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Metabolismo de Glicoprotenas, Glicosaminoglicanos e Proteoglicanos

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Glicoprotenas
Glicoproteinas: so proteinas unidas por ligaes covalentes a quantidade varivel de oligossacridos (com menos de 15 resduos glicidicos cada) isolados ou dispersos ao longo da molcula proteica. Fazem parte dos glicoconjugados ou hidratos de carbono complexos. molculas com uma ou mais cadeias de hidratos de carbono ligada a uma protena (glicoprotenas ou proteoglicanos) ou lpido (glicolpidos). Existem em quase todos os seres vivos. A percentagem de glcidos pode ir de 1% a 85% do peso. Exemplos de glicoprotenas: maioria das plasmticas, na membrana celular (ex.: determinantes dos grupos sanguneos), hormonas,

Funes
...dos resduos glicidicos:
Orientao das glicoproteinas e glicolipidos nas membranas (com resduos glicidicos na membrana extracelular) Manuteno da assimetria da membrana Reconhecimento/identidade celular Modulao de propriedades fisicoquimicas: solubilidade, viscosidade, carga, conformao, etc. Protege contra protelise Afecta o desenvolvimento e diferenciao embrionria.

...das glicoproteinas:
Estrutural (colagnio) Lubrificante (mucinas) Proteco (mucinas) Transporte molecular (transferrina) Imunolgica (imunoglobulinas, antigenios) Enzimtica Coagulao Sitio membranar (fixao interaco reconhecimento) Intercomunicao hormonal

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Classificao das Glicoprotenas


Classificao feita de acordo com as ligaes entre os pptidos e os oligossacridos: 1. Ligao O-glicosdica: entre o OH de um resduo de serina ou treonina e um acar como a N-acetilgalactosamina (GalNAc-Ser[Thr]) Serina ou Treonina + N-Acetilgalactosamina 2. Ligao N-glicosdica: entre o NH2 de um resduo de asparagina e Nacetilglicosamina (GlcNAc-Asn) Asparagina + N-Acetilglicosamina 3. Ligao entre o grupo carboxilo terminal da protena, por um grupo fosfosiletanolamina, a um glicano, ligado pela glicosamina a fosfatidil inositol (PI) glicoprotenas ancoradas a glicosilfosfatidil-inositol (GPIanchored ou GPI-linked) Protena Glicosilfosfatidiletanolamina-inositol Glicoprotenas contm vrios tipos de ligaes O-glicosdicas ligao GalNAc-Ser(Thr) predominante. Ex. nas mucinas, predomina a ligao de Gal ou NeuAc a GalNAc. proteoglicanos possuem trissacridos Gal-Gal-Xyl-Ser colagnio possui ligao Gal-hidroxilisina (Hyl) muitas protenas nucleares (ex.: factores de transcrio) e citoslicas contm cadeias laterais consistindo numa nica GlcNAc ligada a um residuo de serina ou treonina (GlcNAc-Ser(Thr))

Generalidades

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Monossacridos mais comuns


Monossacrido Galactose Glicose Xilose NAcetilgalactosamina N-Acetilglicosamina Fucose Manose c. NAcetilneuraminico Abreviatu ra Gal Glc Xyl GalNAc GlcNAc Fuc Man NeuAc Acarnucletido UDP-Gal UDP-Glc UDP-Xyl UDP-GalNAc UDP-GlcNAc GDP-Fuc GDP-Man CMP-NeuAc

cido silico (N-acetilneuramnico) encontra-se normalmente no final das cadeias glicdicas, ligado a resduos terminais de Gal ou GalNAc. Sulfato ocorre abundantemente, ligado a galactose, Nacetilgalactosamina ou N-acetilglicosamina.

Acares-nucletido
Actuam como dadores de glcidos em reaces de biossntese Muitas das reaces de glicosilao envolvem estes compostos A ligao anidrido entre o grupo fosfato e o acar de alta energia, logo existe grande potencial de transferncia de grupos, ou seja, estes compostos esto activados. Maioria dos glcidos nucleotdicos esto no citosol, e resultam normalmente de reaces com o NTP correspondente. O CMP-cido silico (CMP-NeuAc) formado no ncleo. UTP + glicose 1P UDP-Glc
UDP-Glc pirofosfatase

UDP-Glc + PP i

UDP-Glc epimerase

UDP-Glc

Como a maioria das glicosilaes se do no Golgi, existe um sistema transportador. Os encontrados so antiportes, em que se troca um glcidos nucleotdicos pelo nucletido que resulta da hidrlise da ligao fosfato
da ACh UDP-Gal + protenaligao esterase UDP NDP fosfatase UMP + Pi

Protena Gal + UDP

O estudo de glicoprotenas facilitado pela existncia de exo- e endoglicosidases Nos mamferos, um receptor de assialoprotenas est envolvido na captao de glicoprotenas pelos hepatcitos reconhece a poro galactosil das glicoprotenas assialadas.

