuras Refineras Estn Basadas en Procesos Biotecnolgicos

La refinera como la conocemos en la actualidad constituye una serie de procesos industriales en donde los recursos denominados fsiles son transformados en diversos combustibles lquidos (entre otros: gasolina; diesel y turbosina), gases ligeros (metano; etano; propano; y butano), aceites minerales, asfaltos, etileno, propileno, azufre, sulfato de amonio e hidrgeno, entre otros. Estos
materiales constituyen la mayor parte de la oferta energtica que se utiliza para obtener la gran mayora de bienes y servicios que la humanidad emplea, adems de ser la fuente de materia prima principal para la obtencin de una amplia variedad de polmeros incluyendo plsticos como el polietileno. Estos recursos fsiles se formaron a partir de restos de biomasa vegetal y animal, tanto marina como terrestre, que se acumul en pocas geolgicas y por accin de la naturaleza dieron origen, p. ej. a lo que hoy conocemos como petrleo. En este proceso la fotosntesis jug un papel primordial para fijar la energa proveniente de la radiacin solar y para transformar el dixido de carbono y carbonatos en masa microbiana y vegetal. En este sentido los procesos biogeolgicos permitieron acumular y confinar una inmensa cantidad de carbono en el subsuelo. Sin embargo, la refinera y el uso de sus productos, principalmente los combustibles fsiles y los plsticos, son desde el siglo pasado, una fuente de transformacin del entorno terrestre con impactos ambientales que se circunscriben no solo a una zona localizada, sino a cambios globales como el efecto invernadero, que ha y seguir modificando las condiciones atmosfricas y climticas del planeta. Ests lneas permiten concluir que tanto los combustibles fsiles como los plsticos son primordialmente de origen biolgico, con el principal aporte de haber fijado una cantidad enorme de carbono y con el apoyo de la naturaleza haber incrementado su densidad energtica a travs de cientos de millones de aos. En aproximadamente un siglo los seres humanos hemos extrado del subsuelo estos recursos fsiles, convirtindolos en una cantidad impresionante de contaminantes y dixido de carbono. Por otro lado, muchos de los desarrollos tecnolgicos se han basado en copiar a la naturaleza y esta es la base que sustenta a las biorefineras; es decir, fijar energa solar y dixido de carbono para generar biomasa para ser cosechada y transformada en una amplia variedad de productos mediante procesos biotecnolgicos, con ventajas adicionales, entre las cuales destacan las que permiten mitigar las emisiones de dixido de carbono y otra gama de contaminantes al medio ambiente. La produccin de etanol carburante, vapor-calor para procesos industriales y energa elctrica a partir de la caa de azcar constituye un ejemplo de integracin de procesos biotecnolgicos y termoqumicos para constituir una biorefinera sustentable, la cual permite reducir las emisiones de gases efecto invernadero, genera empleos (tanto en el sector agrcola, de transformacin y comercio) y constituye la base de desarrollo de la economa de Brasil. Adicionalmente, desde el descubrimiento de fuego la bioenerga ha jugado un papel central en el desarrollo de la humanidad. Esta ha sido participe de los
EDITORIAL
grandes cambios en la historia de la humanidad. Tambin ahora tienen un papel preponderante a nivel mundial: en zonas rurales donde la biomasa (lignocelulosa) se utiliza para generar calor o en la industria para generar calor y electricidad. En varias regiones del mundo existe una amplia variedad de material lignocelulsico, que no compite con la produccin de alimentos y que con biotecnologas y bioingenieras de vanguardia pueden ser convertidos en etanol carburante, energa para proceso, electricidad y compuestos fenlicos precursores de molculas de alto valor agregado. La biomasa, que se puede obtener de forma sustentable y estas biotecnologas pueden llegar a constituir la base de una amplia gama de productos como combustibles y solventes (etanol, butanol, propanol, metano, biodiesel, biogasolina, bioqueroseno y bioelectricidad), plsticos cien por ciento biodegradables (polilactatos y polihidroxibutiratos, entre otros), molculas base para polmeros (propanodiol, etanol para general polietileno), bases para resinas (furfural e hidroximetilfurfural), molculas fenlicas, cidos orgnicos precursores de polmeros (actico, pirvico, lctico y succnico entre otros), pigmentos, detergentes y fertilizantes. Todos estos compuestos, con el aporte de diversas ramas de la biotecnologa y bioingeniera pueden ser producidos de forma sustentable reduciendo de forma sustancial las emisiones de contaminantes y de dixido de carbono. La implementacin de estas tecnologas depender en gran medida de generacin de conocimiento bsico y de innovacin en la biotecnologa moderna.
Dr. Alfredo Martnez Jimnez

