Boletim didtico

M Mu ul lt ti ip pl li ic ca a o o d da a A Al lg ga a C Ch hl lo or re el ll la a m mi in nu ut t s ss si im ma a e em m P Pr ro op pr ri ie ed da ad de es s R Ru ur ra ai is s p pa ar ra a P Pr ro od du u o o O Or rg g n ni ic ca a d de e P Pe ei ix xe es s

Alvaro Graeff Clvis Agostinho Segalin Evaldo Nazareno Pruner

Multiplicao da Alga Chlorella minutssima em Propriedades Rurais para Produo Orgnica de Peixes ndice
1. 2. 3. APRESENTAO............................................................................................................................ INTRODUO................................................................................................................................. QUALIDADE DA GUA PARA MULTIPLICAO................................................................... 3.1 Temperatura............................................................................................................................ 3.2 Valor do pH............................................................................................................................ 3.3 Oxignio dissolvido e Gs carbnico..................................................................................... 3.4 Dureza total............................................................................................................................. 3.5 Alcalinidade total.................................................................................................................... 3.6 Amnia total, nitrito e nitrato................................................................................................ 3.7 Turbides e transparncia......................................................................................................... 3.8 Condicionantes para a gua ser o meio timo de multiplicao............................................. CHLORELLA minutssima................................................................................................................ 4.1 Formas de cultivo................................................................................................................... 4.2 Preparo do banco multiplicador.............................................................................................. 4.3 Adubao de manuteno....................................................................................................... 4.4 Estabelecimento da cultura e multiplicao........................................................................... 4.5 Manejo.................................................................................................................................... 4.6 Produo e qualidade da alga................................................................................................. 4.7 Distribuio de cepas da alga................................................................................................. 4.8 Como conservar 4.9 Consideraes......................................................................................................................... LITERATURA CONSULTADA...................................................................................................... ANEXOS...........................................................................................................................................

4.

5. 6.

Figuras
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.1 9.2 9.3 10.1 10.2 11.1 11.2 11.3 12.1 12.2 13.1 13.2 14.1 14.2 Estruturas de Chlorellas sp............................................................................................................. Cultivo intensivo de Chlorella minutssima em ambiente controlado.......................................... Cultivo extensivo de Chlorella minutssima em ambiente externo................................................ Cultivo continuo de Chlorella minutssima em ambiente controlado........................................... Cultivo batch de Chlorella minutssima em ambiente controlado................................................. Cultivo semicontinuo de Chlorella minutssima ........................................................................... Cultivo axenico de Chlorella minutssima..................................................................................... Cultivo monoespecifico ou clonais de Chlorella minutssima tipo batch e extensivo................... Cultivo monoespecifico de Chlorella minutssima........................................................................ Cultivo em banco multiplicador pequeno...................................................................................... Preparo do banco multiplicador..................................................................................................... Verificando a transparncia do cultivo de Chlorella minutssima................................................. Utilizao e incorporao de gua no sistema................................................................................ Chlorella minutssima conservada em meio liquido...................................................................... Banco multiplicador de 100 m2...................................................................................................... Viveiro de engorda de peixes orgnicos com 10.000 m2............................................................... Produo de Chlorella minutssima............................................................................................... Produo de macroalgas................................................................................................................. Folder de orientaes...................................................................................................................... Estao Experimental de Caador.................................................................................................. Chlorella minutssima conservao em geladeira (at 6 meses).................................................... Chlorella minutssima conservao em freezer (at 1 ano)...........................................................

