Tipos bsicos de medios de cultivo atendiendo a su estado fsico: lquidos semislidos slidos atendiendo a su utilidad prctica: Medios para

aislamientos primarios: Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc) selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina) enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K). Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su identificacin (Lowenstein). Medios para identificacin: diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-Fermentacin) TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de estractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes. El gar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. 1- disponibilidad de nutrientes adecuados 2- consistencia adecuada del medio 3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases 4- condiciones adecuadas de humedad 5- Luz ambiental

6- pH 7- Temperatura 8- Esterilidad del medio CONDICIONES PARA EL MEJOR FUNCIONAMIENTO DEL MEDIO DE CULTIVO Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram- positivas). TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO atendiendo a su estado fsico: lquidos semislidos slidos atendiendo a su utilidad prctica: AGAR SANGRE : Medio enriquecido, estndar (ver ms) AGAR POLIVITEX (chocolate) : Medio enriquecido, para bacterias que no crecen en medios habituales y para atmsfera de CO2 (ver ms) MAC CONKEY : Selectivo para BGN. Lactosa+indicador (ver ms) MULLER-HINTON : medio slido estndar para antibiogramas con discos y por difusin MEDIOS DE CULTIVO DE USO HABITUAL Medios para aislamientos primarios: para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc) selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina) enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K). para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su identificacin (Lowenstein). Medios para identificacin: diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-Fermentacin) Tipos de medios Los medios de cultivo se dividen acorde a sus caractersticas en generales, selectivos o diferenciales. Generales: permiten el crecimiento de cualquier tipo de bacteria. Selectivos: slo permiten crecer un cierto tipo, p.ej. slo un gnero. Diferenciales: permiten distinguir entre dos o mas bacterias por caractersticas coloniales.

DISEO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO A la hora de disear un medio de cultivo no slo hay que tener en cuenta los nutrientes sino tambin las condiciones fsicas que permitan el crecimiento de los microorganismos. 1.- Aporte de nutrientes La cantidad y naturaleza de los nutrientes en un medio de cultivo viene determinada por el rendimiento de un producto en especial adems de los requerimientos nutricionales del microorganismo. 2.- pH Un microorganismo puede alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las sustancias producidas por el propio microorganismo; por ejemplo: Utilizacin de carbohidratos ----> Produccin de cidos orgnicos ----> Acidificacin Catabolismo de protenas ----> Produccin de materiales nitrogenados ----> Alcalinizacin Estos cambios pueden llegar a ser tan grandes que inhiban el crecimiento del microorganismo. Estos cambios se pueden prevenir controlando el pH mediante sistemas tampn. Uno de los ms utilizados en microbiologa es la combinacin de KH2PO4 y K2HPO4 tamponando el medio a un pH de aproximadamente 6,8. 3.- Necesidades de gases

Los gases principales que afectan al desarrollo microbiano son el oxgeno y el dixido de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxgeno libre clasificndose en cuatro grupos: i.- Aerobias: bacterias que se desarrollan en presencia de oxgeno libre. ii.- Anaerobias: bacterias que se desarrollan en ausencia de oxgeno libre. iii.- Anaerobias facultativas: bacterias que se desarrollan tanto en presencia como en ausencia de oxgeno libre. iv.- Microaerfilas: bacterias que crecen en presencia de pequeas cantidades de oxgeno libre.

Para desarrollar bacterias aerobias se incuban los medios de cultivo en agitacin constante o introduciendo aire estril en el medio. Los anaerobios estrictos son muy sensibles al O2 por lo que se debe evitar la exposicin de estos microorganismos al O2. Se puede obtener un ambiente de anaerobiosis por los siguientes mtodos: A.- Agregando al medio de cultivo un compuesto reductor, como es el tioglicolato sdico, para disminuir el contenido de O2. B.- Quitando el O2 por procedimientos mecnicos y reemplazndolo por N2 o CO2. C.- Mediante reacciones qumicas dentro del recipiente que contiene el medio de cultivo inoculado para combinar el oxgeno libre con otro compuesto. Por ejemplo: al encender una vela se transforma el oxgeno en dixido de carbono. 4.- Suministro de luz Los organismos fotosintticos debern ser expuestos a una fuente de iluminacin ya que la luz es su fuente de energa. Esta fuente de iluminacin no debe plantear problemas de variacin de temperatura, por lo que suelen usarse lmparas fluorescentes con un desprendimiento mnimo de calor. 5.- Control de la temperatura El desarrollo de las bacterias depende de reacciones qumicas, y la velocidad con que se efectan estas reacciones est influda por la temperatura, por lo que la temperatura puede en parte determinar la velocidad de crecimiento de los microorganismos. Cada especie microbiana posee una temperatura ptima de crecimiento clasificndose segn esto en los siguientes grupos: i.- Psicrfilas: capaces de desarrollarse a 0 C o menos. Su temperatura ptima es alrededor de los 15 C. ii.- Mesfilas: crecen mejor entre 25 y 40 C. iii.- Termfilas: crecen mejor entre 45 y 60 C.