Investigador Titular B de Tiempo Completo Departamento de Ingeniera Celular y Biocatlisis Instituto de Biotecnologa Universidad Nacional Autnoma de Mxico Presidente Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera 2010 - 2012 Correo electrnico: alfredo@ibt.unam.mx
Gua de Autores
La revista puede recibir trabajos de investigacin original as como de revisin en los campos de la biotecnologa y bioingeniera. Todos los manuscritos sern sujetos a revisin por al menos dos miembros del Comit Editorial y debern contar con una recomendacin de aceptacin para ser publicados. Los idiomas de la revista son el Espaol y el Ingls. Los trabajos se escribirn en hoja tamao carta (21.6 cm x 27.6 cm). Los mrgenes aplicados a todo el manuscrito sern de 2.5 cm para los extremos superior e inferior, as como 3 cm de cada lado. Las pginas debern estar numeradas en la parte inferior y central de cada hoja. Se recomienda que los trabajos completos tengan un mximo de 25 pginas, escritas con un interlineado de 1.5 renglones, incluyendo las tablas y figuras. Las publicaciones de trabajos originales y revisiones en la revista Biotecnologa estn exentas de costo para los autores. Cuando corresponda, se recomienda el uso de abreviaturas para referirse a unidades de tiempo (h, min, s), de volumen (l, ml, l), de peso (kg, g, mg, g), DNA, RNA y otras comnmente aceptadas en la literatura cientfica. Los trabajos de investigacin original pueden tocar cualquiera de los diversos campos que cultivan la biotecnologa y la bioingeniera, desde sus aspectos fundamentales hasta las aplicaciones de los mismos, incluyendo: microbiologa, bioqumica y biologa molecular, procesos y proyectos, as como biotecnologa marina y biotecnologa aplicada a la salud, alimentos, agricultura, veterinaria, enzimas y ambiente. Los trabajos de investigacin original sern divididos en las siguientes secciones: Introduccin, Materiales y mtodos, Resultados, Discusin, Referencias y Agradecimientos. Las secciones de Resultados y Discusin pueden presentarse combinadas. Los trabajos de revisin incluirn el tema y subtemas que a juicio de los autores sean necesarios para la mejor presentacin de la informacin. Estos trabajos pueden cubrir los siguientes contenidos: 1. Qu es y para qu sirve la Biotecnologa?. Es decir: descripciones que ilustren y divulguen los distintos campos de la biotecnologa, sus alcances y limitaciones, su historia y sus perspectivas. 2. Las fronteras de la biotecnologa: revisiones de nuevos campos o nuevas aplicaciones de la biotecnologa. Por ejemplo: las perspectivas del uso de los genomas para el desarrollo de nuevas drogas o para el tratamiento de enfermedades metablicas. Las perspectivas de la genmica (estudio sistemtico de los genes y sus aplicaciones), la protemica (prediccin de la expresin de los genes en protenas funcionales) y la fenmica (prediccin de fenotipos o conductas de los organismos, en base a sus genes y a sus protenas). El uso de la ingeniera gentica para hacer
ingeniera metablica. Los nuevos tipos de reactores biolgicos y los fenmenos de transporte implicados. Los nuevos esquemas de reaccin, separacin y control en procesos biotecnolgicos. 3. Aplicaciones de la Biotecnologa para resolver problemas o atender necesidades de la sociedad, con especial atencin a sus aplicaciones ya vigentes en Mxico. Esta seccin ser dedicada a una empresa o institucin (pblica o privada) que desee difundir los logros obtenidos en algn campo de la biotecnologa. Por ejemplo: empresas productoras de antibiticos o productos biolgicos, empresas de ingeniera ambiental que usen procesos biotecnolgicos, empresas agropecuarias, forestales o de acuacultura que usen tecnologas biolgicas avanzadas, o empresas de transformacin de alimentos que utilicen enzimas, cultivos de microorganismos, etc. Esta lista es indicativa pero no exhaustiva. 4. Problemas de bioseguridad, biotica y biodiversidad relacionados con las aplicaciones de la biotecnologa a la sociedad. Por ejemplo: anlisis y comentarios sobre los debates acerca del uso de semillas transgnicas, los problemas de conservacin y explotacin de la biodiversidad mediante la biotecnologa, los riesgos del uso de organismos transgnicos en diversos campos de la industria, los problemas de bioseguridad del uso de antibiticos y otros productos biotecnolgicos. 5. La educacin, la cultura y la difusin tecnolgica en relacin con la biotecnologa. Por ejemplo: comentarios de planes y programas, de estilos y necesidades de la enseanza, del enfoque interdisciplinario, en carreras o planes de estudio directamente ligados con la biotecnologa. Tambin necesidades y modalidades sobre programas de extensin educativa para la industria, para el pblico consumidor o para grupos selectos de personas interesadas en la biotecnologa (polticos, funcionarios de empresas, lderes de opinin). El uso de la informtica en la difusin de la biotecnologa, y en general, el anlisis de necesidades, mtodos y alternativas para difundir los conocimientos de la biotecnologa. 6. Oportunidades y propuestas para mejorar la cooperacin y el desarrollo biotecnolgicos. Por ejemplo: Anlisis de las oportunidades vigentes de intercambio acadmico o comercial en biotecnologa. Propuestas de nuevas formas de cooperacin entre los sectores de investigacin y la industria biotecnolgica. Anlisis y propuestas del uso ptimo de recursos humanos, financieros o materiales para mejorar la cooperacin o el desarrollo de la biotecnologa. En esta seccin se dar espacio a los anlisis, crticas o propuestas de los aspectos legales y fiscales que afecten e incluso puedan mejorar el desarrollo de la biotecnologa en Mxico. Tales como: la propiedad industrial, el rgimen fiscal de las empresas, el costo del desarrollo biotecnolgico y los subsidios o estmulos econmicos para el desarrollo de la biotecnologa. Tanto los trabajos de investigacin original como las revisiones debern apegarse al siguiente formato: 1. El ttulo del manuscrito ser puesto en negritas con letra Arial o equivalente tamao 14. El ttulo deber estar centrado.
2. El nombre de los autores ocupar los siguientes renglones escribiendo el nombre y primer apellido de cada participante. Se usar letra Arial o equivalente tamao 12. Los nombres de los participantes debern estar centrados, sealando con un asterisco el autor responsable de la publicacin. En el siguiente rengln con letra itlica Arial del mismo tamao, se incluir la direccin postal de la institucin de adscripcin de los autores, as como el e-mail del autor corresponsal. 3. Se deber aadir un Resumen de no ms de 250 palabras en Espaol y un Abstract en Ingls de tamao similar. 4. Se incluirn entre 3 a 6 Palabras clave: que permitan clasificar el artculo en una base de datos. Estas palabras debern de incluirse en Espaol y en Ingls (Key words:). 5. Si el texto inicia con el nombre de algn subtema, ste de pondr como primera lnea en cursivas con letra Arial o equivalente tamao 10. Despus en el siguiente rengln se iniciar el texto descriptivo usando letra Arial o equivalente tamao 10. El texto deber ser escrito con un interlineado de 1.5 renglones. Se deber dejar un espacio de un rengln al inicio de una seccin o subtema nuevo. Los gneros y especies debern escribirse en letras itlicas. 6. Las figuras debern numerarse con arbigos, correlativamente en orden de aparicin en el texto. No se integrarn al texto, sino al final del manuscrito. No obstante, para facilitar el trabajo de edicin, se recomienda indicar la ubicacin de las mismas en el momento en que son mencionadas por primera vez en el texto. Las figuras deben incluir un breve ttulo explicativo en la parte inferior de la misma. Si es necesario incluir fotos, stas se debern designar como figuras. La impresin de las figuras e imgenes se har en blanco y negro, por lo que se recomienda que muestren un buen contraste, en especial las figuras con varias lneas. Segn el orden de aparicin en el texto, las tablas tambin se numerarn con arbigos ubicados en la parte superior de las mismas e incluirn un breve ttulo explicativo. Las notas en las tablas debern ser indicadas con letras minsculas en superndice. La ubicacin de las tablas ser sealada en el texto pero se anexarn en hojas separadas despus de las Referencias. 7. La informacin dada como referencias bibliogrficas deber permitir a los lectores llegar con facilidad a tal fuente de informacin original, si ello fuera necesario. En el texto del trabajo, las referencias se citan por autor y ao entre parntesis redondos. Por ejemplo: Martnez & Garca (1999) han demostrado que..., o bien, Datos recientes (Martnez & Garca, 1999) han demostrado que.... Si la cita posee varios autores se escribira como sigue: Gutirrez et al. (2003), han demostrado. O bien: Datos recientes (Gutirrez et al., 2003) han mostrado Si la cita es es una pgina de Internet, sta deber ponerse completa entre parntesis directamente en el texto donde se mencione. La lista de Referencias se deber escribir con el mismo tipo de letra del texto principal (Arial tamao 10) de acuerdo al siguiente formato:
Para revistas: Garca-Carreo F, Cota K & Navarrete del Toro MA (2008) Phenoloxidase activity of hemocyanin in whiteleg shrimp, Penaeus vannamei: conversion, characterization of catalytic properties, and role in postmortem melanosis. J. Agric. Food Chem. 56: 6454-6459. Para libros y captulos de libros: (Libro) Ullrich M (2009) Bacterial Polysaccharides: Current Innovations and Future Trends. Horizon Scientific Press, Norwich. (Captulo de libro) Snchez S & Demain AL (2009) Metabolic regulation and overproduction of primary metabolites. In: Encyclopedia of Industrial Biotechnology. Bioprocess, Bioseparation, and Cell Technology (EIB). Flickinger MC (ed). John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, NJ. pp. 396-458. Para patentes: Fenical WH, Jensen PR & Kwon HC (2009) Polyol macrolide antitumor-antibiotics from the marine actinomycete strain CNQ140. US patent 7,521,414. Para congresos y reuniones: Se aceptarn un mximo de dos citas de este tipo. Reyes N, Domnguez RM, Islas I & Solis S (2007) Induccin diferencial por pH y temperatura del Complejo pectinoltico producido por clulas inmovilizadas de Aspergillus HL. XII Congreso Nacional de Biotecnologa y Bioingeniera. Morelia Mich. Mxico. OIII-12. Para citas provenientes de internet: Se aceptar un mximo de dos citas de este tipo. Van Deuren J, Wang Z & Ledbetter J (1997) Remediation Technologies Screening Matrix and Reference Guide. 3 Ed. Technology Innovation Office, EPA. Disponible en: http://www.epa.gov/tio/ remed.htm. Revistas electrnicas: Sun J, Lu X, Rinas U, & Zeng AP (2007) Metabolic peculiarities of Aspergillus niger disclosed by comparative metabolic genomics. Genome Biol. 8: R182.
Para tesis de pre y posgrado: Crdenas C (2009) Evaluacin del uso biotecnolgico de la semilla de Ditaxis heterantha para la Produccin de safranal. Tesis de Maestra en Ciencias Bioqumicas. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Mxico D.F. pp. 1-78.
Cada autor es responsable de la precisin de las citas que emplea. Las citas de internet, congresos y reuniones, debern evitarse al mximo. Una vez que ha sido revisado y aceptado su trabajo, los autores debern enviar una carta de cesin de los Derechos de Autor, de manera que la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera pueda hacer uso del artculo aceptado, o parte de l, con fines de divulgacin y difusin de la actividad cientfica y tecnolgica. En ningn caso, dichos derechos afectan la propiedad intelectual que es propia de los autores, para usar la totalidad o parte de ese artculo con fines no lucrativos. Los trabajos solamente se reciben va correo electrnico en la direccin smbiotec@yahoo.com.mx Al momento de recibirlo, se enviar un acuse de recibo al autor corresponsal, por lo que se pide incluir una direccin de correo electrnico para este fin, as como para mantener comunicacin con el editor sobre la evolucin de la revisin y sobre la aceptacin del mismo. Una vez aceptados, los trabajos son editados y enviados a los autores para su correccin. En esta condicin no se permitirn cambios sustanciales en el contenido de los mismos sin la aprobacin del editor en jefe. Una vez aprobada la prueba, el trabajo se publicar en lnea y podr ser consultado en la pgina de la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera AC http://www.smbb.com.mx/ La publicacin en lnea preceder a la publicacin impresa.
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Remocin de Cromo (VI) en Solucin Acuosa por la Biomasa de la Cscara de Tamarindo (Tamarindus indica)
Ismael Acosta*1, Viviana Lpez1, Elida Coronado1, Juan F. Crdenas1 y Vctor M. Martnez2
Laboratorio de Micologa Experimental. Centro de Investigacin y de Estudios de Posgrado. Facultad de Ciencias Qumicas. UASLP. Av. Dr. Manuel Nava No. 6. Zona Universitaria. San Luis Potos, S.L.P. Mxico. C.P. 78320. Tel:
014448262440, ext. 505. 2rea Acadmica de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Instituto de Ciencias Agropecuarias. Universidad Autnoma del Estado de Hidalgo. Mxico. email: iacosta@uaslp.mx
RESUMEN El cromo es un elemento esencial para hombres y animales, pero concentraciones elevadas del mismo (15 g/L en agua de ros y 0.10 mg /L en agua potable) resultan txicas en ellos. Actualmente se ha establecido que diversos compuestos de cromo, en forma de xidos, cromatos y dicromatos, son contaminantes ambientales presentes en agua, suelos y efluentes de industrias, debido a que dicho metal es ampliamente utilizado en distintas actividades manufactureras, tales como cromado electroltico, fabricacin de explosivos, curtido de pieles, aleacin de metales, fabricacin de colorantes y pigmentos, etc. Se han utilizado materiales de bajo costo, para la eliminacin y/o recuperacin de metales pesados de efluentes industriales contaminados, entre los que se encuentran: cscaras de avellana, mandarina y/o naranja, por lo que es de inters analizar otros materiales baratos para eliminar el metal de aguas y suelos contaminados. Debido a esto se estudi la capacidad de remocin de Cromo (VI) en solucin por cscara de tamarindo, determinando la concentracin del metal por el mtodo de la Difenilcarbazida, encontrando que la remocin total del metal (50 mg/L) ocurre a los 30 minutos, a pH de 1.0 y 28C. Con respecto a la temperatura, la ms alta remocin se observ a 60C, pues a los 70 minutos, el metal (1 g/L) se remueve completamente. A las concentraciones de Cr (VI) analizadas, la cscara de tamarindo, mostr gran capacidad de remocin, tambin remueve eficientemente el metal in situ, (94.65 % de remocin, 6 das de incubacin, 5 g de biomasa), y despus de 1h de incubacin. La biomasa estudiada reduce 1.0 g de Cr (VI) con la produccin simultnea de Cr (III), por lo que puede utilizarse para eliminarlo de aguas residuales industriales. Palabras clave: Cromo (VI), aguas residuales, Tamarindo, remocin de metales.
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ABSTRACT Chromium is an essential element for human being and animals, but in high concentration is considered toxic: 15 g/L in river water and 0.10 mg /L in potable water. It is now established that various chromium compounds in the form of oxides, chromates and dichromate, are environmental pollutants present in water, soils and effluents from industries, because this metal is widely used in various manufacturing activities, such as electrolytic chromium, explosives manufacturing, leather tanning, metal alloys, manufacture of dyes and pigments, etc. Low cost materials have been used for disposal and/or recovery of heavy metals from contaminated industrial effluents, some of them are: hazelnut shell, tangerine or orange peelings, so it results of interest to analyze another inexpensive materials to eliminate the metal from contaminated soil and water. We studied the removal capacity of Chromium (VI) in solution by the tamarinds husk, using the diphenylcarbazide method to evaluate the metal concentration. So, the highest biosorption with total removal of metal (50 mg/L) occurs within 30 minutes, at pH of 1, and 28 C. According to temperature, the highest removal was observed at 60 C, in 70 minutes, when the metal (1 g / L) is completely adsorbed. At the concentrations of Cr (VI) analyzed, tamarind husk, showed excellent results in removing, too removes efficiently the metal in situ (94.65% removal, 6 days of incubation, 5 g of biomass), and after of 1 hour of incubation the studied biomass reduces 1.0 g of Cr (VI) with the simultaneous production of Cr (III), so it can be used to eliminate it from industrial wastewater. Key words: Chromium (VI), wastewater, tamarinds, metals removal.
INTRODUCCIN Actualmente se ha establecido que
et al., 1995). En presencia de materia orgnica, el Cr (VI) en solucin es reducido a Cr (III); sin embargo, altas concentraciones del in en estado hexavalente pueden sobrepasar esta capacidad de reduccin, lo que impedira su adecuada eliminacin
diversos compuestos de cromo, en forma de xidos, cromatos y dicromatos, son
contaminantes ambientales presentes en agua, suelos y efluentes de industrias, debido a que dicho metal es ampliamente utilizado en distintas actividades manufactureras, tales como cromado electroltico, fabricacin de explosivos, curtido de pieles, aleacin de metales, fabricacin de colorantes y
(Cervantes et al., 2001). Pese a que el cromo es un elemento esencial para animales, altas concentraciones del metal (15 g/L en agua de ros y 0.10 mg /L en agua potable) resultan txicos. En las aguas residuales, el Cr (VI), se encuentra en solucin como CrO42- (Cotton & Wilkinson, 1980), puede removrsele por reduccin, precipitacin qumica, adsorcin e intercambio inico, y actualmente, el proceso ms utilizado es la adicin de un agente reductor que convierta
pigmentos, etc. El cromo se encuentra presente en agua y suelo principalmente en dos estados de oxidacin: Cr (III) o Cr (VI), aunque tambin puede encontrarse como xido de cromo, sulfato de cromo, trixido de cromo, cido crmico y dicromato (Zouboulis
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el Cr (VI) a Cr (III) y posteriormente se le precipita con soluciones bsicas a Cr (OH)3 (Cervantes et al., 2001). Recientemente, se ha estudiado el
anterior el objetivo de este trabajo fue estudiar la capacidad de remocin y/o reduccin de Cromo (VI) en solucin acuosa por la biomasa de la cscara de Tamarindo. MATERIALES Y MTODOS Bioadsorbente utilizado La cscara de Tamarindo se obtuvo a partir de los frutos recolectados entre los meses de noviembre-marzo de 2009, del mercado Repblica de la ciudad de San Luis Potos, S.L.P., se Mxico. lav 72 La h cscara con de
aislamiento de microorganismos resistentes y su capacidad de remocin y/o reduccin de Cr (VI), a partir de sitios contaminados con el metal, como la bacteria Staphylococcus saprophyticus (Ilhan et al., 2004), las
levaduras Candida sp. (Guillen-Jimnez et al., 2008), et Candida al., maltosa y (Ramrezhongos
Ramrez
2004),
los
filamentosos Penicillium sp. (Acevedo-Aguilar et al., 2008), Trichoderma inhamatum
Tamarindo
agua
tridesionizada en agitacin constante, con cambios del agua cada 12 h. Posteriormente, se hirvi 1 hora, para eliminar los restos del fruto, y se sec a 80oC, durante 12 h en estufa bacteriolgica, se moli en licuadora y se guard en frascos mbar hasta su uso.
(Morales-Barrera & Cristiani-Urbina, 2008) y Aspergillus niger (Khambhaty et al., 2009). Por otro lado, tambin se han utilizado materiales de desecho, como residuos
industriales agrcolas o urbanos para la eliminacin y/o recuperacin de metales pesados de efluentes industriales
Soluciones de Cr (VI) Se trabajo con 100 mL de una solucin de 100 mg/L de concentracin de Cr (VI) obtenida por dilucin de una solucin patrn de 1.0 g/L preparada en agua tridesionizada a partir de K2CrO4. Se ajust el pH de la dilucin a analizar con HNO3 1 M y/o NaOH 1 M, antes de adicionarla a la biomasa celular.
contaminados, entre los que se encuentran: residuos de manzana (Lee et al., 1998), corteza de rbol (Sarin & Pant, 2006), cscara de avellana (Cimino et al., 2000), cscara de mandarina y naranja (Pavan et al., 2006; Prez-Marn et al., 2007), por lo que es de gran inters analizar otros materiales de desecho y por lo tanto econmicos, para tratar de eliminar el Cromo (VI) de aguas y suelos contaminados, as como la biorremediacin de los mismos, como el Tamarindo (Tamarindus indica), del cual se ha descrito su capacidad de
Estudios de remocin y reduccin 1.0 g de la cscara de Tamarindo (previamente esterilizada a 15 libras y 120oC, en matraces Erlenmeyer de 250 mL) se mezcl con 100 mL de una solucin de 100 mg/L de Cr (VI), (a diferentes valores de pH, temperaturas y concentraciones del metal) y se incubaron a 28C y 100 rpm, tomando a diferentes tiempos, alcuotas de 5 mL cada
bioadsorcin de Cromo (VI) utilizando las semillas (Agarwal et al., 2006), y la cscara tratada con HCl y cido oxlico (Popur et al., 2007), con resultados satisfactorios. Por lo
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una, las cuales se centrifugaron a 3000 rpm (5 min), y al sobrenadante respectivo se le determin la concentracin de Cr (VI) en solucin, utilizando el mtodo colorimtrico de la Difenilcarbazida (desarrollo de
obtenida de una tina de lavado de una cromadora de Celaya, Gto. Mxico, y se les aadi agua tridesionizada a un volumen final de 100 mL. La mezcla de tierra contaminada y la biomasa se incub a 28oC con agitacin constante (100 rpm), y a diferentes intervalos de tiempo se le
coloracin rosa violeta), (Greenberg et al., 1998), el Cr (III) por el del Cromazurol S (Pantaler & Pulyaeva, 1985) y el Cr total por Espectrofotometra de Absorcin Atmica (Greenberg et al. 1998). Todos los
determin la concentracin de Cromo (VI) en el sobrenadante.
experimentos se realizaron un mnimo de 3 veces y por triplicado.
RESULTADOS Y DISCUSIN En este trabajo, se encontr que la biomasa de la cscara de Tamarindo
Ensayos de biorremediacin A matraces Erlenmeyer de 250 mL conteniendo 5 g de la cscara de Tamarindo, se les agreg 20 g de tierra contaminada con aproximadamente 297 mg Cr (VI)/g de tierra,
remueve eficientemente y a tiempos cortos 50 mg/L de Cromo (VI) en solucin, pues a los 30 min 1 g de biomasa remueve el 100% del metal (Fig. 1).
Fig. 1. Efecto del tiempo de incubacin y del pH inicial sobre la remocin de Cromo (VI) por la cscara de tamarindo (1 g de biomasa, 50 mg/L Cr (VI), 28C, 100 rpm).
La literatura (Prez-Marn et al., 2007) reporta un tiempo ptimo de remocin de plomo de 60 min utilizando cscara de
naranja, y de 2 h para la remocin de Cromo (VI) por la corteza de eucalipto (Sarn & Pant, 2006). Cabe mencionar que el tiempo de
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remocin ptimo encontrado en este trabajo es menor a lo reportado por Agarwal et al. (2006) y Popuri et al. (2007) quienes establecen tiempos de 180 y 120 min, para las semillas y la cscara de tamarindo tratada con cido oxlico, respectivamente. Cambios en la permeabilidad, de origen desconocido, podran explicar en parte las diferencias encontradas en el tiempo de incubacin, proporcionando mayor o menor exposicin de los grupos funcionales de la pared celular de la biomasa analizada (Kratochvil & Volesky, 1998). Con respecto a la influencia del pH inicial sobre la eficiencia de remocin se encontr que la mayor actividad se evidenci a pH 1.0 +/-0.2, pues a los 30 min se remueve el 100% del metal (Fig. 1). Para las biomasas naturales, la mayora de los autores reportan un pH ptimo de 2.0 como: semillas de tamarindo (Agarwal et al., 2006), la corteza de eucalipto (Sarn & Pant, 2006); bagazo y pulpa de caa de azcar (Sharma & Foster,
1994), fibras de coco (Huang & Wu, 1977) y lana (Dakiki et al., 2002), y un pH de 3.0 para la cscara de tamarindo tratada con cido oxlico (Popur et al., 2007). El Cromo (VI) se encuentra como HCrO4-, Cr2O72-, CrO42-, Cr4O132-, Cr3O102- (Rollinson, 1973). Una baja en el pH causa la protonacin de la superficie del adsorbente, lo que induce una fuerte atraccin por los iones Cromo (VI) de la solucin cargados negativamente, por lo que la bioadsorcin incrementa al aumentar la acidez de la solucin. Sin embargo, cuando el pH aumenta, se incrementa
-
la
concentracin de iones OH , induciendo cambios en la superficie del adsorbente, impidiendo la bioadsorcin de los iones Cromo (VI) cargados negativamente, lo cual disminuye la adsorcin del metal a esos valores de pH. Con respecto a la temperatura, la ms alta remocin se observ a 60C, pues a los 20 min se remueve el 100% de Cromo (VI) en solucin (100 mg/L) (Fig. 2),
Fig. 2. Efecto de la temperatura de incubacin sobre la remocin de cromo (VI) por la cscara de tamarindo (1 g de biomasa, 100 mg/L Cr (VI), pH= 1.0, 100 rpm).
15
resultados que son coincidentes con los de Agarwal et al., (2006) con un 98% de remocin a 58C y 180 min., con los de Park et al., (2005) para la semilla de tamarindo, quienes la observaron a 45 C y 24 h, y con los de Leyva-Ramos et al., (2005) para la remocin de cadmio (II) con olote de maz (40C y 5 das). El incremento en la temperatura, aumenta la velocidad de el la por
o
incrementar la exposicin de los grupos funcionales que reaccionan con el mismo (Wittbrodt & Palmer, 1996). Por otra parte, a bajas concentraciones del metal (100 y 200 mg/L) y mayor temperatura, la biomasa estudiada, mostr las mejores respuestas de remocin,
adsorbiendo el 100% a los
20 y 30 min, 1000 mg/L
respectivamente, mientras que
remocin de Cromo (VI) y disminuye tiempo completa de contacto remocin requerido del para
del metal se remueven a los 70 min, a 60C, mientras que a 28C fue de 65, 75 y 330 min, respectivamente (Fig. 3 A y B).
metal,
Fig. 3. Efecto de la concentracin de cromo (VI) sobre la remocin del mismo a 60C (A) y 28C (B), utilizando 1 g de biomasa a pH= 1.0 y 100 rpm.
16
Algunos autores (Bai & Abraham, 2001), sostienen que la cantidad de metal
respecto a las otras biomasas utilizadas, la mayora de los autores reportan menores eficiencias de remocin del metal, por ejemplo: 45 mg/L por la corteza de eucalipto (Sarn & Pant, 2006); 13.4 y 17.2 mg/L por bagazo y pulpa de caa de azcar (Sharma & Foster, 1994), 29 mg/L por fibras de coco (Huang & Wu, 1977), 8.66 mg/L por la lana (Dakiki et al., 2002). Al aumentar la cantidad de biomasa, tambin se incrementa la remocin de Cromo (VI) en solucin (Fig. 4),
eliminado por las biomasas de diferentes microorganismos, tales como Mucor hiemalis y Rhizopus nigricans aumenta en proporcin directa con el incremento de la concentracin del in metlico en solucin. De nuevo se encuentran discrepancias con los resultados de este trabajo, debido a que la biomasa utilizada en el estudio mostr la mayor capacidad de remocin a bajas
concentraciones (50, 100 y 200 mg/L). Con
Fig. 4. Efecto de diferentes concentraciones de biomasa sobre la remocin de 1.0 g/L de cromo (VI) (28C, pH= 1.0, 100 rpm).
debido a que hay ms sitios de bioadsorcin del metal, pues la cantidad de bioadsorbente aadido determina el nmero de sitios de unin disponibles para la bioadsorcin del mismo (Cervantes et al., 2001). Resultados similares se han reportado para R. nigricans, aunque stos ltimos con 10 g de biomasa (Bai y Abraham, 2001), pero son diferentes a lo reportado por Zubair et al., (2008), para la biomasa de los desechos de la mandarina (gabazo), quienes reportan una
concentracin ptima de biomasa de 100 mg/L. Por otro lado, de los reportes sobre y de
aplicaciones
biomasas para
naturales estudios
microorganismos
biorremediacin de suelos contaminados con cromato son escasos, como el empleo de bacterias no identificadas, nativas del sitio contaminado, las cuales se utilizaron en biorreactores para tratar suelo contaminado con el metal (Jeyasingh & Philip, 2004); 17
bacterias
reductoras nativas
de de
Cr
(VI) un
no sitio
la biomasa fngica, disminuye totalmente la concentracin de Cr (VI) de la muestra de suelo contaminado (Crdenas-Gonzlez & Acosta-Rodrguez, 2010). Por lo anterior, se realiz un ensayo de biorremediacin con tierra contaminada con aproximadamente 297 mg Cromo (VI)/g de tierra, obtenida de una tina de lavado de una cromadora de Celaya, Gto., observando que a los 6 das de incubacin la cscara de tamarindo, remueve el metal en un 94.65 %, lo cual coincide con los reportes de la literatura con bacterias, hongos y levaduras aislados de sitios
identificadas,
contaminado, en combinacin con el hongo Ganoderma lucidum (Krishna & Philip, 2005) y la adicin de triptona de soya a suelo adicionado de 1000 mg/L de Cromo (VI), lo cual incrementa la reduccin del in, debido a la accin de microorganismos presentes en el suelo, aunque tal accin no es observada en suelo con mayores concentraciones
(10,000 mg/L) de Cromo (VI) (Tokunaga et al., 2003) y el posible uso de una cepa de Paecilomyces sp para eliminarlo de desechos industriales, adaptando en un ensayo de
contaminados con el mismo metal como: Pseudomonas sp (Maclean & Beveridge, 2001), Arthrobacter rhombi (Elangovan et al., 2010), C. maltosa (Ramrez-Ramrez et al., 2004), Aspergillus sp (Acevedo-Aguilar et al., 2006), y A. niger (Khambhaty et al., 2009) Fig.5).
biorremediacin
solucin
acuosa,
incubando la biomasa micelial con suelo no estril, contaminado con 50 mg Cromo (VI)/g de tierra, resuspendiendo en medio mnimo de Lee, pH 4.0, 28C y 100 rpm, observando que despus de ocho das de incubacin con
Fig. 5. Biorremediacin de 297 mg de cromo (VI)/g de tierra contaminada, por la cscara de tamarindo (5 g de biomasa, 20 g de tierra, 28C, 100 rpm). Se analiz la capacidad de la biomasa de la cscara de tamarindo para disminuir la concentracin inicial de Cromo (VI) (1.0 g/L) y la produccin de Cromo (III) en solucin. En la Fig. 6A se observa una gran disminucin
18
Fig. 6. Reduccin de 1.0 g/L de cromo (VI) a cromo (III) por 1.0 g de cscara de tamarindo. 28C, 100 rpm, pH=1.0 +/- 0.2 (A) y aspecto de las soluciones (B y C). B.- Cromo total unido a la biomasa despus de diferentes tiempos de incubacin en presencia de cromo (VI). 1.- Solucin patrn de Cromo (VI) (1g/L, pH= 1.0). 2.-200 mg/L 3.-500 mg/L 4.-1000 mg/L C.- 5.- Cistina 6.- cido ascrbico 7.- Cscara de tamarindo con agua tridesionizada de los niveles de Cromo (VI), con la produccin concomitante de Cromo (III), (indicado por la desaparicin del color amarillo en los matraces por la presencia de Cromo (VI) y la formacin de un color azulverdoso con un precipitado blanco, que indica la transformacin a Cromo (III), y su determinacin por Cromazurol S, (Fig. 6B). Despus de 1 hora de incubacin, la biomasa disminuye la concentracin inicial del metal, hasta niveles indetectables, sin cambios significativos en la concentracin de Cromo total, la cual permanece constante en el control de agua tridesionizada. Lo anterior indica que esta biomasa es capaz de reducir el metal en la solucin de trabajo
suplementada con cromato, adems de la vitamina C y la cistina (Fig. 6C). La capacidad de reducir Cromo (VI) se ha reportado ampliamente en la literatura en
19
microorganismos que incluyen levaduras y hongos como C. maltosa (Ramrez-Ramrez et al., 2004), Candida sp FGSFEP (GuillnJimnez, 2008) y Aureobasidium pullulans (Fukuda et al., 2008). Finalmente, en la Tabla 1, se muestra la remocin de Cromo (VI) en solucin por diferentes biomasas naturales, en la cual se observa que la cscara de tamarindo es de las ms eficientes en la remocin del metal, y, como sta contiene
vitamina
C,
adems
de
algunos
carbohidratos (Sarmiento Fradera, 2003), nosotros encontramos que la vitamina C y la cistina reducen muy rpido el Cr (VI) a Cr (III), y stos podran ser parte muy importante en la mayor eficiencia para la remocin y/o reduccin del metal por la cscara de tamarindo, con respecto a otras biomasas analizadas.
Tabla 1. Remocin de cromo (VI) en solucin por diferentes biomasas naturales ADSORBENTE MXIMA CAPACIDAD DE ADSORCIN (mg/L) 39.7 29.0 13.4 17.2 15.0 57.7 5.87 8.66 5.36 45.00 100.00 1000.00 pH PTIMO REFERENCIAS
Aserrn Fibras de cscara de coco Bagazo de la caa de azcar Pulpa de remolacha azucarera Fibras prensadas de palmera Carbn activado (Filtrasorb-400) Biogases de lodos residuales Lana Agujas de pino Corteza de eucalipto Biomasa de Paecilomyces Cscara de tamarindo
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 1.0 1.0
Sharma & Foster (1994) Huang & Wu (1977) Sharma & Foster (1994) Sharma & Foster (1994) Tan et al. (1993) Huang & Wu (1977) Namasivayam e Yamuna (1995) Dakiky et al. (2002) Dakiky et al. (2002) Sarin & Pant (2006) Acosta et al. (2008) Este trabajo
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23
Una Vista Integral de la Sntesis de Astaxantina en Phaffia rhodozyma

