Jurnal isolasi dna fix Metode

Dua spesimen dahak dikumpulkan dari BTA penderita AIDS positif selama bulan Oktober 2009 sampai dengan Maret 2010. Sampel penelitian adalah budaya pada dua lereng Lowenstein Jensen ( LJ ) media masing-masing dengan baik piruvat atau gliserin selama 3 minggu . DNA genom diekstraksi dari koloni terlihat sesuai dengan metode yang dijelaskan oleh Van Soolingen et al . ( 1997) . A 245 bp fragmen elemen IS6110 diamplifikasi untuk mengidentifikasi M. tuberculosis isolat kompleks. Maju dan mundur primer dan kondisi PCR yang sama dengan yang diberikan oleh Huard et al . ( 2003) . Kondisi bersepeda didirikan sebagai berikut : 94 C selama 3 menit sebagai denaturasi awal , 94 C selama 1 menit , 65 C selama 1 menit , dan 72 C selama 2 menit untuk 25 siklus , dan 72 C selama 4 menit sebagai ekstensi akhir . Produk PCR diperiksa dengan elektroforesis pada 1,5 % gel agarosa setelah pewarnaan dengan etidium bromida . Selain itu , teknik RD12 dilakukan untuk membedakan anggota M. tuberculosis kompleks ( Parsonsl et al . , 2002) . Kondisi digunakan untuk RD12 adalah 1 menit pada 94 C , diikuti oleh 30 siklus 21 detik pada 94 C , 21sec pada 55 C , dan 22 detik pada 72 C. Sebuah metode RFLP dilakukan oleh pembatasan endonuklease Pvu II untuk mencerna seluruh DNA . Fragmen restriksi dipisahkan dengan elektroforesis dalam gel agarosa 0,8 % di TBE penyangga . Fragmen dalam gel yang ditransfer ke membran nilon dengan blotting transfer perangkat kapiler selatan. Sebelumnya, pb produk PCR 245 telah dimurnikan dari gel dan dikirim untuk diberi label oleh digoksigenin pada akhir 3i dengan metode tailing . ini fragmen berlabel digunakan sebagai probe . Deteksi dilakukan oleh Hibridisasi mereka dengan antibodi Anti - digoksigenin terkonjugasi dengan HRP dan NBT dan BCIP . Pola pita RFLP akhirnya dianalisis dengan gel pro - analyzer . Abstrak

Tuberkulosis ( TB ) merupakan salah satu yang paling penting terkait AIDS penyakit menular di seluruh dunia . Ini adalah penyebab utama penyakit dan kematian di antara orang dengan HIV / AIDSe5t gn di daerah miskin sumber daya dunia . Kejadian tahunan TB di antara masyarakat adat Iran berdiri pada 14 kasus per 100.000 penduduk . Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi infeksi Mycobacterium antara Iran pasien HIV-positif . Dua spesimen dahak dikumpulkan dari BTA penderita AIDS positif. Sampel dikultur pada Lowenstein - Jensen media yang selama tiga minggu . DNA diekstraksi dari dua sampel berdasarkan van protokol Embden . Untuk mengidentifikasi Mycobacterium

Kompleks TB , PCR dilakukan untuk memperkuat 245 bp fragmen IS6110 elemen , diikuti oleh RD12 metode untuk mengkonfirmasi hasil PCR . Seluruh DNA RFLP dengan enzim restriksi Pvu II dipekerjakan untuk menentukan genotip berbudaya isolat . Hasil yang diperoleh oleh morfologi kolonial , PCR , dan RD12 metode menunjukkan bahwa kedua isolat milik M. tuberculosis , dan Genotip yang isolat dengan teknik RFLP ditampilkan bahwa dua isolat milik strain yang berbeda dari M. Tuberculosis Introduction

Tuberkulosis (TB), Wabah Putih sebagaimana diketahui di masa lalu, adalah penyakit kuno dan sering diabaikan. Bukti genetik terbaru menunjukkan bahwa sangat mungkin bahwa nenek moyang hominid terpencil, tinggal tiga juta tahun yang lalu, mungkin telah menderita TB (Gutierrez et al., 2005). TB adalah salah satu yang paling penting terkait AIDS penyakit menular, di seluruh dunia. Presentasi klinis TB pada pasien HIV / AIDS yang jelas terkait dengan tingkat Penekanan kekebalan pasien, yang diukur sebagai tingkat darah CD4 + T limfosit (Sutherland et al., 2006). Sebuah level 200 CD4 + Sel T per mili liter merupakan batas perkiraan untuk parah Penekanan kekebalan ( Jones et al . , 1993) . Beberapa infeksi oportunistik dan agen menular hidup berdampingan di samping HIV itu sendiri , yang menerapkan mekanisme patogenik mereka sendiri di antara semua penyakit oportunistik yang berhubungan dengan HIV / AIDS ( Shaffer et al . , 1992 ) . Ciri khas dari TB terletak terutama di penyebaran udara untuk pasien lain , serta seluruh masyarakat ( Pitche et al . , 2005) . TB berkembang pada host yang terinfeksi HIV oleh salah satu dari dua mekanisme patogen , baik reaktivasi endogen atau eksogen reinfeksi akhirnya , sementara kedua mekanisme dapat hidup berdampingan ( van Rie dkk . , 1999 ) . Teknik molekuler seperti RFLP telah digunakan untuk melacak sumber infeksi dan rute transmisi dalam kasus mikobakteri Infeksi ( Collins et al . , 1997) . Karena tahunan kejadian TB pada adat Iran yang tinggi dengan 14 kasus per 100.000 penduduk ( Hari TB Sedunia , 2009) , penelitian ini dilakukan untuk mengkarakterisasi dan mengidentifikasi Mycobacterium infeksi di antara Iran pasien HIV-positif . Result

Berdasarkan uji morfologi kolonial, kedua isolat mikobakteri diidentifikasi sebagai M. tuberculosis karena keduanya tumbuh pada media LJ dengan gliserol, sementara tidak tumbuh pada media LJ dengan piruvat. Berdasarkan metode PCR, sebuah 245 bp PCR amplikon dicapai oleh kedua isolat, yang

tercermin bahwa kedua isolat M. tuberculosis sebagai IS6110element merupakan bagian dari genom (Gambar 1). Gambar 1. Etidium bromida bernoda gel agarosa menunjukkan 245 bp fragmen IS6110 elemen diamplifikasi dengan PCR Lane 1: Ukuran penanda no. 14 Roche lane, 2: Standar regangan; jalur 3: kontrol negatif; jalur 4-5: sampel. Hasil yang diperoleh oleh RD12 juga menegaskan bahwa dua isolat mikobakteri adalah M. tuberkulosis (Gambar 2). Gambar 2. A 370 bp fragmen genom M. tuberculosis diperkuat oleh RD12. Lane 1: Ukuran penanda no. 14 Roche, jalur 2: Standar regangan sapi, jalur 3: regangan standar manusia, jalur 45: sampel; Lane 6: kontrol negatif