Manual Professor - Aulas Práticas em Microbiologia

UNIVERSIDADEFEDERALDEMINASGERAIS
InstitutodeCinciasBiolgicas
DepartamentodeMicrobiologia
LaboratriodeEnsinoemMicrobiologia
MANUALDOPROFESSOR
Utilizandoaprticaemmicrobiologiaparaintroduzirconceitos
MANUALDOPROFESSOR
MarinaWalker;MarianaDias;SamirElian;
MICROBIOLOGIANASALADEAULA|MANUALDOPROFESSOR|Consideraesimportantes|2
Consideraes importantes para uma boa realizao

dasprticaspropostasnestaapostila
Carosprofessoreprofessora,
Muitas vezes difcil prender a ateno dos alunos apenas com giz e quadro negro. Bem como,
muitasvezesdifcilparaelesentenderemalgotopequenoecomplexocomomicrobiologia.maisfcil
falardeanimaiseplantas,poiselesconvivemcomissodiariamente,masquantosjviramumabactria?
Por isso as aulas prticas so to importantes. Atravs das aulas propostas nessa apostila o aluno
poderentendercomoosmicroorganismosestoemtodososlugares,comofuncionaumprodutodeao
antibiticaemuitomais.
Sabemosquenemtodaescolapossuiumaestruturadelaboratrio,bemcomonotemcondies
de adquirir equipamentos e vidraria. Sabemos, tambm, quo importante para os alunos que a prtica
ocorra de forma adequada. E isso possvel com um pouco de boa vontade, ainda que com poucos
recursos. Por isso listamos aqui alguns procedimentos padres e sugestes de alternativas para que as
prticaspossamserrealizadasdeumamaneiramuitoproveitosa.
Esperamos que esse material ajude a tornar a microbiologia mais interessante para seus alunos.
Portanto,mosaobraedivirtase!!
Marina,MarianaeSamir
Contatodosautores:
MarinaWalkermarinawff@gmail.com
MarianaDiasmariana_odbio@yahoo.com.br
SamirElianelian.samir@gmail.com
ndice
Professor,
Essa apostila difere da Apostila do Aluno em diversos aspectos. Ela mais completa, possui as
respostasdetodasasquestespropostasparaosalunos,textosadicionais,entreoutrascoisas.
Porm, ela um apostila prtica, sem foco em explicaes tericas. Para embasar suas aulas
tericas,sugerimososseguintesmateriais:
MadiganMT,MartinkoJM,ParkerJ.2004.MicrobiologiadeBrock.10ed.SoPaulo:PrenticeHall.
Pelczar MJ, Chan ECS, Krieg NR. 1996. Microbiologia: conceitos e aplicaes. 2.ed. 2v. So Paulo:
MakronBooks.
TortoraGJ,FunkeBR,CaseCL.2005.Microbiologia.8ed.PortoAlegre:Artmed.
Como a aquisio de tais livros dificultada pelo preo, uma outra sugesto o site da professora
Cyntia Maria Kiaw, da Universidade de Braslia. Esta professora foi a responsvel por traduzir o livro
Microbiologia de Bock e seu site possui todo o contedo de microbiologia de forma sinttica e bem
aprofundada:http://www.unb.br/ib/cel/microbiologia
Lembramos ainda que esses so livros de ensino superior, muito mais completos e complexos do que
umaaulaparaalunosdoensinomdiodeveser.

QuemsoosMicroorganismos? Pg4
AvidanoLaboratrio Pg6
MeiosdeCultura Pg10
Prtica:Meiosdeculturaalternativos Pg10
EixotemticoI:Ubiquidademicrobiana Pg12
Prtica:Ondeosmicrbiosestoescondidos? Pg12
Prtica:Osmicroorganismossotransmitidosdeumapessoaparaoutra? Pg15
Outrassugestes Pg17
Questesimportantesparaoprofessor Pg18
Texto complementar I: Microbiota e Probiticos: como as bactrias ajudam na
manutenodanossasade
Pg20
TextocomplementarII:Adisseminaodasinfeces
EixotemticoII:Controledocrescimentomicrobiano
Pg23
Pg25
Prtica:estoosdesinfetanteslivresdemicrbios? Pg25
Prtica:Aodedesinfetantessobresuperfciesinertes Pg27
Informaesimportantesparaoprofessor Pg29
EixoTemticoIII:Microbiologiaaplicada Pg31
Prtica:Fermentao Pg32
Prtica:Antagonismoinvitroentrefungosendofticosefungosfitopatogenicos Pg33
Informaesimportantesaoprofessor Pg36

Quemsoosmicroorganismos?
Microrganismos compem um vasto e diverso grupo de organismos unicelulares de dimenses

reduzidas (microscpicas) que podem ser encontrados como clulas nicas, cadeias ou massas.
Diferentemente dos organismos macroscpicos animais, plantas os microrganismos so em geral
capazesderealizarseusprocessosvitaisdecrescimento,geraodeenergiaereproduo,semdepender
deoutrasclulas,sejamestasdomesmotipooudetiposdiferentes.
Observe o quadro abaixo. Nele esto relacionadas as principais caractersticas dos seres vivos e
comoelasseaplicamaosmicrorganismos,mostrandoqueelestambmsodotadosdevida!
Metabolismo captao de compostos qumicos a

partir do meio ambiente, sua transformao no
interior da clula e eliminao de produtos de
excreo no meio. Assim, a clula corresponde a
umsistemaaberto.
Comunicao As clulas se comunicam ou
interagem primariamente por meio de compostos
qumicos,liberadosoucaptados.
Diferenciao Formao de uma nova estrutura

celular tal qual um esporo, normalmente como
partedociclocelular.
Reproduo (crescimento) os compostos

qumicos captados so transformados em novas
clulas; o processo dirigido pelas clulas
preexistentes.
Movimentao frequentemente, os organismos

vivossocapazesderealizarautopropulso.
EvoluoAsclulasevoluemapresentandonovas
propriedades biolgicas e formando novas
espcies.
A microbiologia envolve o estudo de organismos procariotos (bactrias, archaeas), alguns

eucariotos(algas,protozorios,fungos)etambmosvrus.
Osmicrorganismosencontramseempraticamentetodososlugaresdanatureza.Soencontrados
em sedimentos no fundo do mar, em grandes profundidades. So transportados por correntes areas
desde a superfcie da terra at as camadas superiores da atmosfera. Eles esto na cozinha da sua casa, e
at mesmo no seu corpo. Os microrganismos ocorrem mais abundantemente onde puderem encontrar
alimentos,umidadeetemperaturaadequadaparaseucrescimentoemultiplicao.
No meio ambiente os microrganismos (fungos e bactrias) apresentam um papel essencial: a

