Anda di halaman 1dari 18

jaringan ikat metabolisme pada pasien Chikungunya

1 2 1 Sudarsanareddy Lokireddy 1 , Sarojamma Vemula 2 dan Ramakrishna Vadde 1 1 Departemen Bioteknologi, Sri Krishnadevaraya University, Anantapur, India 2 2 Department of Community Medicine, Medical College Pemerintah, Anantapur, India penulis email sesuai penulis email 1

Virologi Journal 2008, 5: 31 DOI: 10.1186/1743-422X-5-31 Versi elektronik dari artikel ini adalah yang lengkap dan dapat ditemukan secara online di: http://www.virologyj.com/content/5/1/31 Diterima: Diterima: Diterbitkan: 16 Januari 2008 27 Februari 2008 27 Februari 2008

2008 Lokireddy et al; licensee BioMed Central Ltd Ini adalah Akses Terbuka artikel didistribusikan di bawah ketentuan Creative Commons Attribution License ( http://creativecommons.org/licenses/by/2.0 ), yang memungkinkan tidak dibatasi penggunaan, distribusi, dan reproduksi dalam media apapun, asalkan karya asli benar dikutip.

Abstrak
Latar belakang
Chikungunya (Chik) demam adalah penyakit virus ditularkan kepada manusia oleh gigitan virus Chikungunya (Chik virus) yang terinfeksi nyamuk Aedes. Chik virus adalah anggota dari genus Alphavirus dari Togaviridae keluarga. Laporan sebelumnya telah menunjukkan bahwa infeksi virus Chik menghasilkan arthritis akut pada host manusia berdasarkan wilayah besar dan collagenosis nekrosis atau fibrosis.

Hasil
Kami melakukan studi ini untuk menentukan pengaruh Chikungunya di atas kolagen dan metabolisme jaringan ikat di 75 orang yang terkena Chikungunya. Pertama, kita diputar untuk mucopolysaccharides dalam urin oleh setil trimetil Amonium Bromida (CTAB) uji. Penampilan endapan berat menunjukkan adanya tingkat yang lebih tinggi dari mucopolysaccharides dan kemudian dihitung dengan metode dye DMB. The mucopolysaccharide kemih pada pasien Chik adalah 342 45 mg / l dibandingkan dengan kontrol sehat (45 5,6 mg / l). Blok bangunan kolagen, prolin dan hydroxyproline juga diukur pada pasien Chik dan diamati ekskresi yang lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol sehat. Ekskresi kemih hydroxyproline lebih besar daripada tingkat prolin.

Kesimpulan
Hasil ini menunjukkan bahwa infeksi virus dan kerusakan Chik mempengaruhi metabolisme tulang rawan dan ikat dan melepaskan produk rusak dari jaringan dan bertanggung jawab untuk meningkatkan tingkat prolin, hydroxyproline dan mucopolysaccharides pada pasien Chik terpengaruh.

Latar belakang
Chikungunya (Chik) demam adalah penyakit virus ditularkan kepada manusia oleh gigitan virus Chikungunya (Chik virus) yang terinfeksi nyamuk Aedes. Chik virus adalah anggota dari genus Alphavirus dari Togaviridae keluarga. Chik virus pertama kali diisolasi dari serum pasien demam selama wabah demam berdarah yang terjadi di Kecamatan Newala, Tanzania pada tahun 1953 [ 1 ]. Para alphavirus adalah partikel menyelimuti dan genom mereka terdiri dari terdampar, positif-sense RNA tunggal molekul sekitar 12.000 nukleotida. Chik virus merupakan patogen manusia penting yang menyebabkan sindrom penyakit yang ditandai dengan demam, sakit kepala, ruam, mual, mialgia muntah, dan arthralgia [ 2 - 8 ]. asosiasi Its dengan kondisi perdarahan fatal dilaporkan di India [ 9 ]. Chik virus secara geografis didistribusikan dari Afrika melalui Asia Tenggara, dan transmisi untuk manusia terutama melalui spesies nyamuk Aedes [ 1 ]. Sejak 1953, viurs Chik telah menyebabkan wabah terdokumentasi dengan baik banyak dan wabah di Afrika dan Asia Tenggara, yang melibatkan ratusan ribu orang [ 10 - 12 ]. Laporan terbaru menggambarkan wabah penyakit Chik besar terjadi di pulau-pulau di Samudra Hindia, lepas pantai timur Afrika [ 5 , 8 , 13 ]. Timbulnya kembali Chik juga telah dilaporkan dari Indonesia [ 14 ] dan sangat wabah besar baru-baru ini di India. Tidak ada pengobatan atau vaksin tersedia, dan relatif sedikit penelitian telah dilakukan ke dalam patogenesis nya, dibandingkan dengan arbovirus lainnya, seperti demam berdarah. Laporan sebelumnya telah menunjukkan bahwa infeksi virus Chik menghasilkan arthritis akut pada host manusia [ 7 , 15 , 16 ] berdasarkan wilayah besar dan collagenosis nekrosis atau fibrosis [ 17 ]. Arthritis adalah radang sendi dan jaringan sekitarnya, termasuk tulang rawan, ligamen, dan tendon. jaringan ikat terutama terdiri dari mucopolysaccharides, zat protein - kolagen dengan asam amino utama prolin, dll hydroxyproline, kalsium, belerang, dan kolagen. Mucopolysaccharide, pengukuran prolin dan hydroxyproline dalam urin digunakan dalam diagnosis dan pengobatan gangguan berbagai diwariskan yang mempengaruhi tulang dan jaringan ikat. Kehadiran mereka dalam urin berasal dari bahan dasar kolagen, dan tulang [ 18 - 20 ]. Meskipun banyak laporan menyatakan bahwa virus Chik menghasilkan arthritis pada manusia. mekanisme biokimia ini dan perubahan mucopolysaccharides, prolin dan hydroxyproline dalam

nyeri sendi akut belum dilaporkan dalam literatur masa lalu. Selama musim tahun terakhir wabah demam Chik di bagian Selatan India telah membawa kita ke carryout percobaan tentang pengaruh virus Chik pada kolagen dan jaringan ikat. Dalam studi ini kami mengumpulkan sampel darah dan urin dari penderita demam kronis Chik dan parameter biokimia dipelajari terkait dengan jaringan ikat, yang bertanggung jawab untuk nyeri sendi dan artritis akut.