Lectinas:
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Podem ser usadas para purificar glicoprotenas e estudar as suas funes. So protenas que se ligam a glcidos localizados extracelularmente, que aglutinam clulas ou precipitam glicoconjugados, sendo muitas delas glicoprotenas Possuem dois locais de ligao a glcidos A sua especificidade normalmente definida pelos acares que so melhores a inibir a sua capacidade de causar aglutinao ou precipitao O receptor de assialoprotenas heptico uma lectina Utilizao de lectinas: purificao e anlise de glicoprotenas, como ferramentas para sondar as superfcies celulares e para gerar clulas mutantes sem algumas enzimas da sntese de oligossacridos.

Mucinas:
Mucinas so glicoprotenas que possuem 2 grandes particularidades: elevado contedo de ligaes O-glicosdicas (mas tambm possuem ligaes N-glicosdicas) existem muitas sequncias repetitivas de aminocidos na sua poro peptdica, ricas em serina, treonina e prolina Existem mucinas: de membrana participam nas interaces clula-clula mascaram alguns antigneos e de secreo (no muco gastrointestinal, respiratrio e do sistema reprodutor) o muco constitudo por 94% gua e 5% mucinas. estas mucinas so normalmente oligomricas, com os monmeros unidos por ligaes bissulfito. os mucos possuem grande viscosidade podem formar gel, devido presena das mucinas (devido s fortes ligaes no covalentes que se estabelecem entre as pores glicdicas e polipeptdicas entre as mucinas). a presena elevada de NeuAc e sulfato torna-as negativas funes: lubrificao, barreira de proteco fsica dos epitlios Glicosilao no enzimtica de protenas: Fixao de monossacridos extremidade NH2 dos aminocidos Pode ser de duas formas: Lbil (base Schift ou aldimina) Cetoamina (estvel) Em casos de hiperglicmia poder ocorrer glicosilao no-enzimtica de multiplos tipos de proteinas (celulares e circulantes) inibindo-as.

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Biossntese glicosdicas

de

Glicoproteinas

com

ligaes

O-

Transferncia de acares provenientes de aucares-nucletidos apropriados, envolvendo um conjunto de glicosiltransferases de glicoproteina ligadas membrana actuando de forma sequencial; cada transferase geralmente Protena especfica para um tipo particular nxNDP-monossacridos Glicosiltransferase de ligao s de glicoprotena As enzimas envolvidas esto localizadas em vrios Glicoprotena subcompartimentos do aparelho de Golgi A O-glicosilao ocorre psRemodelao e alongamento dos olidossacridos traduo, em determinados Localizao intracelular ou exocitose resduos de Ser ou Thr.

Biossntese glicosdicas

de

Glicoproteinas

com

ligaes

N-

Glicoprotenas N-ligadas possuem uma ligao Asn-GlcNAc a maior classe de glicoprotenas, sendo as melhores estudadas Inclui glicoprotenas de membrana e circulantes. A sua sntese diferente da das glicoprotenas O-ligadas. Principais classes das N-ligadas: complexas hbridas ricas em manose

Estas classes possuem em comum um pentassacrido Man3GlcNAc2, mas diferem nas restantes ramificaes no incio, todas estas classes comeam pela sntese deste pentassacrido

Fases da biossntese:
A. Sntese e transferncia do oligossacrido-PP-dolicol B. Processamento da cadeia oligossacrida

A. Sntese e transferncia do oligossacrido-PP-dolicol


Dolicol um composto poliisoprenide constitudo por 17-20 unidades isoprenides repetidas Primeiro este composto deve ser fosforilado, pela dolicol cinase:

1. Forma-se GlcNAc-PP-dolicol a partir de Dol-P e UDP-GlcNAc como doador. Este um lpido que actua como aceptor de glcidos na sntese de oligossacrido-PP-dolicol, sendo sintetizado na membrana do RER 2. O 2 resduo de GlcNAc adicionado ao primeiro, pelo mesmo mecanismo 3. 5 resduos de Man so adicionados, utilizando GDP-Manose como doador 4. 4 resduos de Man so adicionados utilizando Dol-P-Man como doador.