decomposio. Decompem resduos complexos de plantas e animais, transformandoos em formas
qumicas mais simples, que retornam ao solo, contribuindo para sua fertilidade e evitando o acumulo de
matriaorgnica.
Mas eles no so sempre bonzinhos. Muitos causam contaminaes, perda de produo de
vegetais,edoenas.Essasdoenaspodematacarplantaseanimais,enagente,podemcausardesdeuma
diarria ou uma carie at uma pneumonia. Alguns vrus esto inclusive relacionados com alguns tipos de
cncer!
A imagem abaixo mostra algumas das aplicaes dos microrganismos, e essas so s algumas,
dentreasdiversaspossibilidades!Vejas!
Observe a tabela abaixo, com as caractersticas dos dois grupos de microrganismos com os quais
trabalharemosnasprticaspropostasnestaapostila.
Fungos Bactrias
Organizaonuclear Eucaritico Procaritico
Paredecelular Quitina Peptideoglicanos
Esporos De carter reprodutivo, sejam
assexuaisousexuais
Endsporos(semfimreprodutivo)
Metabolismo Heterotrficos
Aerbiosouanaerbiosfacultativos
Heterotrficosouautotrficos
Aerbios,microaerfilosouanaerbios
(facultativosouno)
Avidanolaboratrio:
Com essas prticas, seus alunos estaro, provavelmente, entrando em contado pela primeira vez
com microrganismos para experincias. Apesar de utilizarmos basicamente microrganismos do meio
ambiente, importante ressaltar que aps o crescimento em placa eles esto em grande quantidade,
muitas vezes inclusive com grande taxa de formao de esporos. Portanto importante ressaltar a seus
alunosparaqueelesnoabramasplacas.
Exijaousodejalecos,sapatosfechadosecalascompridasnosdiasdeprtica.Instruaosparaque
retirem o jaleco ao sair da sala. Se possvel, divida a turma, para ter maior controle dos alunos. Pea s
meninasqueprendamocabeloeretirembrincosecolareslongos.Comomuitasvezesusamosumachama
paraesterilizarareadetrabalho,oriscodequeimadurasalto.
Noseesqueadomaisimportante:Doexemplo!!!
MATERIALPARAUSOEMLABORATRIO
Vidraria:
1Tubodeensaio:Empregadoparafazerreaesempequenaescala,principalmenteemtestesdereao
emgeral.Usadoparaguardarsoluessalinas,fazerdiluiodemateriais,entreoutros.Devesertampado
comumaboneca(rolhafeita comalgodoe/ougaze).Aoutilizlo,flambe abocaembicode bunsene
mantenhaoemp.
2 Becker: de uso geral em laboratrio. Serve para fazer reaes entre solues, dissolver substncias
slidas, efetuar reaes de precipitao, aquecer lquidos, fazer solues. Pode ser substitudo por vidros
debocalarga,dotipousadoparaguardarconservas
3Erlenmeyer:Utilizadoemaquecimentodelquidoseparadissolversubstnciaseprocederreaesentre
solues.Serveaindacomorecipienteparaguardarmeiosdeculturaeoutrassolues.Podesertampado
comumabonecatambm.Podesersubstitudosporvidrosdebocaestreita,dotipousadoparasucos
4Estanteparatubosdeensaio:Serveparaguardartubosdeensaio,mantendoosemp.
5PlacadePetri:Emmicrobiologia,usadocomorecipienteparameiosdecultura.Possuitampaedeveser
guardadodecabeaparabaixo,
6 Pipeta volumtrica: Usada para medir e transferir medios volumes de lquidos. Evite aquecla, pois
possuigrandeprecisodemedida.
7 Pipeta graduada: Utilizada para medir pequenos volumes. Mede volumes variveis com relativa
preciso.Nodeveseraquecida.
8Proveta:Serveparamediretransferirvolumesdelquidos.Nodeveseraquecida.oinstrumento
usadoparafazermedies.Useaaoinvezdebeckerseerlenmeyers.
9BicodeBunsen:afontedeaquecimentomaisutilizadaemlaboratrio.Podesersubstitudaporuma
lamparina.CUIDADO:RISCODEQUIMADURAS!
10Zaragatoa:Usadanacoletademateriaisbiolgicos.Podesersubstitudaporcotoneteoualgumtipode
palitolongocomalgodonaponta,tudodevidamenteesterilizado.
11Alametlica(noilustrada):usadaparafazerinoculaesdebactrias.Podeserfeitacomumarame
finoefirme,comumaextremidadecirculareoutracomumsuportequenoesquente.
Todos esses utenslios podem ser substitudos por outros, muitas vezes encontrados facilmente em uma
cozinha.Usesuacriatividade!
EQUIPAMENTOS:
BalanadePreciso:UsadaparamedirdemaneiraprecisaaMASSA
de substncias. Essa balana to sensvel, que funciona dentro de
um armrio de vidro, para evitar que uma brisa possa alterar sua
medio.
Autoclave: Nada mais que uma grande panela de presso. Com o
uso da gua a grandes temperaturas e presso, o vapor de gua
chega a uma temperatura altssima, cerca de 120C. Isso, por meia
horamataosmicroorganismos,tornandoseumaterialestril.Dessa
forma,seuexperimentonocontaminado!!
comumencontrlastambmemgrandesrestaurantesehospitais.
MUITOCUIDADO!!
Evite ficar prximo da autoclave quando esta estiver em
funcionamento. Nunca mexa nela sem a autorizao e ajuda de sua
Sempre use materiais esterilizados para fazer prticas de microbiologia. Sempre flambe seu
equipamento (quando ele for feito de um material que permita isso, claro) e evite manter as placas
abertaspormuitotempo.Quandoforinocularalgonaplaca,faaonaproximidadedofogo.
Sempre identifique suas placas. Escreva com uma caneta de retroprojetor no fundo da placa, pois
astampaspodemsertrocadas.Asplacasdevemserincubadasdecabeaparabaixo.
COMOESTERILIZARSEMAUTOCLAVE:
Essa tcnica de esterilizao, bem como o meio de cultura a base de caldo de carne so sugestes
encontradasnoCDdeapoiodidticodeAmabiseMartho,daeditoramoderna.
Vocvaiprecisar:
Paneladepresso
Teladearamecommalhasfinas
Papelpardo(deembrulho)
Barbante
Algodo(sepossvelhidrofbico)
Papelalumnio
Separe o material que pretende esterilizar. Todo o material deve estar lavado. Embrulheos em
papelpardoeprendacombarbantee/oufitacrepe.Nuncacoloquerecipientestampadosnaautoclaveou
panela de presso. Caso tenha algum liquido que precise ser esterilizado, tampe o frasco com uma rolha
feita com o algodo e/ou gaze. Esterilize todo o material que ir entrar em contato com o experimento,
paraevitarcontaminao.
Para cultivar bactrias necessrio usar vidros e meios de cultura esterilizados, o que pode ser
feito em uma panela de presso, que funcionar como autoclave. Prepare, com a tela de arame, um
estrado de suporte para ser colocado no fundo da panela de presso, de modo a evitar que os materiais
entrememcontatodiretocomaguafervente,duranteaesterilizao.Corteumcrculodateladearame
cercade10cmmaiorqueodimetrodapanela.Dobreasbordasdatelademodoaformarumestradoque
encaixenofundodapanelaetenhacercade5cmdealtura.Coloqueguanapanelaatmaisoumenos1
cmabaixodoestrado,eponhasobreeleomaterialaseresterilizado.Fecheapanelaecoloqueanofogo,
atliberarvaporpelavlvula.
Deixe ferver por mais 20 minutos e apague o fogo, deixando esfriar. No mercado especializado
podemse encontrar placas de Petri de plsticas j esterilizadas, que podem ser usadas novamente, aps
esterilizao.Seusarplacasdevidro,sempreasesterilizeantes douso.Seforcomprarplacasparaserem
reaproveitadas,dprefernciasdevidro.Apesardemaiscaras,elasdurammais,poisnodeformamna
autoclave,oqueaconteceaospoucoscomasdeplstico.
Estufa: A temperatura ideal para o crescimento de
bactrias de mais ou menos 37C. Esse equipamento
mantm essa temperatura pelo tempo desejado,
fazendocomqueessecrescimentosejamaiseficiente.
Fungoscrescematemperaturaambiente.
Os meios de cultura, com ou sem gar, devem ser colocados em recipientes de boca estreita, no
ultrapassandoametadedovolume.Tampeosfrascoscomrolhasdealgodobemapertadasnogargalo.
Cubra as rolhas de algodo com papel alumnio e coloque os frascos em p na panela de presso, neste
caso,diretamenteemcontatocomagua.
PREPARAODEMEIOSDECULTURACOMCALDODECARNE
garougelatinaincolor
Carnemoda
Acar(sacarose)
Saldecozinha(NaClcloretodesdio)
gua
Prepare um caldo de carne misturando 200 g de carne moda com meio litro de gua filtrada,
deixando de molho at o dia seguinte. Filtre o lquido, espremendo a carne em um pano. Ferva o lquido
obtido por 15 minutos e filtre em algodo ou filtro de papel, de modo a obter um caldo claro e
transparente(ocaldocontmaminocidos,vitaminas,acaresediversasoutrassubstnciasqueserviro
de alimento para os microorganismos). Adicione, em 100 ml de caldo de carne, 1,5 g de gar, fervendo a
misturaatadissoluocompleta.Coloqueasoluoaindaquenteemumfrascodebocaestreita,tampe
comumarolhadealgodoeesterilizenapaneladepresso.
Retire o frasco da panela assim que a presso permitir e, antes que a soluo do frasco esfrie,
distribuaaemplacasdePetriesterilizadas.Paraisso,desembrulheaplacaelevanteatampasemremov
latotalmente,paraevitarsuaexposioaoar.Despejeasoluoatformarumacamadacomcercade 3
mmdealtura.
Cubra imediatamente a placa e deixe que esfrie sobre uma superfcie plana. O meio que
eventualmentesobrarnofrascopodeserguardadonageladeira;seprecisarprepararnovasplacas,derreta
omeioemumfornodemicroondasouembanhomariaereutilizeo.
MICROBIOLOGIANASALADEAULA|MANUALDOPROFESSOR|EixoI:Ubiquidademicrobiana|10
MeiosdeCultura
Como se estuda microbiologia? As bactrias e os fungos so to pequenos, como podemos

enxerglos?Paraisso,usamosmeiosdeculturaartificiaisparacultivarcolniasdebactriasoufungos.
Os meios de cultura fornecem os princpios nutritivos indispensveis ao crescimento dos
microorganismos: fontes de carbono e energia como os acares, fontes de nitrognio, fsforo e sais
minerais. Outros componentes mais especficos podem ser encontrados em um meio especifico para um
determinado organismo (meio seletivo), como por exemplo vitaminas, aminocidos, etc. Por outro lado,
podemosternummeioagentes/constituintesqueinibamocrescimentodedeterminadosmicrorganismos,
sendoestestambmconsideradosmeiosseletivos.
Ummeiodeculturapodeserslido,semislidoouliquido,quantoconsistncia.Oquegarantea
firmeza do meio uma substancia extrada de algas, chamada gargar ou simplesmente gar. O gar
muitousadoemmeiosdeculturaslidosparabactriasefungos,masnoparavrus.Algunsvruspodem,
no entanto, ser cultivados em bactrias que por sua vez crescem em gar. Menos de 1% de todas as
bactrias conhecidas podem ser cultivadas neste tipo de meios, mas a formulao bsica do meio de
culturacomgaradequadoparaamaioria.
A mistura de gar e nutrientes, depois de esterilizada, vertida enquanto lquida para placas de
Petrioutubos.Porvezesadicionadoumsuplementoapsaesterilizao,comoporexemplo,antibiticos
(o calor da esterilizao destri determinados suplementos, no permitindo a sua adio anterior). Aps
solidificao do meio, este encontrase apto a albergar o crescimento de microorganismos. Diferentes
microorganismospossuemdiferentesnecessidadesnutricionais,porissoomeiodeculturaadaptadopara
satisfazeressasnecessidades.Porexemplo,umtipodemeioobloodagar(literalmente,gardesangue),
que possui como suplemento sangue de cavalo, usado para detectar a presena de organismos
hemorrgicoscomoaEscherichiacoli.Adetecofeitaatravsdadigestodosangue,quetornaaplaca
maisclara.
Os meios mais usados, e por isso os que sero usados nas nossas prticas so o gar simples e o
gar Sabouraud. Em geral esses dois meios so usados para o crescimento diferenciado de bactrias e
fungos. O primeiro, por ter pH mais neutro (7,0) e ser incubado em estufa a 37C favoroce o crescimento
de bactrias. Enquanto o segundo meio, por ter caractersticas mais cidas (pH ~ 6,0) e ser incubado em
temperaturaambientefavorecerocrescimentodefungosfilamentosos.
MEIOSDECULTURAALTERNATIVOS
Objetivodaprtica
Nessaprtica,vamosprepararummeiodeculturaalternativocomalimentosdodiaadiaetestar
suaviabilidade.
Metodologia
Escolha alimentos na sua casa. Pode ser qualquer coisa! Frutas, biscoitos, arroz, balas, pizza,
feijoada...Escolhaoquequiser!
Selecionealgunsdessesalimentos,entreosdoseugrupoedosseuscolegaseprepareumamistura
comeles.Peseoseanoteasquantidadesdecada.
Tritureosalimentos,deformaquesetornembemlquidos.Filtreos.Preparemeiosuficientepara
prepararduasplacasporgrupo.
Acrescentegarmisturaecoloqueomeionaautoclavea121Cpor15minutos.
Retirardaautoclave,esfriloa5070Cedistribuir(cercade15a20mlporcadaplaca)emplacas
de Petri (15 x 100mm) estreis.Tampe a placa e espere esfriar. Pronto! Seu meio de cultura est
prontoparaserusado!
Useessasplacasnaprticadeubiqidade.Separeduasplacasdecadagrupoe,juntamentecomumaplaca
degarsimpleseumadeSabouraud.
AOPROFESSOR:
Professor, fizemos testes com diversos meios preparados com alimentos trazidos de casa e todos
funcionaram muito bem. Foram utilizados frango, paoca, massa de po, frutas... Alguns meios
favoreceram o crescimento de fungos, outros de bactrias, mas no geral, houve um crescimento dos dois
grupos de microrganismos. Vale a pena, ainda, ressaltar que o uso de gelatina para solidificar o meio no
funcionou.Porm,otestefoifeitoutilizandoseapenasaautoclave,semousodaesterilizaocompanela
de presso como sugerido no item anterior. Neste caso, foi utilizado gar na concentrao de 1,5 g para
cada 100 mL de meio. Alm disso, a massa mxima de alimento utilizado foi de 5% p/v, ou seja, para100
mLdemeio,omximodealimentoutilizadofoide5g.
EixotemticoI:Ubiquidademicrobiana
Vocjparoualgumavezparapensaraondepodemosencontrarosmicrorganismos?Separarmos
parapensar,veremosqueestoespalhadosportodososlugares:emcasa,nosolo,noar,nagua...Atem
ns mesmos encontramos uma enorme quantidade e diversidade de micrbios. Temos 10 vezes mais
clulas bacterianas em nosso corpo do que clulas humanas!! Os microrganismos ocorrem mais
abundantemente onde puderem encontrar alimentos, umidade e temperatura adequada para seu
crescimentoemultiplicao.
Ejustamenteessadiversidadeeapresenageraldosmicrorganismosquefazcomqueavidaseja
inevitvel sem eles. Sejam como PARASITAS, COMENSAIS ou MUTUALISTAS, estes sempre interferem na
vidadequalqueroutroservivo.Elessotoversteisquepossvelisollosatmesmodefontestermais,
ambientes polares e meios hipersalnicos nesse caso, esses microrganismos so denominados
extremfilos.
Comonagrandemaioriadasvezeselesfazempartedoecossistema,atuamnoequilbriobiolgico,
por exemplo, como decompositores de matria orgnica, transformandoa em formas qumicas mais
simples,queretornamaosolo,contribuindoparafertilidadedeste.
Uma vez que esto dispersos na natureza, deve haver uma forma de demonstrar esse fato. Isso
possvel devido possibilidade de criar esses organismos em placas de Petri com meio de cultura
adequado.Assimpodesefazerumlevantamentodasespciesesuasfunesnoambienteondevivem.
No meio ambiente os microrganismos, fungos e bactrias, apresentam um papel essencial: a
decomposio. Eles decompem resduos complexos de plantas e animais, transformandoos em formas
qumicasmaissimples,queretornamaosolo,contribuindo,assim,parafertilidadedosolo.
AOPROFESSOR:
Aqui vamos trabalhar alguns conceitos sobre a ubiqidade dos microrganismos, ou seja, a
capacidade deles de serem encontrados nos mais diversos ambientes, inclusive em ns mesmos. Assim,
almdosconceitosbsicosqueseroinseridoscomasPerguntasdeaplicaodenovosconhecimentos,
no item Informaes importantes para o professor esto textos complementares. O primeiro, sobre a
microbiota intestinal humana e probiticos reforanos o conceito de ubiqidade microbiana, alm das
propriedades benficas que esses organismos possuem nos protegendo de outros microrganismos que
tenham propriedades patognicas. O segundo texto faz referncia princpios de epidemiologia, como as
formas de contaminao de uma pessoa para outra, o que pode ser associado segunda prtica, por
exemplo, a partir de uma pergunta como: E se em vez de uma levedura, o microrganismo fosse uma
salmonela?
Alm disso, esto fornecidas nesta parte do manual, a frmula dos meios gar Simples e
Sabouraud,bemcomosuasprincipaispropriedades.
ONDEOSMICRBIOSESTOESCONDIDOS?
Objetivodaprtica
Nestaatividadevamosdemonstrarapropriedadedosmicrorganismosdeestaremdispersosnosmais
variadosambientes,condioquedenominamos:ubiqidademicrobiana.
Metodologia
Cada grupo receber duas placas contendo uma, gar Sabouraud (Sb) e outra, gar Simples (AS).
Casovocstambmtenhampreparadoummeioalternativo,eletambmserfornecido.
Vocs devero, ento, escolher o local onde faro a pesquisa dos microrganismos (fungos e
bactrias).Podesernobanheirodaescola,nojardim,naquadra,nasaladeaula...Procurefazerem
umlugardiferentedosescolhidospelosoutrosgrupos.
Identifiqueassuasplacas:nomedogrupo,data,localescolhidoeo tipo de meiodecultura(AS,SB