Hasil
Chik pasien telah melaporkan incapacitating nyeri sendi, atau radang sendi, yang dapat berlangsung selama beberapa minggu atau bulan. Parameter biokimia umum pasien Chik dan kontrol sehat digambarkan dalam Tabel 1 . albumin serum dan kreatinin yang menunjukkan variasi yang signifikan dengan kontrol. Kami melakukan studi ini untuk menentukan pengaruh Chik di atas kolagen dan metabolisme jaringan ikat dengan mengukur tingkat mucopolysaccharide, hydroxyproline dan prolin dalam sampel urin pasien Chik. Urine dari 75 pasien menderita berbeda dengan Chik telah dievaluasi untuk kehadiran mucopolysaccharides oleh skrining trimetil setil amonium bromida (CTAB) tes dalam urin. Penampilan endapan berat menunjukkan adanya mucopolysaccharides dalam sampel. Jumlah endapan tergantung pada konsentrasi mucopolysaccharides. Tergantung pada konsentrasi mereka, sampel diklasifikasikan sebagai negatif, ringan, sedang, dan berat. Dalam studi ini, kami mengamati sedang hingga kasus yang parah. Kontrol sehat menunjukkan tidak ada endapan dengan CTAB. Kami juga diukur secara kuantitatif kemih tingkat mucopolysaccharides dalam spesimen urin pagi pertama dengan metode sederhana dan cepat DMB dan digunakan dalam memahami patofisiologi penyakit arthritis di Chik. mucopolysaccharides kemih (GAG) ekskresi pada pasien meningkat secara signifikan dibandingkan dengan kontrol sehat. Kami juga mengamati variasi yang signifikan pada tingkat ekskresi urin dari Tabel hydroxyproline dan prolin dengan kontrol sehat ( 2 ). Para pasien menderita dengan Chik diekskresikan tingkat yang lebih tinggi hydroxylproline dari prolin. Kami juga melakukan tindak lanjut dari penelitian selama 10 pasien dengan persetujuan mereka sampai satu minggu yang telah sakit rematik kronis. The mucopolysaccharides diekskresikan kencing terus menerus tinggi dalam dua hari pertama dan tingkat perlahan-lahan penurunan pada hari kemudian, tetapi pada akhir satu minggu (sampai 10 hari) kami menemukan masih pasien mengeluarkan nilai yang lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol (Tabel 3 ). Perubahan tingkat hydroxyproline kencing dan prolin juga diukur dan mengamati perbedaan yang signifikan dengan kontrol sehat.
Tabel 1. karakteristik biokimia dan Chikungunya pasien normal Tabel 2. Pengaruh Chikungunya (pada hari rata-rata 3 - 5) pada tingkat prolin, dan asam mucopolysaccharides hydroxyproline Tabel 3. Perubahan urin hydroxyproline prolin, dan mucopolysaccharides selama demam Chikungunya panjang minggu.

Diskusi
Proteoglycan, sebuah bangunan mucopolysaccharide blok tulang rawan dalam ruang bersama, digunakan oleh kondrosit (sel tulang rawan-bangunan) untuk membuat tulang rawan lebih. Setelah infeksi patogen, sendi biasanya menunjukkan respon peradangan alami yang terutama mempengaruhi sinovium (sinovitis). Proses ini diperlukan untuk perbaikan jaringan yang rusak bawaan, yang memungkinkan bersama untuk menutup fungsi normal. Mediator inflamasi dilepaskan ke sendi dari sumber seperti saraf, immunocytes, synoviocytes, dan vascular endothelium membantu untuk mengatur tanggapan ini penyembuhan. Ini mediator inflamasi yang sama juga bekerja pada saraf-saraf bersama, yang mengarah ke baik eksitasi atau sensitisasi [ 21 ]. Ketika orang-orang menderita arthritis, mereka mengalami kehancuran selektif kolagen dalam tulang rawan sendi mereka. Kolagen adalah protein struktural yang paling melimpah di tulang rawan. Ini membantu memberikan elastisitas sendi dan bekerja sebagai "perekat" yang memegang bersama berbagai komponen tulang rawan. Hal ini juga berisi sebagian besar mucopolysaccharides yang memberikan kekuatan tulang rawan penyembuhannya. Mucopolysaccharides secara massal besar-molekul polimer karbohidrat linear terdiri dari asam glukuronat atau iduronic dan N-acetylglycosamine atau unit N-asetilgalaktosamin. Sulfat dan Chondroitin sulfat heparan berasal dari proteoglikan di mana ini glukosaminoglikan (GAG) yang kovalen dihubungkan pada akhir mengurangi ke grup hidroksil residu serin [ 22 ]. Proteoglikan mengandung GAG terikat untuk agregat membentuk asam hyaluronic besar yang terjerat dalam jaringan kolagen sebagai unsur struktural utama dari tulang rawan. Kehilangan proteoglikan adalah fitur awal resorpsi matriks. Erosi dari lapisan tulang rawan sendi merupakan ciri khas osteoarthritis. Peningkatan yang sesuai pada GAG telah dilaporkan dalam cairan sinovial, serum, dan urin pasien dengan penyakit rematik rematik [ 23 , 24 ]. Konsisten dengan ini, kami mengamati dalam studi kami ekskresi yang lebih tinggi dari mucopolysaccharides melalui urin (Tabel 2 ). Pengukuran ekskresi urin hydroxyproline digunakan untuk memperkirakan katabolisme kolagen. Degradasi peptida kolagen tulang rilis 4-hydroxyproline dan bebas yang mengandung 4-hydroxyproline ke plasma. pengukuran hydroxyproline kencing sangat berguna dalam memantau pengobatan dan kemajuan dalam penyakit tulang metabolik seperti osteomalasia dan osteoporosis dan penyakit Paget. Hydroxyprolme muncul dalam urin setelah degradasi kolagen (collagenosis), yang mungkin berasal dari berbagai jaringan [ 25 ]. Mengukur hydroxyproline kemih telah didominasi telah digunakan untuk menunjukkan pergantian kolagen tulang dalam kondisi normal dan patologis. Kolagen, yang merupakan> 90% dari lemak bebas matriks organik tulang, adalah penting dalam integritas struktural dan merupakan elemen utama struktur jaringan ikat di mana fase mineral yang mengkristal selama pembentukan tulang [ 20 , 26 ]. hydroxyproline urin mencerminkan perputaran kolagen harian dan pada manusia telah menunjukkan potensi besar sebagai indeks status gizi dan laju pertumbuhan [ 27 , 28 ]. Para pasien Chik menunjukkan tingkat lebih tinggi diekskresikan hydroxyproline dari prolin menunjukkan peningkatan kolagen omset (Tabel 2 ). Pada follow-up studi pada pasien Chik dipilih, peningkatan kadar mucopolysacchariedes, prolin dan hydroxyproline menunjukkan omset highermetabolic di awal

