SELECCIN DE UN MEDIO DE CULTIVO PARA AISLAMIENTO DE UNA BACTERIA AISLADA DEL KEFIR Mara Liliana Bolaos Carrillo 1, Gabriel

Leyva Ruelas 2 y Ernestina Valadez Moctezuma3

Estudiante de la Maestra en Ciencia y Tecnologa Agroalimentaria. Universidad Autnoma Chapingo.Direccin: km 38.5 Carr. Mxico Texcoco. C.P. 56230. E-mail: lilianabc@correo.chapingo.mx 2, Profesor investigador del Departamento de Ingeniera Agroindustrial.Universidad Autnoma Chapingo. Direccin: km 38.5 Carr. Mxico Texcoco. C.P. 56230. E-mail: gleyva_ruelas@hotmail.com 3 Profesor investigador del Departamento de Fitotecnia. Universidad Autnoma Chapingo. Direccin: km 38.5 Carr. Mxico Texcoco. C.P. 56230. E-mail: evaladez@taurus1.chapingo.mx
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Resumen Se evaluaron dos medios y dos tcnicas de siembra para el aislamiento de Lactobacillus sp. A partir de granos de kfir. Los resultados indicaron que el mejor medio de cultivo para el aislamiento de Lactobacillus sp. Fue agar leche utilizando la tcnica de vaciado en placa. Introduccin El kfir es un producto lcteo fermentado por medio de microorganismos que se encuentran agrupados en granos, que sirven como inculo para la obtencin del producto lcteo. La microflora de los granos es muy diversa, est compuesta por bacterias y levaduras, depende de la regin de elaboracin del producto y no est totalmente identificada. Es posible por lo tanto, encontrar cepas an no identificadas dentro de los granos del kfir, que aporten nuevas caractersticas a la leche fermentada que se obtenga por medio de ellas. Para ello, es necesario utilizar y desarrollar medios de cultivo que permitan su aislamiento y desarrollo para su posterior identificacin. Para el cultivo de bacterias lcticas se han desarrollado medios tales como el MRS y el Rogosa, sin embargo, existen otras alternativas para conservar las bacterias lcticas, siempre y cuando se mantengan los nutrientes necesarios para su crecimiento. En este trabajo se propone el uso de medios distintos y se evalan dos tcnicas de siembra para el asilamiento y desarrollo de cepas de Lactobacillus.

Justificacin Existen medios de cultivo formulados para el aislamiento y desarrollo de bacterias lcticas, sin embargo, su costo es muy elevado comparado con medios no selectivos y de uso general, por lo que es necesario evaluar el crecimiento en otros medios diferentes. Objetivos Evaluar dos medios de cultivo para el aislamiento y mantenimiento de bacterias del gnero Lactobacillus aisladas del kfir. Evaluar dos tcnicas de siembra para el aislamiento y mantenimiento de bacterias del gnero Lactobacillus aisladas del kfir. Materiales y Mtodos La fuente de obtencin de Lactobacillus sp fue leche fermentada (kfir) preparada en el laboratorio de Microbiologa del Departamento de Ingeniera Agroindustrial. Se prepar una dilucin 10-3 que se utiliz como inculo (1%) para sembrar los medios de cultivo descritos en el Cuadro 1. Cuadro 1. Relacin de tratamientos del experimento Tratamiento * 1 2 3 4 Medio de cultivo Agar leche Agar leche Agar de caseinatos Agar de caseinatos Tcnica de siembra Estra cruzada Vaciado en placa Estra cruzada Vaciado en placa

* 4 repeticiones para cada tratamiento. Los cultivos se incubaron a 37 C por 24 horas. Despus de este tiempo, se contaron las colonias por placa, para cada tratamiento y finalmente se verific la pureza de los cultivos al microscopio (mediante tincin de Gram).El diseo experimental fue completamente al azar, los resultados se analizaron mediante un anlisis de varianza y para establecer diferencias entre tratamientos se utiliz la prueba de Tukey. La unidad experimental fue una caja de petri con 20 ml de medio de cultivo. La variable respuesta fue el nmero de colonias obtenidas de Lactobacillus sp.

Resultados y Discusin El medio de cultivo agar leche con la tcnica de siembra de vaciado en placa fue el tratamiento que favoreci el aislamiento de Lactobacillus sp y el desarrollo de mayor nmero de colonias con alto grado de pureza; sobre el particular, Simova et al (2002) encontraron que el medio agar leche descremada tambin es apropiado para el aislamiento y purificacin de Lactobacillus sp. Se observ adems, que al aumentar la temperatura de incubacin se estimul el desarrollo de Lactobacillus sp, esto coincide con lo reportado por Cogan et al (1997). Por otro lado, se observ que utilizando agar leche como medio de cultivo se logr mayor uniformidad de las colonias, mientras que utilizando el agar de caseinatos se favoreci el desarrollo del gnero Streptococcus sp. Conclusiones El mejor medio de cultivo para el aislamiento y desarrollo de Lactobacillus sp es agar leche, sembrado con la tcnica de vaciado en placa.

Referencias 1. Cogan T, Barbosa M, Beuvier E, Bianchi-Salvadori B, Cocconcelli P, Fernandes I, Gmez J. 1997. Characterization of the lactic acid bacteria in artisanal dairy products. Journal of Dairy Research 64: 409-421. 2. Simova E, Beshkova D, Angelov A. 2002. Lactic acid bacteria and yeasts in kefir grains and kefir made from them. Journal of Industrial microbiology & Biotechnology. 28: 1-6.