TALLER 1 NORMAS DE UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Usar Bata de laboratorio Todo el material de muestras y medios de cultivo sembrados debe ser

er considerado potencialmente patgeno No se permite: comer, fumar, beber o maquillarse Mantener el rea del mesn despejada de libros o cuadernos El rea de trabajo se debe limpiar con fenol al 5% Debe evitarse el pipeteo bucal El rea de trabajo debe poseer un mechero o incinerador elctrico, un pipetero con fenol o un brocal Depositar el material usado en los sitios respectivo Identificar debidamente las placas y los tubos de ensayo Lavarse las manos con agua y jabn Medidas especiales: Uso de gabinetes con pared de vidrio o flujo laminar NIVELES DE BIOSEGURIDAD Nivel 1 Incluye la manipulacin de microorganismos no patgenos o no se conozca que causen enfermedad o muerte a adultos sanos. Ejemplo: Bacilllus subtilis, Enterobacterias, BGNNF, S. aureus, etc. Las Medidas son las practicas Microbiolgicas estndar y no requiere equipos de seguridad Nivel 2 Incluye Microorganismo de riesgo moderado asociados con enfermedades humanas por lastimadura de piel, ingestin o exposicin de membranas mucosas Ejemplo: Salmonella, Hepatitis B Viral. Medidas Microbiolgicas estndar Acceso restringido No se debe permitir personas con riesgo aumentado de infeccin como mujeres embarazadas, nios, ancianos o inmunosuprimidos Seales de advertencia de bioseguridad Precaucin con los elementos cortantes Descontaminacin de los desechos El personal debe vacunarse y estar entrenado en caso de accidente de laboratorio La Bata se debe quitar antes de abandonar el laboratorio Utilizar guantes para manipular los animales de experimentacin. Se debe evitar el uso de agujas e inyectadota Contar con duchas de emergencia Es recomendable que el trabajo se realice en una campana de flujo laminar Control de roedores e insectos. Nivel 3

 Nivel 4

Medidas del Nivel 2 Acceso Controlado Descontaminacin de todo desecho Descontaminacin de la ropa de laboratorio Tomar muestras de suero peridicas al personal que labora en esta rea Usar mascaras, guantes antipinchazos, respiradores y batas especiales Usar centrifugas selladas No usar mecheros ni incineradores Utilizar filtros de alta eficiencia en los ductos de aire Doble Puerta automtica Flujo de aire negativo Uso de campanas cerradas

Microorganismos altamente patgenos y mortales que no se conoce bien su forma de trasmisin Ejemplo: Virus Ebola, Virus Junn, Virus Machupo, Virus Lassa y Guanarito Medidas del nivel 3 Cambio de ropa antes de entrar Ducha a la salida Descontaminacin del material Uso de trajes de presin positiva de todo el cuerpo con alimentacin de aire El edificio debe estar aislado y con sistema de suministro de aire independiente COLORACION DE GRAM: Es un mtodo de coloracin que se basa en la composicin qumica de la pared bacteriana Importancia: Permite la clasificacin morfolgica de las bacterias Es gua para el inicio de la antibioticoterapia Mtodo: Preparacin del frotis Violeta de Genciana (60 segundos) Lavar Lugol (60 segundos) Lavar Alcohol acetona (10 segundos) Lavar Safranina (60 segundos) Lavar y secar Observar al microscopio

Resultado: Bacterias Gram positivas: azul-violeta

Bacterias Gram negativas: rojo-rosadas

COLORACION DE ZIEHL NEELSEN (acido alcohol resistente) Es una tcnica de coloracin que permite la visualizacin de las Micobacterias Mtodo: Preparacin del frotis Papel filtro Colorante de Ziehl Neelsen (Fuscina Fenicada) Calentamiento Lavar Decolorar con alcohol acetona Lavar Azul de metileno (60 segundos) Lavar y secar Observar al microscopio

Resultado:

Bacilos rosados sobre un fondo azul COLORACION DE AZUL DE METILENO: Es un mtodo de coloracin que permite la visualizacin de los grnulos meta cromticos de los Corinebacterium diphtheriae Mtodo: Preparacin del frotis Azul de metileno (60 segundos) Lavar Secar Observar al microscopio

RESULTADO: Bacilos trasparentes con puntos azules en su interior MEDIO DE CULTIVO: Un sustrato o solucin de nutrientes que proporciona a los microorganismos las sustancias nutritivas y las condiciones ambientales para su desarrollo Clasificacin segn su estado fsico: Lquidos Slidos Clasificacin segn su procedencia: Naturales Artificiales Clasificacin segn la complejidad de formula: Simples Complejos Clasificacin segn su finalidad bacteriolgica: Medios Bsales o Comunes: (Agar Nutritivo) Medios Enriquecidos: Agar Chocolate o GC) Medios de Transporte: (Carry and Blair) Medios Selectivos: (S-S agar, agar VCN) Medios Diferenciales: (Medio de MacConkey) Medio de Enriquecimiento: (Caldo Selenito F) Medios Indicadores: (agar Urea o agar citrato)

Clasificacin de las bacterias segn sus necesidades de Oxigeno: Aerobios Estrictos Anaerobios Estrictos Anaerobios Facultativos Bacterias Microaerofilicas

Clasificacin de las bacterias segn la temperatura de crecimiento:

 Termofilas: >45 C Mesofilas: 37 C Criofilas: <25 C