6.- Otros requerimientos Halfilas: bacterias que para su crecimiento requieren altas concentraciones de sal (10 - 15%). Son aquellas bacterias aisladas del mar y ciertos alimentos. Otras bacterias, como las aisladas en las fosas marinas, requieren presiones superiores a las normales. TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO 1.- Estado: A.- Medios lquidos B.- Medios slidos: llevan un agente solidificante (Agar) que es un polisacrido acdico producido por ciertas algas rojas que gelifica por debajo de 45 C. Se usa a una concentracin del 1,5%. C.- Medios semislidos: agar a una concentracin del 0,7%.

2.- Composicin: A.- Medios sintticos o qumicamente definidos. Llevan fuente de carbono, fuente de nitrgeno, sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca...), otros elementos como son estimuladores del crecimiento (eritritol para Brucella abortus) pero siempre a concentraciones conocidas. B.- Medios complejos o de composicin indefinida. Estos medios llevan ingredientes como extracto de levadura, peptona, infusin de cerebro, extracto de carne, etc. que contienen nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la composicin cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes. C.- Medios de enriquecimiento. Son medios complejos (normalmente) con aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos (particularmente hetertrofos exigentes). Ejemplo: adiccin de sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas.

D.- Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseo el crecimiento especfico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una poblacin microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como fuente de carbono es selectivo para autotrofos; adiccionando cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram (+); utilizando maltosa como nica fuente de carbono slo crecern los que usen maltosa. E.- Medios diferenciales. Son aquellos destinados a facilitar la discriminacin de microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en dichos medios. Ejemplo: Agar sangre diferencia hemolticos de no hemolticos; McConkey diferencia lactosa (+) de lactosa (-). F.- Medios de mantenimiento. Suelen ser distintos a los de crecimiento ptimo ya que el crecimiento rpido y prolfico suele ocasionar la muerte rpida de las clulas. Ejemplo: al aadir glucosa y utilizarla los microorganismos producen cidos, acidificndose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en los medios de mantenimiento. Agar sangre: Apto para el crecimiento de la mayora de los microorganismos de importancia clnica y para estudiar su propiedad hemoltica. Se usa una base nutriente y sangre ovina estril al 5%. El AS al 5% con base de Tripticasa-Soja es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias aerobias y anaerobias, aunque no es medio de eleccin para anaerobios. Permite visualizar reacciones hemolticas que producen muchas especies bacterianas. Tiene por base una fuente proteica (digeridos trpticos, digeridos proteicos de soja) con una pequea cantidad de hidratos de carbono naturales, cloruro sdico y 5% de sangre. La aportacin de caseina y peptonas de soja al agar de Tripticasa-soja hace el medio en muy nutritivo por el suministro de nitrgeno orgnico, particularmente aminocidos y pptidos de cadena ms larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el cultivo de una gran varedad de grmenes aerobios y anaerobios que crecen rpidamente, as como los del gnero Candida. Tambn permite el crecimiento de algunos grmenes exigentes como estreptococos, pneumococos, Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella. El cloruro sdico proporciona electrolitos esenciales. La adicin de sangre de carnero desfibrinada enriquece la base y lo hace un medio adecuado para realizar la prueba del factor CAMP. Permite as mismo determinar la capacidad de algunas bacterias de producir enzimas extracelulares que actan sobre los glbulos rojos, ya sea por lisis completa (hemlisis beta, produce un halo transparentealrededor de la colonia hemoltica), parcial (hemlisis alfa, coloracin verdosa alrededor de la colonia) o por ausencia de alteracin (hemlisis gamma). La produccin de hemolisinas por las bacterias depende de muchos factores ambientales como pH o atmsfera de incubacin. Las muestras que puedan contener Brucella o Neisseria deben incubarse en atmsfera enriquecida en CO2. Si se aade al medio el 0,5% de telurito potsico es muy til par el cultivo y aislamiento selectivo de Corynebacterium diphteriae, Candida albicans, Listeria y estreptococos.

Segn sus cualidades fsicas distinguimos:

Lquidos Semi-slidos Slidos

Segn su formulacin:

Qumicamente definidos: se conoce exactamente la cantidad de cada uno de los compuestos que hay en el medio. Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre,...). Por tanto, no se conoce exactamente cual es la composicin del medio. Sin embargo, presenta la ventaja de que ya estn presentes todos o casi todos los elementos que una clula puede requerir.

Segn su uso:

Selectivos: permiten seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...). Diferenciales: permiten identificar una especie o grupo por su crecimiento diferencial en este medio. De enriquecimiento: son medios diseados para permitir el crecimiento del mximo nmero de especies posible. Pueden usarse, por ejemplo, para estudiar todos los microorganismos presentes en una muestra. Mnimo: contienen la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento de una especie. De transporte: est preparado para servir de almacenamiento temporal a espcimenes transportados. manteniendo su viabilidad y su concentracin.