Cipriano Chvez-Cabrera, Zoila R. Flores-Bustamante, Luis B. Flores-Cotera* Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera, Cinvestav, Av. IPN 2508, Col. San Pedro Zacatenco, Mxico 07360 D.F. E-mail: lfcotera@cinvestav.mx
RESUMEN La proporcin de los diferentes carotenoides producidos por la levadura Phaffia rhodozyma y la cantidad del carotenoide principal, astaxantina, pueden modificarse por cambios en la composicin del medio de cultivo y por otros factores ambientales. En este trabajo se hace una revisin de los diferentes factores que afectan la sntesis de astaxantina en sta levadura y de su regulacin. Los estudios realizados hasta ahora coinciden en que la sntesis de astaxantina tiene lugar en condiciones oxidativas, al restringirse el crecimiento, mediado por: a) deficiencia de nitrgeno y fosfato, lo que reduce el crecimiento y la sntesis de protenas b) la reasimilacin de etanol, que produce un desbalance NADH/NAD+ y la inhibicin del ciclo de Krebs c) la inhibicin de la cadena respiratoria, que inhibe la sntesis de ATP d) o bien en mutantes de lento crecimiento, pero con produccin aumentada de astaxantina. El inicio de la sntesis de astaxantina en P. rhodozyma, puede estimularse por diferentes mtodos, pero puede explicarse por un evento comn, esto es la inhibicin en la oxidacin de NADH, debido a un impedimento metablico. Palabras clave: Xanthophyllomyces dendrorhous, carotenoides, estrs oxidativo, metabolismo de etanol, regulacin.
ABSTRACT The proportions of different carotenoids produced by Phaffia rhodozyma and the quantity of astaxanthin, the main carotenoid, can be altered by changes in the culture-medium composition and other environmental factors. In this work we review the different factors that affect astaxanthin synthesis and its regulation in this yeast. A number of studies indicate that astaxanthin synthesis takes place in oxidative conditions, when the growth is restricted by different means like: a) deficiency of nitrogen and phosphate, that reduce growth and protein synthesis, b) ethanol uptake, that increases the NADH/NAD+ ratio and inhibits the Krebs cycle function, c) inhibition of the respiratory chain, that inhibits the synthesis of ATP, d) slow-growth mutant strains, with enhanced astaxanthin production. The onset of astaxanthin synthesis in P. rhodozyma, can be triggered by different methods, but in all cases it can be explained by a common event, this is the inhibition of NADH oxidation, as a result of a metabolic impediment.
24