hari dan semakin surut di hari kemudian (Tabel 3 ).

Kesimpulan
Pada pasien Chik metabolisme kolagen dan jaringan ikat itu sangat dipengaruhi dan metabolisme meningkat menyebabkan peningkatan ekskresi prolin, hydroxyproline dan mucopolysaccharides dalam urin dibandingkan dengan kontrol sehat. Hal ini menunjukkan bahwa infeksi virus Chik, jaringan ikat biasanya menunjukkan respon inflamasi dan menyebabkan kerusakan tulang rawan dan jaringan ikat, metabolisme meningkat dan melepas produk terdegradasi ke darah dan akhirnya dibuang melalui urin.

Bahan dan metode


Subjek
Selama tahun pada Juli - Oktober 2006, Chik break out di Andhra Pradesh, India, total 75 (45 jantan + 30 betina) pasien dipilih berdasarkan gejala penyakit untuk penelitian ini. Kami juga mengambil 20 usia-orang sehat yang cocok dipilih dari masyarakat dan digunakan sebagai subjek kontrol. Sampel darah dan air seni dikumpulkan dari setiap mata pelajaran dengan persetujuan tertulis untuk studi lanjut. Dari semua mata pelajaran, 5 ml darah dikumpulkan dalam tabung heparinized dan disentrifugasi pada 1500 g selama 15 menit pada 4 C. Plasma dan pellet RBC dipisahkan disimpan dalam tabung Eppendorf dan disimpan pada -80 C sampai analisis. Kit komersial tersedia diukur analisis Darah dan parameter umum lainnya.

Analisis Urin
Sampel urin dikumpulkan dari pasien dan digunakan untuk estimasi dari mucopolysaccharides, prolin dan hydroxyproline. Total penentuan hydroxyproline kemih dilakukan menggunakan metode yang dijelaskan oleh Cleary dan Saunders (1974) [ 29 ]. Secara singkat, urin melewati kolom resin ion retardasi untuk menghilangkan asam, garam, dan pigmen. Dari eluat kolom, urin penentuan hydroxyproline dilakukan oleh teroksidasi menjadi pirol asam 2-karboksilat dan kemudian ke pyrole. Warna diproduksi dengan benzaldehida dimetil amino-adalah masured pada 560 nm [ 30 ]. Tingkat prolin dalam sampel urin diukur dengan metode Bates et al (1973) [ 31 ]. Dua sampel urin ml dicampur dengan 2 ml pereaksi ninhidrin asam dan disimpan dalam bak air mendidih selama 1 jam Tabung dipindahkan ke penangas es untuk menghentikan reaksi. 5 toluena ml ditambahkan dan dicampur dan membaca pada 520 nm terhadap toluena kosong. uji Skrining untuk mucopolysaccharides dalam urin diuji oleh Amonium setil trimetil Bromida (CTAB) uji. Lima ml urin segar ditambahkan dengan 1 ml CTAB (cetavilon) larutan (50 g / l dalam buffer sitrat (1 M) dari pH 6,0). Sebuah endapan berat menunjukkan adanya mucopolysaccharides (Varley et al 1990). DMB Uji dilakukan dasarnya untuk pengukuran mucopolysaccharides sesuai dengan metode et al Whitley. (1989) [ 32 ]. Secara singkat, DMB (1,9-dimethylmethylene biru) larutan zat warna dibuat dengan melarutkan 16 mg DMB, glisin 3,04 g, 2,37 g natrium klorida, dan 0,5 ml 0,1 mol / l asam klorida dalam 1 l air suling . PH larutan disesuaikan dengan 3. Untuk setiap uji, spesimen urin pasien dicampur dengan 1 ml larutan pewarna pada suhu kamar, dan absorbansi diukur pada 525 nm tanpa penundaan setelah pencampuran sampel dan larutan zat warna. Alat tes telah dikalibrasi ayat kurva standar kondroitin sulfat (5-100 mg / l). Hasilnya dinyatakan sebagai mg / l. Semua estimasi kolorimetri parameter biokimia diatas dalam sampel diukur dengan menggunakan Biotek ELISA Reader.

Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan oleh perangkat lunak InStat GraphPad. Subyek dengan Chik dibandingkan dengan kontrol sehat. Sarana dan standard error berarti dihitung dan perbedaan antara berarti adalah siswa t-test.

Penulis Kontribusi
SL merancang dan melakukan percobaan dengan darah pasien, sampel urin. SL juga dilakukan analisis statistik akhir dari data dan memberikan kontribusi untuk menulis kertas. SV (dia adalah spesialis dalam penyakit menular) panduan untuk kita untuk memilih pasien chikungunya untuk penelitian selama waktu darah dan pengumpulan urin. RV mengawasi proyek secara keseluruhan, dirancang percobaan, menganalisa data dan menulis kertas. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.

