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FUNDAMENTO TERICO: Segn la Real Academia Espaola Colorante:

1. adj. Que da color. Producto colorante. U. t. c. s. Teir con colorantes naturales. 2. m. Sustancia que aadida a ciertos alimentos sirve para darles color o teirlos. Esta mermelada no tiene colorantes. Pigmento:

(Del lat. pigmentum). 1. m. Materia colorante que se usa en la pintura. 2. m. Biol. Sustancia colorante que, disuelta o en forma de grnulos, se encuentra en el

citoplasma de muchas clulas vegetales y animales. EL USO DE COLORANTES Muchos alimentos que se consumen en la actualidad no podran existir sin el empleo de aditivos alimentarios. Los colorantes son sustancias de origen natural o artificial que se usan para aumentar el color de los alimentos, ya sea porque el alimento a perdido color en su tratamiento industrial o bien para hacerlo ms agradable a la vista y ms apetecible al consumidor. De hecho, ms de dos terceras partes de los productos que consumimos los contienen. Dichos aadidos son uno de los grandes descubrimientos que han hecho posible avanzar en el mbito de la conservacin alimentaria, as como conseguir mejoras en el proceso de elaboracin de los alimentos y crear nuevos productos que de forma natural no podran obtenerse. La qumica orgnica relacionada con la sntesis de colorantes tuvo una poca de gran esplendor desde la segunda mitad del s. XIX hasta finales del s. XX. Su importancia queda demostrada, entre otras manifestaciones, por los diversos premios Nobel otorgados a cientficos que trabajaron en este campo. A partir de 1850, el qumico francs PierreEugneMarcelin Berthelot (1827-1907) efectu numerosas sntesis de compuestos orgnicos con lo que demostr que la formacin de materia orgnica no era algo exclusivo de la naturaleza. En esta poca se abri el interesante campo de la obtencin de productos naturales en los laboratorios. Aunque las primeras sntesis orgnicas dieron como resultado compuestos relativamente simples, resultaron indispensables para la obtencin posterior de compuestos ms complejos. Berthelot demostr que los productos de sntesis son idnticos a los naturales de igual frmula y estructura qumica; gracias a su contribucin a la qumica de sntesis orgnica se han preparado infinidad de compuestos, entre los cuales destacan los colorantes.

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Entre otros trabajos, el qumico alemn August Wilhelm von Hofmann (1818-1892) aisl la anilina del alquitrn de carbn de hulla y fij la estructura de algunos colorantes del grupo del trifenilmetano. Junto con su discpulo, el britnico William Henry Perkin (1838-1907), intent la sntesis de la quinina a partir de la anilina. El camino de sntesis diseado no result acertado para la preparacin de quinina, pero al ir a desechar la mezcla que haba resultado de la prueba, Perkin observ un reflejo prpura. A partir de este descubrimiento, realizado en 1856, continu trabajando y al cabo de seis meses obtuvo el compuesto que denomin prpura de anilina. Este colorante artificial se utiliz como tinte de tejidos, y al color resultante, el malva, se le dio este nombre porque recordaba el color de las flores de malva. Perkin fund la primera fbrica de colorantes sintticos en 1874 y se retir a los 36 aos de edad para dedicarse a la investigacin, labor no remunerada en esa poca.

Hacia 1880, despus de 17 aos de investigaciones, el qumico alemn Johann Friedrich Adolf von Baeyer (1835-1917), premio Nobel de Qumica en 1905, consigui sintetizar el ndigo. Este colorante sinttico azul desplaz del mercado al ndigo natural. En 1868, su discpulo Carl Graebe (1841-1927) haba sintetizado la alizarina, slido cristalino de color rojo anaranjado, de propiedades idnticas a las del producto natural. Sin embargo, en el s. XIX, exceptuando el caso del ndigo, los colorantes sintticos no podan competir en precio con las sustancias naturales.