Keywords: Xanthophyllomyces dendrorhous, carotenoids, oxidative stress oxidativo, ethanol metabolism, regulation.
INTRODUCCIN Los carotenoides son pigmentos ampliamente distribuidos en la naturaleza. La astaxantina (3, 3' dihidroxi--caroteno 4,4' diona) es un como oxicarotenoide el salmn, (xantofila), camarn,
comn. Es decir, impedimentos metablicos que se traducen en la inhibicin del ciclo de Krebs.
PHAFFIA RHODOZYMA P. rhodozyma es un basidiomiceto que tiene una forma anamrfica no formadora de basidios y otra telemrfica formadora de basidios (Golubev, como Xanthophyllomyces 1995). Sus pigmento produce dendrorhous caractersticas carotenoide etanol por como
responsable de la atractiva pigmentacin de animales langosta, trucha y flamingos (Shahaidi et al., 1998). Puede ser sintetizada por unos pocos microorganismos entre los que se encuentra la levadura Phaffia rhodozyma, aislada originalmente de la flora asociada con rboles de islas japonesas y de la costa oeste de Norteamrica (Miller et al., 1976; Phaff et al., 1972). La levadura es uno de los mejores productores de astaxantina, debido a que crece rpido y a que puede cultivarse econmicamente considerable a altas desde densidades que fue celulares. Por ello se ha estudiado con detalle
peculiares, incluyen sintetizar astaxantina principal que (Andrewes et al., 1976) y ser una levadura facultativa otras 1991). fermentacin de azcares, a diferencia de levaduras carotenognicas, Rhodotorula y Cryptococcus (Johnson & An,
LA ASTAXANTINA La astaxantina (3,3-dihidroxi-, caroteno-4,4-diona) es un oxicarotenoide (C40H52O4) con un peso molecular de 596.86 uma (Fig. 2). Sus cristales son de color violeta oscuro, con punto de fusin de 217219C. La astaxantina, se usa en dietas de trucha arcoris y salmn, criados en cautiverio para impartirles su pigmentacin caracterstica. Debido a su potente actividad antioxidante, superior incluso a la de la vitamina E (Kurashige et al., 1990), se le han asignado aplicaciones en animales, como protector contra la radiacin ultravioleta, en la prevencin de cncer y otras enfermedades
originalmente aislada. Varios trabajos en la literatura han mostrado que diversos factores ambientales, incluyendo los constituyentes del medio de cultivo, afectan la sntesis de astaxantina (Johnson & An, 1991). En sta revisin ofrecemos una descripcin de los factores nutricionales y ambientales que regulan la sntesis de astaxantina en P. rhodozyma. Se ofrece una visin integrada de los mecanismos implicados en la iniciacin de la sntesis de carotenoides y se muestra que los efectos observados con diferentes nutrientes y condiciones de cultivo, pueden explicarse por eventos con un origen
25