Ucapan Terima Kasih


Publikasi ini dilakukan sebagai bagian dari program 'Bioteknologi Pertanian tanah kering di Andhra Pradesh' dengan dukungan keuangan untuk Divisi Riset dan Komunikasi, Departemen Luar Negeri, pemerintah Belanda. Andhra Pradesh Belanda Bioteknologi Program, IPE, Hyderabad, India.

Referensi

1. 2.

Ross RW: Epidemi Newala. III. Virus: Isolasi, sifat patogen dan hubungan dengan epidemi. Jurnal Kebersihan 1956, 54:. 177-91 PubMed Abstrak Return to text Thaikruea L, Charearnsook O, Reanphumkarnkit S, Dissomboon P, Phonjan R, Ratchbud S, et al:.: Chikungunya

di Thailand suatu penyakit reemerging? Daerah tropis Asia Tenggara J Med Kesehatan Masyarakat 1997, 28:. 359-64 PubMed Abstrak Return to text

3.

Diallo M, Thonnon J, Traore-Lamizana M, Fontenille D: Vektor virus Chikungunya di Senegal: data saat ini dan siklus transmisi. American Journal Kedokteran Tropis dan Kebersihan 1999, 60: 281-286. Return to text

4.

Powers AM, Brault AaronC, Tesh RobertB, Weaver ScottC: Re-munculnya-nyong Chikungunya dan virus o'nyong: bukti silsilah geografis yang berbeda dan hubungan evolusi jauh. Jurnal tahun 2000 Umum, Virologi 81: 471-479. PubMed Abstrak | Publisher Full Text Return to text

5.

Schuffenecker Aku, Iteman saya, Michault A, Murri S, Frangeul L, Vaney MC, et al wabah. Genome: mikroevolusi Chikungunya virus menyebabkan Samudra Hindia. PLoS Med 2006, 6: 263. Full Teks Publisher Return to text

6. 7.

NiCd. Institut Nasional Penyakit Menular, New Delhi: Demam Chikungunya. CD 2006 Alert, 10 (2): 6-8. Return to text Paquet C, Quatresous I, Solet JL, Sissoko D, Renault P, Pierre V, Cordel H, Lasalle C, Thiria J, Zeller H, Schuffnecker I: Chikungunya wabah di Reunion: Epidemiologi dan pengawasan. Surveil Euro 2006, 11: 2. Return to text

8.

Nelson Lee, Wong chunk, Lam WaiY, Wong Ann, Lim Wilina, Lam ChristopherWK, Cockram CliveS, Sung JosephJY, Chan PaulKS, Tang JulianW: Chikungunya demam, Hong Kong. Emerging Infectious Diseases 2006, 12:. 1790 PubMed Abstrak Return to text

9.

Sarkar JK, Chatterjee SN, Chakravarty SK: demam Dengue di Calcutta: beberapa pengamatan epidemiologi. Indian J Med Res 1964, 52 (7): 651-9. PubMed Abstrak Return to text

10. 11.

Rao TR: epidemi baru-baru ini disebabkan oleh virus Chikungunya di India, 1963 - 1965. Budaya Scientifc 1966, 32: 215. Return to text Halstead SB, Scanlon JE, Umpaivit P, Udomsakdi S: Dengue dan Chikungunya infeksi virus pada manusia di Thailand, 1962 1964. IV. Epidemiologi penelitian di daerah metropolitan Bangkok. American Journal Kedokteran Tropis dan Kebersihan 1969, 18: 997-1021. Return to text

12.

Posey D, O'Rourke Thomas, Roehrig Johnt, Lanciotti Roberts, Weinberg Michelle, Maloney Susan: Laporan singkat:-nyong demam o'nyong di Afrika Barat. Am J Med Hyg 2005 daerah tropis, 73 (1): 32. PubMed Abstrak | Publisher Full Text Return to text

13. 14.

Lahariya C, Pradhan SK: Munculnya virus Chikungunya di benua India setelah 32 tahun: tinjauan. J Vect Dis Borne 2006, 43: 151-160. Return to text Laras K, Sukri NC, Larasati RP, MJ Bangs, Kosim R, Djauzi WT, et al Indonesia.: Pelacakan kembali munculnya epidemi chikungunya virus dalam. Trans R Soc Med Hyg daerah tropis 2005, 99: 128. PubMed Abstrak | Publisher Full Text Return to text

15. 16. 17.

Kennedy Ac, Flemming J, Salomo L: Chikungunya virus arthropathy: deskripsi klinis. J Rheumatol 1980, 7: 231-6. PubMed Abstrak Return to text Fourie ED, Morrison JG: sindrom rematik Arthritis setelah demam Chikungunya. S Afr Med J 1979, 56: 130-2. PubMed Abstrak Return to text zden S, M Huerre, JP Riviere, Coffey LL, PV Afonso, et al Infeksi. Otot Manusia Satelit: Sel sebagai Target Virus Chikungunya. PLoS ONE 2007, 2 (6): 527. Publisher Full Text Return to text

18. 19.

Kusam TA, Henneman PH: hydroxyproline urin sebagai indeks pergantian kolagen dalam tulang. Baru ENGL J Med 1963, 268: 132. Return to text Kawata H, T Koizumi, Wada R, Yo-Shida T: ekskresi urin mucopolysaccharide asam dalam kerusakan hati.

Gastroenterology 1959, 40: 507. Return to text

20. 21.

Grant C, Kachniar JF: asam amino dan metabolit terkait. Dalam Dasar-dasar kimia klinis. Dalam Philadelphia, Pennsylvania. Diedit oleh: NW Tietz. WB Saunders Co; 1982:377-400. Return to text Dougall Jason Jmc: Arthritis dan sakit: neurogenik asal nyeri sendi. Arthritis Research & 2006 Terapi, 8: 220. PubMed Abstrak | Teks Penuh BioMed Central | Full Teks Tengah PubMed Return to text

22. 23.