Multiplicao da Alga Chlorella minutssima em Propriedades Rurais para Produo Orgnica de Peixes
Alvaro Graeff1 Clvis Agostinho Segalin2 Evaldo Nazareno Pruner3

1. Apresentao
O presente estudo, em consonncia com os objetivos e prioridades do Projeto de Piscicultura da EPAGRI, atravs de aes de pesquisa apresenta subsdios no apenas para a formulao de um sistema de produo e propagao da alga Chlorella minutssima para a alimentao orgnica dos peixes filtradores, mas fundamentalmente, para o desenvolvimento e agregao de valores na piscicultura de gua doce da pequena propriedade rural. Para tanto, so identificadas e sugeridas as condies da qualidade da gua para o desenvolvimento da atividade, de forma que este insumo de extrema importncia, seja considerado antes da implantao do empreendimento. Assim, o estudo no apresenta apenas as condies para aumentar a renda da pequena propriedade atravs do aproveitamento dos recursos disponveis e da agregao de valor ao produto primrio que o alevino, mas tambm aproveita a experincia da pesquisa catarinense e as tecnologias conhecidas e aplicadas em todo processo. Pretende ainda, que o trabalho possa servir de orientador tcnico-metodolgico para estudos similares de outros sistemas.

2 2.. I In nttr ro od du u o o
As algas compem um importante nicho benfico na natureza. Elas representam a produtividade primria da matria orgnica em ambientes aquticos devido suas qualidades fotossintticas. Seu desaparecimento significaria a ausncia da primeira fonte de alimentao e energia para os animais aquticos. Alm de oxigenarem a gua durante o dia elas

Md. Vet., CRMV SC 0704/Esp. - Nutrio de Peixes de gua Doce, Epagri/Estao Experimental de Caador, C.P. 591 89500-000 Caador, SC - fone: (49) 3561-2027, e-mail: agraeff@epagri.rct-sc.br 2 Md. Vet., CRMV SC 0700/Esp. - Piscicultura de Peixes de gua Doce, Epagri/Gerncia Regional de Joaaba, C.P. 176, 89600-000 Joaaba, SC - fone: (49) 3521-3615, e-mail: csegalin@epagri.rct-sc.br 3 Md. Vet., CRMV SC 0401/Esp. Reproduo de Peixes de gua Doce, Epagri/Estao Experimental de Caador, C.P. 591 89500-000 Caador, SC - fone: (49) 3561-2047, e-mail: pruner@epagri.rct-sc.br

incorporam seus produtos como polissacardeos, aminocidos, DNA, RNA, enzimas e outras protenas ao meio que servem diretamente aos organismos associados a elas. Na reviso das mais variadas formas das algas microscpicas e macroscpicas nos detivemos naquele grupo com maior interesse para o aquicultor. As algas variam desde as mais simples estruturas celulares como no objeto deste estudo, como das mais complexas como a Gracilaria sp. que ramificada. Assim mesmo h uma grande variedade de tamanhos como as micromonas que podem medir de 1 a 15 micras a as macroalgas que podem chegar a alguns metros de comprimento.

3. Qualidade da gua para multiplicao

guas representam sistemas complexos nos quais aparecem os mais diferentes efeitos isolados. Estes devem ser abrangidos ou avaliados atravs da analise por si s ou como resultantes. Para as guas valido de forma especial frase de Aristteles: O todo mais do que a soma de suas partes. Efeitos de ao recprocas e sinrgicas assim como antagnicas, muitas vezes tm maior importncia do que a grandeza absoluta de uma substncia isolada. Tambm a soluo de substncias, possvel em determinadas condies, no pode e nem devem ser desconsideradas. Condies marginais que influenciam na qualidade: Estrutura da bacia hidrogrfica, influncias da formao do solo Meteorologia, estao do ano, temperatura Condies de vazo, correnteza Represamentos Sedimentos, tipo e teor de substratos

3.1 Temperatura
A temperatura da gua um fator que influncia quase todos os processos fsicos, qumicos e biolgicos na gua. Portanto a sua medio imprescindvel para a interpretao do restante dos parmetros de qualidade das guas e dos processos que ocorrem na gua. Todos os organismos que vivem na gua so adaptados para uma determinada faixa de conforto de temperatura e possuem uma temperatura preferencial. Eles conseguem aceitar

oscilaes e, especialmente, aumentos da temperatura, somente at determinados limites, acima dos quais eles sofrem a morte trmica. Como norma, para o fitoplancton a temperatura de preferncia na multiplicao deve ficar entre 17 e 27oC. Por outro lado, quedas rpidas de temperatura da gua tambm tm efeitos negativos sobre a biocenose aqutica