degenerativas. estimulante de (Nishino, la 1998) y como inmune producen durante el metabolismo normal de las clulas (Armstrong, 1997; Britton, 1995). La regulacin de la capacidad antioxidante en las clulas es de vital importancia, de FUNCIN BIOLGICA DE LOS hecho la presencia en el 1990; al en de
1
respuesta
(Jyonouchi et al., 1996).
de
molculas apropiados, y En la
CAROTENOIDES Una de las funciones ms importantes de los carotenoides es proteger los tejidos celulares contra radicales libres oxigenados que se producen durante la respiracin normal o mediante la interaccin del oxgeno con la luz visible o UV, y molculas fotosensibles como protoporfirina IX, hemo, bacterioclorofila
1
antioxidantes determinan Munkres, inactiva presentes mucoide
niveles
desarrollo Sies, y
normal 1993).
longevidad de las clulas (Konz et al., 1998; P. rhodozyma se ha sugerido que la astaxantina O2 radicales o perxido (flujo al propio su habitad natural
abedules) oxidativo
debido
clorofila.
El
oxgeno
metabolismo
intracelular
singulete ( O2) y el radical hidroxilo (OH) son molculas sumamente reactivas que se cree son los principales agentes oxidantes en sistemas biolgicos (King et al., 1995). Estas y otras molculas oxigenadas reactivas (MOR) como el perxido de hidrgeno (H2O2) y el superxido (O2-) son capaces de iniciar la peroxidacin de lpidos, oxidar protenas, o causar dao a molculas de DNA o RNA. En las plantas, los carotenoides son indispensables en la funcin fotosinttica, su ausencia induce la muerte celular por dao fotoxidativo (Armstrong & Hearst, 1996; Armstrong, 1994). En los microorganismos no fotosintticos, los carotenoides tambin protegen a las clulas contra radicales generados durante la respiracin o por dao fotoxidativo. Es decir, la presencia de estos pigmentos en todos los organismos se puede explicar por su capacidad para desactivar eficientemente los radicales libres que se
(Schroeder y Johnson, 1995 a y b; Johnson & Schroeder, 1996). Se ha sugerido que la sntesis de astaxantina compensa la falta o la muy disminuida actividad de otras enzimas antioxidantes, como la superxido dismutasa y catalasa (Johnson & An, 1991; Schroeder & Johnson, 1993; Gu et al., 1997).
BIOSNTESIS DE ASTAXANTINA Las etapas tempranas de la sntesis de carotenoides en P. rhodozyma, como ocurre con la sntesis de cidos grasos en otras levaduras oleaginosas, se lleva a cabo en el citoplasma. El citrato mitocondrial es considerado la fuente ms importante de acetil-CoA para la sntesis de cidos grasos en levaduras oleaginosas y se ha sugerido que tambin la misma fuente opera para la sntesis de carotenoides en P. rhodozyma como se muestra en la figura 1 (Ratledge & Wynn, 2000; Chvez-Cabrera et al., 2010).
26
Glucosa Piruvato Malato Acetil-CoA CoA Oxalacetato