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5. 3 resduos de glicose so doados pelo Dol-P-Glc 6. Forma-se Glc3Man9GlcNAc2-PP-dolicol Note-se que os 7 primeiros glcidos so transferidos de nucletidos e os restantes 7 so do dolicol O oligossacrido ligado ao dolicol transferido em bloco para o resduo Asn da protena do lmen do RER pela oligossacrido:protena transferase (enzima de membrana do RER), O resduo Asn de tripptidos Asn-X-Ser/Thr (X qualquer aminocidos excepto prolina, aspartato e glutamato), Podem intervir outros factores na seleco do resduo a glicosilar Proteinas de secreo e intrinsecas de membrana podem ser aceptoras do olissacrido (as citoslicas raramente so) Outro produto da reaco o dolicol-PP que convertido a dolico-P, por uma fosfatase, sendo reutilizvel.
Dolicol ATP ADP Dolicol cinase Dolicol P UDP-N-acetilglicosamina UMP Glicosil transferase

N-Acetilglicosamina-dolicol PP UDP-N-acetilglicosamina UDP 2(N-Acetilglicosamina)-dolicol PP 5(GDP-Manose) 5 UDP 5(manose) 2(N-Acetilglicosamina)-dolicol PP 4(Dolicol P-Manose) 4 Dolicol-P 9(manose) 2(N-Acetilglicosamina)-dolicol PP 3(Dolicol P-Glicose) 3 Dolicol-P 3(glicose) 9(manose) 2(N-Acetilglicosamina)-dolicol PP Protena Dolicol PP Glicoprotena

Remodelao e alongamento dos olidossacridos Localizao intracelular ou exocitose

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B. Processamento da cadeia oligossacrida


1. Fase inicial Reaces reaco 2 reaco 3 reaco 4 reaco 5
AG

RE

reaco 6 reaco 7

Cadeias ricas em manose Cadeias complexas remoo da glicose terminal pela glicosidase I remoo das 2 glicoses seguintes pela glicosidase II Processo pode parar aqui, So removidos 4 resduos ou podem ainda ser externos de manose por, pelo removidos 4 resduos de menos, 2 manosidases manose Resduo de GlcNAc a um resduo de manose pela GlcNAc transferase I Pela Golgi manosidase II, reduzem-se as manoses do ncleo para 3

As enzimas lisossomais: Reaco 4: remoo de um resduo manose Reaco 5. um resduo de GlcNAc-1-Para adicionada ao carbono 6 de um resduo de manose especfico, pela GlcNAc fosfotransferase: UDP-GlcNAc + Manprotena GlcNAc-1-P-6-Manprotena + UMP GlcNAc removida por uma fosfodiesterase, deixando a 6-P-Manprotena. Receptores Man-6P localizados no aparelho de Golgi ligam-se aos resduos Man-6P dirigindo-se para os lisossomas. 2. Fase tardia verifica-se a adio de outros acares Reaco 8
AG

Uma segunda GlcNAc adicionada ao outro brao da ramificao glicdica, pela GlcNAc transferase II Adio de Fuc, Gal e NeuAc em locais especficos, catalizadas pelas fucosil, galactosil e sialil transferases A formao de N-Acetillactosamina necessita de mais GlcNAc transferases

Reaces 9, 10, 11

Importncia de alguns intermedirios da N-glicosilao: As grandes cadeias glicdicas N-ligadas presentes nas glicoprotenas recm sintetizadas mantm a sua solubilidade no lmen do RER Algumas cadeias participam no enrolamento e na reteno de determinadas protenas: Calnexina uma chaperone do RER

Regulao

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Os factores que influenciam a biossntese de glicoproteinas: presena de locais que sejam aceptores adequados nas protenas concentrao de Dol-P actividade da oligossacrido transferase Tipo celular (diferenas nos perfis enzimticos) Enzima prvia (certas glicosiltransferases actuaro apenas num oligossacrido) Desenvolvimento (conformao dos genes on/off) Localizao intracelular Conformao da protena (pode facilitar ou dificultar o acesso de enzimas processadoras a cadeias de oligossacardeos) Cancro (as clulas cancergenas podem exibir enzimas processadoras diferentes das normais) Inibio da N-glicosilao: Tunicamicina (inibe a GlcNAc-P transferase, na 1 reaco da biossntese do oligossacrido-PP-dolicol) Desoxinojirimicina (inibidor das glicosidades I e II) Swainsonina (inibidor da manosidase II) A extenso das cadeias O-ligadas pode ser inibida competitivamente pelo GalNAc-benzil, impedindo a adio de GalNAc.