En 1906, el qumico alemn Richard Martin Willsttter (1872-1942) separ por primera vez la clorofila, colorante verde de los vegetales, y recibi el premio Nobel de Qumica en 1915 por sus estudios sobre colorantes y pigmentos vegetales. Otro qumico alemn, Hans Fischer (18811945) consigui realizar en 1929 la sntesis del colorante rojo de la sangre de los vertebrados, la hemoglobina, y obtuvo el premio Nobel de Qumica en 1930. Posteriormente, Paul Karrer (18891971), bioqumico suizo de origen ruso y premio Nobel de Qumica en 1937, estableci la estructura de los carotenoides, colorantes vegetales relacionados con la vitamina A. El conocimiento de las complicadas estructuras de los colorantes fue el primer paso hacia su sntesis posterior. En 1961 la clorofila fue sintetizada por el qumico estadounidense Robert Burns Woodward (19171979) que, por ste y otros trabajos, recibi el premio Nobel de Qumica en 1965.

Los colorantes se dividen en dos grandes grupos: colorantes naturales y colorantes artificiales. Todos ellos llevan un nmero que los identifica en el caso de Europa este nmero va precedido de una E. Ejemplo: E-120. El consumidor slo puede comprobar el tipo de aditivo que lleva el producto si est embolsado y aparece indicado en la etiqueta (aunque el etiquetado no siempre es correcto), lo que no ocurre cuando se compran este tipo de productos a granel.

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Los colorantes se aaden a los alimentos para mejorar su aspecto y hacerlos ms apetecibles o para reemplazar prdidas de color que se producen durante el proceso de elaboracin. Diversos estudios han constatado que la aceptacin de un producto por parte del consumidor depende, en buena medida, de su apariencia y, por tanto, tambin de su color. sta es la principal justificacin para el uso de colorantes en alimentos. Los alimentos que no tienen color propio como las golosinas, algunos postres, se colorean artificialmente para hacerlos ms atractivos al consumidor. El color es la primera sensacin que se percibe y la que determina el primer juicio sobre su calidad. Es tambin un factor importante dentro del conjunto de sensaciones que aporta el alimento, y tiende a veces a modificar subjetivamente otras sensaciones como el sabor y el olor. El color artificial de los alimentos ayuda en muchos casos a definirlos. Algunos colorantes naturales, como los colorantes vegetales propios de ciertas frutas y verduras. Es el caso del colorante E 60 o beta-caroteno, colorante natural que proviene de frutas y verduras tonos entre amarillentos, anaranjados y rojizos. Es muy empleado en mantequillas, margarinas y batidos, entre otros alimentos. La mayora de los colorantes utilizados en la elaboracin de golosinas son los colorantes artificiales, de uso autorizado. Con la mezcla de estos colorantes se obtiene toda la gama de colores presente en las golosinas y otros productos artificiales como bebidas. Los colorantes empleados con mayor frecuencia son tartrazina (E102), amarillo de quinolena (E104), amarillo anaranjado S o amarillo ocaso FCF (E110), azorrubina o carminosina (E122), rojo cochinilla A (E124), rojo allura AC (E129) y azul patente V (E131). Entre los colorantes de sntesis o artificiales se incluyen los azoicos o azocolorantes, que se han relacionado con reacciones alrgicas (sobre todo en nios) por consumo excesivo de golosinas coloreadas (tartrazina, amarillo anaranjado S, azorrubina, rojo cochinilla y rojo allura AC). La tartrazina (E102), por ejemplo, puede producir reacciones adversas (alergias no graves y manifestaciones cutneas o respiratorias) en nios asmticos y en el 10% de las personas alrgicas a la aspirina. Relacionar salud con colorantes no parece posible si no es de forma negativa, al sealar los innumerables peligros y efectos nocivos que puede acarrear su ingestin. En nuestro pas se admiten los aditivos aprobados por la Comunidad Europea, designados con nmeros que comienzan por la letra E (Europa) y que se recogen en una lista aprobada en una Directiva europea actualizada con regularidad. En total, estn autorizados 345 aditivos, de los cuales slo se emplea habitualmente un pequeo porcentaje (125) y el resto se usa slo en casos muy concretos. La industria alimentaria puede usar nicamente los que han sido aprobados tras haber pasado por largos, detallados y exhaustivos estudios que verifiquen que, con las dosis autorizadas, no pueden causar ningn efecto daino para la salud de las personas.