NADH NADP+ NADPH
Oxalacetato Citrato Isocitrato

NAD+ NADH
Citrato Acetil-CoA
Malato
NAD+
Fumarato
FADH
-cetoglutarato
NAD+ FAD+ NADH
Malonil-CoA
IPP
Succinato
Succinil-CoA
Lpidos
Carotenoides
MITOCONDRIA
CITOSOL
Fig. 1. Ruta proveedora de acetil-CoA para la sntesis de astaxantina en P. rhodozyma. Muestra al ciclo de Krebs que al inhibirse acumula citrato mitocondrial, que es exportado al citosol y escindido por la ACL, que provee acetil-CoA citoslico para la sntesis de lpidos y astaxantina. La biosntesis de astaxantina en P. rhodozyma inicia a partir de acetil-CoA, que se transforma a isopentenil pirofosfato (IPP) a travs de la bien conocida ruta del mevalonato, teniendo como intermediarios hidroximetilglutaril-CoA (HMG-CoA) y mevalonato (Andrewes et al., 1976; Johnson & An, 1991). El IPP es un precursor comn para la sntesis de carotenoides, monoterpenos, sesquiterpenos, giberelinas y esteroles entre otros compuestos (Disch et al., 1998). Una molcula de IPP y otra de su ismero dimetilalil pirofosfato (DMAP), compuestos de cinco carbonos (C5), se condensan para formar geranil pirofosfato (C10). La adicin de unidades adicionales de IPP, forman de manera consecutiva, farnesil pirofosfato (C15) y geranil-geranil pirofosfato, GGPP (C20). La condensacin de dos molculas de GGPP produce fitoeno (C40), cuya desaturacin conduce a la formacin de licopeno, que es ciclado sucesivamente a -caroteno y -caroteno (C40). La formacin de astaxantina del involucra -caroteno, la al oxidacin que se secuencial
adicionan grupos oxo en los carbonos C4 y C4 e hidroxi en los carbonos C3 y C3
27

(Rodrguez-Siz dendrorhous, el et al., 2010). sexual En de X. P. Wynn, 2000). Cuando una levadura se cultiva en un medio que contiene amonio como nica fuente de nitrgeno, la disponibilidad de esta fuente tiene un efecto considerable en la cantidad de esqueletos de carbono, ATP y NADPH que son canalizados a la sntesis de protena (Larsson et al., 1993). Al disminuir la disponibilidad de amonio, la demanda de carbono para la sntesis de protena y nucletidos de disminuye, y particularmente -cetoglutarato
estado
rhodozyma, la biosntesis de astaxantina requiere de cuatro enzimas a partir de IPP. Los genes que codifican para estas enzimas son; crtE para GGPP sintasa, crtYB para fitoeno sintasa/licopeno ciclasa, crtI para fitoeno desaturasa, y crtS para astaxantina sintasa, (Verdoes et al., 1999a; Ojima et al., 2006; Lodato et al., 2007; Rodrguez-Siz et al., 2010). Las enzimas codificadas por los genes crtYB licopeno, y crtS son bifuncionales, la que segunda tiene primera cataliza la formacin de fitoeno y mientras funciones de oxigenasa e hidrolasa, lo que permite la conversin del -caroteno en astaxantina.
oxaloacetato, y como resultado la fuente de carbono canalizada al ciclo de Krebs ser excesiva. La acumulacin de lpidos en estas condiciones es un fenmeno comn en muchas levaduras (Ertugay et al., 1997). Por otro lado, en cultivos de P. rhodozyma, con limitacin de fsforo, se ha observado que el contenido celular de
FACTORES
QUE
AFECTAN
LA
astaxantina tiene una relacin inversa a la concentracin de fsforo en el medio de cultivo. A bajas concentraciones de fsforo,
PRODUCCION DE ASTAXANTINA Limitacin de nitrgeno y fsforo Empleando complejos, la diferentes mayor cepas de P. de rhodozyma cultivadas en medios definidos o produccin astaxantina generalmente se obtiene a bajas concentraciones de nitrgeno en el medio de cultivo (altas relaciones C/N), pero a expensas de un menor contenido de protena en las clulas (Flores-Cotera et al., 2001; Yamane et al., 1997a; Meyer & du Preez,1994a; Chavez- Cabrera et al., 2010). Anlogamente, la acumulacin de lpidos, que comparten con los carotenoides el requerimiento de acetil-CoA como precursor, es un evento comn en un nmero de levaduras cuando crecen limitadas por nitrgeno (Ertugay et al., 1997; Ratledge &
no solo se observa un aumento en el contenido de astaxantina, sino tambin de lpidos. Al igual que en condiciones de limitacin de nitrgeno, la limitacin de fsforo inhibe la sntesis de protenas y el crecimiento celular (Callieri et al., 1984; Flores-Cotera et al., 2001), lo que sugiere que una limitada sntesis de protenas pudiera ser un mecanismo comn que estimula la sntesis de astaxantina. Esta interpretacin concuerda tambin con otros datos publicados por ejemplo, An et al., 1989, han sugerido que la velocidad o la eficiencia de utilizacin de nitrgeno es progresivamente impedida en una serie de
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mutantes con mayor contenido el estudio de de rhodozyma, comnmente se observa la acumulacin de carotenoides durante la reutilizacin del etanol en condiciones oxidativas. Chvez-Cabrera et al., 2010, han reportado un incremento en actividad ATP citrato liasa (ACL), enzima clave para proveer acetil-CoA en citosol, asociado a la concentracin de oxgeno disuelto (OD) en el medio de cultivo, y que coincide con el inicio de la sntesis de carotenoides. La adicin de Metabolismo de etanol En cultivos en lote de P. rhodozyma es comn la acumulacin de etanol durante la fase temprana de crecimiento, en presencia de concentraciones altas de azcares y/o de limitacin de oxgeno (Yamane et al., 1997a). En una fase tarda de crecimiento, a bajas concentraciones de azcares y al aumentar la del oxgeno, P. rhodozyma es capaz de reutilizar el etanol producido inicialmente, al igual que otras levaduras (Yamane et al., 1997b). El etanol generalmente es oxidado va acetaldehdo-acetato-acetil-CoA para alimentar el ciclo de Krebs (Heinisch & Hollenberg, 1993; Vries & Marres, 1987). Efectos comunes de metabolismo de etanol en todos los tipos de clulas incluyen: 1) aumento de la relacin NADH/NAD+ y la consecuente inhibicin del ciclo de Krebs 2) bloqueo de la divisin celular y de la replicacin. esqueletos En condiciones oxidativas el carbonados y ATP para la ciclo de Krebs es la nica fuente de sntesis de aminocidos, cidos nucleicos y para la gluconeognesis (Jones, 1989). En consecuencia, la inhibicin controla el crecimiento por deficiencia de precursores para la sntesis. En cepas nativas de P. etanol, a cultivos de P. rhodozyma en diferentes fases del crecimiento, aumenta la sntesis de carotenoides (Gu et al., 1997). En cultivos en lote alimentado de P. rhodozyma, se han observado aumentos de 2-3 veces en el contenido de carotenoides, cuando se usa etanol como fuente de carbono (Yamane et al., 1997b). Se debe remarcar que los grupos oxigenados de la astaxantina slo se forman en presencia de ciertos niveles de oxgeno. Es bien conocido que los cultivos de P. rhodozyma requieren una tensin de oxgeno mayor de 20%, de para una adecuada & produccin astaxantina, (Johnson
carotenoides.
Asimismo,
diferentes fuentes de nitrgeno para la produccin de astaxantina frecuentemente ha conducido a la eleccin de aminocidos que son metabolizados lentamente, posiblemente debido a que su uso produce una limitacin de nitrgeno (Meyer et al., 1993; Meyer & du Preez, 1994b).
Lewis, 1979; Yamane et al., 1997a; ChvezCarbrera et al., 2010). La sntesis se reduce drsticamente microaeroflicas, en condiciones acumulndose
principalmente carotenos no oxigenados. La expresin de los genes carotenogenicos, crt YB (fitoeno sintasa), crtI (fitoeno deshidrogenasa) y crtS (astaxantina sintasa), de igual forma ha sido asociada a la reasimilacin de etanol (Lodato et al., 2007). La actividad de hidroxi-metil-glutaril-CoA reductasa (HMGR), enzima clave para la formacin de mevalonato, un precursor de carotenoides, tambin es estimulada por 29