oumeioalternativo)
Vocs devero se dirigir para o local escolhido, onde devero deixar as placas abertas durante 10
minutos.NOABRAMASPLACASANTES!!
Retorne sala. As placas que contm gar Simples sero incubadas a 37 C por 24 horas, e as que
contem gar Sabouraud sero deixadas em temperatura ambiente por uma semana. Coloque
metadedasplacascommeioalternativonaestufaa37Ceaoutrametadetemperaturaambiente.
Naprximaaula,anoteosseusresultadosnatabeladoprximoitem.
Resultados
ATENO:Noabraasplacas!Parafazersuasobservaesolhesemprepeloversodaplaca!
A figura abaixo mostra uma placa de Petri aps incubao. Observe pequenas colnias de aspecto
homogneo essassocolniasdebactrias.Ascolniasgrandes,deaspectofilamentosoeirregularso
ascolniasdefungosfilamentosos(F).Jascolniasdelevedurassocolniasgeralmenteuniformes,um
poucomaioresqueasbacterianasedeaspectoopaco.
Placas
Crescimento
FungoseLeveduras Bactrias Total
garSimples(AS)
garSabouraud(Sb)
Meiosalternativos
Comovocexplicaosresultadosencontrados?
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Questespararefletir
Houvediferenaentreostiposdecolniaobservadosnosdiferentesmeios?
Qual a diferena entre as suas placas e a dos outros grupos? Qual local do colgio tem maior
contaminaoporfungos?Eporbactrias?Vocconsegueexplicarporqu?
Essa tcnica permite a demonstrao de todos os microrganismos presentes nos ambientes
estudados?Qualasuaconclusosobreaprtica?
Voc esperaria encontrar algum microrganismo na atmosfera? Por qu? Se sim, voc esperaria que
eleestivessecompletamenteativooucomsuacapacidademetablicareduzida?Porqu?
Qualoriscoquecorremoscomautilizaodearcondicionadoemambientesmovimentadosepopulosos?
AOPROFESSOR:ComentriossobreasQuestespararefletir
o Houvediferenaentreostiposdecolniaobservadosnosdiferentesmeiospoisogarsimplesum
meio que favorece o crescimento de bactrias e o Sabouraud favorece o crescimento de fungos a
composiodestesmeiosestrelacionadanoitemInformaesimportantesparaoprofessor.
o Fungosfilamentosostmaspectofilamento,ebactriaseleveduraspossuemaspectocremoso.
o Essa tcnica no permite a demonstrao de todos os microrganismos presentes nos ambientes

estudados,poisnemtodososmicrorganismosencontramnomeiodeculturaumambientefavorvel
paraseudesenvolvimento.Almdisso,casotenhasidofeitocoletasdesoloougua,surgeaquesto
dosmicroaerfilosedosanaerbiosrestritos,quesoimpossibilitadosdecresceremplacassemque
hajacondiesarticiaisdeausnciadeoxignio.
o Encontrar um microrganismo na atmosfera algo esperado, uma vez que eles so leves os bastante
para serem transportados passivamente pelo ar. Porm, eles, nestas condies, esto com sua
capacidademetablicareduzida,poisesteseriaumambientedeestresse,semnutrienteseumidade
adequados.
o Quanto mais movimentado e populoso o ambiente, mais rico em microrganismos que podem ser
disseminados pela movimentao do ar e pelas correntes areas. O ar condicionado faz o papel de
manteressesorganismosquepodemserpotencialmentepatognicosemcirculao.
OS MICRORGANISMOS SO TRANSMITIDOS DE UMA PESSOA PARA

OUTRA?
Objetivodaprtica
Observaratransmissodeummicroorganismodeumapessoaparaoutraatravsdeumsimples
apertodemo
Metodologia
Material
o 1gdefermentobiolgico(leveduraSaccharomycescerevisiae);
o Frascocontendo10mlguadestiladaestril;
o Zaragatoasestreis;
o PlacascontendogarSabouraud.
o Pipetasde1mlestreis
Acrescentar1gdefermentobiolgico
em
10mldesoluosalinaestril.
Derramar a suspenso de fermento nas mos do aluno n 1 (iniciador da cadeia epidemiolgica). A

seguir,oalunodeverespalharhomogeneamenteasuspensoentreaspalmasdasmos.
O aluno n 1 dever apertar a mo de outro colega (vizinho imediato) e assim sucessivamente at

completarumacadeiaepidemiolgicacompostapornomximooitocomponentes(oito"rounds"de
apertosdemos).
Aps finalizar os apertos de mos, cada aluno dever umedecer uma zaragatoa em soluo salina
estril, esfregar na palma da mo contaminada e semear em placas contendo Agar Sabouraud em
movimentosdezigzag,comoindicadoabaixo.Essatcnicaemzigzagsechamaesgotamento.
Identificarasplacascomnmerodoalunonacadeiadetransmisso,bancadaeturma,eincublasa
25
o
Couatemperaturaambiente.
Resultados
EmquaisplacashouveformaodecolniasdeSaccharomyces?
Indivduo 1 2 3 4 5 6 7 8
Colnias

Questespararefletir
Quaissoascaractersticasvocobservounocrescimentodosmicrorganismosnasplacasde1a8?
Houvecrescimentodeleveduraataoitavaplaca?Senotiverocorrido,porquevocachaqueisso
aconteceu?
Houve alguma placa em que no houve o crescimento das leveduras, mas na placa seguinte, sim?
Comovocexplicariaisso?
Ocorreu o crescimento de outras colnias, que diferem do padro das leveduras? Em quais placas
elasapareceram?Deondevieramessasbactrias?
Oqueissosignificananossavida?Quaiscuidadosdevemosternonossodiaadia?
AOPROFESSOR:ComentriossobreasQuestespararefletir
o Ao analisar o crescimento das placas de 1 a 8, observase uma diminuio constante do nmero de

bactrias,comosefosseumprocessodediluioseriada.
o O crescimento pode prosseguir ou no at a oitava placa, isso depende de diversos fatores que vo
desde a quantidade de microrganismos presentes no inoculo, at o tamanho da mo dos alunos, a
formacomohouveatrocademicrorganismoseaindaaformadecoletadomaterialdasmos.
o Casotenhaacontecidodenohavercrescimentoemumaplaca,masnasplacasanterioreposteriora
ela o crescimento tenha ocorrido, isso pode ter acontecido nas placas finais, onde a quantidade do
inoculo j est bastante reduzida, e assim, mais espalhada na mo do aluno. Ao fazer a coleta do
materialoalunopode noterpassadoosawbde formacorreta,portodaapalmadamo,eassim,
nocoletadoasleveduras.
o Aocontrriodoqueteriaocorridonasmenoresdiluies(crescimentointensosemcolniasisoladas),
na medida em que ocorrem as diluies aparecem a colnias isoladas. Acontece que na palma das
mos existe uma microbiota que tambm transmitida para o swab no momento da coleta. Nas
primeirasdiluiesoinculodelevedurafoitograndequenofoipossvelcoletaramicrobiotadas
mosousepossvel,haviaumaquantidademuitosuperiordelevedura,queporcompetioinibiuo
crescimento das bactrias. J nas menores diluies a competio menor, o que permite o
crescimentodestesmicrorganismos.
RESPOSTASDAAPLICAODENOVOSCONCEITOS
1. Os microrganismos esto restritos a ambientes com muita disponibilidade de alimento e

temperaturasamenasdecercade30C.Aafirmativaverdadeiraoufalsa?Justifique.
Osmicrorganismosnoestorestritosaambientescommuitadisponibilidadedealimentoetemperatura
de cerca de 30C. Na verdade, os microrganismos so encontrados nos mais diversos ambientes, desde
guas quentes nas proximidades de vulces a montanhas de neve esses microrganismos so
denominados extremfilos. Alm disso, freqente que pessoas hospitalizadas e que utilizam cateteres
sejam mais propcias s infeces. Isso ocorre devido formao de biofilmes nesses equipamentos
inertes. Biofilmes so formados por um acmulo de bactrias em meio a uma matriz extracelular. Os
microrganismos tambm podem ser encontrados na atmosfera, mas ali, por falta de nutrientes,
encontramsevegetativamente.Temperaturasmedianaseoexcessodealimentofavorecemadiversidade,
mascomodito,nosoanicacondioparaasobrevivnciadosmicrorganismos.
2.Qualpalavramelhordescreveaocorrnciadosmicrorganismosnanatureza?
Apalavraquemelhordescreveaocorrnciadosmicrorganismosnanaturezaubiqidadeouseja,eles
estopresentesnosmaisdiversosambientes.
3. Voc esperaria conseguir isolar todos os microrganismos presentes em uma quantidade de solo que
coubesseemumacolherdech?Justifique.
Nopossvelisolartodososmicrorganismospresentesemumacolherdechdesolo,umavezquealm
da grande quantidade de espcies ali presentes cada uma apresenta uma especificidade metablica
prpria. Assim, como no conhecemos todas as espcies ali presentes, no podemos garantir que os
diferentes meios e condies fornecidas sejam suficientes para isolar todos os microrganismos ali
presentes.
4. Animais possuem em sua superfcie um conjunto prprio de microrganismos denominado

_________,queatingenmeroscercade______vezesmaioresdoqueonmerodeclulasprpriasdo
organismo.
Animais possuem em sua superfcie um conjunto prprio de microrganismos denominado MICROBIOTA