3.2 Valor do pH
Para caracterizao do comportamento neutro, cido ou alcalino de uma soluo, serve o valor de pH. A escala de valores de pH estende-se de 0 a 14. No contando com a presena de condies ou fatores excepcionais, o valor de pH para guas naturais oscila entre 6,5 e 8,5. O pH um parmetro muito importante a ser considerado na piscicultura, j que possui um profundo efeito sobre o metabolismo e processos fisiolgicos de peixes e todos os organismos aquticos. Tm sido reportado que os pontos letais de acidez e alcalinidade so de pH 4 e pH 11 respectivamente. Para uma multiplicao tima das algas deve estar um pouco acima do valor natural, ou seja, em torno de 8 a 9.

3.3 Oxignio dissolvido e dixido de carbono

Os dois gases atmosfricos mais importantes em aqicultura de viveiros so o oxignio e o gs carbnico (dixido de carbono). A atmosfera cerca de 21 % oxignio e 0,033% gs carbnico, e ambos so trocados entre a gua e o ar. As concentraes de oxignio dissolvido na gua tima para multiplicao das algas esta entre 3,5 a 6,0. Enquanto as concentraes de gs carbnico raramente so altas o suficiente para prejudicar os cultivos, mas longas exposies a concentraes acima de 10 mg/l por vrios dias devem ser proporcionadas.

3.4 Dureza total

O teor de clcio na gua pode ser utilizado para caracterizar quanto ao grau de dureza. Reflete principalmente o teor de ons de Clcio e Magnsio que esto combinados ao

carbonato e ou bicarbonato, podendo tambm estar associado com sulfato e cloreto. expressa em mg/l de equivalente de carbonato de clcio (CaCO3) A dureza total esta geralmente relacionada com os nions da alcalinidade e os ctions da dureza so derivados de solues minerais. Quanto dureza total, as guas podem ser classificadas da seguinte forma: gua mole gua moderadamente dura gua dura gua muito dura 0 76 151 a a a 75 mg/l de CaCO3 150 mg/l de CaCO3 300 mg/l de CaCO3

acima de 301 mg/l de CaCO3

Esta classificao no tinha significado biolgico, mas importante em sistema de produo de algas. Entretanto a classificao ocasionalmente utilizada para cultivo de algas, que neste caso precisa conter uma quantidade maior de Ca e Mg, mas as quantidades estaro presentes quando a dureza estiver marcando valores acima de 20 mg/l de CaCO3.

3.5 Alcalinidade total

A alcalinidade est relacionada com a capacidade da gua de neutralizar cidos. guas com baixa alcalinidade (abaixo de 30 mg/l de CaCO3) apresentam grandes variaes de pH, o que prejudica a sobrevivncia e a multiplicao das algas. A faixa que se recomenda para a multiplicao das Chlorellas entre 50 e 100 mg/l de CaCO3.

3.6 Amnia total, nitrito e nitrato

Na gua, a amnia oxidada por bactrias do gnero Nitrosomas e transformada em nitrito (NO2-). O nitrito, por sua vez, oxidado por bactrias do gnero Nitrobacter e forma o nitrato (NO3-). A amnia e o nitrito no so txicos em baixas concentraes, enquanto o nitrato s se torna txico em altas concentraes, normalmente no obtidas em sistemas de cultivo. A amnia est presente nas formas ionizada (NH4+ ou amnio) e no-ionizada (NH3 ou amnia). A quantidade destas duas formas no ambiente depende principalmente do pH e da temperatura da gua. A porcentagem de NH3 na gua aumenta em guas com pH alcalino.