ncoras de GPI (GlicosilPhosfatidilInositol)


As ncoras de GPI (GlicosilPhosfatidilInositol) so caractersticas da camada externa das membranas plasmticas O primeiro elemento lipidico da ncora uma molcula de fosfatidilinositol (PI). A unidade inositol liga-se a um ncleo glicidico constituido por glicosamina e 3 residuos manose. A molcula de fosfatidiletanolamina liga-se atravs do grupo fosfato ao carbono 6 da manose. O grupo amina da fosfatidiletanolamina forma uma ligao amina com o terminal carboxilo de GPI-linked
Protena etanolamina-P man man man GlcN mio-inositolfosfolpido

proteins. Funes da ligao: permite a ligao do sector hidrofbico s proteinas da superficie externa aumenta a mobilidade (lateral e rotao) destas protenas de membrana transduo de sinal sinalizao para o domnio apical da membrana plasmtica das clulas epiteliais

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Glicoproteinas e processos biolgicos


Fertilizao:
Compem grande parte da zona pelcida do ocito (ZP 1, 2 e 3) A ZP3 receptora do espermatozide, na reaco acrossomal

Selectinas e o processo inflamatrio:


Clulas endoteliais interagem com os leuccitos atravs de selectinas (tambm atravs de integrinas e imunoglobulinas) em ambas as membranas plasmticas, aderindo entre si So protenas transmembranares que se ligam ao Ca2+, com vrios domnios O seu terminal amino tem um domnio lectina, para se ligar a glcidos especficos

Aspectos Clinicos
Hemoglobinria paroxismal nocturna
uma anemia ligeira, em que existe Hb na urina devido hemlise dos eritrcitos durante o sono diminuio do pH durante o sono, aumentando a susceptibilidade de lise pelo sistema complemento. um defeito na enzima que liga a glicosamina + PI GPI, em 2 protenas (DAF factor de acelerao de decaimento e CD59) que interagem com o sistema complemento de modo a evitar aces hemolticas

Doenas das clulas I


devido a problemas na sinalizao das enzimas lisossomais origina atraso psico-motor e sinais fsicos que podem conduzir morte defeito na enzima GlcNAc fosfotransferase, pelo que as enzimas lisossomais so secretadas (ex.: para o plasma) os lisossomas no vo possuir determinadas hidrolases. nem todas as clulas fazem sinalizao de Man 6P para os lisossomas (ex.: hepatcito), nem todas as enzimas lisossomais tm esta sinalizao

Defeitos genticos em glicoprotenas lisossomais


provoca: manosidose, fucosidose, sialisidose, aspartilglicosaminria e doena de Schindler (acumulao da acetilgalactosamina) usualmente exibem retardo mental ou outras anormalidades neurolgicas, poder ocorrer visceromegalia.

Glicoprotenas tambm participam, directa ou indirectamente, na contaminao por Influenza, HIV-1, artrite reumatide, infeces recorrentes, (Harpers pgs 692/3)

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Proteoglicanos e glicosaminoglicanos
Proteoglicanos:
Protenas unidas por ligaes covalentes a 1 ou + cadeias de glicosaminoglicanos. Existem associados a elementos estruturais dos tecidos (sseo, cartilageneo, ...) A percentagem de glcidos elevada, podendo atingir 95%. Variam de acordo com: distribuio pelos tecidos natureza do centro proteico (core protein) glicosaminoglicanos ligados funo

Exemplo de Proteoglicano: Agrecano muito grande, com estrutura em forma de escova Possui uma longa cadeia de hialuronato, qual se ligam no covalentemente protenas de ligao (link proteins) Estas protenas de ligao interagem no covalentemente a protenas centrais (sulfato de queratano e sulfato de condroitina) Funes: Lubrificao de superfcies (ex.: crnea, articulaes) Deformabilidade dos tecidos (ex.: cartilagem articular) Adeso intercelular (ex.: tecido conjuntivo matrix extracelular), havendo interaco com protenas adesinas como fibronectina e laminina. Suporte proliferao celular (ex.: para factores de crescimento e proliferao) Manuteno do equilbrio hidrossalino corporal (GAG so polianinicos: ligam-se a policaties, Na+ e K+ atrai e retm gua) Filtrao para macromolculas na matriz (so gel, em baixas concentraes)