INDGENA (NORMAL, COMENSAL), que atinge nmeros cerca de DEZ vezes maiores do que o nmero de
clulasprpriasdoorganismo.
5.Comoosmicrorganismoscomensaisajudamnaproteodohospedeiro?
Amicrobiotacomensaltembasicamenteduasfunesimportantesparasadedohospedeiro:aresistncia
colonizao (inibe a multiplicao de microrganismos exgenos no local) e a imunomodulao (permite
uma resposta imune mais rpida e adequada durante uma agresso infecciosa). Isso possvel devido a
algumaspropriedadesdamicrobiotacomoaresistnciacolonizao(aprimeiralinhadedefesacontraa
invaso por patgenos), a produo de bacteriocinas, perxido de hidrognio e cidos orgnicos, a
competiopornutrienteseporstiosdeadeso.
Outrassugestes
Professor,vocpodeaindaobservarcomseusalunosotransportedemicrorganismospormeiode
insetos. Para isso voc pode pegar uma formiga e deixla andar pela placa de gar Sabouraud. Aps a
incubao, esperase que o caminho por onde a formiga andou esteja marcado pela presena
principalmentedefungos.
Paraplaquearsolo,pegue0,2gramasdesoloecoloqueem2mLdesalina.Faadiluiesdecimais,
transferindo 100 L da soluo inicial para outro tubo contendo 900 L de salina (a concentrao neste
tubo ser de 10
1
). Repita o procedimento sucessivamente, chegando at a diluio 10
5
. Plaqueie 100 L
das solues 10
3
e 10
5
em aguar simples e ou Sabouraud. Aps incubao conte quantas colnias
cresceram. Para saber quantas colnias haviam na amostra inicial multiplique a quantidade de colnias
(UFC)Xofatordediluio(FD)(10
3
ou10
5
).UFCxFD=forneceraquantidadedecolniasporgrama/mL,
comohaviam2gem2mL,bastamultiplicarpor2oresultado!
INFORMAESIMPORTANTESPARAOPROFESSOR
TEXTOCOMPLEMENTARI
MicrobiotaeProbiticos:
comoasbactriasajudamnamanutenodanossasade
AdaptadoporS.D.A.Elian,apartirdatesededoutoradodefendidaporF.S.MartinsnaFaculdadedeMedicinadaUFMGem2008,
entitulada Efeito de dois probiticos, Saccharomyces boulardii e Saccharomyces cerevisiae linhagem UFMG 905, na resposta
inflamatriainduzidaporSalmonellaentericasubsp.entericasorovar.Typhimurium
Osorganismospossuemdiversasbactriasabrigadasemsuasmucosas.Quandovamosnosreferira
essa coleo de microrganismos comensais utilizamos o termo microbiota normal ou indgena. O trato
gastrintestinal dos mamferos abriga uma comunidade microbiana que extremamente densa e diversa,
compostapor10
14
unidadesformadorasdecolnias(UFC)ecercade300a400espcies.Essaquantidade
tograndequeonmerodebactriasdezvezesmaiorqueodeclulasdohospedeiro(10
13
),atingindo
cercade1,2Kg.Almdisso,possuiumaatividademetablicatoaltacomoadofgado.
Oestabelecimentoeamanutenodamicrobiotaconstituemumprocessocomplexo,quepodeser
influenciado por vrios fatores, como dieta, idade, utilizao de antibiticos, utilizao de probiticos e
prebiticos, ambiente, microbiota materna, via do parto, interaes microbianas, interaes
microrganismohospedeiro,presenadecertosgenes(ouprodutosgnicosouexpressodecertosgenes)e
receptores,almdesuasucessoecolgica,demandanutricionaletolernciaoral.
Amicrobiotaresidenteconsisteemtiposrelativamentefixosdemicrorganismosencontradoscom
regularidade em determinada rea e em determinada idade e que quando perturbada, recompese
prontamente. A microbiota transitria consiste em microrganismos nopatognicos ou potencialmente
patognicos que colonizam a pele ou as mucosas somente por horas, dias ou semanas; esta microbiota
provmdomeioambienteenoseestabelecedeformapermanentenasuperfcie.Emgeral,osmembros
da microbiota transitria so de pouco significado enquanto a microbiota residente normal permanece
intacta.Todavia,seamicrobiotaresidenteforperturbada,osmicrorganismostransitriospodemcolonizar
eproliferar,produzindodoena,sepatognicos.
Todos os animais, em condies de sade, nascem isentos de qualquer microrganismo. A
colonizaodotratodigestrioocorreimediatamenteapsonascimento.Inicialmente,quandooespaoe
a disponibilidade de nutrientes so abundantes, as bactrias com altas taxas de multiplicao comeam a
dominar.Apartirdomomentoemqueonmerobacterianoaumenta,essesdoisfatoresdisponibilidade
de nutrientes e espao ficam escassos, os habitats ficam ocupados por microrganismos mais
especializados e a complexidade da biota aumenta. As primeiras bactrias a colonizarem o trato
gastrintestinalsoderivadasdamicrobiotapresentenocanaldoparto.
Em geral, quanto mais numerosa uma populao de uma espcie bacteriana, mais estvel ela
no seu nicho ecolgico. Por isso, e em nvel de gneros, as microbiotas digestrias dominantes e
subdominantespermanecemrelativamenteconstanteseestveisnotempoedeumindivduoparaoutro.
Ao contrrio, a microbiota residual bastante varivel de um indivduo para outro e flutua
consideravelmenteaolongodotemponomesmoindivduo.
Peloseutamanho,amicrobiotaindgenaassociadaaotratodigestrio,muitasvezes,considerada
como um rgo ou organismo atuando na superfcie das mucosas do hospedeiro. basicamente
responsvel por trs funes importantes para sade do hospedeiro: a resistncia colonizao (inibe a
multiplicao de microrganismos exgenos no local), a imunomodulao (permite uma resposta imune
mais rpida e adequada durante uma agresso infecciosa) e contribuio nutricional (fornece vitaminas e
substratosenergticosereguladores).
As bactrias comensais so responsveis por um grande nmero de funes bioqumicas e
digestivas que vo desde o metabolismo de colesterol produo de vitamina K. Dentro outros fatores
associados microbiota esto a resistncia colonizao (a primeira linha de defesa contra a invaso por
patgenos), a produo de bacteriocinas, perxido de hidrognio e cidos orgnicos, a competio por
nutrientes e por stios de adeso. A presena da microbiota tambm estimula o peristaltismo, o sistema
imuneeamaturaoerenovaodasclulasepiteliaisdoclon.
A microbiota do trato digestrio extremamente potente nas suas funes, mas tambm frgil,
podendo ser perturbada. Diversos fatores podem interferir no processo de instalao da microbiota
normal em recmnascido (parto normal ou cesariana; isolamento em incubadora; amamentao no seio
ou por frmula) ou na sua manuteno em adultos (uso de antimicrobianos; mudanas alimentares
drsticas;estresse),provocando,respectivamente,atrasonasuaimplantaooufalhadesuasfunes.No
caso particular de antibioticoterapia, esses distrbios dos equilbrios populacionais e das funes
protetorasdamicrobiotagastrointestinalsoprovavelmenteresponsveispelaocorrnciade15a40%dos
episdios de diarrias associadas ao uso de antibiticos (DAA). Alm disso, a utilizao excessiva e
inadequadadeantibiticostambmassociadacomaocorrnciacadavezmaiordemultirresistncianos
microrganismospatognicos.
A microbiota normal possui microrganismos com efeitos benficos e microrganismos com efeitos
deletrios para o hospedeiro. Nos ltimos anos, vem aumentando o interesse no uso de microrganismos
que exercem os efeitos benficos com o propsito de beneficiar a sade do hospedeiro e de prevenir ou
tratar doenas. Esses organismos recebem o nome genrico de probiticos e vm sendo propostos como
medicamentosparaprevenoetratamentodeumgrandenmerodedesordensgastrintestinais.
Relatos dos efeitos benficos das bactrias na alimentao datam desde a verso Persa do Velho
Testamento (Gnesis 18:8), que relata que Abrao atribuiu sua longevidade ao consumo de leite azedo.
Plnio, um historiador romano, em 76 a.C., recomendou o uso de leite fermentado para o tratamento de
gastroenterites.Otermoprobiticofoicriadocomoumantnimoaotermoantibiticoe,originalmente,foi
propostosignificandoaquelequefavoreceocrescimentodemicrorganismos.Maisde20anosdepois,um
pesquisador chamado Fuller definiu probitico como um suplemento microbiano vivo que afeta
beneficamenteoanimalhospedeirograasmelhorianobalanomicrobianointestinal,embora,hoje,os
probiticos j tenham, tambm, aplicaes em outros ecossistemas. Esta definio pode ser estendida ao
hospedeiro humano como microrganismos nopatognicos que, quando ingeridos, exercem uma
influnciapositivanasadeoufisiologiadohospedeiroou,comoumapreparaoouprodutocontendo
microrganismos viveis, em nmero suficiente, para alterar a microbiota em um compartimento do
hospedeiro ou para exercer efeitos benficos no hospedeiro. Esta definio enfatiza que outros
compartimentos do corpo podem ser alvos dos probiticos, alm do intestino, onde uma alterao da
microbiotapodeexercerumefeitobenfico.
Existem alguns trabalhos mostrando a eficcia dos probiticos nas infeces do trato urogenital,
nasinfecescausadaspeloHelicobacterpylori,infecesnabocaedentes,infecesdotratorespiratrio
e outras. Atualmente, a definio mais aceita para probiticos aquela estipulada pela Organizao
Mundial da Sade (OMS), que diz que probitico um microrganismo vivo que, quando ingerido em
quantidadessuficientes,confereumbenefciosadedohospedeiro.
Oconceitodeprobiticofoidesenvolvidoporvoltade1900.Omicrobiologistarussolaureadocom
o Prmio Nobel de Medicina (1908), Elie Metchnikoff (18451916), foi o primeiro a sugerir que o uso de
bactriaspoderiainfluenciarpositivamenteamicrobiotadotratointestinaleprolongaravida.Eleatribuiu
a longa e saudvel vida de camponeses na Bulgria ao consumo de produtos lcteos fermentados
(coalhada). Mais tarde se convenceu que o iogurte e os alimentos fermentados continham os
microrganismosnecessriosparaprotegerointestinodosefeitosdanososdasbactriasnocivasepassoua
defenderoseuuso.
Oconceitodeprobiticoimplicaqueomicrorganismoempregadoestejavivel,outenhacondies
de ser reativado, para que possa exercer seu efeito benfico. Esta exigncia reduz o nmero de
microrganismos que podem atuar como medicamento, j que o intestino humano apresenta uma
microbiotaextremamentecompetitiva,quefuncionacomoumabarreirafsicaequmica,conhecidacomo
barreira intestinal, possuindo mecanismos poderosos de combate a microrganismos no autctones.
Embora no sejam mencionados nmeros especficos na definio de probiticos, considerase que, pelo
menos, 10
9
UFC/dia de microrganismos devam ser ingeridos para chegar ao intestino em nveis iguais aos
damicrobiotadominante.
Os probiticos tm sido referidos, tambm, como agentes bioteraputicos e alimentos funcionais;