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Los colorantes sintticos deben reunir una serie de caractersticas, para asegurar su buen uso. Los requisitos exigidos son: 1.- Ser inocuo. 2.- Constituir una especie qumica definida y pura. 3.- Tener gran poder tintorial, con objeto de utilizar la mnima cantidad posible y ser fcilmente incorporables al producto. 4.- Ser lo ms estable posible a la luz y al calor. 5.- Poseer compatibilidad con los productos que deben teir. 6.- No poseer olor ni sabor desagradables. 7.- Ser indiferente PH, agentes oxidantes y reductores. 8.- Ser lo ms econmico posible.

FACTORES QUE CONTRIBUYEN A LA INESTABILIDAD - Trazas de metales - Altas temperaturas - Agentes xido-reductores - Luz - PH Algunos colorantes azoicos con trazas de metales en el producto o en el envase, alteran el color. Otros se degradan cuando son expuestos a ciertos azcares, aldehdos, perxidos y cidos. Generalmente, la luz es la principal causa de degradacin de los colorantes (las lacas son ms estables frente a este agente). Normalmente la toxicidad de un colorante, est relacionado con su absorcin. El grado de seguridad requerido, depende de los campos de aplicacin y frecuencia del uso. No es lo mismo, la toxicidad de un colorante, utilizado en jabones, cremas y otros productos aplicados en la superficie corporal, que aqulla que se pueda producir cuando el colorante es ingerido en medicamentos o alimentos. Se estn estudiando colorantes de alto peso molecular, que no son absorbidos por el tracto gastrointestinal, con lo cual se reduciran los riesgos de toxicidad. Estos colorantes conocidos como Colorantes Polimricos mantienen las propiedades fsico -qumicas de los colorantes naturales. No todos los colorantes permitidos en un pas, lo son en otros. Esta situacin se debe a que los

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estudios toxicolgicos no son realizados de igual manera en todos los pases, obtenindose por ello resultados diferentes. En algunos pases, el criterio utilizado para los estudios, es el de realizar los ensayos toxicolgicos en situaciones anlogas a las que van a ser empleados. Hay otro tipo de ensayos que se realizan inyectando soluciones de los colorantes propuestos, bajo la piel de los individuos objeto del estudio. Como los mecanismos de los test son diferentes, las conclusiones que se deriven de los mismos, tambin lo sern. Ello, comporta distintas listas de colorantes permitidos (o restringidos) para cada pas. La Comunidad Europea tiene unas normas

muy estrictas en cuanto a la lista de colorantes permitidos, su pureza y su dosis mxima al da.
LOS COLORANTES SINTTICOS: El color es la sensacin que produce sobre el rgano de la visin la radiacin de la luz absorbida y reflejada por la materia. Por tanto, el color contribuye a la identificacin visual, y la utilizacin de un determinado colorante puede condicionar la aceptacin de un producto. Los colorantes deben ser sustancias inocuas para las personas y compatibles con la proteccin del medio ambiente.

Las sustancias coloreadas deben su color a la capacidad de absorber parcial o totalmente la luz visible. Al incidir sobre una sustancia la luz blanca, formada por un conjunto o espectro de radiacin, tiene lugar la absorcin de cierta radiacin. Cuando la absorcin del espectro visible es total, la sustancia aparece de color negro; si no absorbe ninguna radiacin, es de color blanco; si las absorbe en igual proporcin, es de color gris; si absorbe preferentemente alguna de las radiaciones, presenta el color complementario de las radiaciones absorbidas. Por ejemplo, las sustancias que se ven de color amarillo absorben radiacin en la franja del violeta azulado, que es su color complementario.

GRUPOS CROMFOROS Y AUXOCROMOS Todos los colorantes poseen uno o ms grupos cromforos que originan el color. Pero para que una sustancia coloreada sea un colorante debe presentar tambin grupos auxocromos, que tienen la misin de potenciar y fijar el color sobre el material que se pretenda colorear.