Margolis RK, Margolis RU: Struktur dan lokalisasi glikoprotein dan glukosaminoglikan glycoconjugates. Dalam Neurobiology of. Diedit oleh: Margolis RU, Margolis RK. New York: Plenum; 1989:85-126. Return to text Bensouyad A, Hollander AP, Dularay B, et al arthritis.: Konsentrasi glukosaminoglikan sinovial dalam cairan mereka dan hubungan imunologi dan inflamasi dengan mediator arthritis di. Ann selesma Dis 1990, 49: 301-7. PubMed Abstrak | Penerbit Teks Penuh | Full Teks Tengah PubMed Return to text

24.

Vladimir Kery, Maria Orlovska, Maria Stanlkova, Risko Martin, Daniel Zlna: Ekskresi urin glikosaminoglikan di Penyakit rematik. Klinis kimia 1992, 38 (6): 841. PubMed Abstrak | Publisher Full Text Return to text

25. 26.

Dequeker J, Mbuyi-Muamba JM, Holvoet G: hydroxyproline dan metastasis tulang.. Bone Dalam metastasis: pemantauan dan pengobatan Diedit oleh: BA Stoll, Parbhoo S. New York: Raven Press; 1983:181-99. Return to text Smith R, Elia M: Pentingnya hydroxyproline kencing dan-methylhistidine perubahan 3 dalam pertumbuhan, kelaparan dan cedera analisis. Amino-acid Dalam. Diedit oleh: JM Rattenbury. New York: Tekan Haistead; 1981:225-36. Return to text

27. 28. 29.

Whitehead RC: hydroxyproline rasio kreatinin sebagai indeks status gizi dan laju pertumbuhan. 1965, 567-570. Lancet PubMed Abstrak | Publisher Full Text Return to text Howells CR, Wharton BA, Mc Tebu RA: Nilai indeks hydroxyproline kekurangan gizi. 1967, 1082-1083. Lancet PubMed Abstrak | Publisher Full Text Return to text Cleary Aku, Saunders PA: Sebuah prosedur yang disederhanakan untuk pengukuran total hydroxyproline dalam urin. Clin Chem Acta 1984, 57: 217-223. Publisher Full Text Return to text

30. 31. 32.

Raghuramulu N, Madhavan Nair K, Kalyanasundaram S: Sebuah manual teknik laboratorium. NIN 2003. Return to text Bates LS, Waldron RP, Teare EP: Cepat penentuan status prolin bebas stres. Pabrik dan Tanah 1973, 39: 205-208. Publisher Full Text Return to text Whitley CB, Rindour MD, Draper KA, Dutton CM, Neglia JP: uji diagnostik untuk mucopolysaccharidosis. I. langsung metode untuk mengukur glikosaminoglikan ekskresi urin berlebihan. Clin Chem 1989, 35: 374-9. PubMed Abstrak | Publisher Full Text Return to text

Memiliki sesuatu untuk mengatakan? Berikan komentar pada artikel ini!

Syarat dan Ketentuan Privasi Pernyataan Informasi bagi pengiklan Pekerjaan di BMC Hubungi kami
1999-2010 BioMed Central Ltd kecuali dinyatakan lain. Bagian dari Springer Science + Business Media .

Connective tissue metabolism in chikungunya patients


Sudarsanareddy Lokireddy1
1

, Sarojamma Vemula2

and Ramakrishna Vadde1

Department of Biotechnology, Sri Krishnadevaraya University, Anantapur, India Department of Community Medicine, Government Medical College, Anantapur, India author email corresponding author email

Virology Journal 2008, 5:31doi:10.1186/1743-422X-5-31 The electronic version of this article is the complete one and can be found online at: http://www.virologyj.com/content/5/1/31 Received: 16 January 2008 27 February 200 Accepted: 8 27 February 200 Published: 8 2008 Lokireddy et al; licensee BioMed Central Ltd. This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution

License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0), which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.

Abstract
Background Chikungunya (CHIK) fever is a viral disease transmitted to humans by the bite of Chikungunya virus (CHIK virus) infected Aedes mosquitoes. CHIK virus is a member of the Alphavirus genus of the family Togaviridae. Previous reports have indicated that infection with CHIK virus produces an acute arthritis in human hosts by large area of necrosis and collagenosis or fibrosis. Results We carried out the present study to determine the effect of chikungunya on the collagen and connective tissue metabolism in 75 chikungunya-affected people. First, we screened for mucopolysaccharides in urine by Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide (CTAB) test. Appearance of heavy precipitate indicates the presence of higher levels of mucopolysaccharides and later quantified by DMB dye method. The urinary mucopolysaccharide in CHIK patients was 342 45 mg/l compared to healthy controls (45 5.6 mg/l). The collagen building blocks, proline and hydroxyproline were also measured in CHIK patients and observed higher excretion compared to healthy controls. Urinary excretions hydroxyproline was greater than the proline levels. Conclusion These results indicate that CHIK virus infection affects and damage the cartilage and connective metabolism and releases the degraded products from the tissue and responsible for increasing the levels of proline, hydroxyproline and mucopolysaccharides in CHIK affected patients.