porm, alguns autores preferem se referir a eles com termos distintos, definindo probiticos como um
suplemento microbiano vivo, que afeta beneficamente o animal hospedeiro graas melhoria no balano
microbiano intestinal, e alimentos funcionais como agentes (vivos ou no) que possuem outras funes
almdeseupapelnutricional,ereservamotermoagentesbioteraputicosparamicrorganismosvivos
que possuem eficcia comprovada na preveno ou tratamento de alguma doena pela interao com a
microecologianaturaldohospedeiro.
Alm dos probiticos, tambm so estudados os prebiticos e os simbiticos. Os prebiticos so
ingredientes alimentares nodigerveis, que promovem a sade do hospedeiro ao estimular a
multiplicao ou a ao de uma espcie bacteriana benfica ou um grupo delas no trato digestivo. A
lactulose,osfrutooligossacardeos(FOS)eainulinasoosprebiticosmaisestudadosecomercializados.O
primeiro aumenta a atividade lactofermentativa de populaes de Lactobacillus, e os FOS estimulam o
crescimento de Bifidobacterium. interessante salientar que o desenvolvimento dos prebiticos veio da
descoberta dos fatores bifidus, grupo de oligossacardeos presentes em maior quantidade no leite
humano e que favorecem a multiplicao de bifidobactrias de recmnascidos amamentados no seio.
Alimentos como alcachofra, cebola, banana, aspargo e chicria contm, naturalmente, componentes com
propriedadesprebiticas.Jossimbiticossocombinaesdeprobiticoseprebiticos.
Entre os probiticos mais estudados, tanto experimentalmente quanto clinicamente, esto as
bactrias e as leveduras. Alguns j so comercializados sob a forma de suplemento alimentar ou
preparaes farmacuticas, contendo um ou vrios microrganismos. Entre os principais probiticos esto
as bactrias do cido lctico (BAL), que incluem os lactobacilos, os enterococos, dentre outros. Alm das
BAL, temos tambm as bifidobactrias, Escherichia coli (EMO e Nissle) e as leveduras Saccharomyces
boulardiieS.cerevisiae.
TEXTOCOMPLEMENTARII
Adisseminaodasinfeces
AdaptadodeTortoraGJ,FunkeBR,CaseCL.2005.Microbiologia.8ed.PortoAlegre:Artmed.
Para que uma doena se dissemine por uma populao dois fatores so muito importantes: o
primeiro a existncia de uma fonte contnua de organismos da doena o que podemos denominar
reservatriosdeinfeco;osegundoacapacidadedetransmissodosagentesetiolgicosdoreservatrio
deinfecoparaumhospedeiro.
RESERVATRIOSDEINFECO
Um reservatrio de infeco pode ser um organismo vivo ou mesmo um objeto inanimado, mas
deve garantir ao patgeno condies de sobrevivncia e multiplicao, alm de oportunidade de se
transmitir.Essesreservatriospodemserhumanos,animaisouinanimados.
Reservatrios humanos O corpo humano o principal reservatrio vivo de doenas humanas.
Muitaspessoaspossuemabrigampatgenoseostransmitemdiretaouindiretamenteaoutrosindivduos.
Emalgunscasos,algumaspodemabrigarmicrorganismospatognicosetransmitilosaoutraspessoassem
exibir qualquer sinal de doena, so os chamados indivduos portadores. Isso pode ocorrer por dois
principaismotivos:1)Ohospedeiroteminfecesinaparentessinaisousintomasnuncasoexibidos;2)
O portador est com uma doena em fase de latncia, durante o perodo de incubao (antes do
surgimento de sintomas) ou no perodo de convalescena (recuparao). Exemplos clssicos de doenas
disseminadas por portadores so: AIDS (HIV), febre tifide (um tipo de Salmonella); hepatite (vrus) e
disenteriaamebiana(Entamoeba).
Reservatrios animais Diversos animais domsticos ou selvagem so reservatrios de
microrganismo de doenas que podem ser transmitidas tambm para humanos, as chamadas zoonoses.
Um exemplo clssico dede zoonose a raiva (causada por um vrus). A transmisso das zoonoses aos
humanos por contato direto com animais infectados; por contado com detritos de animais domsticos
(limpeza de gaiolas ou caixa de areia); pelo consumo de produtos animais contaminados ou por insetos
vetores.
Reservatrios inanimados Os principais reservatrios inanimados so o solo e a gua. O solo
abrigaprincipalmentefungoscausadoresdemicoses;asbactrias quecausamobotulismoeottano.
A gua contaminada, principalmente por fezes, fonte de diversos microrganismos relacionados a
infeces gastrintestinais como as bactrias do clera e da febre tifide. Alimentos armazenados ou
preparadosinadequadamentetambmsofontesdedoenascomoasalmonelose.
TRANSMISSODEDOENAS
Atransmissodedoenaspodeocorrerportrsviasprincipais:contato,veculoouvetor.
A transmisso por cantato, por sua vez pode ocorrer de trs formas. 1) Transmisso por contato
direto (de pessoa para pessoa), na qual ocorre a passagem do microrganismo da fonte para um novo
hospedeiro, sem o envolvimento de qualquer objeto intermedirio. As formas mais comuns deste tipo de
transmisso so: toque, beijo, relaes sexuais. E as doenas transmitidas por contato direto podem ser:
resfriado comum, influenza, hepatite A, sarampo, DSTs. Zooneses como a raiva e o antraz tambm so
transmitidas por contato direto. A utilizao de luvas, mscaras e outros equipamentos pelo profissionais
da sade feita com o objetivo de proteger contra esse tipo de infeco, principalmente. 2) Na
transmisso por contato indireto h a participao de um ojeto inanimado (fmite) como intermedirio,
como toalhas, roupas de cama, copos, brinquedos, dinheiro e termmetros. Exemplos de doenas so:
AIDS, ttano e hepatite B. 3) Na transmisso por gotculas os micrbios so transmitidos no interior de
gotculas (gotas de muco) que percorrem distancia curtas, ao serem liberadas no ar durante tosses,
espirros,risadasoupelaconversa.Exemplosdedoenasso>influenza,pneumoniaeacoqueluxe.
Atransmissoporveculosenvolveummeiocomoagua,osalimentosouoar,almdosanguee
oslquidoscorporais,drogaseosfluidosintravenosos.Nessescasosaguaestcontaminada,geralmente,
por esgoto no tratado ou tratado de forma inadequada, e pode transmitir o clera e a leptospirose. Na
transmisso por alimentos, eles esto mal cozidos, mal refrigerados ou preparados em condies no
higinicas,sendofontedeintoxicaesalimentaresoutenase.Asdoenastransmitidaspeloarporncleos
de gotculas no p, que so capazes de percorrer distncias maiores do que um metro. Exemplos de
microrganismossoovrusdosarampo,bactriadatuberculose,almdeesporosdefungos.
Na transmisso por vetores esto envolvidos principalmente os artrpodes. Estes transmitem as
doenasdeformamecnica(naspatasououtraspartesdocorpo)aoentraremcontatocomoalimentode
um hospeidero, como as moscas domesticas o faz, podendo causar doenas como a febre tifide ou
disenteriabacilar;oufazematransmissobiolgica,noqualovetorpicaumindivduoinfectado,ingerindo
assimtambmomicrorganismo,queirmultiplicasenovetoresertransmitidoparaumnovohospedeiro
atravsdasfezesouvmitodovetoroumesmoduranteomomentodapicada,seomicrorganismoestiver
alojado nas glndulas salivares do vetor. Geralmente esto envolvidas doenas causadas por protozorios
ouvermes.
MICROBIOLOGIANASALADEAULA|MANUALDOPROFESSOR|EixoII:Controlemicrobiano|25
EixotemticoII:Controledocrescimentomicrobiano
Comovimosnaprticaanterior(Ondeosmicrbiosestoescondidos?),osmicrorganismosesto
presentesnosmaisdiversoslocais.Seelessereproduzissemaleatoriamente,empoucotempodominariam
aTerradetalformaqueavidaseriainvivel.Nomeioambientepodemoscontarcomdiversosmecanismos
ecolgicos que controlam as populaes microbianas: desde disponibilidade de alimento predao.
Porm,nonossodiaadiaprecisamoscontrolarosmicrorganismos,inclusiveparamanterahigiene.Eonde
fazemos isto? Ao tomarmos banho, ao lavarmos as vasilhas na cozinha, ao escovarmos os dentes, ao
passarmos pano no cho. E como isso possvel? Observe com ateno como praticamos essas aes:
utilizamos sabo, pasta de dentes, detergentes, desinfetantes. Veja como em todas as situaes descritas
ns usamos alguma substncia que tenha ao antimicrobiana. Mas isso significa que todos os
microrganismosmorrem?
Existem substncias que apenas reduzem a quantidade de microrganismos, outras deixam apenas
osesporos,algumasaindasocapazesdeeliminarcompletamentetodaaformadevida microbiana. Mas
nosoapenaspormeiodesubstnciasochamadocontrolequmicoqueosmicrbiossoeliminados.
Existemaindaosmtodosfsicos,queincluemocaloreadesidratao,porexemplo.
Outropontoquesurgequandochegamosaestetpicoousodeantibiticos.Estesnadamaisso
do que mtodos de controle qumico extremamente potentes e que so utilizados no tratamento de
doenas especficas. Um problema muito comum nos dias de hoje a emergncia de microrganismos
resistentesaantibiticos.Issoestocorrendoporqueousoinconscientedestesquimioterpicosseleciona
bactriasresistes,eestasacabamdisseminandose.Comoesseumprocessocclico,asbactriasacabam
por tolerar concentraes cada vez mais altas de medicamento. Outro problema disso a capacidade de
transmissodegenesdeumaespcieparaoutra,ecomisso,ocorreatransmissohorizontaldaresistncia
microbiana. Dentre as bactrias que vm ganhando grande destaque esto os chamados MRSA
(Staphylococcusaureusmeticilinaresistente)eVRE(Enterococcusfaecalisvancomicinaresistente).
Nunca tome antibiticos sem consultar um mdico. Cada tipo de antibitico ataca um tipo de
bactria,esomenteumprofissionalpodereconheceroAGENTE CAUSADORdadoenaeindicaromelhor
tratamento. Uma vez receitado, tome o remdio assim como indicado pelo mdico e no caso de
antibiticos,continueotratamentomesmodesaparecendoossintomas.
AOPROFESSOR:
Professor, como foi dito na introduo da apostila, este eixo de relevante importncia. Por isso,
introduzaemsaladeaulaconceitoscomo:esterilizao,agentescidaesttico,pasteurizao.Esses
conceitos esto listados ao final deste manual, em Informaes importantes para o professor e podem
serintroduzidoscomoauxliodaseoAplicaodenovosconhecimentos.Aproveiteeexpliqueparaos
alunosqueosmateriaisutilizadosemaulaprticadevemestarestreis,eosmecanismosquevocutiliza
paraesterilizaressesmateriais.
Lembrese de reforar aos alunos a importncia de se consultar um mdico antes de tomar
antibiticos. Mais informaes sobre resistncia bacteriana tambm podem ser encontradas nas
Informaesimportantesparaoprofessor
ESTOOSDESINFETANTESLIVRESDEMICRBIOS?
Objetivodaprtica
Nesta atividade vamos controlar a qualidade microbiolgica de desinfetantes. Ou, em outras