Un cromforo (del griego kroma y fors, "portador del color"), o grupo cromforo, es una agrupacin atmica con caractersticas individuales de absorcin de luz visible o ultravioleta, es decir, el grupo de tomos responsable de la coloracin de una molcula. Son cromforos todas las agrupaciones no saturadas en cadena abierta o cerrada; ejemplos de ello son el grupo azo ( N=N), el grupo azoxi ( N=NO), el grupo carbonilo ( C=O), el grupo nitroso ( N=O) y el grupo etileno ( C=C). En general, se necesita ms de un grupo cromforo para que aparezca el color. Por ejemplo, la acetona ( CH 3COCH 3), que nicamente presenta un grupo carbonilo, es incolora; el diacetilo ( CH 3COCOCH 3) es amarillo, y la pentanotriona ( CH 3COCOCOCH 3) es amarillo

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anaranjado. A medida que aumenta el nmero de cromforos, la radiacin absorbida es menos energtica (se desplaza hacia el rojo), y las radiaciones complementarias estn ms desplazadas hacia el violeta.

Un auxocromo (del griego auxe y kroma, "exaltador del color"), o grupo auxocromo, es un tomo o grupo de tomos que, sin producir absorcin en los espectros visible y ultravioleta, es capaz de potenciar la accin de un cromforo, convirtiendo la sustancia en coloreada y colorante, ya que aumenta su solubilidad y ayuda a fijar el color en los materiales por colorear. Generalmente, se trata de radicales saturados, como por ejemplo el amino ( NH 2, NHR, NRR'), el hidroxilo ( OH), el metoxi ( OCH 3) y los halgenos ( F, Cl, Br o I).

Los primeros colorantes usados eran de origen vegetal o animal, pero en la actualidad la mayora de los colorantes utilizados son sintticos. Estos colorantes, segn su comportamiento qumico, se pueden clasificar en:

- Colorantes cidos: Corresponden, normalmente, a compuestos orgnicos cidos que sirven para teir los componentes bsicos de las clulas de un corte histolgico. Se pueden citar las anilinas cidas (eosina, eritrosina o fluorescena) y el rojo Congo, que cambia a azul en presencia de cidos. - Colorantes bsicos: La mayora de ellos son compuestos orgnicos empleados para teir los componentes cidos de las clulas. Entre los colorantes bsicos se encuentran los carmines y las anilinas bsicas. - Colorantes neutros: Se utilizan para teir las grasas, como el Sudn III o el rojo escarlata.

COLORANTES AZICOS Los colorantes azoicos deben su color a la presencia de un grupo azo N=N conjugado con anillos aromticos por ambos extremos.

Como en el caso de los dems colorantes artificiales, los colorantes azicos autorizados para su utilizacin como aditivos alimentarios son todos solubles en agua, debido a la presencia de grupos sulfnicos.

Los colorantes azoicos se han cuestionado reiteradamente, debido a que muchos colorantes de esta familia (no los autorizados para uso alimentario) han demostrado ser cancergenos en experimentos con animales. Una diferencia fundamental es que los colorantes cancergenos son

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poco polares, solubles en grasas, y atraviesan con cierta facilidad la barrera intestinal, incorporndose al organismo. En cambio, los colorantes autorizados, que son muy polares y solubles en agua, no se absorben.

Pertenecen a este grupo los colorantes:

Tartrazina, E 102 Amarillo anaranjado S, E 110 Azorrubina, carmoisina, E 122 Amaranto, E 123 Rojo cochinilla, rojo Ponceau 4R, E 124 Rojo 2G, E 128 Rojo Allura AC, E 129 Negro brillante BN, E 151 Marrn FK, E 154 Marrn HT, E 155 Litol Rubina BK, E 180

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Tartrazina, E 102
La tartrazina es uno de los colorantes artificiales ms utilizados en los alimentos. Su uso est autorizado en ms de sesenta pases, incluyendo entre ellos los de la Unin Europea y Estados Unidos. Confiere a los alimentos y bebidas un tono amarillo ms o menos anaranjado, dependiendo de la cantidad aadida. Tambin se utiliza para obtener colores verdes, al mezclarlo con colorantes azules. La tartrazina es un colorante amplsimamente utilizado (desde 1916), por ejemplo, en productos de repostera, derivados crnicos, sopas preparadas, conservas vegetales, salsas, helados, postres, caramelos y otras golosinas. Tambin se utiliza para colorear las bebidas refrescantes de naranja y "limn". A nivel anecdtico, la tartrazina es el colorante del condimento para paellas utilizado en substitucin del azafrn.