etanol. Todo lo anterior indica que la sntesis de carotenoides en P. rhodozyma, ocurre en condiciones oxidativas, durante la asimilacin de etanol. (An et al., 1989; Schroeder & Johnson, 1995a y b; Johnson et al., 1994; An & Johnson, 1990). La antimicina y el KCN, bloquean la transferencia de electrones del complejo III y complejo Inhibidores de la cadena respiratoria En P. rhodozyma, la sntesis de astaxantina es estimulada en presencia de inhibidores de la respiracin como cianuro, antimicina, tunicamicina y azida entre otros IV respectivamente. Se ha encontrado que en presencia de estos compuestos, la sntesis de astaxantina ocurre paralelamente con un cambio casi completo de respiracin sensible a cianuro, a respiracin insensible a cianuro (Fig. 2).
NADH
NAD
O2 Complejo III
H2O
e-
Complejo I
ee-
Complejo V
ubiquinona
H3C CH3
eCH3
Respiracin alternativa
Complejo II
eCH3 CH3 CH HO O CH3
succinato
fumarato
astaxantina
Fig. 2. Modelo del flujo de electrones en cadena respiratoria de P. rhodozyma (Adaptado de Hoshino et al., 2004). Muestra la existencia de una ruta de respiracin alternativa (RA), que provee electrones para la sntesis de astaxantina, al presentarse restriccin del flujo de electrones en cadena de respiracin principal. de una va RA en las condiciones citadas (An Debido a esto se ha propuesto que la activacin de una va respiratoria alternativa (RA) est estrechamente ligada a la sntesis de astaxantina (Hoshino et al., 2004). Una cepa silvestre de P. rhodozyma fue cultivada en medio liquido con antimicina, tanto en la obscuridad como expuesta a la luz. En esta ltima condicin se observ un mejor crecimiento y el doble de acumulacin carotenoides, lo que se asign a la induccin & Johnson, 1990; Schroeder & Johnson, 1995a y b). Adems, una mutante productora de -caroteno incapaz de sintetizar astaxantina (yan-1), logr restablecer esta capacidad al ser cultivada con antimicina en presencia de luz (An & Johnson, 1990). En virtud de que la antimicina puede estimular la produccin de especies de oxgeno reactivas, la induccin de la sntesis de carotenoides por antimicina podra ser tambin mediada
30

por estrs oxidativo (An & Johnson, 1990). Otros hongos y levaduras que incluyen especies productoras de carotenoides como Rhodotorula, Cryptococcus y Sporobolomyces poseen tambin vas RA insensibles a antimicina y a cianuro (Goffeau & Crosby, 1978; Johnson y Schroeder, 1996; Shiraishi & Fujii, 1986). En algunos casos la expresin de un solo polipptido es suficiente para activar la RA (Albury et al., 1996). Estas vas RA generalmente se activan para permitir el crecimiento en condiciones en las que la cadena respiratoria principal ha sido inhibida ya sea por inhibidores de la OTROS FACTORES QUE REGULAN LA SNTESIS DE ASTAXANTINA En cepas nativas de P. rhodozyma, la Efecto de la limitacin de otros nutrientes La limitacin de nutrientes produce en los microorganismos un gran nmero de respuestas adaptativas, una de las cuales es la produccin de metabolitos secundarios. En muchos casos la produccin de metabolitos secundarios es parte de una estrategia de supervivencia en ciertos ambientes y por ello es una propiedad estable en los
2+
contraste, el contenido de astaxantina en P. rhodozyma no fue estimulado en cultivos con concentraciones por debajo de 1 M de Fe2+, otro cofactor de enzimas de la cadena respiratoria (Flores-Cotera et al., 2001). Se sabe que las hidroxilasas y oxidasas de varios microorganismos productores de astaxantina requieren de oxgeno y hierro para su actividad (Fraser et al., 1998), quiz debido a esto no se observ una mejor produccin de astaxantina en condiciones de limitacin de hierro.
respiracin o por mutacin.
sntesis de carotenoides es regulada por represin catablica por carbono (Johnson & Schroeder, 1996; Yamane et al., 1997a). Fuentes de carbono de asimilacin lenta promueven una mayor pigmentacin de las clulas, pero a expensas de un menor crecimiento. Entre 11 fuentes de carbono, la celobiosa produce la mayor pigmentacin, pero otros disacridos como la maltosa y sacarosa tambin dan buenos resultados en trminos de pigmentacin. En la mayor parte de los estudios realizados con cepas mutantes de P. rhodozyma, la formacin de astaxantina est asociada al crecimiento (Johnson & Lewis, 1979; Fang & Chiou, 1996; Meyer & du Preez, 1994a; Ukibe et al., 2008). En contraste, en cepas nativas es comn un aumento del contenido de astaxantina de las clulas en las fases tardas de cultivo (Chvez-Cabrera et al., 2010). Lo anterior sugiere que que inhibe un el 31 impedimento metablico
microorganismos. Concentraciones de Cu
por debajo de 3.2 M en el medio de cultivo, incrementan el contenido de astaxantina en P. rhodozyma, pero a expensas de una ligera disminucin en el crecimiento (Flores-Cotera et al., 2001). Sin embargo, concentraciones Cu
2+
por arriba de esta concentracin no efecto en la produccin de
tienen
carotenoides. El cobre es un cofactor de citocromo-oxidasa, la oxidasa terminal de la cadena respiratoria, un dficit de cobre podra limitar el flujo de electrones y estimular as la sntesis de astaxantina. En