palavras:existemmicrorganismosvivendonessesprodutos?IssooquepodemoschamardeControlaro
controlador.
Metodologia
Material
o Alametlica;
o 1placadeAgarsimples;
o 1placadeAgarSabouraud;
o Desinfetanteouprodutodeaoantimicrobianadeescolhadoaluno(procuremanteroprodutoem
suaembalagemoriginal).
Comoauxliodeumaalametlicaesterilizadaaorubro(coloqueanaparteazuldachama
e espere at que ela fique vermelha. Espere ela esfriar prximo a chama antes de coletar sua
amostra)ouumswabestril,coleteumaamostradodesinfetante.
Espalhe na superfcie das placas contendo gar simples (AS) ou gar Sabouraud (Sb),
fazendo movimentos de zigzag (veja na figura abaixo como fazer). Esta tcnica denominada
semeaduraporesgotamentoeobjetivaaobtenodecolniasisoladas.

Incubeasplacas:garsimples(AS)a37CegarSabouraud(Sb)emtemperaturaambiente.
Resultados
Placas
Crescimento
garSimples(AS)
garSabouraud(Sb)
Questespararefletir
Houve crescimento de microrganismos? Caso SIM, observe se o crescimento ocorreu na linha da

semeaduraouforadalinha.Agoradiscuta:oquesignificariacadaumadessasduassituaes?
Os desinfetantes dos quais foram isoladas colnias estavam em seus frascos originais? Como voc
relacionaessefatoaoresultadoencontrado?
ComentriossobreasQuestespararefletir
o Caso tenha havido crescimento microbiano e o crescimento tenha ocorrido na linha de semeadura,
issoindicaqueacolniaprovenientedaamostra,ouseja:odesinfetanteestavacontaminado.Caso
o crescimento fosse fora da linha de semeadura, isso indica contaminao da placa durante o
manuseio.
o Essa questo bastante delicada. Inicialmente, vamos considerar que o aluno trocou o frasco de
desinfetante, com isso o crescimento pode ter decorrido da contaminao deste novo frasco. Por
outrolado,seodesinfetanteestemseufrascooriginal,deveseconsideraraindaalgumasquestes
como: tempo que o frasco est aberto, local e outras condies de armazenamento e, inclusive, o
manuseio do aluno. Lembrese que os resultados obtidos aqui no foram obtidos sob condies
ideaisparaessetipodeteste.Logo,nohmotivoparaqueosalunossedesesperemachandoqueo
desinfetanteruim.Ocrescimentoaindapodetersidoocasionadoporresistnciamicrobianaesse
assuntodiscutidonotpicoInformaesimportantesparaoprofessor.
AODEDESINFETANTESSOBRESUPERFICIESINERTES
Objetivodaprtica
Nesta atividade vamos visualizar como os desinfetantes atuam em superfcies, comparando as

populaesmicrobianasanteseapsautilizaodestesagentescontroladoresdocrescimentomicrobiano.
Metodologia
Material
o Zaragatoasestreis;
o 1placadeAgarsimples;
o 1placadeAgarSabouraud;
o Desinfetantedeescolhadoaluno.Procureescolherumdesinfetantediferentedosescolhidospelos
seuscolegas
o Gabaritos.
Divida as placas em dois semicrculos, identificandoas (rea suja, rea desinfetada), bancada e
turma.
Escolhaumasuperfcieepassarazaragatoaestrilemumapequenaextensodestelocaldelimitada
por um gabarito, com o objetivo de colher material. Escolha um local onde voc acha que existem muitos
microorganismos.
Repicar por esgotamento o material colhido com a zaragatoa em um dos semicrculos das duas
placas.
Tratar a mesma rea com o desinfetante escolhido, utilizando outra zaragatoa embebida no
desinfetante.
Esperar secar, colher material do local desinfetado com uma terceira zaragatoa e repicar por
esgotamentonooutrosemicrculo(identificadocomodesinfetado)dasduasplacas.Aseguir,incubeasplacas
deAgarsimplesa37
o
CeasdeAgarSabouraudatemperaturaambiente.
Resultados
Placas
Crescimento
garSimples(AS)
garSabouraud(Sb)
Meioalternativo
Questespararefletir
O local onde voc coletou o material estava livre de bactrias? Voc associaria a quantidade e a
diversidadedemicroorganismoscomolocal?Porqu?
Comofoiaaododesinfetante?Vocachapreocupanteoaparecimentodessesmicrbios?
Qualomelhordesinfetanteentreostestados?
1Oslocaisondeascoletasforamfeitasnoestolivresdemicroorganismos,jqueelesestopresentes
em todos os ambientes, como gua, ar, solo, fontes termais, etc (ubiqidade). Podese associar a
diversidade e quantidade de microorganismos com o local e as caractersticas desse (ensolao, umidade,
luminosidade,etc.)
2Aaodosdesinfetantesmuitovarivel,masesperasequeelediminuaaquantidadeediversidadede
microorganismos.Oaparecimentodealgumascolniasnopreocupante,poisodesinfetantenotemo
objetivo de esterilizar o local, que aberto e est em constante exposio a novas contaminaes. Alm
disso,oprpriodesinfetantepodeestarcontaminado,comopodetersidoobservadonapraticaanterior.
importante ainda ressaltar que os desinfetantes usados foram de uso caseiro, e no os usados em
Hospitais,porexemplo.
1. Em microbiologia o conceito de morte baseado em apenas um critrio: a CAPACIDADE DE SE

REPRODUZIR. Para os organismos superiores utilizase diversos outros critrios como: ausncia de
respirao,batimentoscardacos,pressosangunea;eprincipalmenteonofuncionamentocerebral.
2.ESTERILIZAOumprocessoquematadatodasasformasdevidamicrobiana.
3. Uma substncia que usualmente aplicada no corpo humano e se ope spsis, isto , que destri
microrganismosouinibeseucrescimento,chamadadeANTISPTICO.
4. O conceito de esterilizao um conceito absoluto, ou seja, ou o objeto est estril ou no est. Logo
NO podese dizer que o objeto meio estril. Isso ocorre pois esterilizao definida como a ausncia
totaldequalquerformamicrobianaviva.
5. A pasteurizao foi um processo criado por Louis Pasteur em 1860. A Pasteurizao no sinnimo de
esterilizao uma vez que nem todos os microrganismos so mortos. A pasteurizao rpida do leite, por
exemplo, ocorre da seguinte maneira: O leite tem sua temperatura elevada a 71C por 15 segundos, em
seguidaresfriadorapidamente.Japasteurizaolentaosprocessosdeaquecimentoeresfriamentoso
lentos,oquepromovemaioresalteraesnoaspectodoleite.
6.Otermoquemaisseaproximadotermomicrobicidad)GERMICIDA
7.Emgeral,umagentequmicopossuiumAMPLOespectrodeatividade.
8.Observeosdesenhosabaixo:
9. Os principais tipos de antibitico bem como seus stios alvos esto citados no item Informaes importantes
paraoprofessor.
FORMASFSICASDECONTROLEDOCRESCIMENTOMICROBIANO
CALOR=processofsicodeusoamploealtamenteeficaz.Podeserutilizadodeduasformasdistintas:
calor seco ou calor mido; e possui apenas duas variveis a serem controladas: tempo e
temperatura. A morte se d pela oxidao de constituintes celulares e desnaturao de protenas e
cidos nuclicos. Como o ar um condutor de calor pior do que a gua, o calor mido (autoclave,
ebulio, pasteurizao) mais eficaz do que o calor seco (incinerao, ao rubro, flambagem,
esterilizaoemestufa).
FILTRAO = Utilizado nas esterilizao de materiais que so alterados pelo calor. So utilizados
filtrosespeciaiscomporosde0,2mqueremovemosmicrorganismos(excetoosvrus)delquidose
gases.
RADIAO = A forma mais comum de radiao utilizada a ultravioleta (260 nm) pois bastante
letal; apesar disso, ela exibe baixa penetrabilidade (no atravessando vidros, filmes sujos e outros
materiais)sendotilnaeliminaodemicrorganismospresentesemsuperfcies.AradiaoUVatua
na molcula de DNA formando dmeros de pirimidina (timinas adjacentes so unidas, alterando a
conformao normal da molcula de DNA). Existem ainda as radiaes ionizantes, como a radiao
gamaeosraiosX.Estasproduzemaionizaodetomos(perdadeeltrons),gerandoradicaislivres
extremamente reativos. Estes radicais podem destruir inclusive ligaes duplas e pontes de
hidrognio. As radiaes ionizantes tem sido utilizadas em produtos como plsticos que so
sensveis temperatura e em alimentos, onde atuam tambm na inativao de enzimas,
permitindomaiordurabilidadedvegetal.
OUTROSAGENTESFSICOS=Autilizaodebaixastemperaturasummtodobastantedifundidona
conservao de alimentos, isso possvel pois os microrganismos patognicos para o homem,
geralmente possuem temperatura tima de metabolismo na faixa dos 37C. Assim, ao abaixar a
temperaturaambiente(porexemplo,comauxiliodageladeira)hadiminuiodometabolismo,ou
at mesmo sua interrupo. Outra forma muito difundida a presso osmtica. O exemplo so os
doces tipo compota ou cristalizados onde a concentrao de acar to grande que impede a
viabilidade do crescimento microbiano. O mesmo resultado pode ser observado se a conserva

possuiraltosteoresdesal.
CONTROLEDEMICRORGANISMOSPORAGENTESQUMICOS
Conceitosimportantes
Esterilizao:Processoquelevadestruioouremoodetodasasformasdevidadeumobjeto.
Desinfeco:Processoquepromoveainibio,morteouremoodemicrorganismos,aindaqueno
eliminetodasasformasdevida.
Antisptico:Produtoqueevitaainfecoemtecidos,sejainibindooumatandoosmicrorganismos.
Como so aplicados em tecidos vivos, os antispticos so, geralmente, menos txicos que os
desinfetantes(agentesaplicadasemmateriaisinanimados).
Agente cida: Qualquer agente que promova a morte de microrganismos, mas no endsporos.
Podeserbactericida,fungicida,algicida...
Agente sttico: Qualquer agente que promova a inibio do crescimento e que, quando retirado,
permitequeomicrorganismovolteacrescer.Podeserbacteriosttico,fungisttico.
Fatoresqueafetamaaodosagentesmicrobianos
Quantomaiorapopulaomicrobiana,maiorotemponecessrioparasuautilizao.
O tipo da populao microbiana interfere no controle do crescimento se houver a formao de

biofilmesouendsporos.
Geralmente,quantomaioraconcentraodoagente,maioraeficcia.Olcoolumaexceo.
O tempo de exposio do microrganismo ao agente diretamente proporcional eficcia do

produto. A recomendao da Organizao Mundial para a Sade (OMS) indica o tempo mnimo de
exposiode30minutos.
Condies do ambiente tais como pH, presena de matria orgnica e consistncia do material
podeminterferiraumentandooudiminuindoaeficciadosagentes.
MICROBIOLOGIANASALADEAULA|MANUALDOPROFESSOR|EIXOIII:Microbiologiaaplicada|31
EixotemticoIII:Microbiologiaaplicada
Qualaimportnciadosmicrorganismos?Elesexistemapenasparanoscausardoenas?
A microbiologia estuda a diversidade e a evoluo dos microrganismos. Alm disso, estuda qual a
funo deles no mundo e como eles se relacionam com o corpo humano, animais e plantas. Se os
microorganismos interagem com todas as formas de vida, de fundamental importncia o estudo da
microbiologia.
Como cincia aplicada, a microbiologia se depara com problemas na sade humana (doenas por
exemplo), agricultura e indstria. Mas, os microrganismos tambm podem contribuir com caractersticas
positivas. Vocs j devem ter ouvido falar que microrganismos ajudam na produo de queijos, iogurtes,
pes, bebidas e at na produo de antibiticos! Alm disso, sem os microrganismos a maior parte do
oxignio(O
2
)daterranoteriasidoproduzido,osnutrientes,comocarbono,noteriamsidorecicladose
muitasplantasnoconseguiriamabsorversaisenutrientes.
A fermentao em exemplo aplicado da utilidade econmica dos microrganismos. Atravs dela,
eles obtm a energia necessria para sua sobrevivncia e ainda produzem substncias (gases, cidos e
lcool) usadas pelos humanos. Esse processo consiste na quebra de molculas orgnicas (glicose, por
exemplo) por meio de enzimas, com produo de compostos mais simples e energia. Dependendo do
microrganismopresente,afermentaopodeserdetrsjeitos:1Fermentaoalcolica,produzindoCO
2
e lcool, muito usados na produo de po e produo de bebidas alcolicas, respectivamente; 2