Background
Chikungunya (CHIK) fever is a viral disease transmitted to humans by the bite of Chikungunya virus (CHIK virus) infected Aedes mosquitoes. CHIK virus is a member of the Alphavirus genus of the family Togaviridae. CHIK virus was first isolated from the serum of a febrile patient during a dengue epidemic that occurred in the Newala District, Tanzania in 1953 [1]. The Alphaviruses are enveloped particles and their genome consists of a single-stranded, positive-sense RNA molecule of approximately 12000 nucleotides. CHIK virus is an important human pathogen that causes a disease syndrome characterized by fever, headache, rash, nausea, vomiting, myalgia and arthralgia [2-8]. Its association with a fatal haemorrhagic condition was reported in India [9]. CHIK virus is geographically distributed from Africa through Southeast Asia, and its transmission to humans is mainly through Aedes species mosquitoes [1]. Since 1953, CHIK viurs has caused numerous well-documented outbreaks and epidemics in both Africa and Southeast Asia, involving hundreds of thousands of people [10-12]. Recent reports have described a massive outbreak of CHIK disease occurring on islands in the Indian Ocean, off the east coast of Africa [5,8,13]. Reemergence of CHIK has also been reported from Indonesia [14] and very recent massive outbreak in India. No treatment or vaccine is available, and relatively little research has been conducted into its pathogenesis, compared with that of other Arboviruses, such as dengue. Previous reports have indicated that infection with CHIK virus produces an acute arthritis in human hosts [7,15,16] by large area of necrosis and collagenosis or fibrosis [17]. Arthritis is the inflammation of a joint and its surrounding tissues, including the cartilage, ligaments, and tendons. Connective tissue is mainly composed of mucopolysaccharides, protein substances collagen with major amino acids proline, hydroxyproline etc, calcium, sulfur, and collagen. Mucopolysaccharide, proline and hydroxyproline measurements in urine are used in the diagnosis and treatment of various inheritable disorders that affect bone and connective tissues. Their presence in urine is originated from ground substance of collagen, and bone [18-20]. Though many reports state that CHIK virus produces arthritis in humans. The biochemical mechanisms and the changes of mucopolysaccharides, proline and hydroxyproline in this acute joint pain have not been reported in past literature. During last year monsoon outbreak of CHIK fever in Southern parts of India has led us to carryout the experiments on

the effect of CHIK virus on the collagen and connective tissue. In this study we collected the blood and urine samples from chronic CHIK fever patients and studied biochemical parameters related to connective tissue, which is responsible for acute joint pains and arthritis.

Results
CHIK patients have reported incapacitating joint pain, or arthritis, which may last for weeks or months. The general biochemical parameters of CHIK patients and healthy controls were depicted in Table 1. Serum albumin and creatinine were showing significant variation with controls. We carried out the present study to determine the effect of CHIK on collagen and connective tissue metabolism by measuring the levels of mucopolysaccharide, hydroxyproline and proline in urine samples of CHIK patients. Urine from 75 different patients suffering with CHIK was evaluated for the presence of mucopolysaccharides by screening cetyl trimethyl ammonium bromide (CTAB) test in urine. Appearance of heavy precipitate indicates the presence of mucopolysaccharides in the sample. The amount of precipitate depends on the concentration of mucopolysaccharides. Depending upon their concentration, samples were classified as negative, mild, moderate, and severe. In this study, we observed moderate to severe cases. The healthy controls showed no precipitate with CTAB. We also measured quantitatively urinary mucopolysaccharides levels in the first morning urine specimens by the simple and rapid DMB method and used in understanding the pathophysiology of arthritis in CHIK diseases. Urinary mucopolysaccharides (GAG) excretion in patients increased significantly compared to healthy controls. We also observed the significant variation in the levels of urinary excretions of hydroxyproline and proline with healthy controls (Table 2). The patients suffering with CHIK excreted higher levels of hydroxylproline than proline. We also carried out the follow up study for 10 patients with their consent up to one week who has chronic arthritic pains. The urinary excreted mucopolysaccharides are continuously high in the first two days and the levels were slowly decreasing on later days, but at the end of one week (up to 10 days) we found still the patients are excreting higher values compare to control (Table 3). The changes in the levels of urinary hydroxyproline and proline were also measured and observed the significant difference with healthy controls. Table 1. Biochemical characteristics of normal and Chikungunya patients Table 2. Effect of chikungunya (on average day 3 5) on the levels of proline, hydroxyproline and acid mucopolysaccharides Table 3. Changes of urinary proline, hydroxyproline and mucopolysaccharides during week long Chikungunya fever.

Discussion
Proteoglycan, a mucopolysaccharide building block of cartilage within the joint space, is used by chondrocytes (cartilage-building cells) to create more cartilage. Following pathogenic infection, joints typically exhibit a natural inflammatory response that mainly affects the synovium (synovitis). This process is necessary for the innate repair of damaged tissues, allowing the joint to recoup normal function. Inflammatory mediators released into the joint from such sources as nerves, immunocytes, synoviocytes, and vascular endothelium help to orchestrate these healing responses. These same inflammatory mediators also act on joint sensory nerves, leading to either excitation or sensitization [21]. When people suffer from arthritis, they experience a selective destruction of collagen within the cartilage of their joints. Collagen is the most abundant structural protein in cartilage. It helps provide elasticity of joints and works as the "glue" that holds together the various components of cartilage. It also contains the majority of mucopolysaccharides that give cartilage its healing powers. Mucopolysaccharides are large-molecular mass linear carbohydrate polymers composed of glucuronic or iduronic acid and N-acetylglycosamine or N-acetylgalactosamine units. Chondroitin sulfate and heparan sulfate are derived from proteoglycans in which these glycosaminoglycans (GAG) are covalently linked at the reducing end to the hydroxyl group of serine residues [22]. Proteoglycans containing GAG bound to hyaluronic acid form large aggregates that are enmeshed in a collagen network as the principal structural constituents of cartilage. Loss of proteoglycans is an early feature of matrix resorption. The erosion of the cartilage lining the joints is a hallmark of osteoarthritis. A corresponding increase in GAGs has been reported in synovial fluid, serum, and urine of patients with

rheumatic arthritic diseases [23,24]. Consistent with this, we observed in our studies higher excretion of mucopolysaccharides through urine (Table 2). Measurement of urinary hydroxyproline excretion is used to estimate collagen catabolism. Degradation of bone collagen releases free 4-hydroxyproline and peptides containing 4-hydroxyproline into the plasma. Urinary hydroxyproline measurement is particularly useful in monitoring treatment and progress in metabolic bone diseases such as osteomalacia and osteoporosis and Paget's disease. Hydroxyprolme appears in urine after degradation of collagen (collagenosis), which may originate from various tissues [25]. Measuring urinary hydroxyproline has predominantly been used to indicate bone collagen turnover in normal and pathological conditions. Collagen, which constitutes >90% of the fat-free organic matrix of bone, is important in its structural integrity and is the central element of connective tissue structure in which the mineral phase crystallizes during bone formation [20,26]. Urinary hydroxyproline reflects daily collagen turnover and in humans has shown great potential as an index of nutritional status and growth rate [27,28]. The CHIK patients showed higher excreted levels of hydroxyproline than proline indicates increased collagen turnover (Table 2). On follow-up study in the selected CHIK patients, increased levels of mucopolysacchariedes, proline and hydroxyproline indicates highermetabolic turnover in early days and recedes progressively in later days (Table 3).