Glicosaminoglicanos
Glicidos complexos de elevado peso molecular constituidos por aminoacares e uronatos, em sequncias repetitivas de dissacridos. Com excepo do hialuronato, todos os GAG so sulfatados Hilaruronato tambm excepo porque no se liga covalentemente a protenas Existem pelo menos 7 glicosaminoglicanos: Hialuronato sulfato de condroitina sulfatos de queratano I e II heparina sulfato de heparano

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Biossntese de Glicosaminoglicanos
1. Sntese da protena central no RER 2. Ligao protena central, no RER Ligao O-glicosdica entre xilose e serina transfere-se uma Xyl da UDP-Xyl para a serina e adicionam-se mais 3 Gal serxylgalgal gal Ligao O-glicosdica entre GalNAc e Ser/Thr (sulfato de queratano II) transfere -se uma GalNAc da UDP-GalNAc para a ser/thr Ligao N-acetilglicosamina entre GlcNAc e o grupo amina da Asn (sntese usa oligossacrido-PP-dolicol) 3. No AG, alongamento da cadeia, com acares de nucletidos e glicosil-transferases especficas existe uma enzima para cada ligao criada 4. Terminao da cadeia: sulfatao e progresso da cadeia GAG em crescimento para fora do stio membranar, ondo ocorre a catlise. 5. No AG, outras modificaes: adicionar grupos sulfato a GalNAc (por sulfotransferases, usando 3-fosfoadenosina-5-fosfosulfato (PAPS) como dador de grupos sulfato) e epimerizao de GlcUA a IdUA (por uma epimerase)

sulfato de dermatano.

Diferenas entre GAG


Diferem em: composio em acares aminados composio em cido urnico ligaes entre os componentes comprimento da cadeia de dissacridos presena ou ausncia de grupos sulfato ligao a protenas centrais distribuio tecidual e subcelular funo biolgica

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Tipos Condroitinosulfato Queratanosulfato Heparanosulfato

Unidades repetitivas em sequncia Glicuronato + N-acetilgalactosamina Galactose + NAcetilglicosamina Glicuronato + glicosamina

Localizao Cartilagem, tendes, ligamentos, locais de ossificao endocondral Crnea (I), cartilagem, osso Ubquo nas membranas celulares, parede vascular

Funes Endoesqueleto de neurnios

Heparina Dematanosulfato Hialuronato

Iduronato + glicosamina Iduronato(ou glicuronato) + N-acetilgalactosamina Glicuronato + NAcetilglicosamina

Mastocitos, anticoagulante e antilipemiante Pele, parede vascular, vlvulas cardacas, anticoagulante Humor vtreo, liquido sinovial, cordo umbilical

Receptor Mediao do crescim. Comunicao intercel. Selectividade de cargas da filtrao glomerular Liga-se lipoprotena lipase libertao para a circulao Funo estrutural na esclera Migrao celular (na morfognese embrionria) Cicatrizao Compressibilidade da cartilagem

Aspecto Clinico
Deficincias na degradao de GAG causam mucopolissacaridoses Exo e endoglicosidases degradam GAG, que so sujeitos a turn-over. GAG so degradados por hidrolases lisossomais, com exo- e endoglicosidases e sulfatases. Quando no so degradados, os GAG acumulam-se, em particular no fgado, bao, osso, pele e SNC. Os defeitos genticos que esto na base destas patologias so herdados de forma autossmica recessiva. Os mais estudados so os sndromes de Hurler e Hunter. Anlises: urina (aumento de GAG), anlise da actividade das enzimas em leuccitos, fibroblastos, e soro, bipsia tecidual, teste de DNA, diagnstico pr-natal (clulas amniticas ou vilosidades corinicas). Mucolipidose refere-se acumulao de mucopolissacaridoses e esfingolipidoses. Hialuronidase uma enzima muito importante envolvida no metabolismo do hialuronato e sulfato de condroitina uma endoglicosidase que cliva ligaes hexosamnicas

Associao com as grandes doenas e com o envelhecer


Cancro: Hialuronato pode ser importante na migrao tumoral. Diminuio do sulfato de heparano superfcie pode diminuir a adesividade entre as clulas. Aterosclerose: A camada ntima das artrias possui hialuronato, sulfato de condroitina, sulfato de dermatano e sulfato de heparano sulfato de dermatano liga-se s LDL. sintetizado em grandes quantidades pelo msculo liso arterial estas clulas proliferam na aterosclerose aumento do sulfato de heparano agravamento da doena.

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Artrite: proteoglicanos podem agir como antignios: sulfato de condroitina nas cartilagens diminui com a idade, sulfato de queratano e hialuronato aumentam.

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