Fermentaoactica,produzindoocidoacticoesendousadonaproduodovinagree3Fermentao
ltica, gerando o cido ltico. Esse tipo de processo largamente usado para a produo dos queijos e
iogurtes.
Alm disso, um outro processo muito importante a associao dos microrganismos com as
plantas.Vocsdevemterouvidofalarquenasrazesdofeijo(leguminosas)humagrandequantidadede
ndulos. Esses ndulos so formados pelas bactrias Rhizobium juntamente com as razes. Com essa
simbiosebactriaplanta, asplantasobtmonitrognionecessrioparaaproduodeprotenasecidos
nuclicos,jqueRhizobiumreduzoN
2
atmosfricoaNH
3
(nitrogniocapazdeserusadopelasplantas).Em
troca,asplantasfornecemnutrientesparaessasbactrias.
Aindadentrodosexemplosdeassociaesestoasmicorrizas.Nessecaso,arelaosedentreos
fungos e a maioria das Gimnospermas e Angiospermas. Os fungos, ao se infiltrarem nas razes dessas
plantas,favorecemaabsorodegua,sais,fosfatosecarbonatospelosvegetais.Emtroca,elesrecebem
compostosorgnicos(emgeralsacarose)dessasplantas.
Apesar de minsculos, os microrganismos tambm so capazes de competir e realizar controle
biolgico. Dessa forma, um agente fitopatgeno, por exemplo, (causador de doena em plantas) teria seu
efeito atenuado em presena de outro organismo. Ou seja, ao interferir nos processos vitais de outro
microrganismo,eleestariaatuandocomoantagonista.Nessaprticairemosvercomoosfungosendofticos
(colonizadores de partes vegetativas das plantas, causando infeco assintomtica) interferem no
desenvolvimentoecrescimentodefungospatognicosdeplantas.
AOPROFESSOR:
Professor,agoranessaetapaprecisofalardecomoamicrobiologiaempregadanocotidiano.
importante ressaltar tambm, que devese utilizar exemplos que esto dentro do contexto sciocultural
dos alunos! Primeiramente, fale das doenas provocadas pelos microrganismos (Dengue, AIDS,
tuberculose,micosesetc).Depoisjintroduzaaidiaqueessesorganismostambmpossuemimportantes
aes no meio ambiente e que eles podem at nos beneficiar. Fale da importncia deles na indstria, em
quehoproveitodosprodutosmetablicosdafermentaoparaaobtenodepes,queijo,iogurteeat
mesmodeantibiticoscomopenicilina.Trabalheoconceitodefermentao,paraoqueelaserveequais
soseustipos(estaromaisdetalhadasnasRespostasdaaplicaodenovosconceitos.
Discutatambmaimportnciadaassociaomutualsticamicrorganismoplanta.Enfatizeaidiade
quemuitasplantasdependeminteiramentedessasassociaesparasuaprpriasobrevivncia.Expliqueo
quesoosndulosnasrazesdasleguminosas,paraoqueelesservemequalaimportnciadasbactrias
do gnero Rhizobium no ciclo do nitrognio. Agora explique o que so as micorrizas e qual a importncia
delas(maioresdetalhesnassessesRespostasdaaplicaodenovosconceitoseInformaesteispara
oprofessor).
Por fim, introduza o conceito de antagonismo e controle biolgico. Fale dessas relaes entre os
microrganismos e como que um pode interferir na sobrevivncia do outro. Explique o que um fungo
fitopatognico e um fungo endoftico. Depois estabelea o tipo de interao entre esses organismos que
possuem o mesmo nicho ecolgico (maiores detalhes nas sesses Respostas da aplicao de novos
conceitosInformaesteisparaoprofessor)
FERMENTAO
Objetivodaprtica
Demonstraraocorrnciadefermentaoemsucodefrutasporlevedurasecompararorendimento
dafermentao(liberaodeCO
2
)nosucocomesemadiodesacarose.
Metodologia
Material
o 2frascosdevidrode250mL;
o 1pipetavolumtricade10mL;
o Utensliosparapreparodosucodefrutaaescolhadoaluno;
o Liquidificador,espremedordefrutasoumixer;
o Peneira;
o Balodeltex;
o Barbante;
o Acar(sacarose);
o Fermentobiolgico;
o guadestilada.
Preparaodoinoculo
o Praquear em um Becker ou outra vidraria apropriada (utilizar o microondas) cerca de
170 mL de gua destilada. Aps adio de 30 g de fermento biolgico desidratado,
completeovolumepara200mL.(Prepareoinoculonoinciodaaula,parapromoverasua
ativaoenquantoopreparodossucosrealizado).
Preparodosucodefrutas
o Preparecercade480mLdesucodefrutasdesuaescolhaefiltrepararemoverosslidos.
(Noseesqueadeanotaraconstituiodosuco).
o Adicione240mLdesucoemumdosfrascos,comauxliodeumfunil.
o Adicione2colheresdesopadeacarnorestantedosuco,eadicione240mLcomauxlio
deumfunilnosegundofrasco.
o Adicione 10 mL do inculo em cada um dos frascos, e identifiqueos (tratamento, turma,
bancada).
o Prenda com o auxlio de um barbante um balo de ltex vazio no gargalo de cada frasco
(Usepelomenosduasvoltasdobarbanteemtornodogargalo,paraevitaraperdadegs).
o Incube os frascos a temperatura de 37
o
C at a observao de aumento do volume do
balo.
Leitura
Avaliaroaumentodovolumedobalopresonosdoisfrascos.
Sedesejarem,opesodosfrascospoderserrealizadonotempozeroenofinaldafermentao.A
diminuiodopesopoderocorreremconseqnciadafermentaodoacar.
Questespararefletir
Qualaimportnciadoprocessodefermentaoparaosmicrorganismosquearealizam?
Comovocvaimportnciadafermentaonaindstriaalimentcia?
Comoaadiodeacarnosucointerferenoprocessofermentativo?Porqu?
o A fermentao um processo utilizado para a obteno de energia (ATP) pelos organismos que a
fazem.Comparativamenterespirao,afermentaotemmenorrendimentoenergtico,emque
na quebra da glicose h um rendimento lquido de 2 ATPs. Com essa energia, o microrganismo
poderdesempenharsuasfunesmetablicascomoreproduzirereplicar.
o Aplicaodiretademicroorganismosvivosnaindstriaalimentciatem,comoprincipaisobjetivos,
aproduoaumentadadeingredientes,formaodesaborearomaepreservao,pelaproduo
de substncias naturais (antagonismo) que inibem o crescimento de organismos patognicos e
deterioradores. Leveduras, fungos filamentosos e bactrias podem ser usados para a obteno
direta de alimentos, ou seja, transformam uma matriaprima, atravs da fermentao, fazendo
partedaquelealimento.Comoexemplos,podemoscitarosalimentosderivadosdafermentaodo
leite(iogurtesequeijos),econservascomopiclesporbactriaslcticas.Aslevedurastambmso
aplicadas diretamente como fermento na indstria de panificao, bebidas (cerveja e vinho) e
como suplemento alimentar e os fungos, alm de serem utilizados na fermentao de diversos
tiposcaractersticosdequeijos(gorgonzola),sotambmconsumidosdiretamente(champignon).
o Ao adicionarmos acar em apenas um dos frascos contendo suco mais fermento, estamos
testando a importncia de um composto orgnico energtico na realizao da fermentao. A
fermentao alcolica consiste na quebra da glicose com a formao de ATP, etanol e gs
carbnico. Dessa forma, no ambiente que contiver mais matriaprima para a realizao desse
processometablico,havermaiorproduodeCO
2
,queservisualizadopeloaumentodovolume
dobalo.
ANTAGONISMO IN VITRO ENTRE FUNGOS ENDOFTICOS E FUNGOS

FITOPATOGNICOS
Objetivodaprtica
Nessa prtica iremos analisar como se do as relaes entre microrganismos de plantas que
possuemmesmonichoecolgicoeverificaracapacidadeantagonistadosmesmos.
Metodologia
Material:
PlacascomgarBDAestreis
Ponteirasde1mLestreis,paraserviremdecortadores
PlacascomofundofitopatognicoColletotrichumacutatum,preparadaspelo(a)professor(a)
Placascomfungosendofiticos,preparadaspelo(a)professor(a)
Com o auxilio das ponteiras, corte pequenos discos de cerca de 5mm de dimetro das margens das
colnias.
TransfiraosparaasplacasdePetricomgarBDA.Emcadaplacaserocolocadosdoisdiscos,umde
patgenoisoladoeoutrodefungoendofitico.Osdiscosseroposicionadosaumadistanciade20mmda
bordadaplaca,obedecendoumadistanciade5cmentresi.Osdiscosdevemsercolocadoscomofungo
paracima.
Paraocontrolenegativo,uma placaseradicionadadeum discodepatgenoeoutra comofundo

endofitico.
Incubeasplacasa25C.Aps5dias,observeocrescimentonaplaca.
Questespararefletir
Comoosfungosendofticospodemcontrolarocrescimentodosfungospatognicos?
Microrganismos endofticos colonizam os espaos intercelulares dos tecidos vegetais, sem causar
quaisquerdanosaestes.Destaforma,estenichoecolgicoocupadopelosendfitos,osfavorecempara
ocontrolebiolgicodepatgenosepragas,poisnestelocalpoderiamcompetirpornutrienteseespao
comospatgenos,bemcomoproduzirsubstnciastxicasaestesorganismosouainda,induziraplanta
adesenvolverresistnciasdoenas.
Vocconseguepensaremumoutroexemplodeagenteantagonista?
Antagonismoumtipoderelaoecolgicaqueseestabeleceentreseresvivosdeespciesdiferentes
interespecfica,emqueumaespcieimpedepelasuapresenaodesenvolvimentodeoutra.Entreos
mecanismosbsicosdeantagonismoestoaantibiose,competio,parasitismo,induoderesistncia
nohorpedeiroepredao.Qualquerrelaoquetenhaessasinteraessovlidas.
Comovocvaimportnciadocontrolebiolgico?
O controle biolgico uma tcnica utilizada para combater espcies que so nocivas a outras,
reduzindo os prejuzos causados por elas. Comumente, esse mtodo consiste em introduzir no
ecossistema um inimigo natural (predador ou parasita) da espcie nociva, para manter a densidade
populacional dessa espcie em nveis compatveis com os recursos do meio ambiente. Quando bem
planejado,ocontrolebiolgicoacarretaevidentesvantagensemrelaoaousodeagentesqumicos.
Resultados
Para ilustrar tal experimento acrescentamos algumas fotos do experimento para que j se conhea o
resultadoesperado.Lembramosoresultadodapraticafeitaemsaladeaulapodediferirdovistonessas
imagens.
FotomostrandoofungoPatognico(P)eoFungoantagonista(A1)(Placafechadaaesquerdaeabertaa
direita)
FotomostrandoFungoPatognico(P)efungoantagonista(FungoA2).Placadaesquerdafechadaeda
esquerdaaberta.
Fotomostrandooexperimentocontrole,comoFungopatognicoeocontrole(discodegar).Placada
esquerdafechadaedaesquerdaaberta.
APLICAODENOVOSCONCEITOS
1.Oquefermentao?Quaissoseusprocessoseprodutos?
2.Oqueumfungoendoftico?
3.Oqueumfungofitopatognico?
4.Ondeelessoencontrados?
5. Dentre outras importncias da microbiologia aplicada est a produo de penicilina por alguns
microrganismos.Pesquisesobreessaproduoequalaimportnciaqueelatemnasadehumana.
6.Oquesofungosmicorrzicos?Paraqueelessoteisparaasplantas?
7.Oqueserantagonista?
1 A fermentao um processo biolgico anaerbico (na ausncia de oxignio) de obteno de energia