Conclusion
In CHIK patients the collagen and connective tissue metabolism was greatly affected and increased metabolism leads to increased excretion of proline, hydroxyproline and mucopolysaccharides in urine compared to healthy controls. It indicates that the CHIK virus infection, connective tissue typically exhibits inflammatory response and leads to the damage of cartilage and connective tissue; increases metabolism and releases degraded products in to blood and ultimately excreted through urine.

Materials and methods


Subjects During last year July October 2006, CHIK out break in Andhra Pradesh, India, a total of 75 (45 males + 30 females) patients were selected based on disease symptoms for this study. We also taken the 20 age-matched healthy persons were chosen from the community and used as control subjects. Blood and urine samples were collected from each subject with their prior written consent for further studies. From all subjects, 5 ml of blood was collected in heparinized tubes and centrifuged at 1500 g for 15 min at 4 C. Plasma and pelleted RBC were separated stored in eppendorf tubes and kept at -80 C until analysis. Commercially available kits measured Blood analysis and other general parameters. Urine analysis The urine samples were collected from the patients and used for estimation of mucopolysaccharides, proline and hydroxyproline. Total urinary hydroxyproline determinations were performed employing the method described by Cleary and Saunders (1974) [29]. Briefly, urine was passed through a column of ion retardation resin to remove acid, salts, and pigments. From the column eluate, urine hydroxyproline determination was performed by oxidized to pyrrole 2-carboxylic acid and then to pyrole. The color produced with dimethyl amino-benzaldehyde is masured at 560 nm [30]. The proline levels in urine sample were measured by the method of Bates et al (1973) [31]. Two ml urine sample mixed with 2 ml acid ninhydrin reagent and kept in boiling water bath for 1 h. The tubes transferred to an ice bath to terminate the reaction. 5 ml toluene was added and mixed and read at 520 nm against the toluene blank. Screening test for mucopolysaccharides in urine was tested by Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide (CTAB) test. Five ml of fresh urine was added to 1 ml of CTAB (cetavilon) solution (50 g/l in citrate buffer (1 M) of pH 6.0). A heavy precipitate indicated the presence of mucopolysaccharides (Varley et al 1990). The DMB assay was performed essentially for measurement of mucopolysaccharides according to the method of Whitley et al. (1989) [32]. Briefly, the DMB (1,9dimethylmethylene blue) dye solution was prepared by dissolving 16 mg of DMB, 3.04 g of glycine, 2.37 g of sodium chloride, and 0.5 mL of 0.1 mol/l hydrochloric acid in 1 l of distilled water. The pH of the solution was adjusted to 3. For each assay, the patient's urine specimen was mixed with 1 ml of the dye solution at room temperature, and measured absorbance at 525 nm without delay after mixing the sample and dye solution. The assay was calibrated verses a standard curve of chondroitin sulfate (5

100 mg/l). The results were expressed as mg/l. All colorimetric estimations of above biochemical parameters in samples were measured by using BIOTEK ELISA Reader. Statistical analysis Statistical analysis was performed by GraphPad InStat software. Subjects with CHIK were compared with healthy controls. Means and standard error of means were calculated and differences between means were student's t-test.

Authors' contributions
SL designed and conducted the experiments with patient's blood, urine samples. SL also performed the final statistical analysis of the data and contributed to writing the paper. SV (she is specialist in infectious diseases) guide to us for selecting the chikungunya patients for research during time of blood and urine collection. RV supervised the overall project, designed experiments, analyzed the data and wrote the paper. All authors read and approved the final manuscript.

Acknowledgements
The publication was conducted as part of the programme 'Biotechnology for Dry land Agriculture in Andhra Pradesh' with financial support for the Research and Communication Division, Ministry of Foreign Affairs, the government of Netherlands. Andhra Pradesh Netherlands Biotechnology Programme, IPE, Hyderabad, India.

References
1. Ross RW: The Newala epidemic. III. The virus: isolation, pathogenic properties and relationship to the epidemic. Journal of Hygiene 1956 , 54:177-91. PubMed Abstract Return to text 2. Thaikruea L, Charearnsook O, Reanphumkarnkit S, Dissomboon P, Phonjan R, Ratchbud S, et al.: Chikungunya in Thailand: a reemerging disease? Southeast Asian J Trop Med Public Health 1997 , 28:359-64. PubMed Abstract Return to text 3. Diallo M, Thonnon J, Traore-Lamizana M, Fontenille D: Vectors of Chikungunya virus in Senegal: current data and transmission cycles. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene 1999 , 60:281-286. Return to text 4. Powers AM, Brault AaronC, Tesh RobertB, Weaver ScottC: Re-emergence of chikungunya and o'nyong-nyong viruses: evidence for distinct geographical lineages and distant evolutionary relationships. Journal of General Virology 2000 , 81:471-479. PubMed Abstract | Publisher Full Text Return to text 5. Schuffenecker I, Iteman I, Michault A, Murri S, Frangeul L, Vaney MC, et al.: Genome microevolution of chikungunya viruses causing the Indian Ocean outbreak.