La toxicidad aguda de la tartrazina es muy pequea, incluso menos que la de sal comn. La ingestin diaria aceptable, prcticamente imposible de alcanzar est establecida en 7,5 mg/k g de peso. Sin embargo, parece que la tartrazina es capaz de producir reacciones adversas en un pequeo porcentaje (alrededor del 10%) de entre las personas que son alrgicas a la aspirina. Estas personas deben examinar la etiqueta de los alimentos que pueden contener este colorante antes de consumirlos. El mecanismo de esta sensibilidad cruzada no es bien conocido, ya que no existe un parentesco qumico evidente entre ambas sustancias. Soluble en agua, regularmente presentada en polvo y mientras ms este disuelta en algn liquido toma tonalidades cada vez ms y ms amarillas, no es soluble en lactosa.

Amarillo anaranjado S, E 110

Tambin conocido como amarillo ocaso, este colorante se utiliza en la mayor parte de los pases del mundo, incluyendo Estados Unidos (con el cdigo FD&C Yellow #5) Se utiliza para colorear refrescos de naranja, helados, caramelos, productos para aperitivo, postres, etc. Mezclado con el rojo Sudn produce un tono rojo anaranjado tpico de ciertos derivados crnicos como la sobrasada. La ingestin diaria aceptable es de 2,5 mg/kg de peso. Soluble en agua, presentada en polvo, tiene un color naranja claro, es el colorante ms comn.

Rojo Ponceau 4R, E 124

Tambin llamado rojo cochinilla A, aunque no tiene nada que ver con la autntica cochinilla (E 120), que es un colo rante natural. Se utiliza para dar color de "fresa" a los caramelos y productos de pastelera, helados, etc., y tambin en sucedneos de caviar y

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derivados crnicos (en el chorizo, por ejemplo, sin demasiada justificacin, al menos en Espaa, sustituyendo en todo o en parte al pimentn). Desde 1976 no se utiliza en Estados Unidos. Se ha discutido su posible efecto cancergeno en experimentos realizados con hamsters, con dosis muy altas (los resultados son claramente negativos en ratas y ratones). Los resultados, confusos, podran ser debidos a la presencia de impurezas en las muestras del colorante utilizadas en el test. Polvo cristalino granate, soluble en agua, ligeramente soluble en etanol, insoluble en cloroformo y ter.

Eritrosina, E 127
Una caracterstica peculiar de la eritrosina es la de incluir en su molcula 4 tomos de yodo, lo que hace que este elemento represente ms de la mitad de su peso total. La eritrosina ha sido el colorante ms popular en los postres lcteos con aroma de fresa. Se utiliza en postres aromatizados, en mermeladas, especialmente en la de fresa, en caramelos, derivados crnicos, pats de atn o de salmn, y en algunas otras aplicaciones. Es un colorante muy eficaz para teir las guindas en conserva, ya que se fija a ellas y no destie. Su principal inconveniente desde el punto de vista tecnolgico es que es relativamente sensible a la accin de la luz. En Estados Unidos, donde tambin est autorizado, tiene el cdigo FD&C Red # 3. Se utiliza tambin en el coloreado de algunos medicamentos, y para visualizar la placa dental en odontologa. La eritrosina a dosis muy elevadas (4% en la dieta de animales de experimentacin) produce alteraciones en el tiroides, que pueden llegar en algunos casos hasta el desarrollo de tumores. Este efecto, debido probablemente a su alto contenido en yodo, no se produce a dosis bajas. Sin embargo, aunque en su forma original se absorbe muy poco, no se conoce bien hasta qu punto el metabolismo de las bacterias intestinales puede producir su descomposicin, originando substancias ms sencillas, o yodo libre, que sean ms fcilmente absorbibles. Tambin se puede liberar el yodo si la eritrosina se somete a un calentamiento muy intenso. En esta lnea se ha ido tendiendo a limitar algunas de sus aplicaciones, especialmente las dirigidas al pblico infantil. La ADI se ha ido reduciendo desde 2,5 mg/Kg de peso en la dcada de 1970 hasta la actual (desde 1990), de solamente 0,1 mg/kg de peso. Para que esta ADI sea efectiva, se han ido reduciendo consecuentemente el nmero de alimentos en los que se puede utilizar este colorante. En algunos pases, como Australia, solamente est autorizado para colorear las cerezas en conserva, mientras que en otros, como Estados Unidos, el colorante, aunque no la laca, est autorizado para uso general.