3.7 Turbidez e transparncia

A turbidez da gua dos viveiros provocada por slidos no dissolvidos em disperso fina (partculas de argila originadas de enxurradas, eroses laterais pela ao do vento). Tambm existe a turbidez biolgica que aparecem nas guas formados por atividades de animais aquticos em forma de plncton em determinadas condies. Slidos turvos modificam as condies de iluminao nas guas e, com isso, tm influncia sobre a fotossntese e o crescimento de plantas aquticas e de plncton, particularmente em guas de correnteza lenta. Tambm podem influenciar o metabolismo do oxignio nas guas e em quantidade alta podem sedimentar e prejudicar o espao vital de organismos no fundo dgua. Para determinao da turbidez, podem ser usados mtodos visuais ou fotomtricos. No mtodo visual, tal como a descrio da intensidade, a determinao da profundidade de visibilidade ou a determinao da transparncia podem ser identificados com a ajuda do disco de Secchi (vide anexo) e tm um valor orientativo. De modo geral uma turbidez com transparncia entre 20 a 25 cm de profundidade e de colorao verde (fitoplcton) altamente bem vinda pois demonstra que a multiplicao das algas esta ocorrendo normalmente.

3.8 Condicionantes para a gua ser o meio timo de multiplicao

A luz - Para o cultivo ser eficiente necessrio que o cultivo (banco de multiplicao) esteja em locais sem sombreamento, para poder ocorrer fotossntese.

A temperatura - J comentada anteriormente Agitao - A maior parte dos cultivos tem uma tendncia a sedimentar. pois importante uma agitao peridica, que pode ser manual com uma p ou atravs de uma bomba de ar.

4. Chlorella minutssima
A alga Chlorella minutssima tem uma estrutura unicelular muito simples, com forma circular plano-convexa, que se multiplicam por simples diviso celular, que poder perpetuar-

se por bipartio repetida, para formar novos indivduos com caractersticas semelhantes a progenitora. Essa alga foi introduzida no ano de 1999 na Unidade Experimental de

Piscicultura da EPAGRI/Caador, visando oferecer aos piscicultores mais uma alternativa para produo de peixes orgnicos.

Figura 1 - estruturas de Chlorellas sp

4.1 Formas de cultivo

Pela natureza dos cultivos classificam-se em: Cultivo intensivo - Aqui os fatores de crescimento se mantm sob um sistema controlado, permitindo obter uma resposta mxima de produo. Isto ocorre em ambientes de laboratrios produtores de cepas puras.

Figura 2 - Cultivo intensivo de Chlorella minutssima em ambiente controlado

Cultivo extensivo - Nesta classe de cultivo s so controladas as variveis mais acessveis ao cultivo, tais com o as caractersticas do meio e a densidade do cultivo. Este o objetivo deste trabalho.

Figura 3 Cultivo extensivo de Chlorella minutssima em ambiente externo

Pela forma do uso das algas classifica-se em: Cultivo contnuo - A populao algal, as caractersticas qumicas e fsicas do meio, a temperatura e finalmente a luz so mantidas com um valor constante por perodos prolongados, procurando ter um fluxo sustentvel de requerimentos e sada das algas.

Figura 4 Cultivo continuo de Chlorella minutssima em ambiente controlado

Cultivo batch - Estes cultivos so intermitentes pois se caracterizam pela instalao do cultivo de alga e quando chegam ao nvel apropriado ou mximo se coletam as mesmas. O nvel ideal se mede por clulas por mL ou atravs do disco de Secchi. Esta a forma proposta para ser desenvolvida em viveiros nas propriedades rurais.

Figura 5 Cultivo batch de Chlorella minutssima em ambiente controlado

Cultivos semicontinuos - Aqui se coleta uma parte do banco de produo e estocado, e se renova o volume coletado por meio de um cultivo novo

Figura 6 Cultivo semicontinuo de Chlorella minutssima

Pela pureza do cultivo classifica-se em: Cultivo axenico - So cultivos puros, livres de bactrias e estreis, para poder manter a produtividade por um perodo prolongado de tempo. Estes cultivos so delicados e de muito cuidado, obtidos em laboratrio.

Figura 7 Cultivo axenico de Chlorella minutssima

Cultivos monoespecficos ou clonais - Aqui a populao de microalgas convive parcialmente contaminada por outros microorganismos como bactrias e protozorios. So utilizados em cultivos do tipo batch e extensivo.