PLoS Med 2006 , 6:263. Publisher Full Text Return to text 6. NICD. National Institute of Communicable Disease, New Delhi: Chikungunya Fever. CD Alert 2006 , 10(2):6-8. Return to text 7. Paquet C, Quatresous I, Solet JL, Sissoko D, Renault P, Pierre V, Cordel H, Lasalle C, Thiria J, Zeller H, Schuffnecker I: Chikungunya outbreak in Reunion: Epidemiology and surveillance. Euro Surveill 2006 , 11:2. Return to text 8. Nelson Lee, Wong ChunK, Lam WaiY, Wong Ann, Lim Wilina, Lam ChristopherWK, Cockram CliveS, Sung JosephJY, Chan PaulKS, Tang JulianW: Chikungunya fever, Hong Kong. Emerging Infectious Diseases 2006 , 12:1790. PubMed Abstract Return to text 9. Sarkar JK, Chatterjee SN, Chakravarty SK: Haemorrhagic fever in Calcutta: some epidemiological observations. Indian J Med Res 1964 , 52(7):651-9. PubMed Abstract Return to text 10. Rao TR: Recent epidemics caused by Chikungunya virus in India, 1963 1965. Scientifc Culture 1966 , 32:215. Return to text 11. Halstead SB, Scanlon JE, Umpaivit P, Udomsakdi S: Dengue and Chikungunya virus infection in man in Thailand, 1962 1964. IV. Epidemiologic studies in the Bangkok metropolitan area. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene 1969 , 18:997-1021. Return to text 12. Posey D, O'Rourke Thomas, Roehrig Johnt, Lanciotti Roberts, Weinberg Michelle, Maloney Susan: Short report: o'nyong-nyong fever in West Africa. Am J Trop Med Hyg 2005 , 73(1):32. PubMed Abstract | Publisher Full Text Return to text 13. Lahariya C, Pradhan SK: Emergence of chikungunya virus in Indian subcontinent after 32 years: a review. J Vect Borne Dis 2006 , 43:151-160.

Return to text 14. Laras K, Sukri NC, Larasati RP, Bangs MJ, Kosim R, Djauzi WT, et al.: Tracking the reemergence of epidemic chikungunya virus in Indonesia. Trans R Soc Trop Med Hyg 2005 , 99:128. PubMed Abstract | Publisher Full Text Return to text 15. Kennedy Ac, Flemming J, Solomon L: Chikungunya viral arthropathy: a clinical description. J Rheumatol 1980 , 7:231-6. PubMed Abstract Return to text 16. Fourie ED, Morrison JG: Rheumatoid arthritic syndrome after chikungunya fever. S Afr Med J 1979 , 56:130-2. PubMed Abstract Return to text 17. Ozden S, Huerre M, Riviere J-P, Coffey LL, Afonso PV, et al.: Human Muscle Satellite Cells as Targets of Chikungunya Virus Infection. PLoS ONE 2007 , 2(6):527. Publisher Full Text Return to text 18. Dull TA, Henneman PH: Urinary hydroxyproline as an index of collagen turnover in bone. New Engl J Med 1963 , 268:132. Return to text 19. Kawata H, Koizumi T, Wada R, Yo-Shida T: Urinary acid mucopolysaccharide excretion in liver damage. Gastroenterology 1959 , 40:507. Return to text 20. Grant C, Kachniar JF: Amino acids and related metabolites. In Fundamentals of clinical chemistry. In Philadelphia, Pennsylvania. Edited by: Tietz NW. WB Saunders Co; 1982:377400. Return to text 21. Dougall Jason JMc: Arthritis and pain: Neurogenic origin of joint pain. Arthritis Research & Therapy 2006 , 8:220. PubMed Abstract | BioMed Central Full Text | PubMed Central Full Text Return to text 22. Margolis RK, Margolis RU: Structure and localization of glycoproteins and glycosaminoglycans. In Neurobiology of glycoconjugates. Edited by: Margolis RU, Margolis RK. New York: Plenum; 1989:85-126.

Return to text 23. Bensouyad A, Hollander AP, Dularay B, et al.: Concentrations of glycosaminoglycans in synovial fluids and their relation with immunological and inflammatory mediators in rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis 1990 , 49:301-7. PubMed Abstract | Publisher Full Text | PubMed Central Full Text Return to text 24. Vladimir Kery, Orlovska Maria, Stanlkova Maria, Risko Martin, Zlna Daniel: Urinary Glycosaminoglycan Excretion in Rheumatic Diseases. Clinical chemistry 1992 , 38(6):841. PubMed Abstract | Publisher Full Text Return to text 25. Dequeker J, Mbuyi-Muamba JM, Holvoet G: Hydroxyproline and bone metastasis. In Bone metastasis: monitoring and treatment. Edited by: Stoll BA, Parbhoo S. New York: Raven Press; 1983:181-99. Return to text 26. Smith R, Elia M: The significance of urinary hydroxyproline and 3-methylhistidine changes in growth, starvation and injury. In Amino-acid analysis. Edited by: Rattenbury JM. New York: Haistead Press; 1981:225-36. Return to text 27. Whitehead RC: Hydroxyproline creatinine ratio as an index of nutritional status and rate of growth. Lancet 1965 , 567-570. PubMed Abstract | Publisher Full Text Return to text 28. Howells CR, Wharton BA, Mc Cane RA: Value of hydroxyproline indices in malnutrition. Lancet 1967 , 1082-1083. PubMed Abstract | Publisher Full Text Return to text 29. Cleary I, Saunders PA: A simplified procedure for the measurement of total hydroxyproline in urine. Clin Chem Acta 1984 , 57:217-223. Publisher Full Text Return to text 30. Raghuramulu N, Madhavan Nair K, Kalyanasundaram S: A manual of laboratory techniques. NIN 2003. Return to text 31. Bates LS, Waldron RP, Teare EP: Rapid determination of free proline for stress status. Plant and Soil 1973 , 39:205-208. Publisher Full Text

Return to text 32. Whitley CB, Rindour MD, Draper KA, Dutton CM, Neglia JP: Diagnostic test for mucopolysaccharidosis. I. Direct method for quantifying excessive urinary glycosaminoglycan excretion. Clin Chem 1989 , 35:374-9. PubMed Abstract | Publisher Full Text

Teks asli Inggris Sudarsanareddy Lokireddy 1 Sarankan terjemahan yang lebih baik