Es poco soluble en agua, presentado en polvo con color rosa mexicano.

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Azul patente V, E 131

Tambin se conoce con el nombre de azul sulfn. Es un colorante utilizado para conseguir tonos verdes en los alimentos, al combinarlo con colorantes amarillos como el E102 y el E-104. Se utiliza en conservas vegetales y mermeladas (guindas verdes y mermelada de ciruela, por ejemplo), en pastelera, caramelos y bebidas. Esta sustancia se absorbe en pequea proporcin, menos del 10% del total ingerido, eliminndose adems rpidamente por va biliar. La mayor parte tampoco resulta afectado por la flora bacteriana intestinal, excretndose sin cambios en su estructura. Se ha indicado que puede producir reacciones asimilables a alergias en algunos casos muy raros.

Rojo allura, E 129

Este colorante se utiliza desde la dcada de 1980, sobre todo en Estados Unidos, (con el cdigo FD&C Red #40), donde se introdujo para substituir al amaranto, siendo el ms utilizado en este pas. Se ha introducido recientemente en las listas de la Unin Europea, para eliminar problemas comerciales. La ingestin diaria aceptable de este colorante es de 7 mg/kg de peso.

Carmn de ndigo, E 132

La indigotina o carmn de ndigo es el nico representante de la familia de colorantes conocida como indigoides que se puede utilizar legalmente para colorear alimentos. En Estados Unidos, donde tambin est autorizado, tiene el cdigo FD&C Blue # 2. La indigotina es uno de los colorantes artificiales menos estable, pudiendo alterarse el color en medios muy cidos, o en presencia de sulfito. Se utiliza en la elaboracin de bebidas, caramelos, confitera y helados,

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INSTRUMENTAL 1) Matraz Erlenmeyer de 100ml 2) Vasos de bohemia de 100ml 3) Probeta 10ml 4) Lana desengrasada 5) Placas de silicagel 6) Cubetas cromatogrficas

REACTIVOS 1) Amoniaco NH3 2) cido clorhdrico HCl 3) n-butanol 4) Etanol 5) Agua destilada

COLORANTES ESTANDAR * AMARILLO TARZANINA (E 102) * AMARILLO SUNSET (E 110) * ROJO ALLURA (E 129) * ROJO ERITROSINA (E 127) * ROJO PONCEAU (E 124) * CARMIN INDIGO (E 132) * AZUL PATENTE V (E 131)

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PROCEDIMIENTO Preparacin de la muestra

Productos lquidos: BEBIDAS Y JUGOS DE FRUTAS. La muestra original debe someterse a un calentamiento moderado a bao Mara para facilitar la eliminacin de productos susceptibles de impedir, retardar o dificultar la fijacin del colorante (alcohol, cido actico, etc.). Inmediatamente se filtra por papel de filtro para separar las materias precipitadas o en suspensin a fin de obtener una solucin sin interferencias. Productos slidos, pastosos o viscosos: CARAMELOS, CONFITURAS. La muestra original, dbilmente triturada, molida o pulverizada, bien homogeneizada, se trata con agua tibia o caliente para su disolucin total o para la extraccin de las partes que contengan las materias colorantes.