metablica (sntese de ATP), a partir da degradao incompleta de substncias orgnicas, resultando em
umadisponibilidadeenergticainferiorsecomparadarespiraoaerbia.Nafermentao,aglicose(um
carboidrato/glicdio/acar)catabolizadaemsubstnciasorgnicasmaissimples.Nessemecanismo,o
aceptorfinaldehidrognio(prtonH
+
)umcompostoorgnicoenomaisooxignio,justamenteporser
anaerbio. Esse processo pode ser dividido em duas partes principais: a gliclise (quebra da glicose com
cidopirvico)eareduodocidopirvico.Nagliclisehaveraformaode2ATPslquidose2NADH
2
(os ltimos sero utilizados na reduo do cido). O cido pirvico formado ser reduzido pelo NADH
2
originando,conformeotipodeorganismofermentativo,cidolctico,cidoactico
oulcooletlicoedixidodecarbono.
OstiposdeFermentao
FermentaoAlcolicaNormalmenterealizadoporcertasbactriasefungos(leveduras:Saccharomyces
cerevisiae/levedodecervejaoufermentodepadaria),empregadonafabricaodevinhos,cervejasepo.
Reaodafermentaoalcolica
Fermentao ltica Mecanismo realizado por bactrias que fermentam o leite, processando seus
derivados(iogurte,queijoecoalhada).
Reaodafermentaoltica
Fermentao actica Fermentao Actica consiste na oxidao parcial, aerbica, do lcool etlico, com
produo de cido actico. Esse processo utilizado na produo de vinagre comum e do cido actico
industrial. Desenvolvese tambm na deteriorao de bebidas de baixo teor alcolico e na de certos
alimentos.realizadaporbactriasdenominadasacetobactrias,produzindocidoacticoeCO2.
2 Microrganismos endofticos (fungos ou bactrias) so aqueles que habitam o interior das plantas sem
causar aparentemente dano a seus hospedeiros. Microrganismos endofticos tambm podem ser
encontrados no apenas nas partes areas dos vegetais, mas inclusive em razes, que so, alis uma das
principais portas de entrada. Entre os microrganismos endofticos, os fungos e bactrias associados s
razessoosmaisestudadosdevidoimportncianaindstria.
3Fungosfitopatognicossoosfungosquecausamdoenasemplantas.
4Tantoosfungosfitopatognicosquantoosfungosendofticospossuemomesmonichoecolgico,eso
encontradosnasplantas.Porcoexistiremnomesmohabitat,podemcompetirporrecursos,eusartcnicas
dedefesadiferentes,levandoaoquefoiobservadonapratica.
5Apalavraantibiticovemdogregoesignificacontraavida.Apenicilinafoioprimeiroantibiticousado
comsucesso notratamentodeinfecescausadasporbactrias. Antesdodesenvolvimentodapenicilina,
muitaspessoasmorriamdedoenasque,hoje,nosomaisconsideradasperigosas.Sparavocteruma
idia,apenasmachucarsenumprego,porexemplo,poderia,eventualmente,levarmorte.
Aproduoindustrialdepenicilinaumprocessofermentativo.Tratasedeumprocessoaerbicoemque
o microrganismo Penicillium chrysogenum cresce num meio orgnico complexo contendo acares e em
regimedeadiodesubstrato(paramanteromicrorganismoacrescerdurantemaistempo).Apenicilina,
como a maior parte dos antibiticos, um produto do metabolismo secundrio. Na fase inicial da
fermentao assegurase o crescimento rpido do microrganismo e em seguida, numa segunda fase,
optimizaseaproduodepenicilina.
6Micorrizaumaassociaomutualistanopatognicaentrecertosfungosdosoloeasrazesdaplanta.
A planta, atravs da fotossntese, fornece energia e carbono para a sobrevivncia e multiplicao dos
fungos, enquanto estes absorvem nutrientes minerais e gua do solo, transferindoos para as razes da
planta,estabelecendoassimomutualismodasimbiose.
Oefeitobenficomaismarcantedestaassociaosimbiticaestnoaumentodocrescimentodasplantas
medianteoaumentodaabsorodenutrientes,especialmenteaquelesmenossolveis,comofsforo,
zincoecobre,resultandoemplantasmaisnutridasevigorosas,commaisresistnciascondies
ambientaisadversas.Portanto,amicorrizatemumpapelimportantenasobrevivnciaenocrescimento
dasplantasnostrpicos,ondepredominamsolosdebaixafertilidade,carenteemfsforodisponvel.
7 Tipo de relao ecolgica que se estabelece entre seres vivos de espcies diferentes interespecfica ,
em que uma espcie impede pela sua presena o desenvolvimento de outra. O termo antagonista
empregado para designar os agentes biolgicos com potencial de interferir nos processos vitais de outro
organismos. Entre os mecanismos bsicos de antagonismo esto a antibiose, competio, parasitismo,
induoderesistncianohorpedeiroepredao.
Curiosidadessobremicrorganismosendofticos
Dependendo da curiosidade da turma, o professor poder falar um pouco de como os

microrganismos patognicos so usados na indstria, at porque esses seriam mais exemplos da
importnciadamicrobiologiaaplicadaemnossasvidas.
Sugesto da leitura do artigo Atividade antimicrobiana de fungos endofticos isolados de plantas

txicas da Amaznia: Palicourea longiflora (aubl.) rich e Strychnos cogens bentham. SOUZA, Antnia
QueirozLimaet.al.ActaAmazniavol.34(2)2004:185195.
As interaes endfito/planta, ainda no so muito bem compreendidas, mas podem ser

simbiticas, neutras ou antagnicas (neste caso, estudadas pela fitopatologia). Nas interaes simbiticas
osmicrorganismosproduzemou induzema produodemetablitosprimriosesecundriosquepodem
conferir diversas vantagens planta tais como: a diminuio da herbivoria e do ataque de insetos, o
aumento da tolerncia a estresses abiticos e o controle de outros microrganismos. Exemplo de
metablitos que podem ser induzidos pelos endfitos so as fitoalexinas, substncias de baixo peso
molecularcomatividadesantimicrobianas,produzidaspelasplantasanteaaodemicrorganismosoude
agentes estressantes. Da parte dos fungos podese citar a produo de micotoxinas, metablitos
secundriosquepodemcausardoenasemhumanoseoutrosanimais.
Osendfitossopotencialmenteteisnaagriculturaenaindstria,particularmentenaalimentcia
e farmacutica. Podem ser utilizados como vetores para introduo de genes de interesse nas plantas,
comoagentesinibidoresdepragasepatgenosecomofontesdemetablitosprimriosesecundriosde
interesse como o taxol, poderoso anticancergeno, a cryptocandina lipopeptdeo antimictico e diversos
outrosantibiticos.
Aoprofessor:
OmeiodeculturautilizadonessaprticaoBDA(Batatagardextrose).Essemeioutilizado
emlaboratrioparacultivodemicroorganismos,principalmentedefungos.
.
Batatas,descascadasecortadas 200g
Glicose 10g
gar 15g
Aguadestilada 1L
Outrassugestes
Professor, ma outra prtica interessante a observao dos ndulos formadas por bactrias Gram
negativo simbiontes em ndulos de razes de plantas leguminosas. Voc pode conseguir em hortas
comunitrias diferentes materiais, sendo o feijo o exemplar mais comum. A prtica bastante simples,
nodemandandotempoeespaoparaocorrer.
Depossedomaterialaseranalisado,interajacomosalunosquestionandoossobreoqueelesacham
que teria causado o aparecimento de tais estruturas (ndulos) na raiz. Faa uma introduo sobre as
bactriasdogneroRhizobiumeoprocessosimbiticoqueestabelecemcomaplantae,emseguida,pea
para os alunos compararem os diferentes tipos de ndulos (tamanhos e formatos) que ocorrem em
diferentes leguminosas (amendoin, grama, feijo). Podese ainda cortar o ndulo e verificar que seu
interiordecoloraoavermelhada.Associeessacortonalidadedomsculohumano,mostrandoque
umpigmentosemelhantehemoglobina.
ASBACTRIASDONDULORADICULAREASIMBIOSECOMPLANTASLEGUMINOSAS
Asleguminosascorrespondemaumgrandegrupovegetalqueincluiplantasdegrandeimportncia
econmica, como soja, feijo, ervilha e amendoin. Rhizobium e outros gneos como Bradrhyzobium e
outrossobastonetesgrannegativosmveisqueinfectamasrazesdessasplantas,levandoformaode
ndulosradiculares,nosquaisocorreaconversodenitrogniogasosoenitrogniocombinadoprocesso
conhecido como fixao do nitrognio. Nesta associao, a planta fornece nutrientes e condies de
anaerobiose para o crescimento da bactria, e a bactria fixa o nitrognio para ser incorporado s
protenas da planta.Pelo fato da deficincia de nitrognio frequentemente ocorrer em solos nus no
fertilizados,asleguminosasnoduladasexibemvantagensseletivasemtaiscondies,podendocrescerem
reasondeoutrasplantasnodedesenvolvem.
As figuras abaixam mostram, respectivamente, (A) uma raiz de soja com ndulos e (B) uma
plantaodesojanaqualasplantasdoladoesquerdonoestoinfectadascombactriasfixadorasdeN2,
enoladodireitoplantasinfectadascomRhizobium.
A) B)
Em condies normais, tanto a leguminosa como o Rhiizobium so incapazes de fixar nitrognio,

contudo, a interao desses organismos promove tal capacidade. O rizbio quando incubado in vitro s
capaz de realizar esse processo quando em condies de microaerofilia, isso porque a bactria precisa de
umacertaquantidadedeO
2
paragerarenergiaparaafixaodoN
2
.Poroutrolado,aenzimanitrogenase
inativadapelapresenadeO
2
.Estacondiofoiresolvidapelapresenadeleghemoglobina,umaprotena
vermelhadeligaoaoO
2
queencontradaemndulossaudveisdefixadoresdeN
2
.Essaenzimapermite
oacessodoRhizobiumaooxignio,aomesmotempoquemantmembaixasconcentraesaquantidade
deO
2
livrenondulo.
O processo de infeco da planta pela bactria iniciase com a secreo de uma diversidade de
compostos qumicos (pela planta) que estimulam o crescimento da microbiota da rizosfera. Essa
estimulao no restrita ao rizbios, mas estando ali presentes, eles se multiplicam atingindo grandes
densidades populacionais. Os rizbios ento, aderemse superfcie dos pelos radiculares e, por ali,
penetram na raiz. Dentro da raiz, a bactria secreta fatores de nodulao que estimulam a diviso
continuadadasclulasvegetaisebacterianas,levandoformaodondulo.

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Consideraes importantes para uma boa realizao

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