crecimiento celular en las mutantes, induce la sntesis de astaxantina asociada al crecimiento. En levaduras y otros organismos, el control global de la va del mevalonato ocurre en las etapas iniciales de la sntesis de isoprenoides (Goldstein & Brown, 1990; Gu et al., 1997), particularmente en la enzima hidroximetilglutaril-CoA reductasa (HMGR) encargada de la formacin de mevalonato. En Saccharomyces cerevisiae, la enzima es regulada al menos parcialmente por represin catablica y por la concentracin de oxgeno. La regulacin por producto final o bien por algn intermediario de la biosntesis es otro mecanismo regulatorio comn de la sntesis de carotenoides en diversos organismos. En las levaduras, la HMGR es retrorregulada por intermediarios tempranos y por intermediarios tardos (regulacin cruzada) de la va de los isoprenoides (Hampton et al., 1996; Brown & Goldstein, 1980). En P. rhodozyma, la produccin de astaxantina es inhibida por ionona, que posee un anillo anlogo a los del -caroteno (Lewis et al., 1990). Lo anterior, hace suponer que la sntesis de astaxantina en P. rhodozyma es regulada por producto final (Johnson & Schroeder, 1996; Schroeder & Johnson, 1995b). La fotorregulacin de la sntesis de carotenoides ha sido reportada en al menos 15 hongos y en varias algas. Se cree que la traduccin de la seal luminosa es mediada por radicales libres formados la luz, el intracelularmente al interactuar DISCUSIN Y CONCLUSIONES La proporcin de los diferentes carotenoides producidos por la levadura P. rhodozyma y la cantidad de astaxantina en las clulas pueden alterarse por cambios en la composicin del medio de cultivo y por otros factores ambientales. Concentraciones de OD por arriba de 20% y la reasimilacin de etanol son factores desencadenantes de la sntesis de astaxantina en P. rhodozyma (Yamane et al., 1997a, Chvez-Cabrera et al., 2010). Por otro lado, altas concentraciones de algunos componentes del medio de cultivo como azcares, fosfatos, sulfato de amonio y cobre tienen un efecto negativo sobre la produccin de astaxantina. La concentracin de carotenoides totales, as como los contenidos de astaxantina y lpidos en la levadura muchas veces se incrementan a bajas concentraciones de nitrgeno o de fosfatos (Flores-Cotera et al., 2001, Miao et al., 2010, Chvez-Cabrera et al., 2010). En ambos casos, la mayor produccin de carotenoides parece ser una respuesta para protoporfirina IX, hemo y otras (Bramley & MacKenzie, 1988; Johnson & An, 1991). Otros factores que se han reportado como promotores de la formacin de carotenoides incluyen: uso de cultivo alimentado de fuente de carbono (Yamane et al., 1997; Reynders et al., 1996, 1997), uso de fuentes de carbono como glicerol (Johnson et al., 1994), acetato (Meyer & du Preez, 1993), xilosa (Paraj et al., 1997,1998), succinato (Johnson & An, 1991), -pineno y limoneno (Meyer et al., 1994) entre otros.
oxgeno y molculas fotosensibles como la
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canalizar el exceso de carbono y energa, debidos a una limitacin del crecimiento y de sntesis de protenas, ocasionadas por la deficiencia de estos dos nutrientes. En presencia de inhibidores de la cadena respiratoria y en medios deficientes en cobre se obtiene altas proporciones de astaxantina en el pigmento (An et al., 1989; Flores & Snchez, 2001). Se ha sugerido en estas condiciones, la activacin de una va respiratoria alterna (RA), que participa en la formacin de los grupos oxigenados de la astaxantina, al inhibirse la cadena respiratoria principal. Es factible entonces que la activacin de la va RA funcione como un mecanismo para reducir el excedente de NADH, causado por un rpido catabolismo, pero que no puede ser oxidado rpidamente cuando la cadena respiratoria principal se encuentra inhibida. En resumen, los resultados obtenidos en muy diversas condiciones estudiadas, convergen en que la sntesis de astaxantina en P. rhodozyma, tiene lugar al surgir una restriccin en el metabolismo, como: a) la inhibicin de sntesis de protenas y nucletidos por deficiencia de nitrgeno y fosfato, b) la inhibicin del ciclo de Krebs durante la reasimilacin de etanol, producida por un desbalance NADH/NAD ,
+
producen un excedente de energa debido a la baja demanda de ATP, para sntesis de protenas y nucletidos, derivada de su dficit. Puesto que la fosforilacin oxidativa es la principal va de oxidacin de NADH, la relacin NADH/NAD+ debe necesariamente elevarse. De forma similar, debido a que el etanol es un sustrato muy energtico, su metabolismo eleva la relacin NADH/NAD+ lo que inhibe varias enzimas implicadas en ciclo de Krebs. Por ejemplo, la enzima isocitrato deshidrogenasa, una enzima clave para la operacin del ciclo de Krebs, requiere de NAD+ para su actividad. La carencia de NAD+ la inhibe y da lugar a la acumulacin de citrato, que se sabe es precursor de lpidos y de carotenoides. Aparentemente, el mismo reservorio de acetil-CoA producido por escisin de citrato, puede servir tanto en la sntesis de lpidos como de carotenoides (Miao et al., 2010; Chvez-Cabrera et al., 2010; Flores-Cotera et y al., 2001; Domnguez-Bocanegra Torres-Muoz,
2004). En mutantes de Rhodotorula gracilis, deficientes en la sobreproduccin de lpidos y carotenoides, se mostr que tambin eran deficientes en ACL (Venkateswaran et al. 1992). En contraste, en presencia de inhibidores de la cadena respiratoria o en condiciones de deficiencia de cobre la sntesis de protenas podra estar supeditada a la disponibilidad de ATP. Pero un rpido catabolismo junto con una cadena respiratoria inhibida, conducira tambin a elevar la relacin NADH/NAD+. Todo lo anterior indica que la elevacin de la relacin NADH/NAD+ y/o la acumulacin de NADH podran ser eventos comunes y 33
c)
la
inhibicin de la cadena respiratoria por deficiencia de cobre o uso de inhibidores que producen la acumulacin de NADH, d) un lento crecimiento debido a mutacin o al uso de fuentes de carbono o nitrgeno de lenta asimilacin, que incrementa la pigmentacin (Schroeder & Johnson, 1995a). La limitacin de nitrgeno o de fosfato, posiblemente

fundamentales que disparan la sntesis de astaxantina en P. rhodozyma. Hasta donde sabemos, actualmente no existe una visin integrada de los cambios asociados con la iniciacin de la sntesis de carotenoides, ni en P. rhodozyma, ni en otros microorganismos. Este trabajo hace una contribucin en este sentido, al sugerir que en P. rhodozyma, la estimulacin de la sntesis de carotenoides mediante diferentes mtodos, pueden explicarse por eventos con un origen comn, i.e. la inhibicin en la oxidacin de NADH, debido a algn tipo de impedimento metablico. Andrewes AG, Phaff HJ & Starr MP (1976) Carotenoids of Phaffia rhodozyma, a red pigmented fermenting yeast. Phytochemistry 15:10003- 10007 Armstrong GA (1994) Eubacteria show their true colors: genetics of carotenoid pigment biosynthesis from microbes to plants. J. Bacteriol. 176: 4795-4802 Armstrong GA (1997) Genetics of eubacterial carotenoid biosynthesis: a colorful tale. Ann. Rev. Microbiol. 51:629-659 Armstrong GA & Hearst JE (1996) Genetics and molecular biology of carotenoid pigment biosynthesis. FASEB J. 10:228237 Bramley REFERENCIAS Albury MS, Dudley P, Watts FZ & Moore AL (1996) Targeting the plant alternative oxidase protein to Schizosaccharomyces pombe mitochondria confers cyanideinsensitive respiration. J. Biol. Chem. 271:17062-17066 An G (2001) Improved growth of the red yeast, presence 1009 An G & Johnson EA (1990) Influence of light on growth and pigmentation of the yeast Phaffia rhodozyma. Antonie van Leeuwenhoek 57:191-203 An GH, Schuman DB & Johnson EA (1989) Isolation of Phaffia rhodozyma mutants with increased astaxanthin content. Appl. Environ. Microbiol. 55:116-124 of Phaffia tricarboxylic rhodozyma acid cycle (Xanthophyllomyces dendrorhous), in the intermediates. Biotechnol. Lett. 23:1005 PM & Mackenzie A (1988) Regulation of carotenoid biosynthesis. Curr. Top. Cell Reg. 29:291-343 Britton G (1995b) Antioxidant effects of carotenoids in vivo and in vitro: an overview. FASEB J. 9:1551-1558 Brown MS & Goldstein KL (1980) Multivalent feedback reductase, regulation a of HMG CoA control mechanism
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rhodozyma enhanced in fed-batch culture ethanol Biotechnol. Lett. 19:1109-1111
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Las Futuras Refineras Estn Basadas en Procesos Biotecnolgicos

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Dr. Alfredo Martnez Jimnez

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INTRODUCCIN Actualmente se ha establecido que

diversos compuestos de cromo, en forma de xidos, cromatos y dicromatos, son

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filamentosos Penicillium sp. (Acevedo-Aguilar et al., 2008), Trichoderma inhamatum

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determin la concentracin de Cromo (VI) en el sobrenadante.

experimentos se realizaron un mnimo de 3 veces y por triplicado.

RESULTADOS Y DISCUSIN En este trabajo, se encontr que la biomasa de la cscara de Tamarindo

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adsorbiendo el 100% a los

20 y 30 min, 1000 mg/L

respectivamente, mientras que

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concentraciones (50, 100 y 200 mg/L). Con

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REFERENCIAS Acevedo-Aguilar F, Espino-Saldaa AA,

from industrial wastes, using chromateresistant strains of filamentous fungi

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Remocin de cromo (VI) en solucin acuosa por la biomasa celular de

TIBTECH.16: 291- 300.

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Una Vista Integral de la Sntesis de Astaxantina en Phaffia rhodozyma

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(Jyonouchi et al., 1996).

antioxidantes determinan Munkres, inactiva presentes mucoide

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Glucosa Piruvato Malato Acetil-CoA CoA Oxalacetato

Oxalacetato Citrato Isocitrato

adicionan grupos oxo en los carbonos C4 y C4 e hidroxi en los carbonos C3 y C3

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eCH3 CH3 CH HO O CH3

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respiracin o por mutacin.

por arriba de esta concentracin no efecto en la produccin de

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oxgeno y molculas fotosensibles como la

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Schizosaccharomyces Saccharomyces Academic Press, N.Y.

medium. Biotechnol Lett 23: 793797,

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