1) Determinacin de la naturaleza cida o bsica de los colorantes

Fundamento: si el colorante es cido se fijar sobre la lana blanca desgrasada (la teir) en medio cido. Si es bsico se fijar a la lana si el medio es alcalino. 1.1) Colorantes cidos:

En un vaso de bohemia adecuado se colocan 50ml de la muestra preparada, se agregan 5 ml de HCl al 10 %, hebras de lana blanca desengrasada y se hierve durante 3 - 5 min. Se retira la lana, se lava con abundante agua y se observa. Si la lana se tie, se trata de un colorante cido. 1.2) Colorantes bsicos En un vaso de bohemia adecuado se colocan 50ml de la muestra preparada, se agregan 5 ml de amonaco al 10 % o la cantidad necesaria para obtener reaccin alcalina, y se procede de la misma manera que en el caso anterior. Si en este medio la lana aparece teida se trata de un colorante bsico. Ya se vio antes que si el colorante es cido se fija sobre la lana cuando se acidifica el medio, por lo tanto el desmonte se debe efectuar en medio alcalino. Si el colorante es bsico ocurre lo contrario, es decir, se fija en medio alcalino y se desmonta en medio cido.

2) Extraccin y desmontado.
1) Colocar en un vaso de bohemia 50 ml de la muestra. 2) Si el colorante es de naturaleza acida se agrega 10ml HCl y 7-10 hebras de lana desengrasada para fijar el colorante. 3) Hervir durante 5 minutos. 4) Retirar las lanas y lavarlas con agua destilada. 5) Colocar la lana en otro vaso de bohemia conteniendo 50ml de agua destilada y 5 ml de amoniaco. 6) Hervir la lana durante 5 minutos (para desmontar el colorante). 7) Retirar las hebras (que deben estar decoloradas).

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8) Seguir calentando el lquido hasta evaporacin del amoniaco (si es necesario para no llevar a sequedad agregar ms agua). 9) Aadir en un vaso de bohemia 10ml de cido clorhdrico y colocar nuevas hebras de lana, hervir durante 5 minutos. 10) Retirar las lanas y lavarlas (si el color persiste el colorante es artificial). 11) Pasar las lanas a un vaso de bohemia y aadir 10ml de agua destilada y 10 gotas de amoniaco. 12) Colocar en bao mara hasta que el colorante haya pasado de la lana a la solucin. 13) Concentrar la solucin por calentamiento.

3) Cromatografa.
3.1) Preparacin del estndar. Pesar 0,05g del colorante estndar y disolverlo con 8ml de agua destilada, colocar en un tubo identificado. 3.2) Preparacin de la fase mvil. Colocar en un matraz 50ml n-butanol, 25ml etanol y 25ml agua destilada. 3.3) Preparacin fase estacionaria. La cromatografa se realizara en capa fina de silicagel (o similar). Trazar recta con lpiz marcando los puntos de siembra. 3.4) Preparacin cmara. 1. Colocar 10ml fase mvil y tapar. 2. Dejar reposar la cmara durante 15 minutos. 3.5) Procedimiento de siembra. Sembrar los estndares y las muestras en la fase estacionaria con una aguja de insulina. 3.6) Desarrollo cromatogrfico. 1. Colocar la fase estacionaria dentro de la cmara de manera tal que la misma se sumerja uniformemente en la fase mvil. 2. Dejar que la fase mvil trepe por la fase estacionaria hasta alcanzar 1cm del borde. 4) Identificacin mediante absorbancia 4.1) Medir la absorbancia de cada uno de los estndares preparados. 4.2) medir la absorbancia de cada una de las soluciones obtenidas mediante la extraccin del colorante. Antes de medir la absorbencia de cada tinte, calibrar el espectrofotmetro con una solucin en blanco (agua) de acuerdo con las instrucciones del instrumento.

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COLORANTE ESTANDAR AMARILLO TARZANINA (E 102) AMARILLO SUNSET (E 110) ROJO ALLURA (E 129) ROJO ERITROSINA (E 127) ROJO PONCEAU (E 124) CARMIN INDIGO (E 132) AZUL PATENTE V (E 131)

ABSORBANCIA

SOLUCION MUESTRA MUESTRA #1 MUESTRA #2 MUESTRA #3 MUESTRA #4 MUESTRS #5 MUESTRA #6 MUESTRA #7

ABSORBANCIA

TABLA A MODO DE EJEMPLO

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