Figura 8 Cultivo monoespecifico ou clonais de Chlorella minutssima tipo batch e extensivo``````

4.2 Preparo do banco multiplicador

Para a multiplicao da alga, recomenda a formao de banco multiplicador ou seja um viveiro nas propriedades rurais. Para a formao do banco, deve ser escolhidos uma rea com solo de boa impermeabilizao e sem espcies vegetais invasoras e com luminosidade total, ou seja, longe de qualquer vegetao que possa fazer sombreamento. Aconselha-se escavar o solo na forma retangular com uma profundidade no superior a 70 cm, e aproveitar para fazer e enviar uma amostra para anlise do solo. Para a correo, utilizar a quantidade de calcrio recomendado atravs da analise do solo, espalhando-se sobre o mesmo, sem a necessidade de incorporao. Deve ser observado um perodo de carncia de

3 meses antes de colocar gua. Uma semana antes de inocular as algas deve adubar o banco com 35kg de Superfosfato triplo e 65kg de uria por hectare, que a quantidade de fsforo e nitrognio, recomendado para manuteno. Outro alternativo utilizar dejetos orgnico

animais na quantidade a seguir: Aves : 500 kg por hectare Sunos: 700 kg por hectare Bovinos: 1.000 kg por hectare No caso em que a quantidade de algas ainda insuficiente para iniciar o banco multiplicador definitivo, aconselha-se multiplicar em ambientes de menor quantidade.

Figura 9.1 - Cultivo monoespecifico de Chlorella minutssima 9.2 - Cultivo em banco multiplicador pequeno 9.3 - Preparo do banco multiplicador definitivo

4.3 Adubao de manuteno

Deve ser feita sempre, aps a aferio da transparncia conseguida atravs do Disco de Secchi. Em caso de necessidade utilize a mesma quantidade recomendada para adubao de implantao do banco multiplicador a cada 7 dias. Tambm recomendvel fazer esta adubao quando da utilizao e incorporao de gua ao sistema.

Figura 10.1 - Verificando a transparncia do cultivo de Chlorella minutssima 10.2 - Utilizao e incorporao de gua ao sistema

4.4 Estabelecimento e multiplicao

A poca mais indicada para a inoculao das cepas da alga no banco multiplicador no incio de setembro. Inoculam-se 10 litros de algas na concentrao de 15 milhes por mililitro em um ambiente com at 100 m2 . A relao de multiplicao desse banco de 1:100, ou seja, com 100m2 possvel abastecer um viveiro de engorda de peixes orgnicos com at 10.000 metros quadrados.

Figura 11.1 - Chlorella minutssima conservada em meio liquido (10 litros) 11.2 - Banco multiplicador de 100 m2 11.3 - Viveiro de engorda de peixes orgnicos com 10.000 m2

4.5 Manejo
A multiplicao da alga at o seu estabelecimento pleno acontece em aproximadamente 20 dias. Isso ocorre mais facilmente quando a temperatura da gua for superior a 20 0C e a transparncia da gua medida pelo disco de Secchi for inferior a 25 cm. Quando isso acontece, pode ser iniciada a colheita e o repique para o viveiro de engorda de peixes. No banco multiplicador dever ser mantida uma lmina mnima de 30 cm de gua, rica em algas. Aps a colheita o nvel da gua dever ser restabelecido e a adubao/fertilizao refeita.

4.6 Produo e qualidade da alga

Em condies adequadas de manejo e utilizao do banco pode-se produzir alga para at 5.000kg/ha/ano de peixes orgnicos com tima aceitabilidade pelos mesmos. Esta produo anual esta concentrada no perodo de setembro a abril onde a luminosidade e temperatura so favorveis multiplicao. No inverno com temperaturas abaixo de 15oC no conveniente usar o banco e sim deixa-lo em descanso.

Em termos de qualidade essa alga assemelha- se s plantas superiores.

Figura 12.1 - Produo de Chlorella minutssima 12.2 - Produo de macroalgas

4.7 Distribuio de cepas da Alga

A distribuio de cepas feita pela Epagri, entre setembro e final de maro, atravs da Estao Experimental de Caador Laboratrio de Nutrio e Patologias de Peixes. A alga distribuda em sacos plsticos de 500 ml etiquetados com a concentrao de clulas, com as quais possvel comear implantaes de um banco de 1000 litros de gua. Atravs desta incubadora, os produtores podem estabelecer bancos maiores visando sua autosuficincia de algas nas propriedades, como foi descrito anteriormente a partir do item 4.

Figura 13.1 Folder de orientaes 13.2 Estao Experimental de Caador

4.8 Como conservar

Se houver necessidade de conservar as cepas precisa-se: Geladeira com temperatura de 2,0 0C Freezer com temperatura de -15,0 0C 500 mL (1/2 litro) de cepa da alga para 1000 L de gua (caixa dagua)

Quantidade mnima a ser conservada em geladeira ou freezer para recomear

10.000 mL (10 litros) de cepa da alga para 70.000 L de gua (100 m2 x 0,70 m de profundidade)

Porque conservar em geladeira e freezer? Para paralisar a multiplicao das cepas

Validade da conservao Em geladeira um perodo de at 6 meses No freezer por um perodo de mais de 6 meses e menor do que 12 meses

Figura 14.1 - Chlorella minutssima conservao em geladeira (at 6 meses) 14.2 - Chlorella minutssima conservao em freezer (at um ano)

4.9 Consideraes

Com o uso de algas no sistema de produo orgnico, a produtividade no ser igual ao sistema de produo convencional embora em termos de lucratividade por unidade ser maior.

A produo de alga o inicio da cadeia alimentar de um sistema orgnico de produo

Diante do exposto e estimando que este estudo favorea a compreenso mais apurada da atividade da aquacultura e que, principalmente, seja um ponto de partida a uma melhor conscincia de preservao ambiental em comunho com a necessidade de diminuir a fome das pessoas no mundo. Deseja-se que este boletim tcnico seja um suscitador de seno a busca de pesquisas mais avanadas e mais frteis, pelo menos a curiosidade na composio de novas tendncias sobre a piscicultura e o seu desenvolvimento sustentvel. Assim, recomenda-se que preciso tornar a produo de algas uma atividade sustentvel, para que no seja conhecida daqui algum tempo como mais uma boa idia que no deu certo. Concluise que para o desenvolvimento de um sistema de produo orgnica de peixes acontecer

plenamente preciso se valer de estratgias que contemplem essa viso. Dessa forma o desenvolvimento se tornar verdadeiro, por atender as reais necessidades da comunidade com a aplicao da tecnologia em benefcio das pessoas.

5. Literatura consultada

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6. Anexos

Como construir um Disco de Secchi

Utilizar madeira, metal ou plstico rgido. Cortar uma circunferncia de 25 cm. Pintar a circunferncia em 4 partes igual de branco e preto intercalada. Fixar no centro da circunferncia uma guia ou seja: basto ou uma fita mtrica ou mesmo barbante com marcao entre a base e a altura de 30 e 40 cm visvel.

Como utilizar o Disco de Secchi

De costa para o sol Afundar o disco devagar at no mais enxerga-lo e parar Voltar um pouco at visualiza-lo na situao de baixa nitidez. Marcar a profundidade que esta o disco olhando a marcao na guia. De posse de esta informao identificar a cor da gua contra o branco da circunferncia.

Como entender o Disco de Secchi

Leitura do disco
Menor que 25cm

Comentrios
Viveiro muito turvo. Se o viveiro est turvo devido ao fitoplncton (verde), haver problemas com baixa concentrao de oxignio dissolvido. Quando a turbidez for por partculas de solo em suspenso (marrom), a produtividade ser baixa A turbidez est se tornando excessiva Se a turbidez for devida ao fitoplncton (verde), o viveiro est em boas condies O fitoplncton est se tornando escasso (verde claro) gua muito clara. Produtividade inadequada e perigo de problemas com plantas daninhas aquticas

Coeficiente de aplicao (Kg/ha) N P2O5

0,0 0,5 2,0 2,0 2,5

0,0 2,0 5,0 8,0 10,0

Entre 26 e 30 cm Entre 30 e 40 cm Entre 40 e 60 cm Maior que 60 cm